c-KIT激活抑制劑、皮膚美白的化合物及含有該化合物的用於皮膚美白的組合物的製作方法
2023-12-10 04:20:11 1
專利名稱：：c-KIT激活抑制劑、皮膚美白的化合物及含有該化合物的用於皮膚美白的組合物的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種與黑素合成、黑素細胞分化和成熟等相關的c-Kit的激活抑制劑，具有皮膚美白作用(如治療黑斑病或雀斑)的皮膚美白的的組合物。
背景技術：
：已知c-Kit是一種屬於III類受體酪氨酸激酶(RTK)的受體，其與黑素細胞的存活、增殖和分化相關。當皮膚暴露於紫外線時，皮膚中的黑素細胞的數量會增加。c-Kit在這種反應中起到重要作用。已證實，在K14(角蛋白啟動子)-steel因子的轉基因小鼠中，產生和分化黑素細胞的毛嚢'生態位，中增加的幹細胞生成因子(SCF)生長並分化成黑素細胞以從生態位移出，並且證實如果在胚胎期用c-Kit的抗體ACK2處理小鼠，則小鼠具有白色毛髮和白色皮膚(Nature416,854-860,2002)。從一開始，與作為美白的化合物相比，更多的嘗試致力於研究c-Kit作為抗癌劑的靶。眾所周知，伊馬替尼(imatinib)(Gleevec,STI-571,Novatis，EastHanover,NJ，USA)已經作為一種用於治療白血病的抗癌劑，其以Bcr-Abl激酶為耙。然而，已顯示，6個接受伊馬替尼處方的患者皮膚中的黑色素水平下降，說明伊馬替尼抑制了除Bcr-Abl之外的c-Kit的活性。因此，可以看出，SCF/c-Kit在人類黑素細胞的生長和持續中起到重要作用(Cancer98，2483-7,2003)。同時，據報導，作為c-kit的配體的SCF在黑斑病的病斑部位的表達過度超過正常皮膚部位(KoreanJ.Dermatol.2005;43(8):1046-1052)，並且在如UVB-黑變病、老年雀斑樣痣、皮膚纖維瘤和咖啡斑(Caffeauremacule)的過多黑色素存在的條件下，SCF會過度表達(PigmentCellResearch17:96-110.2004)。如果c-Kit被激活，則該激活的c-Kit會激活MAP激酶，並且該激活的MAP激酶順序使為螺旋-環-螺旋/亮氨酸拉鏈蛋白的小眼畸形相關專爭錄因子(microphthalmia國associatedtranscriptionfactor,Mitf)石粦酸4b，成為激活態。激活的Mitf刺激如酪氨酸酶、Tyrp-2等的黑素合成酶的轉錄以合成黑色素。當暴露於紫外線時，角化細胞分泌的SCF刺激黑素細胞前體分化成含有c-Kit的成熟的黑素細胞，並且還通過刺激與黑素合成相關的酶的轉錄刺激黑色素的合成。如上所述，c-Kit主要與刺激由紫外線引起的黑素合成的信號轉導系統相關。因此，如果可能抑制c-Kit活性，則除抗癌作用之外可抑制黑素細胞的分化和成熟。通常，許多人希望有白皙和柔軟的皮膚，但是如果黑素在其皮膚中過度合成，他們則會有暗淡的皮膚色調，並且還會有黑斑病、雀斑等。因此，如果抑制了皮膚中黑色素的合成，則可以使皮膚色調變亮從而美白皮膚，並且還可以治療由紫外線、激素和其他遺傳因子引起的如黑斑病、雀斑、老年雀斑樣痣、皮膚纖維瘤、咖啡斑等的皮膚色素沉著過度從而美白皮膚。因此，混合對酪氨酸酶具有抑制活性的如氬醌、抗壞血酸、曲酸和穀胱甘肽的常規化合物與如軟膏或化妝品的皮膚可適用的組合物，然後將合成的組合物用於皮膚美白領域中，例如，治療黑斑病和雀斑。然而，已證實，氫醌具有一些美白作用，但是由於其對皮膚的嚴重刺激只能以極低的量使用。抗壞血酸也存在由於其易於氧化使包含抗壞血酸的化妝品組合物的氣味和顏色易於改變的問題。同時，如穀胱甘肽、半胱氨酸等的硫醇化合物具有固有的難聞氣味和經皮膚送遞的相關問題，並且由於其高極性使其糖苷和衍生物還難於用作混合成分。
