車前草總苷的製備工藝及其在醫藥中的應用的製作方法

2023-11-03 06:54:12

專利名稱：車前草總苷的製備工藝及其在醫藥中的應用的製作方法
技術領域：
本發明屬於中藥技術應用領域，特徵上涉及治療慢性腎小球腎炎，和/或具有免疫抑制作用，和/或具有利尿作用。車前草總苷來源於常用中藥平車前(Plantago depressaWilld)及其同屬植物(如P.asiatica L.、P.camtschatica Link、P.maritima L等)的全草。
背景技術：
慢性腎小球腎炎(chronic glomeralonephritis)是由多種疾病引起，通過不同的發病機理，具有不同病理改變，原發於腎小球的一組疾病。其臨床特點為病程長，多為緩慢進行型。本病預後較差。慢性腎小球腎炎的治療除利尿及降壓等對症治療外，目前臨床治療慢性腎小球腎炎的藥物主要是糖皮質激素(如強的松)及細胞毒類(如鹽酸氮芥、環磷醯胺)藥物單獨或聯合使用，由於這些藥物有明顯的毒副作用，因此，臨床迫切需要一種高效低毒的慢性腎小球腎炎治療藥物。

發明內容
本發明的目的是從車前草及其同屬植物中提取的車前草總苷對慢性腎炎動物模型有明顯降低尿蛋白作用，並有利尿作用，而未發現有明顯的毒副作用。可以將它單獨或與其他中西藥合併研製成為一種慢性腎炎治療劑。
車前草為車前科植物平車前Plantago depressa Willd的乾燥全草，又稱當道，始載於《四聲本草》，性味甘、寒。歸肝、腎、肺、小腸經。具有清熱利尿、涼血解毒等功效。治小便不通、淋濁、尿血、水腫、癰腫瘡毒、帶下。車前草總苷含量為藥材的0.5～6％，為苯乙醇苷類化合物，主要有acteoside(類葉升麻苷)、cisacteoside、isoacteoside、hydroxyacteoside、Methoxyacteoside等成分，其中主要成分acteoside，佔總苷的40～70％。
本發明提供了一類如結構式I的化合物 結構式(I) 結構式(II)
本發明提供的車前草總苷的化學組成是一類以結構式(I)為骨架R1或為氫(H)或為羥基(OH)或為甲氧基(OCH3)取代，R2或為氫(H)或為結構式(II)取代，R3或為氫(H)或為結構式(II)取代，R4為鼠李糖基或為氫(H)取代的混合物。其中主要成分acteoside的結構式是結構式(I)的R1、R2為氫取代，R3為結構式(II)取代，R4為鼠李糖基取代。
上述化合物的定量分析方法可以用常規方法進行，通常用色譜法。例如HPLC法；或用紫外分光光度法。
如上所述，本發明的總苷具有降低尿蛋白、利尿和改善血清肌肝和尿素氮水平等實際的治療用途。
具體實施例方式
實例1.車前草總苷的製備工藝車前草粗粉，加入一定量的酸性醇，回流提取兩次，濾過，合併兩次濾液，減壓回收醇至盡，水溶液離心除去沉澱後，通過大孔樹脂柱，水洗，用20～80％的酸性醇洗脫，收集洗脫液減壓回收醇至盡，水溶液再通過大孔樹脂柱，水洗後，用60～100％的醇洗脫，收集洗脫液，加活性炭脫色，過濾，減壓回收醇，得黃棕色車前草總苷。
實例2 車前草總苷的利尿作用試驗給大鼠1次灌胃給藥，劑量為60mg/Kg和30mg/Kg，另設空白對照組(蒸餾水)，各組均按25ml/Kg的容量給予，同時腹腔注射生理鹽水25ml/Kg(觀察期間不再飲水)，然後置大鼠代謝籠，每籠放2隻。記錄1，2，3，4，6小時的尿量。3天後動物各組輪換再重複1次試驗。可見，一次經口給予車前草總苷後尿量有增加，60mg/Kg組從給藥後第一小時末開始至第六小時末的整個試驗期間均顯示有利尿作用，且有統計學差異。
車前草總苷的利尿作用(n＝24)

