一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法

2023-12-09 14:57:06

一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法
【專利摘要】本發明為一種碳納米管降鈣素原的檢測試劑盒及其製備方法。試紙底板上依次粘貼有樣品墊、碳納米管膠體金墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊。其特徵在於：所述的碳納米管膠體金墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線。本發明試劑盒採用碳納米管膠體金標記技術，檢測樣本中的降鈣素原，從而判斷是否為細菌感染。具有操作簡單、反應快速、靈敏度高、特異性強等特點，適合現場檢測和自檢。
【專利說明】 一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法

【技術領域】
[0001]本發明涉及一種體外診斷試劑盒，具體來說，涉及一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法，適用於臨床檢驗樣本中的降鈣素原。

【背景技術】
[0002]膠體金免疫層析技術廣泛用於疾病標記物檢測、食品檢測、科學研宄等多個領域，所選用的示蹤標記材料一般為膠體金、乳膠顆粒等，層析材料一般為纖維素膜，包括硝酸纖維素膜、醋酸纖維素膜、混合纖維素膜等，其中最常用的是硝酸纖維素膜。在目前的技術條件下，使用膠體金等示蹤材料和硝酸纖維素膜作為載體很難再提高檢測靈敏度。
[0003]靈敏度不高的原因很多，包括原料、工藝等，但根本的原因是膠體金方法本身的局限性，按傳統的膠體金方法很難再提高靈敏度了。現在一般的解決思路是在膠體金體系中增加放大系統，比如採用生物素-親和素放大系統。


【發明內容】

[0004]本發明提供一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法，其所要解決的技術問題是:提供一種碳納米管膠體金複合物，作為示蹤標記材料，用於標記降鈣素原抗體，提高檢測的靈敏度。
[0005]本發明採用如下技術方案來實現的:
一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒，其特徵在於:該試劑盒是用碳納米管膠體金複合物標記降鈣素原抗體。
[0006]試紙底板上依次粘貼有樣品墊、碳納米管膠體金複合物墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊；所述的碳納米管膠體金複合物墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線。
[0007]所用的碳納米管4為單壁碳納米管、多壁碳納米管、羥基化碳納米管、羧基化碳納米管、水溶性碳納米管中的一種。
[0008]碳納米管4和膠體金3通過自組裝形成碳納米管膠體金複合物。
[0009]所述的碳納米管膠體金複合物，其中碳納米管4佔膠體金複合物總質量為0.1?20.0%。
[0010]一種如上所述的碳納米管降鈣素原檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於:所述的碳納米管膠體金複合物墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線；具體步驟如下:
(1)碳納米管分散液的製備:取10ml純水中加入0.5?5.0g的表面活性劑，攪拌均勾後，加入10?100mg碳納米管4，超聲波細胞粉碎機超聲2?lOmin，得到碳納米管分散溶液；
(2)碳納米管膠體金複合物的製備:取用膠體金3標記好的降鈣素原抗體，加入質量比0.1?30.0%的上述碳納米管分散液，攪拌5?30分鐘；離心30?60min ；
(3)碳納米管膠體金複合物墊的製備:棄去上清液，再往離心管中加入金標稀釋液，混勻後，將上述溶液噴塗在處理過的金標墊上，乾燥備用；
(4)檢測線、質控線劃膜:將NC膜貼於底板上，待用；配製0.5mg/ml的降鈣素原單克隆抗體2 ;配製濃度為1.0mg/ml羊抗鼠抗體；分別再通過點膜儀以1.Ομ?/cm在之前準備好的NC膜上劃膜，分別為T、C線，室溫乾燥2小時；
(5)組裝:再將乾燥好的膠體金墊和吸水紙、樣品墊、貼有NC膜的底板進行組裝，然後通過自動斬切機切割成4.0mm的試紙條，再將試紙條和卡盒進行壓殼，然後將試劑盒與乾燥劑、吸管組裝並封口。
[0011]優點及效果:一般認為，當每平方毫米的膠體金顆粒積聚為17個時，檢測線才能明顯顯色，通過增加膠體金的積聚量就能提高檢測靈敏度。本著這個思路，採用碳納米管和膠體金結合形成複合物的方法來提高檢測靈敏度。
[0012]碳納米管是一種新型納米材料，重量輕，六邊形結構連接完美，具有許多異常的力學、電學和化學性能。碳納米管在免疫分析方面已有不少研宄，主要集中在免疫傳感器領域，能大幅度提高檢測靈敏度。碳納米管分為單壁碳納米管、多壁碳納米管、羥基化碳納米管、羧基化碳納米管，經處理後也可得到水溶性碳納米管，具有良好的吸附分離性能，功能化的碳納米管更易和蛋白質結合。碳納米管和膠體金的複合物標記蛋白質，能提高檢測的靈敏度。
[0013]降鈣素原(PCT)是一種蛋白質，當嚴重細菌、真菌、寄生蟲感染以及膿毒症和多臟器功能衰竭時它在血漿中的水平升高。自身免疫、過敏和病毒感染時PCT不會升高。
[0014]在呼吸道細菌感染患者中，痰液和咽部分泌液中的降鈣素原水平均會升高，其升高水平一般高於血液，所以檢測痰液和咽拭子中的降鈣素原含量，可以診斷呼吸道感染的類型。
[0015]【專利附圖】