發明內容技術問題因此，本發明的一個目的是提供一種能夠抑制與黑素合成、抗癌活性等相關的c-Kit的活性的c-Kit激活抑制劑。另外，本發明的另一個目的是提供一種皮膚美白的化合物和用於皮膚美白的組合物，其能夠安全使用而對皮膚沒有任何副作用且對色素沉著具有極好的抑制作用。技術方案為了實現第一目的，本發明提供了一種c-Kit激活抑制劑，其為選自由下列化學式110表示的化合物組成的組中的黃酮衍生物。化學式16-曱氧基黃酮化學式2formulaseeoriginaldocumentpage103,7-二羥基黃酮化學式3formulaseeoriginaldocumentpage103,6-二羥基黃酮化學式4formulaseeoriginaldocumentpage103-羥基-6-曱基黃酮化學式5formulaseeoriginaldocumentpage116,4'-二曱氧基-3-羥基黃酮化學式8formulaseeoriginaldocumentpage124'-羥基-P-萘黃酮化學式9formulaseeoriginaldocumentpage123,7，3'-三羥基黃酮化學式IOformulaseeoriginaldocumentpage12另外，本發明提供了一種皮膚美白的化合物，其為選自由化學式1~10表示的化合物組成的組中的一種黃酮衍生物，以及含有上述任一種化合物作為活性成分的用於皮膚美白的組合物。在用於皮膚美白的組合物中，基於組合物的總重量，所述黃酮衍生物的含量優選在0.000001-10wt。/。的範圍內，並且可以將這些黃酮衍生物加入多種製劑(如薄膜(skin)、洗液、面霜、粉底、精華素、凝膠、美容塗敷劑、泡沫潔面乳、肥皂、軟膏等)中，從而實現皮膚美白的作用。在下文中，將更加詳細地描述本發明。本發明提供了一種c-Kit抑制劑，其為選自由化學式1~10表示的化合物組成的組中的一種黃酮衍生物化學式1表示的6-曱氧基黃酮(6-曱氧基-2-苯基-4H-苯並吡喃-4-酮(6-methoxy-2-phenyl-4H畫chromen-4-one),Ci6H1203，CASNo.26964-24-9);化學式2表示的3，7-二羥基黃酮((^15:1004,CASNo.492-00-2);化學式3表示的3，6-二羥基黃酮(dsHwO"CASNo.08238-41-1);化學式4表示的3-羥基-6-甲基黃酮(6-曱基-3-雍基黃酉同，C16H1203，CASNo.6971-18-2);化學式5表示的3,3'-二輕基黃酮(C15H10O4，CASNo.55977畫09畫8);化學式6表示的6，2'，3'-三羥基黃酮(C15H10O5,CASNo.108238-47-7);化學式7表示的6,4'-二曱氧基-3-羥基黃酮(CnH,40s,CASNo.93176-02-4);化學式8表示的4'畫羥基-P國萘黃酮((191€1203，CASNo.98166-72-4);化學式9表示的3,7,3'-三羥基黃酮(dsH川05)和化學式10表示的香葉木素(5,7-二羥基-2-(3-羥基-4-曱氧基-苯基)-苯並吡喃-4-酮(5，7-dihydroxy-2-(3-hydroxy畫4畫methoxy隱phenyl)畫chromen-4-one),C16H1206，CASNo.520-34-3)。特別是，化學式10表示的香葉木素是一種已報導作為包括以下植物的成分的化合物金合歡(Acaciafamesiana)、亞洲蓍(Achilleaasiatica)、長葉山金草(Arnicalongifolia)、香葉蒿(Artemisiarutifolia)、北艾(Artemisiavulgaris)、Calerianachionophila、芥菜(Capsellabursa-pastoris)、檸檬(Citruslimon)、蟲它床(Cnidiummonnieri)、Cyperusalopecuroides、剪割龍膽全草(Gentianabarbata)、山杉卩菊(Hieraciumcompositum)、Lnariamacroura、留蘭香(Menthaspicata)、牛至(Origaganumvulgare)、Pedaliummurex、歐芽(Petroselinumcrispum)、迷迭香(Rosmarinusofficinalis)、Salviacandidissima、Salvianutans、Salviareptans、糖芥糹胃毛菊(Soroserishookeriana)、Stemodiaviscose,菊蒿(Tanacetumvulgare)、飛龍掌血屬花束月季(Toddaliafloribunda)、Thymbracapitata、Thymushirtus、百裡香(Thymusvulgaris)、羽裂美女櫻(Verbenabipinnatifida)、Valerianacardamines、Valerianaeriophylla、新疆纈草(Valerianafedtschenkoi)、Valerianalaxiflora、Viciatruncatula、Xanthorrhoeahastiledurch和Xanthorrhoeahastila。