一種半胱氨酸的檢測試劑及檢測方法

2023-11-30 23:03:21

一種半胱氨酸的檢測試劑及檢測方法
【專利摘要】本發明提供了一種半胱氨酸的檢測試劑及檢測方法。具體地，所述的試劑組合包含銀納米片溶液；其中，所述的銀納米片溶液中含有保護劑。以及用所述的試劑組合檢測樣品中半胱氨酸的檢測方法。本發明的試劑盒具有檢測快速，實驗條件簡易，結果準確等特徵。
【專利說明】-種半脯氨酸的檢測試劑及檢測方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於生物小分子的檢測領域，具體涉及一種能夠快速、簡便、靈敏的識別出 水溶液中半脫氨酸的檢測方法。

【背景技術】
[0002] 在天然胺基酸中，半脫氨酸是唯一一種含有琉基的胺基酸，在生物體及某些植物 體中起著重要的作用。例如，在生物體中半脫氨酸缺乏時，將會導致生長緩慢，頭髮無光澤， 發生水腫，肝臟，皮膚損傷及身體虛弱等症狀。因此對於半脫氨酸的檢測具有重要的意義。 而目前傳統的半脫氨酸檢測方法主要有高效液相層析、電化學、化學發光法、分光光度法 等，該些方法都依賴於氧化還原法，或者得到發光基團，或者英光基團，並且藉助相關的大 型精密儀器設備進行檢測，而該些方法操作繁瑣，成本花費高且耗時長。
[0003] 文獻"Selectively colorimetric detection of cysteine with triangular silver nanoprisms"中，採用的是半脫氨酸的琉基直接和銀片作用，形成銀硫鍵，長時間的 反應使銀原子從銀片上剝落下來，其形貌發生改變，達到檢測半脫氨酸的目的。但是該反應 常溫下反應時間長，需要水浴加熱，促使反應的進行，並且其比色靈敏度為160nM高於本發 明的方法（如圖1所示，比色靈敏度為25nM)。
[0004] 因此，本領域尚缺乏一種能夠快速、及時、簡便、準確地檢測出水溶液中低濃度的 半脫氨酸方法。