注T檢驗，與對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01實例3 車前草總苷的免疫調節作用方法SRBC定量溶血測定法觀察車前草總苷對小鼠抗體生成的影響。
用BALB/C小鼠，雌性，按體重均勻分為5組；受試藥物按劑量設40、20、10mg/Kg體重三個劑量組，經口給予車前草總苷溶液；空白對照組經口給予同體積的蒸餾水。每天給藥一次，連續給藥9天。以腹腔注射15mg/Kg環磷醯胺為陽性對照組，在試驗的第6～8天給藥，每天一次。在給藥的第六天全部小鼠腹腔注射5％SRBC以致敏，每隻0.2ml(相當於3×108SRBC)致敏後96小時，放血處死小鼠，取脾。用RPMI1640培養液按15mg脾重/ml製成脾細胞懸液，依次在試管中加入等容量三脾細胞懸液、0.2％SRBC和110豚鼠血清，混勻，37℃水浴溫育1小時，離心，取上清液，於分光光度計測定吸光度，以OD值表示抗體生成水平。車前草總苷10～20mg/Kg經口給藥可明顯抑制致敏小鼠IgM抗體生成，對體液免疫呈較強的抑制作用。
車前草總苷對小鼠抗體生成的影響(X±SD)

T檢驗*p＜0.05 **p＜0.01實例4 車前草總苷對大鼠C-BSA腎炎的作用觀察方法1將陽離子化牛血清白蛋白(C-BSA)1mg，加入0.5mlD到PBS中，再加0.5ml不完全佐劑充分混勻，研磨成乳劑。在大鼠雙側腋下、腹股溝作多點皮下注射進行預免疫。預免疫一周後正式免疫，每隻大鼠尾靜脈注射C-BSA2.5mg，每周三次，四周後加量到4mg/只，直到試驗結束。
在正式免疫四周後，開始給藥，每日一次，連續給藥四周。設車前草總苷高、中、低(分別為40、20、10mg/Kg)三個劑量組，經口給藥；環磷醯胺(CY)10mg/Kg，腹腔注射給藥，為陽性對照組。模型組經口給蒸餾水，另設空白對照組，經口給蒸餾水。觀測藥前、給藥後1、2.5、4周24小時尿旦白總量，車前草總苷20～40mg/Kg，經口給藥四周，對大鼠C-BSA腎炎有明顯的治療作用，其作用強度與腹腔注射10mg/Kg環磷醯胺的作用相似。
24小時尿蛋白量的變化(X±SD)

注T檢驗與模型組比較，*p＜0.05 **p＜0.01；內數字為動物數。
實例5 車前草總苷對兔IgG加速型小鼠腎毒血清腎炎的作用在無菌條件下，取小鼠腎皮質剪碎，研磨並過200目鋼絲網，1500rpm離心10分鐘，取沉澱物，加福氏完全佐劑，充分研磨使成均勻的含10％腎組織的乳劑，用此乳劑免疫兔，1ml/只，皮下多點注射，每周一次，共六次。第一次免疫要加入卡介苗原漿，濃度為4mg/ml乳劑。末次注射後5天，兔頸動脈放血，離心得血清，經滅活補體及BALB/C小鼠血球吸收後再離心得腎毒血清。
小鼠先腹腔注射兔IgG0.5mg(與0.25ml福氏完全佐劑充分混勻)，4天後尾靜脈注射腎毒血清0.08ml/只，注射後5天，測小鼠尿蛋白及血漿白蛋白含量，按其測定值均勻6組，設模型對照組，陽性對照組，給環磷醯胺(CY)10mg/kg(i.p)，空白對照組，給蒸餾水(p.o)，給藥組設四個劑量組，分別給車前草總苷80、40、20mg/kg(p.o)。連續給藥21天。在給藥後的第14天、21天測尿蛋白。車前草總苷40～80mg/kg口服3周，對兔IgG加速型小鼠腎毒血清腎炎有明顯的治療作用，其作用強度與CY10mg/kg(i.p)相似；20mg/kg劑量組的作用較弱。顯示有一定的量效關係。22天放血處死，取小鼠腎作病理檢查，常規固定，包埋，切片，P.A.S及Masson三色染色，光鏡下觀察，模型組動物大多有腎小球毛細管基底膜明顯增厚，Mas-son染色標本可見部分腎小球毛細管呈纖維素樣壞死， 部分腎小球囊壁細胞增生，形成新月體，嚴重者腎小球與囊粘連，有纖維化和萎縮現象，部分腎小球管腔有蛋白管型存在。與模型組比，CY組及車前草總苷高、中、低劑量組腎臟病變較輕，腎小管腔內蛋白管型數量減少。小鼠尿蛋白的變化(X±SD)