已殺口香p十木素具有^t菌作用(PlantaMedica，70(6),2004，509-514)和抗過敏作用(Bioorg.Med.Chem,10(10)，2002，3123-3128)、消炎作用(J.haram.Pharmacol"50(9)，1998,1069-1074)等。本發明人已經研究了能夠抑制與黑素合成、黑素細胞分化和成熟等相關的c-KIT的活性的化合物，並且已經發現上述黃酮衍生物顯示了對c-Kit的非常有效的抑制作用，本發明基於該發現。也就是說，上述黃酮衍生物抑制了c-Kit的活性，從而可以使用它們作為抑制黑素細胞分化和成熟及黑素合成相關酶的合成並具有抗癌作用的多功能的皮膚美白的化合物。特別是，因其在黑素合成的信號轉導初發揮作用，所以即使以少量使用，如上述黃酮衍生物的c-Kit激活抑制劑也有益於達到極好的皮膚美白作用。在本發明中，術語"皮膚美白作用"通常指包括改善與皮膚顏色相關的令人不快的皮膚狀態的作用，例如，治療黑斑病和雀斑，改善老年雀斑樣痣、皮膚纖維瘤和皮膚色素沉著過度和使皮膚美白的作用。上述化學式110表示的黃酮衍生物為可商購的。然而，更優選使用菊花(C/70^朋^emwm附0〃/0//"—(菊花花瓣)的提取物作為化學式10表示的香葉木素。從菊花中提取香葉木素的方法如下所述，但是本發明的範圍不限於如本發明中所述的被提取或提取方法的主題。購買作為草藥的可商購的菊花，將其研磨成小塊，並在具有回流冷凝器的提取器中，在5010(TC下將研磨物質用5~20倍體積的曱醇提取1~5小時。使用相同方法通過濾布提取該剩餘物，然後一次或多次過濾剩餘提取物。收集生成的提取物，在減壓下濃縮，然後冷凍乾燥或噴霧乾燥以製得乾燥的提取物。為了確定菊花的甲醇提取物中是否存在活性成分，在IO倍體積的水中懸浮曱醇提取物，並且用等量的己烷分餾以除去非極性化合物，然後用等量的丁醇溶劑使剩餘的水層分餾以得到菊花的丁醇鎦分。使用混合的氯仿/曱醇溶劑混合物作為洗脫液通過矽膠柱層析從生成的菊花的丁醇餾分中分離活性成分，並且在相同條件下使用製備級HPLC純化該得到的活性成分。使用核磁共振(NMR)和質譜測量法(質量)確定該純化的活性成分為香葉木素。為了實現皮膚美白的作用，可將上述化學式110表示的純黃酮書亍生物或香葉木素提取物以有效量加入多種組合物(如軟膏和包括薄膜、洗液、面霜、粉底、精華素、凝膠、美容塗敷劑、泡沫潔面乳、肥皂等的化妝品產品)中，並且黃酮衍生物或香葉木素提取物可以單獨或其組合使用。考慮到皮膚美白效果和經濟效果，基於組合物的總重量，加入的黃酮衍生物的量優選在0.000001~10wt%、更優選在0.00011wt。/。範圍內。圖1為顯示根據本發明的一個實施方式提取和純化的香葉木素的H匸NMR波譜的圖。圖2為顯示根據本發明的一個實施方式提取和純化的香葉木素的C"NMR波鐠的圖。圖3為顯示才艮據本發明的一個實施方式提取和純化的香葉木素的質譜測量波譜的圖。具體實施例方式在下文中，將參照附圖更加詳細地描述本發明。然而，此處提出的描述僅僅為用於說明目的的優選實施例，並不意於限制本發明的範圍，因而應當理解，可以進行其它等效物和修改而沒有脫離本發明的實質和範圍。為了更好地理解，將詳細地描述本發明的優選實施方式，這對本領域技術人員是明顯的。化學式19表示的黃酮衍生物的評價購買並使用化學式1~9表示的可商購的黃酮衍生物化合物。將每種黃酮衍生物化合物的最終濃度調整至1pM，並且加入至384-孔板的每個孔中，並且向384-孔板的每個孔中加入c-KitRTK和ATP，然後在室溫下進行初級反應。然後，加入生物素醯化的聚[Glu:Tyr](4:l)作為底物，然後進行次級酶反應。