一種心可舒膠囊的含量測定及鑑別方法
2023-12-04 08:37:11 2
一種心可舒膠囊的含量測定及鑑別方法
【專利摘要】本發明公開了一種對心可舒膠囊中丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、葛根素等4種有效成分進行含量測定，對丹參、葛根進行特徵圖譜鑑別的方法及對粉葛和葛根進行鑑別的方法。本發明方法具有靈敏度高、重現性與穩定性好等特點，大大提高了檢驗效率，方便快捷，經濟環保，可有效控制心可舒膠囊的質量。
【專利說明】一種心可舒膠囊的含量測定及鑑別方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種對心可舒膠囊中多種有效成分進行含量測定及特徵圖譜的鑑別方法，具體地說，是利用超高效液相色譜法(UPLC)法對心可舒膠囊中丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、葛根素等4種有效成分的含量進行測定及對丹參、葛根進行特徵鑑別的一種方法。
【背景技術】
[0002]心可舒膠囊由丹參、葛根、三七、木香和山楂5味藥組成，具有活血化瘀、行氣止痛的功效。用於氣滯血瘀型冠心病引起的胸悶、心絞痛、高血壓、頭暈、頭痛、頸項疼痛及心律失常、高血脂等症。1998年收入《衛生部藥品標準》中藥成方製劑第十五冊。目前，全國共有7家藥品生產企業。
[0003]心可舒膠囊現行標準為《衛生部藥品標準》中藥成方制第十五冊(標準號為WS3-B-2856-98)及藥典業字發[2004]389號文。本品質量標準主要收載有性狀、鑑別與常規檢查(詳見表1心可舒膠囊現行標準檢驗項目)，檢驗項目較少，只有鑑別與檢查項，缺少含量測定等項目，且熊果酸為山楂中非專屬性成分、原兒茶醛為丹參中的水解成分，以此兩種成分對照實行薄層鑑別，專屬性差，所以現行標準不能很好控制藥品的質量。
[0004]本發明就是為了克服上述缺陷，建立一種快速環保的檢測方法來對心可舒膠囊中多種有效成分的含量進行控制，並對君藥與臣藥丹參、葛根進行了鑑別，從而保證藥品質量。
【發明內容】
[0005]本發明目的是提供一種心可舒膠囊中丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B、葛根素等4種有效成分的含量進行測定及對丹參、葛根進行特徵鑑別的一種方法，該方法利用超高效液相色譜法(UPLC)法進行測定，該方法快速、環保，可有效控制藥品質量。
[0006]本發明提供一種心可舒膠囊的含量測定方法，該含量測定方法由以下步驟組成:
[0007]A、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每1ml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液；
[0008]B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 % -80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；
[0009]C、液相 色譜條件:C18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件為O分鐘到2分鐘，流動相A的比例為1% -10%，流動相B的比例為99% -90% ；2分鐘到 30分鐘，流動相A的比例升高至20% _40%，流動相B的比例降低M 80% -60% ;柱溫為 20-500C ;流速:0.2-1.0ml/min ;檢測波長為 270_310nm ；
[0010]D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各Ι-?ο μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
[0011]含量測定方法優選為:
[0012]A、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每Iml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液；
[0013]B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，取出，放冷，再稱定重量，50 %甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；
[0014]C、液相色譜條件:C18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為I %，流動相B的比例為99 % ;2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至20%，流動相B的比例降低至80% ;柱溫為20°C ;流速:0.2ml/min ;檢測波長為270nm ；
[0015]D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
[0016]含量測定方法還優選為:
[0017]Α、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每Iml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液；
[0018]B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；
[0019]C、液相色譜條件:C18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.2%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為10 %，流動相B的比例為90 % ;2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至40%，流動相B的比例降低至60% ;柱溫為50°C ；流速:1.0ml/min ;檢測波長為31Onm ；
[0020]D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
[0021]含量測定方法還優選為:
[0022]Α、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每Iml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20μ g、丹酹酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液；
[0023]B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70 %甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液；
