一種調節動物免疫功能的藥物組合物及其製備方法與流程

2023-12-05 09:16:01

本發明涉及獸藥領域，具體而言，涉及一種調節動物免疫功能的藥物組合物及其製備方法。

背景技術：

我國西南地區雲、貴、川均為畜牧業生產大省，其中養豬業在全國首屈一指，家禽養殖業也日趨繁榮，並且養殖量逐年上升。但由於長期使用各種化學藥品、抗生素等，動物極易產生耐藥性。某些常見疾病，如大腸桿菌、雞白痢沙門氏菌、流行性感冒、流行性腹瀉、傳染性支氣管炎等病毒性疾病在畜、禽中普遍存在，發病死亡率較高。每年由於這類疾病，對整個畜牧業造成巨大的損失。

使用這些化學藥品的同時，存在兩大問題：其一，由於家畜家禽的不規範用藥和長期使用這類藥品，已產生了明顯的耐藥性，雖用藥量在不斷的增加，而療效卻並沒有明顯的提高甚至不斷下降；其二，由於這類藥品在實際應用中，不嚴格限制休藥期，加之超劑量使用，導致藥物在動物體內的蓄積量不斷增加，在動物源性食品中引起超量殘留。超量殘留，一方面嚴重影響這類食品的出口，給國家在出口創匯方面造成極大的損失；另一方面，人在食用這些食品後，對身體健康危害極大，引起人體耐藥性，當需要使用這類藥品時，這時正常劑量、甚至超劑量都將達不到治療效果；同時，由於超量的攝入化學藥品，其副作用還將給人的身體器官帶來漸近性和不可復損害，因此，必須減少或者避免給動物使用化學類藥品。

技術實現要素：

本發明的第一目的在於提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過黃芪和大青葉的相互配伍，能夠益氣固本、清瘟解毒，提高動物的免疫能力。

本發明的第二目的在於提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物的製備方法，該方法以黃芪和大青葉為原料，通過提純工藝同時製備不同純度的藥材提取液，並最後同時得到多種劑型的藥物組合物，製劑工藝簡便、穩定，易於大批量生產，且生產成本低。

為了實現本發明的上述目的，特採用以下技術方案：

一種調節動物免疫功能的藥物組合物的製備方法，其包括：

採用溶劑提取法提取3～5份重量份的黃芪，減壓濃縮後製備多種純度的黃芪提取物；

採用溶劑提取法提取1～3份重量份的大青葉，減壓濃縮後製備多種純度的大青葉提取物；以及

將黃芪提取物與大青葉提取物混合，製備顆粒劑、口服液、注射劑或丸劑。

一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，按重量份數計，黃芪為3～5份，大青葉為1～3份。

與現有技術相比，本發明的有益效果為：

該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過黃芪和大青葉的相互配伍，黃芪扶正補氣、調節免疫，大青葉抗菌病毒、增強免疫，兩者共奏益氣固本、清瘟解毒之功，且安全有效，提高動物的免疫能力，且提高動物的肉質。該方法以黃芪和大青葉為原料，通過提純工藝同時製備不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液，並通過不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液之間的混合，能夠同時得到多種劑型的藥物組合物，即處理同一批次的黃芪和大青葉，便可同時得到顆粒劑、口服液、注射劑等劑型的藥物組合物，從而極大的減緩了工藝程序、降低了工作強度，且該方法工藝簡便、成熟、穩定，易於大批量生產，生產成本低。

具體實施方式

下面將結合實施例對本發明的實施方案進行詳細描述，但是本領域技術人員將會理解，下列實施例僅用於說明本發明，而不應視為限制本發明的範圍。實施例中未註明具體條件者，按照常規條件或製造商建議的條件進行。所用試劑或儀器未註明生產廠商者，均為可以通過市售購買獲得的常規產品。

