一種纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒的製作方法
2023-12-05 22:45:51 3
本發明涉及臨床體外檢測試劑技術領域，特別涉及一種纖維蛋白溶酶原免疫比濁法檢測試劑盒。
背景技術：
人纖維蛋白溶酶原（plasminogen，Pg）是一種血漿蛋白，主要由肝細胞產生，血漿中的含量為0.06~0.25mg/mL。人纖維蛋白溶酶原是人纖維蛋白溶酶的前體物質，沒有活性。在正常人體內，人纖維蛋白溶酶原通過纖維蛋白溶酶原激活因子激活轉變成有活性的人纖維蛋白溶酶，進而水解纖維蛋白（原）和其它的凝血因子，起到抗凝的作用。纖溶酶的作用是保持血管內的凝血、纖溶的平衡，使血流暢通。
纖維蛋白溶酶原主要生理功能是參與纖溶系統。纖維蛋白溶酶原在血清中處於非活性狀態，可被尿激酶、鏈激酶、胰蛋白酶、凝血酶等物質激活。激活後的纖維蛋白溶酶原轉變為纖溶酶，它可以水解凝固的纖維蛋白，從而使得沉澱附著於血管壁的纖維蛋白得以逐漸溶解，起到抗凝的作用。嚴重創傷、灼傷、外科手術、產科意外、輸血反應等病理情況時，纖溶系統被過度激活，致使大量的纖維蛋白溶酶原轉變為纖溶酶，其活力過強，超過了抗纖溶酶的抑制能力，這時就會導致纖溶過度而致出血。纖溶過度也是血管內彌散性凝血的重要特徵。
本發明提供一種用免疫透射比濁法檢測纖維蛋白溶酶原的試劑盒，優化其反應體系，使其操作簡單、重複性好、穩定性好、可進行批量樣本全自動化檢測，從而有利於在市場中進一步推廣使用。
技術實現要素：
本發明旨在提供一種穩定性好用於檢測纖維蛋白溶酶原的試劑盒，該試劑盒採用免疫透射比濁法。該試劑盒與常規的試劑盒相比，穩定性和線性相關性比常規的檢測試劑盒要好，有利於試劑在臨床上的推廣應用。
基本原理：
以免疫透射比濁法為測定原理，當樣本與試劑混合後，樣本中的纖維蛋白溶酶原與羊抗人纖維蛋白溶酶原抗體發生特異性結合，形成不溶性的抗原-抗體複合物，使溶液產生濁度。在340nm波長下檢測，該濁度的高低在一定量抗體存在時與抗原的含量成正比。通過與同樣處理的校準液比較，計算未知樣本中纖維蛋白溶酶原的含量。
發明是通過以下步驟得到的：
一種纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，其特徵在於，它包含試劑R。試劑組成如下：50mmol/L pH為7.8 的磷酸鹽緩衝液、1.8mg/mL羊抗人纖維蛋白溶酶原抗體、1%聚乙二醇6000、2%乳膠顆粒、20mmol/L EDTA-Na2、50mmol/L氯化鈉、10mmol/L疊氮鈉。
所述的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，其特徵在於試劑R緩衝液為25℃，pH為7.8的磷酸鹽緩衝液。
所述的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，其特徵在於所述膠乳顆粒為聚苯丙烯，粒徑為100-260nm。
所述的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，其特徵在於所述穩定劑為EDTA- Na2（乙二胺四乙酸二鈉）。
所述的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，其特徵在於，使用全自動生化分析儀採用終點法進行測定，檢測主波長為340nm。
本發明的試劑盒在具有雙試劑功能的全自動生化分析儀上進行，其具體使用方法為：
加入生理鹽水、樣本或校準品3μl，再加入300μl 的試劑R，預孵育5min後讀取吸光度A1，再反應5min後讀取吸光度A2，並計算ΔA。