加入包含用抗生蛋白鏈菌素塗布的供體珠和連接有抗體(P-Tyr-100)的受體珠的捕獲緩衝液，然後進行三級反應以連接到底物上。使用Fusion微量培養板分析器通過測量a篩查信號(AlphaScreensignal)確定底物的磷酸化水平。還使用現有技術中已知的作為c-Kit抑制劑的酪氨酸磷酸化抑制劑(Tyrphostin)A51比較其抑制作用。為了測量a篩查信號至精確水平，每個試驗樣品測試3次。此處，為了確定對c-Kit的抑制，使用DMSO作為陽性對照代替試驗樣品，並且使用DMSO和緩衝液分別代替試驗樣品和酶作為陽性對照。根據下列公式l,從檢測出的信號計算對c-Kit的抑制率(％)。結果列於下表l中。公式1抑制率(％)=(試驗樣品的平均值-陰性對照的平均值)/(陽性對照的平均值-陰性對照的平均值)x100表1tableseeoriginaldocumentpage17tableseeoriginaldocumentpage18如表1中所列，其顯示了化學式1~9表示的黃酮衍生物化合物在濃度比已知的作為c-Kit激活抑制劑的酪氨酸磷酸化抑制劑A51低的情況下呈現出對c-Kit有效的抑制活性。基於下表2中所列的組成及其含量，將一些上述黃酮衍生物化合物加入面霜中，然後評^f介美白作用。表2tableseeoriginaldocumentpage18tableseeoriginaldocumentpage19照射前，用70。/。的乙醇水溶液徹底清洗將^L照射的部位。在照射前3天至照射後3周的時間段內，每日兩次將根據製備實施例1~3和比較實施例1製備的基本組合物成對地應用於相同的槽線中。用肉眼評價製備實施例和比較實施例的基本組合物的色素沉著速率，然後與比較實施例的基本組合物相比，將製備實施例的基本組合物評為兩個級別，即有效和無效。結果列於表3中。表3tableseeoriginaldocumentpage20如表3中所列，在20個受驗者中至少有IO個顯示製備實施例13的包含黃酮衍生物的面霜具有美白作用而沒有副作用。對黑斑病治療效果的測試選擇10個患黑斑病的健康女人，然後每日兩次連續三周將根據製備實施例1製備的基本組合物施用於具有黑斑病的面部。實驗完成後，醫學專家用肉眼對色素沉著作評價，並且被測試的受驗者基於主觀判斷評價黑斑病的治療，因此製備實施例1的面霜對黑斑病的治療被評為兩個級別，即有效和無效。結果列於下表4中。表4formulaseeoriginaldocumentpage21如表4中所列，在10個受驗者中至少有6個顯示根據製備實施例1製備的包含6-曱氧基黃酮的面霜對黑斑病具有治療作用而沒有副作用。化學式IO表示的香葉木素提取物的製備與評價實施例1購買作為草藥的可商購的幹菊花並將其研磨成小塊，在設置有回流冷凝器的提取器中將10kg研磨物質加熱至70°C3小時並用150L曱醇提取。通過濾布過濾該生成的提取物，然後一次或多次過濾該剩餘提取物。收集該生成的提取物並在減壓下濃縮，以製得1.2kg乾燥提取物。實施例2在IOL水中懸浮1kg實施例1中製備的菊花曱醇提取物，並用10L己烷溶劑分餾3次以除去己烷餾分。然後，用IOL丁醇溶劑分餾剩餘水層3次以得到丁醇餾分。在減壓下濃縮該丁醇餾分以製得125g乾燥物質。實施例3在10L水中懸浮lkg實施例1中製備的菊花曱醇提取物，並用10L乙酸乙酯溶劑分鎦3次以得到乙酸乙酯餾分。然後，在減壓下濃縮該乙酸乙酯餾分以製得230g乾燥物質。實施例4使用混合的氯仿/曱醇溶劑作為洗脫液，將100g實施例2中製備的可溶性菊花丁醇餾分進行矽膠柱層析以得到活性部分。然後，用製備級HPLC純化該生成的活性部分以得到1.2g活性成分。通過核;茲共振(NMR)和質譜測量法(質量)(參見圖13),該純化的活性成分確定為由化學式IO表示的如下香葉木素。分子式C16H1206分子量300.27熔點260264°CUV(人ax，nm)(MeOH):272，3421H-畫R(DMSO畫d6)cr:3H(6.69,s),6H(6.13，s)，8H(6.39，s),2'H(7.41,s)，5'H(7.06，d，8.6Hz),6'H(7.51，d，8.6Hz),5-OH(12.89，br)，7-OH(10.0，br),4'-OMe(3.85,s)對c-Kit活性的抑制作用將實施例1的曱醇提取物和實施例2的可溶性丁醇餾分的濃度各自調整至20ng/ml，並將實施例4的香葉木素的最終濃度調整至0.3(xM，然後以與化學式19表示的上述黃酮衍生物化合物的評價方法相同的方式進行評價。