本實施方式提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物的製備方法，其包括：

S1:採用溶劑提取法提取3～5份重量份的黃芪，減壓濃縮後製備多種純度的黃芪提取物。

黃芪提取物包括第一黃芪提取物、第二黃芪提取物和第三黃芪提取物中的一種或多種，第一黃芪提取物、第二黃芪提取物和第三黃芪提取物的純度依次遞增。較高純度的黃芪提取物是由較低純度的黃芪提取物製備而來，即第三黃芪提取物是由第二黃芪提取物或者第一黃芪提取物提純製備而來；第二黃芪提取物是由第一黃芪提取物提純製備而來。

溶劑提取法包括水煎煮法、回流提取法、浸泡法、超聲波提取法等。在本發明較佳的實施例中，採用水煎煮法提取。

第一黃芪提取物的製備方法包括：採用水煎煮法提取黃芪，濾液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對密度為1.2～1.3。優選的，取黃芪藥材，加入8倍量的水煎煮3次，每次1.5h，合併濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.2～1.3(60℃)，即將濾液濃縮至其在60℃下的相對密度為1.2～1.3。

第二黃芪提取物的製備方法包括：將第一黃芪提取物與乙醇按照體積比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為50～60％，優選為55％；靜置後，離心得第一黃芪沉澱和第一黃芪上清液；優選為靜置12～48小時；第一黃芪上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對密度為1.20～1.28，優選為第一黃芪上清液減壓濃縮至其相對密度為1.20～1.28(60℃)。

由第一黃芪提取物製備第二黃芪提取物的過程，主要採用水提醇沉的純化工藝，將第一黃芪提取物中不易溶於水中的組分通過乙醇沉澱除去，進而提高最後所得的第二黃芪提取物的純度。

第二黃芪提取物的製備方法還包括：用水溶解第一黃芪沉澱，再使其與乙醇按照體積比6～7：3～4混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為30～40％，優選為35％，進行醇沉法，以除去第一黃芪沉澱中不易溶於水中的組分；隨後，靜置12～48h，離心得第二黃芪上清液，第二黃芪上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對密度為1.20～1.28，優選為第二黃芪上清液減壓濃縮至其相對密度為1.20～1.28(60℃)。

第三黃芪提取物的製備方法包括：將第二黃芪提取液用水溶解，優選為用5～10倍注射用水溶解；溶解後，加熱煮沸30～60min，優選為45min；再與活性炭混合均勻，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，優選為0.8g/L，靜置後過濾澄清。

第二黃芪提取液溶解後，加熱煮沸30～60min，以使第二黃芪提取液中的水溶性蛋白在高溫下變性、聚集，有利於提高活性炭的吸附效果，從而得到純度更高的第三黃芪提取物。

優選的，在將第二黃芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量為85～95％，靜置12～48h，上清液加入活性炭進行循環過濾澄清，濾液濃縮至相對密度1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水，攪拌溶解，冷藏過夜，過濾澄清，加熱煮沸30min，加入活性炭攪拌10min，使溶液中活性炭的濃度為5～10g/L，過濾澄清。

S2:採用溶劑提取法提取1～3份重量份的大青葉，減壓濃縮後製備多種純度的大青葉提取物。

大青葉提取物包括第一大青葉提取物、第二大青葉提取物和第三大青葉提取物中的一種或多種，第一大青葉提取物、第二大青葉提取物和第三大青葉提取物的純度依次遞增；較高純度的大青葉提取物是由較低純度的大青葉提取物製備而來，即第三大青葉提取物是由第二大青葉提取物或者第一大青葉提取物提純製備而來；第二大青葉提取物是由第一大青葉提取物提純製備而來。

第一大青葉提取物的製備方法包括：採用水煎煮法提取大青葉，濾液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對密度為1.18～1.28。優選的，取大青葉藥材，加入10倍量的水煎煮2次，每次1h，合併濾液，將濾液減壓濃縮至相對密度為1.18～1.28(60℃)，即將濾液濃縮至其在60℃下的相對密度為1.18～1.28。