[0024]C、液相色譜條件:色譜柱為Acquity BEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m);以乙腈為流動相A，以0.1 %的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為3%，流動相B的比例為97% ；2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至28%，流動相B的比例降低至72% ;柱溫為250C ;流速:0.4ml/min ;檢測波長為287nm ；[0025]D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3 μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
[0026]本發明還提供了一種心可舒膠囊中葛根的特徵圖譜鑑別方法，該鑑別方法由以下步驟組成:
[0027](I)對照品溶液的製備、供試品溶液的製備、液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟Α、步驟B、步驟C ;
[0028](2)葛根陰性對照溶液的製備:取不含葛根的陰性樣品，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根陰性對照溶液；
[0029](3)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為葛根對照藥材溶液；
[0030](4)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、葛根陰性對照溶液、葛根對照藥材溶液各1-10 μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定葛根的特徵色譜峰為3、4、5、6、7號峰；
[0031]心可舒膠囊中葛根特徵鑑別方法優選為:
[0032](I)對照品溶液的製備、供試品溶液的製備、液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟Α、步驟B、步驟C ;
[0033](2)葛根陰性對照溶液的製備:取不含葛根的陰性樣品，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70 %甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根陰性對照溶液；
[0034](3)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液；
[0035](4)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、葛根陰性對照溶液、葛根對照藥材溶液各3 μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定葛根的特徵色譜峰為3、4、5、6、7號峰；
[0036]本發明還提供一種心可舒膠囊中丹參的特徵圖譜鑑別方法，該鑑別方法由以下步驟組成:
[0037](I)對照品溶液的製備、供試品溶液的製備、液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟Α、步驟B、步驟C ;
[0038](2)丹參陰性對照溶液的製備:取不含丹參的陰性樣品，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為丹參陰性對照溶液；
[0039](3)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各1-10 μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定丹參的特徵色譜峰為1、2、8號峰。
[0040]心可舒膠囊中丹參的特徵鑑別方法優選為:
[0041](I)對照品溶液的製備、供試品溶液的製備、液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟Α、步驟B、步驟C ;
[0042](2)丹參陰性對照溶液的製備:取不含丹參的陰性樣品，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70 %甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為丹參陰性對照溶液；
[0043](3)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各3 μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定丹參的特徵色譜峰為1、2、8號峰。
[0044]本發明還提供了一種葛根藥材與粉葛藥材的鑑別方法，該方法由以下步驟組成:
[0045](I)液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟步驟C ；
[0046](2)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.Ι-lg,置具塞錐形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液；
[0047](3)粉葛對照藥材溶液的製備:取粉葛對照藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，力口50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛對照藥材溶液；
[0048](4)葛根藥材溶液的製備:取葛根藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根藥材溶液；
[0049](5)粉葛藥材溶液的製備:取粉葛藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛藥材溶液；
[0050](6)測定:精密吸取葛根對照藥材、粉葛對照藥材、葛根藥材、粉葛藥材溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，葛根對照藥材和葛根藥材均有3、4、5、6、7號峰；粉葛對照藥材有4、5、6、7號峰；粉葛藥材只有4、7號峰。
[0051]葛根藥材與粉葛藥材的鑑別方法優選為:
[0052](I)液相色譜條件同心可舒膠囊的含量測定方法中的步驟步驟C ；
[0053](2)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液；
[0054](3)粉葛對照藥材溶液的製備:取粉葛對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛對照藥材溶液；
[0055](4)葛根藥材溶液的製備:取葛根藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根藥材溶液；
[0056](5)粉葛藥材溶液的製備:取粉葛藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛藥材溶液；