結果列於下表5中。tableseeoriginaldocumentpage23如表5中所列，顯示了與已知的作為c-Kit激活抑制劑的酪氨酸磷酸化抑制劑A51相比，包含香葉木素粗提物的實施例1和2的試驗樣品對c-Kit具有較高的抑制作用，並且作為純化的香葉木素的實施例4的試驗樣品對c-Kit活性具有優異的抑制作用。美白作用的評價為了評價包含香葉木素的化妝品的美白作用，基於下表6中所列的組成及其含量，製備面霜。表6tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage24為了得到對色素沉著的抑制作用，以與上述製備實施例13中相同的方式評價如表6中所列製備的面霜。結果列於下表7中。表7tableseeoriginaldocumentpage24如表7中所列，在20個受驗者中有14個顯示製備實施例4的包含香葉木素的面霜對皮膚具有美白作用而沒有副作用。對黑斑病的治療作用選擇10個患黑斑病的健康女人，然後每日兩次連續三周將根據製備實施例4製備的基本組合物施用於具有黑斑病的面部。實驗完成後，醫學專家用肉眼對色素沉著作評價，並且被測試的受驗者基於主觀判斷評價黑斑病的治療，因此製備實施例4的面霜對黑斑病的治療被評為兩個級別，即有效和無效。結果列於下表8中。表8tableseeoriginaldocumentpage25如表8中所示，在10個受驗者中有7個顯示根據製備實施例4製備的包含香葉木素的面霜對黑斑病有治療作用。工業實用性如上所述，本發明的黃酮衍生物是有效的c-Kit激活抑制劑。特別是，上述黃酮衍生物對皮膚沒有副作用，並且抑制了黑素合成及黑素細胞的分化和成熟，因此，包含黃酮衍生物作為活性成分的組合物可非常有效地用於治療黑斑病和雀斑，改善如老年雀斑樣痣、皮膚纖維瘤、咖啡斑等的皮膚色素沉著過度，並達到皮膚美白的作用。權利要求1.一種c-Kit激活抑制劑，其為選自由下列化學式1～10表示的化合物組成的組中的黃酮衍生物化學式16-甲氧基黃酮化學式23，7-二羥基黃酮化學式33，6-二羥基黃酮化學式43-羥基-6-甲基黃酮化學式53，3′-二羥基黃酮化學式66，2′，3′-三羥基黃酮化學式76，4′-二甲氧基-3-羥基黃酮化學式84′-羥基-β-萘黃酮化學式93，7，3′-三羥基黃酮化學式10香葉木素2、一種用於皮膚美白的組合物，該組合物含有選自由如權利要求1所述的化學式110表示的化合物組成的組中的至少一種黃酮衍生物作為活性成分。3、一種用於皮膚美白的組合物，該組合物含有下列化學式10表示的化合物作為活性成分化學式10formulaseeoriginaldocumentpage5香葉木素4、一種用於皮膚美白的組合物，該組合物含有菊花(菊花花瓣)提取物作為活性成分。5、根據權利要求24中任一項所述的用於皮膚美白的組合物，其中，皮膚美白為對黑斑病或皮膚色素沉著過度的治療。6、根據權利要求24中任一項所述的用於皮膚美白的組合物，其中，基於組合物的總重量，所述黃酮衍生物的含量在0.000001-10wt°/0的範圍內。7、根據權利要求2-4中任一項所述的用於皮膚美白的組合物，其中，所述用於皮膚美白的組合物為選自由薄膜、洗液、面霜、粉底、精華素、凝膠、美容塗敷劑、泡沫潔面乳、肥皂和軟膏組成的組中的一種製劑。全文摘要本發明公開了一種c-Kit激活抑制劑、皮膚美白的化合物及含有該皮膚美白的化合物作為活性成分的用於皮膚美白的組合物。本發明的c-Kit激活抑制劑為選自由化學式1～10表示的化合物組成的組中的黃酮衍生物。該黃酮衍生物抑制與黑素合成、黑素細胞分化和成熟等相關的c-Kit的活性。因此，上述黃酮衍生物可用作皮膚美白的化合物，並且含有該黃酮衍生物作為活性成分的化妝品組合物可以非常有效地用於皮膚美白，例如治療黑斑病、雀斑等。文檔編號A61Q19/02GK101370470SQ200780002680公開日2009年2月18日申請日期2007年1月12日優先權日2006年1月18日發明者姜常真,金秉俊,金縞正,陳戊鉉申請人:株式會社Lg生活健康