第二大青葉提取物的製備方法包括：將第一大青葉提取物與乙醇按照體積比1～2：1～3混合，即使所得溶液中乙醇的含醇量為50～60％，優選為55％；靜置後，離心得大青葉上清液，大青葉上清液減壓濃縮至其在55～65℃下的相對密度為1.16～1.26。

第三大青葉提取物的製備方法包括：將第二大青葉提取液與水混合，優選用5～10倍注射用水溶解；溶解後，加熱煮沸25～35min後，與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為5～10g/L，靜置後過濾。

優選的，在將第二黃芪提取液用水溶解前，先加乙醇使所得溶液中乙醇的含醇量為85～95％，靜置12～48h，上清液加入活性炭進行循環過濾澄清，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.28(60℃)；再加5～10倍注射用水溶解，冷藏過夜，過濾澄清，加熱煮沸30min；再與活性炭混合，攪拌均勻，過濾澄清。

S3:將黃芪提取物與大青葉提取物混合，製備顆粒劑、口服液、注射劑或丸劑。

藥物組合物為顆粒劑，該顆粒劑的製備方法包括：在將第一黃芪提取物與第一大青葉提取物混合，再與藥用輔料混合均勻並制粒、乾燥，藥用輔料的質量為黃芪提取物與大青葉提取物總質量的5～10倍，藥用輔料包括蔗糖、糊精、可溶性澱粉等。

在本實施方式中，溶液減壓濃縮後的相對密度是在發明人多年的理論研究和實踐研究中得到的，若相對密度過高，則所得提取物的稠度過大，難以進行有效濃縮；而當相對密度過低，則不能很好的去除溶劑，不利於後續的純化步驟。

藥物組合物為口服液，該口服液的製備方法包括：將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合併用水溶解，優選的，用5～10倍的水溶解；調節其pH值為7.0～7.5後，優選的，用10wt％的NaOH調節pH；隨後，再加熱煮沸30～60min，優選為45min；隨後與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，過濾澄清；最後，加水定容後，再次用10wt％的NaOH調節pH值為7.0～7.5，過濾、灌裝、滅菌。

藥物組合物為注射液，該注射液的製備方法包括：將第三黃芪提取物與第三大青葉提取物混合，調節其pH值為7.0～7.5後，優選的，用10wt％的NaOH調節pH；隨後，加熱煮沸55～65min，優選為60min；隨後與活性炭混合，使溶液中活性炭的濃度為1～5g/L，保溫10min後過濾；濾液冷藏過夜，再次過濾後，用注射用水定容，再次用10wt％的NaOH調節pH值為7.0～7.5，過濾、灌裝、滅菌。

該製備方法以黃芪和大青葉為原料，通過提純工藝同時製備不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液，並通過不同純度的黃芪提取液和大青葉提取液之間的混合，能夠同時得到多種劑型的藥物組合物，即處理同一批次的黃芪和大青葉，便可同時得到顆粒劑、口服液、注射劑等劑型的藥物組合物，從而極大的減緩了工藝程序、降低了工作強度，且該方法工藝簡便、成熟、穩定，易於大批量生產，生產成本低。

一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，按重量份數計，黃芪為3～5份，大青葉為1～3份。

該藥物組合物由黃芪和大青葉組成，通過黃芪和大青葉的相互配伍，黃芪扶正補氣、調節免疫，大青葉抗菌病毒、增強免疫，兩者共奏益氣固本、清瘟解毒之功，且安全有效，具有調節免疫功能，促進抗體形成，抗菌、抗病毒的功能，能夠有效的提高動物的免疫能力，且能夠提高動物的肉質。

以下結合實施例對本發明的特徵和性能作進一步的詳細描述：

實施例1

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.28(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉400g加4000mL水煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.24(60℃)，得第一大青葉提取物。

合併第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃乾燥，即得。

實施例2

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其製備方法為：

稱取黃芪600g，加4800mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.2(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉200g加2000mL水煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.18(60℃)，得第一大青葉提取物。

合併第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃乾燥，即得。

實施例3

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑，其製備方法為：

稱取黃芪1000g，加8000mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.3(60℃)，得第一黃芪提取液；