[0057](6)測定:精密吸取葛根對照藥材、粉葛對照藥材、葛根藥材、粉葛藥材溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，葛根對照藥材和葛根藥材均有3、4、5、6、7號峰；粉葛對照藥材有4、5、6、7號峰；粉葛藥材只有4、7號峰。
[0058]為了驗證測定含量方法的穩定性、準確性、專屬性及系統適應性，對方法進行了以下方法學驗證實驗，並用該方法對葛根、丹參的特徵圖譜進行了確認，及用該方法區別葛根和粉葛，並建立區別特徵，以確保該含量測定及鑑別方法可以作為心可舒膠囊的質量控制方法。
[0059]一、心可舒膠囊的含量方法學考察
[0060]1、色譜條件與系統適用性試驗
[0061]1.1 色譜柱:Acquity BEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m)
[0062]1.2流動相:乙腈為流動相A，0.1 %三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫，梯度表見表1。
[0063]表1流動相梯度洗脫表
【權利要求】
1.一種心可舒膠囊的含量測定方法，其特徵在於所述含量測定方法由以下步驟組成: A、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每1ml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液； B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50% -80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液； C、液相色譜條件=C18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05-0.2%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件為O分鐘到2分鐘，流動相A的比例為1% -10%，流動相B的比例為99% -90% ；2分鐘到 30分鐘，流動相A的比例升高至20% _40%，流動相B的比例降低至80% -60% ;柱溫為 20-500C ;流速:0.2-1.0ml/min ;檢測波長為 270_310nm ； D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
2.根據權利要求1所述的含量測定方法，其特徵在於所述含量測定方法由以下步驟組成: Α、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每1ml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液； B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理10分鐘，取出，放冷，再稱定重量，50%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液； C、液相色譜條件=C18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.05%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為1%，流動相B的比例為99% ；2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至20%，流動相B的比例降低至80% ;柱溫為20°C ;流速:0.2ml/min ;檢測波長為 270nm ； D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
3.根據權利要求1所述的含量測定方法，其特徵在於所述含量測定方法由以下步驟組成: Α、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每1ml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液； B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入80 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲處理60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液； C、液相色譜條件=C 18色譜柱，以乙腈為流動相A，以0.2%的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為10%，流動相B的比例為90% ；2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至40%，流動相B的比例降低至60% ;柱溫為50°C ;流速:.1.0ml/min ;檢測波長為 31Onm ；D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各I μ 1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
4.根據權利要求1所述的含量測定方法，其特徵在於所述含量測定方法由以下步驟組成: Α、對照品溶液的製備:取丹參素鈉對照品、原兒茶醛對照品、丹酚酸B對照品、葛根素對照品適量，精密稱定，加70%甲醇製成每1ml含丹參素鈉50 μ g、原兒茶醛20 μ g、丹酚酸BlOO μ g、葛根 素150 μ g的混合溶液,作為對照品溶液； B、供試品溶液的製備:取裝量差異項下的心可舒膠囊內容物，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為供試品溶液； C、液相色譜條件:色譜柱為AcquityBEH C18 (2.1 X 100mm, 1.7 μ m);以乙腈為流動相A，以0.1 %的三氟乙酸溶液為流動相B，梯度洗脫條件:0分鐘到2分鐘，流動相A的比例為.3%，流動相B的比例為97 % ;2分鐘到30分鐘，流動相A的比例升高至28 %，流動相B的比例降低至72% ;柱溫為250C ;流速:0.4ml/min ;檢測波長為287nm ； D、測定:精密吸取對照品溶液與供試品溶液各3μ1，注入液相色譜儀，以外標法分別計算各成分含量。