注T檢驗，與模型組相比較*p＜0.05 **p＜0.01；內數字代表動物數。
實例6.車前草總苷膠囊的製備將100g車前草總苷加入適量乳糖，結晶纖維素，聚乙二醇3000，羧甲基澱粉鈉，幹壓制粒後，加硬脂酸鎂適量，分裝成1000粒，即得。每粒含acteoside 30mg。
實例6.車前草總苷片劑的製備100g的車前草總苷，加入適量乳糖，澱粉，以60～80％乙醇為粘合劑制粒，乾燥，整粒，加適量硬脂酸鎂，壓製成1000片，包薄膜衣，每片含acteoside 30mg。
實例7.車前草總苷顆粒劑的製備100g的車前草總苷，加入適量乳糖，糊精，糖粉，以60～80％乙醇為粘合劑制粒，乾燥，整粒，分裝成1000袋，每袋含acteoside 30mg。
權利要求
1.車前草總苷及其製備方法，其特徵在於藥材用水、醇或酸性水、酸性醇提取，提取液回收溶劑和/或經大孔樹脂處理等方法製備的車前草總苷。
2.按照權力要求1所述的車前草總苷中含acteoside在10％～80％範圍內。
3.按照權力要求2所述的acteoside在藥品或藥物製劑中的含量為10～70％，或總苷在藥品或製劑中的人日用劑量為50～2000mg。
4.按照權力要求1所述的提取用醇是指甲醇或乙醇或含水甲醇或含水乙醇；酸性醇是指提取用的甲醇或乙醇或含水甲醇或含水乙醇中加有0.5％～10％的甲酸或乙酸或鹽酸或磷酸等有機酸或無機酸的混合溶劑。
5.按照權力要求1所述的大孔樹脂是指大孔樹脂D101或HP-20或SP825或HP2MG等以苯乙烯或甲基丙稀酸酯為骨架的大孔樹脂。
6.按照權力要求1、2、3所述的車前草總苷或以車前草總苷為藥品原料製備的藥物製劑對慢性腎小球腎炎有治療作用。
7.按照權力要求1、2、3所述的車前草總苷或以車前草總苷為藥品原料製備的藥物製劑有利尿作用。
8.按照權力要求1、2、3所述的車前草總苷或以車前草總苷為藥品原料製備的藥物製劑有免疫抑制作用。
9.按照權力要求1、2、3所述的車前草總苷或以車前草總苷為藥品原料製備的藥物製劑對對大鼠C-BSA腎炎及兔IgG加速型小鼠腎毒血清腎炎有治療作用。
全文摘要
車前草總苷的製備工藝及其在醫藥中的應用提供了用含酸的低級醇為溶劑加熱回流提取，再經大孔樹脂純化製備車前草總苷的生產工藝，製備車前草總苷膠囊、片劑、顆粒劑的處方及工藝，以及車前草總苷或製劑作為治療慢性腎小球腎炎或/和作為免疫抑制或/和作為利尿劑在醫藥領域中的應用。
文檔編號A61P37/00GK1513862SQ0212525
公開日2004年7月21日 申請日期2002年7月19日 優先權日2002年7月19日
發明者郭緒林, 王鐵軍 申請人:郭緒林, 王鐵軍