大青葉600g加6000mL水煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.28(60℃)，得第一大青葉提取物。

合併第一黃芪提取液和第一大青葉提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃乾燥，即得。

實施例4

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，加乙醇使含醇量為60％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，得沉澱120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量50％，靜置過夜，再將上清液濃縮至相對密度為1.16(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調pH值至7.0～7.5，加熱煮沸30min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過濾澄清，冷藏過夜，過濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，過濾，灌裝，滅菌，即得。

實施例5

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.3(60℃)，加乙醇使含醇量為50％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，得沉澱120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28(60℃)，得第一浸膏；取沉澱，加720mL水攪拌溶解，加乙醇使含醇量為40％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量60％，靜置過夜，再將上清液濃縮至相對密度為1.26(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調pH值至7.0～7.5，加熱煮沸60min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過濾澄清，冷藏過夜，過濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，過濾，灌裝，滅菌，即得。

實施例6

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為口服液，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.25(60℃)，加乙醇使含醇量為55％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，得沉澱120g和上清液1100mL。取上清液減壓濃縮至相對密度為1.24(60℃)，得第一浸膏；取沉澱，加720mL水攪拌溶解，加乙醇使含醇量為35％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.28(60℃)，得第二浸膏，混合第一浸膏和第二浸膏，得到第二黃芪提取物；

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量55％，靜置過夜，再將上清液濃縮至相對密度為1.30(60℃)，得第二大青葉提取物。

將第二黃芪提取物和第二大青葉提取物混合，加水800mL，攪拌溶解，用10wt％的NaOH溶液調pH值至7.0～7.5，加熱煮沸45min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過濾澄清，冷藏過夜，過濾，加水定容至1000mL，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，過濾，灌裝，滅菌，即得。

實施例7

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其製備方法為：

按照實施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸60min，加活性炭攪拌10min，使溶液中活性炭的濃度為1g/L過濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸35min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為5g/L攪勻，過濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，加熱煮沸65min，加活性炭保溫10min，使溶液中活性炭的濃度為1g/L過濾，濾液冷藏過夜，過濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發明注射液。

實施例8

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其製備方法為：

按照實施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，攪拌10min，過濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸25min，加活性炭，使溶液中活性炭的濃度為1g/L攪勻，過濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，加熱煮沸55min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，保溫10min，過濾，濾液冷藏過夜，過濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發明注射液。

實施例9

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其製備方法為：

按照實施例6的方法得到第二黃芪提取物和第二大青葉提取物；

將第二黃芪提取物用水溶解，加熱煮沸45min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為2.5g/L，攪拌10min，過濾澄清，得第三黃芪提取物；

將第二大青葉提取物用水溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為8g/L，攪勻，過濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，加熱煮沸60min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為2.5g/L，保溫10min，過濾，濾液冷藏過夜，過濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發明注射液。

實施例10

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為注射液，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.24(60℃)，得第一黃芪提取物。

將第一黃芪提取物加乙醇使含醇量為60％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，得沉澱100g和上清液1000mL。取上清液減壓濃縮至相對密度為1.24(60℃)，用水溶解，加乙醇使含醇量為85％，靜置過夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，循環過濾澄清，濾液減壓濃縮至相對密度1.25(60℃)，得第一浸膏。取沉澱，加600mL水攪拌溶解，加乙醇使含醇量為35％，攪拌均勻，靜置過夜，離心，取上清液減壓濃縮至相對密度為1.24(60℃)，得第二浸膏。第二黃芪提取物即為第一浸膏和第二浸膏的總和。

將第一浸膏加注射用水400mL，攪拌溶解，冷藏過夜，過濾澄清，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，攪拌10min，過濾澄清，得第一溶液；將第二浸膏加注射用水300mL溶解，加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，，攪勻、過濾澄清，得第二溶液；混合第一溶液和第二溶液，得到第三黃芪提取物。