本發明的有益效果：
1）採用新的緩衝體系，改善了試劑穩定性；
2）添加EDTA-Na2，增強了試劑穩定性，而且不會對試劑準確度產生影響；
3）試劑準確度和穩定性好，價格便宜，使用方便，有利於該試劑在市場中進一步推廣。
附圖說明
圖1為本發明試劑與對照組試劑準確度實驗結果；
圖2為本發明試劑與對照組試劑準確度實驗的相關性曲線圖；
圖3為本發明試劑與對照組試劑效期穩定性曲線圖；
圖4 為本發明試劑與對照組試劑線性相關性驗證試驗結果；
圖5 為本發明試劑與對照組試劑線性穩定性驗證試驗結果。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明進行進一步說明：
實施例1
一種常規的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，它包括試劑R。
試劑R組成為：
50mmol/L 磷酸鹽緩衝液 pH為7.8
羊抗人纖維蛋白溶酶原抗體 1.8mg/mL
聚乙二醇6000 1%
乳膠顆粒 2%
EDTA-Na2 20mmol/L
氯化鈉 50mmol/L
疊氮鈉 10mmol/L。
本實施例所述試劑R配置時需先配製磷酸緩衝液，調到適當pH值後，再添加其它成分。本實施例所述試劑盒在使用時，其測定方法是採用邁瑞800全自動生化分析儀，利用終點法進行測定，檢測主波長為340nm，操作如下：
加入生理鹽水、樣本或校準品3μl，再加入300μl 的試劑R，預孵育5min後讀取吸光度A1，再反應5min後讀取吸光度A2，並計算ΔA。
ΔA＝A2- A1
纖維蛋白溶酶原含量（mg/L）＝（∆A測定÷∆A標準）×C標準。
測定：檢測樣本 ∆A標準：標準品
實施例2
準確度驗證試驗：將實施例1的纖維蛋白溶酶原檢測試劑作為實驗組，市場上獲得認可的一種準確度好、穩定性好的纖維蛋白溶酶原檢測試劑作為對照組進行檢測，對20個臨床血清樣本進行檢測，檢測結果如圖1所示。獲得了兩種試劑的相關性曲線（如圖2所示），結果表明，兩組試劑盒的相關係數為0.9961，說明兩者相關性比較好。證明本發明試劑盒添加及更改的組分對其準確性不會造成影響，試劑盒依然保持較好的準確度。
實施例3
線性相關性驗證試驗：選取纖維蛋白溶酶原含量為420mg/L的高值樣本，用生理鹽水進行系列稀釋，配製6個不同濃度的樣本，濃度依次為420mg/dL、336mg/dL、252mg/dL、168mg/dL、84mg/dL、0mg/dL。分別利用實施例1試劑及對照組試劑進行檢測，每個濃度的樣本分別測定三次，分別取平均值，檢測結果如圖4所示。
如上表所示，實施例1與對照組試劑檢測結果相關係數均大於0.990，且實施例1試劑檢測結果的相關係數略大於對照組試劑檢測結果的相關係數，這表明本發明試劑具有更好的線性相關性。
實施例4
穩定性驗證實驗：在2℃～8℃、無腐蝕性氣體的避光環境中貯存試劑，檢測實施例1及對照組試劑的穩定性。每月1號分別用兩組試劑測定同一混合血清樣本，測定三次取平均值，檢測數據如圖5所示。
實驗結果顯示，實施例1試劑在2℃～8℃、無腐蝕性氣體的避光環境中貯存15個月穩定，而對照組試劑在2℃～8℃、無腐蝕性氣體的避光環境中貯存8個月後開始不穩定，說明本發明試劑更換緩衝液及添加EDTA-Na2後穩定性增強。
綜上所述，本發明提供的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒，將試劑R的緩衝液更換為pH 7.8的磷酸鹽緩衝液，同時添加20mmol/L的EDTA-Na2，提高了試劑盒的穩定性，線性範圍較好，試劑的準確度也較好。因此，本發明提供的纖維蛋白溶酶原檢測試劑盒有利於在市場中進一步的推廣使用。