【附圖說明】:
圖1為本發明碳納米管膠體金複合物微觀結構示意圖。
[0016]圖中標註:膠體金3，碳納米管4。
[0017]【具體實施方式】:
一個碳納米管可以吸附多個膠體金顆粒，只要其中有一個或幾個抗體和待測抗原在檢測線上形成夾心複合物，就可同時將碳納米管上其他膠體金顆粒積聚在檢測線上，增加顯色強度，從而提高檢測靈敏度。
[0018]圖1為碳納米管膠體金複合物示意圖，膠體金和碳納米管可以通過自組裝形成複合物，一個碳納米管可以吸附多個金顆粒。在一般膠體金法中，一個標記好的金顆粒和一個待測抗原結合，並在檢測線上形成夾心物顯色。採用碳納米管膠體金複合物後，如果碳納米管上的一個金顆粒和待測抗原結合，那麼就可以將碳納米管上的其他未和待測抗原結合的金顆粒一起帶到檢測線並停留顯色，增加金顆粒在檢測線的積聚量，顯色效果更明顯。多數情況下，待測抗原要少於金標記的抗體，就是說抗體往往過量，尤其是在檢測微量抗原時更是如此，比如說檢測微量PCT。在這種情況下，大量的未和待測抗原結合的金顆粒未在檢測線停留，直接層析過去，這就是膠體金法靈敏度難以提高的根本原因。通過採用碳納米管膠體金複合物技術，就可以讓未結合待測抗原的膠體金顆粒在檢測線上停留，從而提高檢測靈敏度。
[0019]一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒及其製備方法，所述的碳納米管膠體金複合物墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線。
[0020]碳納米管分散液的製備:取10ml超純水中加入0.5?5.0g的表面活性劑，攪拌均勾後，加入10?100mg碳納米管，超聲波細胞粉碎機超聲2?lOmin，得到碳納米管分散溶液；
碳納米管膠體金複合物的製備:取用膠體金標記好的降鈣素原抗體，加入質量比
0.1?30.0%的上述碳納米管分散液，攪拌5?30分鐘。離心30?60min。
[0021]碳納米管膠體金複合物墊的製備:棄去上清液，再往離心管中加入金標稀釋液，混勻後，將上述溶液噴塗在處理過的金標墊上，乾燥備用。
[0022]下面結合實施例對本發明進行進一步詳細說明，但本發明的保護範圍不受實施例所限。
實施例
[0023]1、碳納米管分散液的製備:取10ml純水中加入2.0g的吐溫_20，攪拌均勻後，加入20mg單壁碳納米管，超聲波細胞粉碎機超聲2min，得到0.2mg/ml的碳納米管溶液；
2、膠體金標記降鈣素原抗體:取製備好的膠體金溶液10ml加入燒杯中，通過酸度計測定，以0.2M的碳酸鉀溶液調pH值為8.0，加入0.5mg的降媽素原單克隆抗體1，磁力攪拌30mino
[0024]3、碳納米管膠體金複合物的製備:取用膠體金標記好的降鈣素原抗體，加入
0.1ml的上述碳納米管分散液，攪拌30分鐘。低溫離心30min。
[0025]4、碳納米管膠體金複合物墊的製備:棄去上清液，再往離心管中加入金標稀釋液，混勻後，將上述溶液噴塗在金標墊上，乾燥備用。
[0026]5、檢測線、質控線劃膜:將NC膜貼於底板上，待用。配製0.5mg/ml的降鈣素原單克隆抗體2 ;配製濃度為1.0mg/ml羊抗鼠抗體；分別再通過點膜儀以1.Ομ?/cm在之前準備好的NC膜上劃膜，分別為T、C線，室溫乾燥2小時。