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.24(60℃)，得第一大青葉提取物；加乙醇至含醇量60％，靜置過夜，再將上清液濃縮至相對密度為1.20(60℃)，得第二大青葉提取物；用水溶解，加乙醇至含醇量60％，靜置過夜，上清液濃縮至相對密度1.20(60℃)，加乙醇至含醇量85％，靜置過夜，上清液加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，過濾，濾液濃縮至相對密度1.20(60℃)，加注射用水300ml，攪拌溶解，冷藏過夜，過濾澄清，濾液加熱煮沸30min，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為5g/L，攪勻，過濾澄清，得第三大青葉提取物。

混合第三黃芪提取物和第三大青葉提取物，用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，加熱煮沸1小時，加活性炭使溶液中活性炭的濃度為1g/L，保溫10min，過濾，濾液冷藏過夜，過濾，加注射用水至1000ml，再用10wt％的NaOH溶液調pH值7.0～7.5，精濾，灌裝，滅菌，即得本發明注射液。

實施例11

本實施例提供一種調節動物免疫功能的藥物組合物，該藥物組合物為顆粒劑、口服液和注射劑，其製備方法為：

稱取黃芪800g，加6400mL水煎煮3次，每次1.5小時，過濾，合併濾液，減壓濃縮至相對密度為1.24(60℃)，得黃芪提取物。將黃芪提取物分為2份，其中一份為第一黃芪提取物，另一份採用實施例6的方法製備第二黃芪提取物；將第二黃芪提取物分為2份，一份留用，另一份採用實施例9的方法製備第三黃芪提取物。

稱取大青葉400g，加4000mL水煎煮2次，每次1小時，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.24(60℃)，得大青葉提取物；將大青葉提取物分為2份，其中一份為第一大青葉提取物，另一份採用實施例6的方法製備第二大青葉提取物；將第二大青葉提取物分為2份，一份留用，另一份採用實施例9的方法製備第三大青葉提取物。

採用實施例3的方法將第一黃芪提取物與第一大青葉提取物混合，製得顆粒劑；採用實施例6的方法將留用的第二黃芪提取物與留用的第二大青葉提取物混合，製得口服液；採用實施例9的方法將第三黃芪提取物與第三大青葉提取物混合，製得注射液。

實驗例

下面結合藥效試驗對本發明實施例提供藥物組合物在調節動物免疫功能，促進動物生長，提高動物肉質等方面的效果進行評價。

一、試驗材料

1.1試驗藥品

實施例11製備的顆粒劑和口服液。

1.2試驗動物

KM小鼠，體重16-18g；雛雞，21日齡左右；

1.3試驗儀器、試劑

96孔細胞培養板；注射器；電子天平；玻璃毛細管；96孔V型血凝板；遊標卡尺；色差計，等；

環磷醯胺；生理鹽水；1640細胞培養基；小鼠外周血淋巴細胞分離液；CCK-8試劑盒；刀豆蛋白A(ConA)等

1.4陽性藥物

陽性藥物配方：黃芪150g、大青葉150g、黃連100g、黃芩150g、連翹250g。

製備方法：將上述藥物分別加入8～10倍量水，採用煎煮法提取三次，每次1～1.5h，分別將每味藥材的濾液合併，減壓濃縮至相對密度為1.2(60℃)後，合併所有藥材的提取物，加蔗糖粉850g混合均勻，制粒，80℃乾燥，即陽性藥物顆粒劑。

二、試驗方法

取240隻雌性KM小鼠分為12組，每組20隻，適應性餵養3天後，禁食12h，開始按照表1進行給藥，連續7天，在給藥第3天、第4天和第7天時對第9-12組進行腹腔注射80mg/kg環磷醯胺免疫抑制劑，0.5ml/25g體重。