5.一種心可舒膠囊的鑑別方法，其特徵在於所述鑑別方法為葛根的特徵圖譜鑑別方法，該鑑別方法由以下步驟組成: (1)對照品溶液的製備同權利要求1中的步驟Α、供試品溶液的製備同權利要求1中的步驟B、液相色譜條件同權利要求1中的步驟C ； (2)葛根陰性對照溶液的製備:取不含葛根的陰性樣品，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-80%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根陰性對照溶液； (3)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液作為葛根對照藥材溶液； (4)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、葛根陰性對照溶液、葛根對照藥材溶液各1-10 μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定葛根的特徵色譜峰為羥基葛根素、葛根素、3』 -甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷與大豆苷。
6.根據權利要求5所述的鑑別方法，其特徵在於所述鑑別方法由以下步驟組成: (1)對照品溶液的製備同權利要求2、3或4中的步驟Α、供試品溶液的製備同權利要求.2、3或4中的步驟B、液相色譜條件同權利要求2、3或4中的步驟C ； (2)葛根陰性對照溶液的製備:取不含葛根的陰性樣品，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根陰性對照溶液； (3)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇.50ml，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液； (4)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、葛根陰性對照溶液、葛根對照藥材溶液各3μ1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定葛根的特徵色譜峰為羥基葛根素、葛根素、3』 -甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷與大豆苷。
7.—種心可舒膠囊的鑑別方法，其特徵在於所述鑑別方法為丹參的特徵圖譜鑑別方法，該鑑別方法由以下步驟組成: (1)對照品溶液的製備同權利要求1中的步驟Α、供試品溶液的製備同權利要求1中的步驟B、液相色譜條件同權利要求1中的步驟C ； (2)丹參陰性對照溶液的製備:取不含丹參的陰性樣品，研細，取0.Ι-lg，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入50-80 %甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲10-60分鐘，取出，放冷，再稱定重量，補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為丹參陰性對照溶液； (3)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定丹參的特徵色譜峰為丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B。
8.根據權利要求7所述的鑑別方法，其特徵在於所述鑑別方法由以下步驟組成: (1)對照品溶液的製備同權利要求2、3或4中的步驟Α、供試品溶液的製備同權利要求2、3或4中的步驟 B、液相色譜條件同權利要求2、3或4中的步驟C ； (2)丹參陰性對照溶液的製備:取不含丹參的陰性樣品，研細，取0.5g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入70%甲醇50ml，密塞，稱定重量，超聲(功率250W，頻率40kHz) 30分鐘，取出，放冷，再稱定重量，70%甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，作為丹參陰性對照溶液； (3)測定:精密吸取對照品溶液、供試品溶液、丹參陰性對照溶液各3μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，確定丹參的特徵色譜峰為丹參素鈉、原兒茶醛、丹酚酸B。
9.一種葛根與粉葛的鑑別方法，其特徵在於所述鑑別方法由以下步驟組成: (1)液相色譜條件同權利要求1中的步驟步驟C; (2)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液； (3)粉葛對照藥材溶液的製備:取粉葛對照藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛對照藥材溶液； (4)葛根藥材溶液的製備:取葛根藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根藥材溶液； (5)粉葛藥材溶液的製備:取粉葛藥材0.Ι-lg，置具塞錐形瓶中，加50-80%甲醇50ml，超聲10-60分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛藥材溶液； (6)測定:精密吸取葛根對照藥材、粉葛對照藥材、葛根藥材、粉葛藥材溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，葛根對照藥材和葛根藥材均有3』 -羥基葛根素、葛根素、3』-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷與大豆苷；粉葛對照藥材有葛根素、3』-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷與大豆苷；粉葛藥材只有葛根素、大豆苷。
10.根據權利要求9所述的鑑別方法，其特徵在於該鑑別方法由以下步驟組成: (1)液相色譜條件同權利要求2、3或4中的步驟步驟C； (2)葛根對照藥材溶液的製備:取葛根對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為葛根對照藥材溶液； (3)粉葛對照藥材溶液的製備:取粉葛對照藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛對照藥材溶液； (4)葛根藥材溶液的製備:取葛根藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70%甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液,作為葛根藥材溶液； (5)粉葛藥材溶液的製備:取粉葛藥材0.5g，置具塞錐形瓶中，加70 %甲醇50ml，超聲30分鐘，搖勻，濾過，取續濾液，作為粉葛藥材溶液； (6)測定:精密吸取葛根對照藥材、粉葛對照藥材、葛根藥材、粉葛藥材溶液各1-10μ 1，注入液相色譜儀，對比色譜圖，葛根對照藥材和葛根藥材均有3』 -羥基葛根素、葛根素、3』-甲氧基葛根素、葛根素-7-木糖苷與大豆苷；粉葛對照藥材有葛根素、3』-甲氧基葛根素、葛根素-7-木 糖苷與大豆苷；粉葛藥材只有葛根素、大豆苷。
【文檔編號】G01N30/02GK103969372SQ201410215955
【公開日】2014年8月6日 申請日期:2014年5月22日 優先權日:2014年5月22日
【發明者】劉永利, 趙振霞, 王敏, 馮麗, 王鈺寧 申請人:河北省食品藥品檢驗院