[0027]6、組裝:再將乾燥好的膠體金墊和吸水紙、樣品墊、貼有NC膜的底板進行組裝，然後通過自動斬切機切割成4.0mm的試紙條，再將試紙條和卡盒進行壓殼，然後將試劑盒與乾燥劑、吸管組裝並封口。
[0028]最低檢出限
配製不同濃度的降鈣素原質控品(來自於朗道公司)，用本檢測試劑盒檢測，結果表明本檢測試劑盒最低檢出限為0.lng/mlo比傳統的膠體金方法靈敏度提高約5倍。
[0029]臨床檢驗
本試劑盒的臨床試驗，經由二家省級三甲醫院240例臨床研宄，可以用於痰液或咽拭子中降鈣素原的半定量檢驗，和血液檢測的符合率為100%。
【權利要求】
1.一種碳納米管降鈣素原檢測試劑盒，其特徵在於:該試劑盒是用碳納米管膠體金複合物標記降鈣素原抗體的；在試紙底板上依次粘貼有樣品墊、碳納米管膠體金複合物墊、硝酸纖維素膜以及吸水墊；所述的碳納米管膠體金複合物墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線。
2.根據權利要求1所述的碳納米管降鈣素原檢測試劑盒，其特徵在於:所用的碳納米管(4 )為單壁碳納米管、多壁碳納米管、羥基化碳納米管、羧基化碳納米管、水溶性碳納米管中的一種。
3.根據權利要求1所述的碳納米管降鈣素原檢測試劑盒，其特徵在於:碳納米管(4)和膠體金(3 )通過自組裝形成碳納米管膠體金複合物。
4.根據權利要求1所述的碳納米管降鈣素原檢測試劑盒，其特徵在於:所述的碳納米管膠體金複合物，其中碳納米管(4)佔膠體金複合物總質量為0.1?20.0%。
5.一種如權利要求1所述的碳納米管降鈣素原檢測試劑盒的製備方法，其特徵在於:所述的碳納米管膠體金複合物墊上附著有碳納米管膠體金複合物標記的降鈣素原單克隆抗體1，所述的硝酸纖維素膜上包被有降鈣素原單克隆抗體2的檢測線以及質控線；具體步驟如下: (1)碳納米管分散液的製備:取100ml純水中加入0.5?5.0g的表面活性劑，攪拌均勾後，加入10?lOOOmg碳納米管(4)，超聲波細胞粉碎機超聲2?lOmin，得到碳納米管分散溶液； (2)碳納米管膠體金複合物的製備:取用膠體金(3)標記好的降鈣素原抗體，加入質量比0.1?30.0%的上述碳納米管分散液，攪拌5?30分鐘；離心30?60min ； (3)碳納米管膠體金複合物墊的製備:棄去上清液，再往離心管中加入金標稀釋液，混勻後，將上述溶液噴塗在處理過的金標墊上，乾燥備用； (4)檢測線、質控線劃膜:將NC膜貼於底板上，待用；配製0.5mg/ml的降鈣素原單克隆抗體2 ;配製濃度為1.0mg/ml羊抗鼠抗體；分別再通過點膜儀以1.Ομ?/cm在之前準備好的NC膜上劃膜，分別為T、C線，室溫乾燥2小時； (5)組裝:再將乾燥好的膠體金墊和吸水紙、樣品墊、貼有NC膜的底板進行組裝，然後通過自動斬切機切割成4.0mm的試紙條，再將試紙條和卡盒進行壓殼，然後將試劑盒與乾燥劑、吸管組裝並封口。
【文檔編號】G01N33/531GK104459117SQ201410740721
【公開日】2015年3月25日 申請日期:2014年12月8日 優先權日:2014年12月8日
【發明者】李洪江, 王巖, 董楷一, 李雙, 才鳳, 解雨婷, 徐志偉, 姜竹泉 申請人:本溪泰斯特捷生物科技有限公司