表1

最後一天給藥後間隔12h後，每組每隻小鼠腿部肌肉注射雞新城疫疫苗，每隻2頭份，給藥結束。

將雛雞40隻分為8組，每組5隻，按照表1中組別1-8的濃度進行拌料給藥，自由採食7天。

2.1小鼠生長發育試驗

分別稱量各組小鼠的初始體重和給藥結束後第7、14、21天小鼠的體重並記錄，進行數據比較。

2.2小鼠抗體水平檢測

於給藥後第7、14、21天每組隨機選擇3-5隻小鼠，用毛細管採眼眶血0.2-0.4mL，分離血清，採用微量血凝抑制試驗檢測抗體效價並記錄。

2.3小鼠淋巴細胞轉化率

給藥結束後第7、14、21天，分別每組隨機選擇3-5隻，採集含抗凝劑眼眶外周血1mL，按照淋巴細胞分離液試劑盒說明書進行淋巴細胞分離，將分離出的淋巴細胞加入96孔細胞培養板中，每孔100μL，以培養基作為空白對照，每個樣本做4個孔重複，其中兩孔加入50μL 50μg/ml Con A，另外兩孔不加，空白對照同樣進行本處理。在含5％二氧化碳37℃培養箱中培養48h。於培養結束前4h，每孔加入10μL CCK-8試劑，繼續培養3h，取出後用酶標儀測定OD450值並記錄，按照下面公式進行計算淋巴細胞轉化率：

2.4小鼠脾臟指數測定

於給藥結束後22天處死小鼠，並取出脾臟，稱量脾臟重量並按照下面公式計算脾臟指數：

脾臟指數＝脾臟重量(mg)/小鼠體重(g)

2.5雛雞肉質測定

給藥結束後7天，將肉雞處死並去毛，剝離肉雞胸肌，靜置45min後，採用美國產WSC一II型色差計測定肌肉顏色(紅色色度，也稱Hunterα值)，測定並計算胸肌滴水損失率。

三、試驗結果

3.1小鼠生長發育試驗

給藥結束後不同時間測量小鼠體重發現，給藥後7、14、21天免疫抑制-陰性對照組於陰性對照組比較均有顯著差異(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功，且數據可信；給藥後7、14、21天後顆粒劑高濃度組和口服液高濃度組與陰性對照組差異極顯著(P0.05)，與免疫抑制-陰性對照組比較有明顯差異。

3.2小鼠抗體水平

結果表明經過雞新城疫疫苗免疫後第7、14、21天，免疫抑制-陰性對照組抗體水平與陰性對照組相比均有顯著差異(P<0.05)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫後第7、14、21天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對照組差異均為顯著(P<0.05)，免疫抑制給藥組與陰性對照組差異趨勢相同；陽性對照組抗體效價與陰性對照組差異並不顯著。

3.3小鼠淋巴細胞轉化率

給藥後不同時間各組小鼠外周淋巴細胞刺激指數說明免疫後7、14、21天免疫抑制-陰性對照組與陰性對照組相比有顯著或者極顯著差異(P<0.05或P<0.01)，表明免疫抑制模型造模成功；免疫後第7天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對照組差異極顯著(P<0.01)，免疫後14、21天顆粒劑和口服液高劑量與陰性對照組差異均為顯著或極顯著(P<0.05或P0.05)；陽性對照組與陰性對照組差異不顯著(P>0.05)。

3.4提高雛雞肉質

經過對雛雞肉質的測定發現，與陰性對照組比較，口服液和顆粒劑高濃度組紅色色度具有極顯著差異(p0.05)；且給藥組(即顆粒劑與口服液)滴水損失率與陰性對照組相比有減少，差異顯著或極顯著(p<0.05或p0.05)。

四、結論

本發明實施例11中提供的顆粒劑和口服液，相比與陽性以及陰性對照組，能夠促進動物的生長發育，提高動物體內的抗體水平以及淋巴細胞轉化率，並且能一定程度提高動物肉質，由此說明，本發明提供的藥物組合物具有提高動物免疫功能和增加體重的作用。

儘管已用具體實施例來說明和描述了本發明，然而應意識到，在不背離本發明的精神和範圍的情況下可以作出許多其它的更改和修改。因此，這意味著在所附權利要求中包括屬於本發明範圍內的所有這些變化和修改。