【發明內容】

[0005] 本發明的目的在於提供一種能夠快速、及時、簡便、準確地檢測出水溶液中低濃度 的半脫氨酸的試劑盒及檢測方法。
[0006] 本發明的第一方面，提供了一種用於檢測半脫氨酸的試劑，所述的試劑包含銀納 米片溶液；其中，所述的銀納米片溶液中含有保護劑。
[0007] 在另一優選例中，所述溶液中，銀納米片的濃度為3nM-100nM。
[000引在另一優選例中，所述溶液中，銀納米片的濃度為15nM-25nM。
[0009] 在另一優選例中，所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0010] 在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0011] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[001引 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0013] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0014] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；鹼金屬 鹽、鹼±金屬鹽，或其組合。
[0015] 在另一優選例中，所述的試劑的抑值為3-10。
[0016] 在另一優選例中，所述試劑的抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0017] 本發明的第二方面，提供了一種用於檢測半脫氨酸的試劑盒，所述的試劑盒包括 如本發明第一方面所述的試劑；或
[0018] 所述的試劑盒包括組分：
[0019] (i)銀納米粒子前驅體；
[0020] (ii)還原性試劑；和
[0021] (iii)保護劑。
[0022] 在另一優選例中，所述的銀納米粒子前驅體是可溶性銀鹽。
[0023] 在另一優選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液，其中，所述的 可溶性測酸鹽優選測氨化軸、測氨化鍾，或其組合。
[0024] 在另一優選例中，所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[00巧]在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0026] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0027] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0028] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0029] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；（對-賴 醜苯基）苯基麟化鹼金屬鹽、（對-賴醜苯基）苯基麟化鹼±金屬鹽，或其組合。
[0030] 在另一優選例中，所述的試劑盒還包括；含有楓離子的溶液。
[0031] 在另一優選例中，所述的含有楓離子的溶液為楓化鍾溶液。
[0032] 在另一優選例中，所述的試劑盒還包括抑調節試劑。
[0033] 在另一優選例中，所述的抑調節試劑是強酸和/或強鹼，較佳地，所述的抑調節 試劑選自下組：氨氧化軸、氨氧化鍾、硫酸、硝酸。
[0034] 本發明的第H方面，提供了一種檢測待測樣品中的半脫氨酸的方法，所述方法包 括：用如本發明第一方面所述的試劑，或如本發明第二方面所述的試劑盒對樣品進行檢測。 [00巧]在另一優選例中，所述方法包括步驟：
[0036] 提供一如本發明第一方面所述的試劑；
[0037] 提供一樣品水溶液；
[0038] 將所述的試劑加入樣品中使其反應，再加入含楓離子的溶液，形成檢測混合液；
[0039] 通過所述檢測混合液光譜學特徵，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判 斷樣品中半脫氨酸的含量。
[0040] 在另一優選例中，所述的光譜學特徵選自下組；顏色、光吸收強度、吸收光譜峰，或 其組合。
[0041] 在另一優選例中，所述方法還包括；用肉眼觀察所述檢測混合液的顏色。
[0042] 在另一優選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法檢測所述檢測混合液的顏色。
[0043] 在另一優選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法。
[0044] 在另一優選例中，所述方法還包括；提供一對照混合液，通過比較所述檢測混合液 和所述對照混合液的光譜學特徵，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判斷樣品中 半脫氨酸的含量。
[0045] 在另一優選例中，所述的對照混合液通過W下步驟製備：
[0046] 提供一不含有半脫氨酸的空白溶液；
[0047] 將所述的試劑加入空白溶液中，並加入含楓離子的溶液，形成對照混合液；
[0048] 通過所述對照混合液和所述檢測混合液的光譜學特徵差異，判斷所述樣品中是否 存在半脫氨酸。
[0049] 在另一優選例中，所述的光譜學特徵選自下組；顏色、光吸收強度、吸收光譜峰，或 其組合。
[0050] 在另一優選例中，所述方法還包括；用肉眼分別觀察所述檢測混合液和所述對照 混合液的顏色。
[0051] 在另一優選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法分別檢測所述檢測混合液和 所述對照混合液的顏色。
[0052] 在另一優選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法。
[0053] 在另一優選例中，所述的如本發明第一方面所述的試劑通過包括W下步驟的方法 製備：
[0054] 提供一溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液；
[0055] 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
[0056] 在另一優選例中，所述的銀納米粒子前驅體是可溶性銀鹽。
[0057] 在另一優選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液，其中，所述的 可溶性測酸鹽優選測氨化軸、測氨化鍾，或其組合。
[0058] 在另一優選例中，所述溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液中還含有保護劑。
[0059] 在另一優選例中，所述的溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液通過W下步驟製備：
[0060] 將銀納米粒子前驅體和保護劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅體的 水溶液。
[0061] 在另一優選例中，所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0062] 在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0063] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0064] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0065] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0066] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；鹼金屬 鹽、鹼±金屬鹽，或其組合。
[0067] 在另一優選例中，所述的方法還包括：用抑調節試劑調節樣品溶液抑至3-10。 [006引在另一優選例中，用抑調節試劑調節樣品溶液至抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0069] 在另一優選例中，包括步驟：
[0070] 用所述檢測混合液與已知濃度的標準樣品進行比較，判斷待測樣品中是否存在半 脫氨酸和/或判斷待測樣品中半脫氨酸的濃度；
[0071] 或所述方法包括：
[0072] 檢測所述檢測混合液的光譜學特徵，並將所得結果代入標準曲線，得到待測樣品 中半脫氨酸的濃度。
[0073] 在另一優選例中，所述的標準曲線是通過如下方法製得：
[0074] 配製一系列含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液，並加入如本發明第一方面所 述的試劑，從而製得含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液；
[00巧]測量各檢測混合液的光譜學特徵；
[0076] 繪製"檢測混合液的光譜學特徵-半脫氨酸濃度"曲線，或繪製"相對光譜學特 徵-半脫氨酸濃度"曲線，作為標準曲線。
[0077] 在另一優選例中，所述的檢測混合液的光譜學特徵是各檢測混合液的紫外-可見 吸光度或紫外-可見透光度。
[0078] 在另一優選例中，所述的相對光譜學特徵是各檢測混合液相對對照混合液的紫 外-可見吸收峰值對應的波長之差。
[0079] 在另一優選例中，所述方法包括：用所述檢測混合液與標準比色卡進行對比。
[0080] 在另一優選例中，所述的樣品水溶液是選自下組的樣品經過或未經過預處理製成 的溶液：環境水樣、生物樣品、固態環境樣品、食品、化妝品、人體尿液、血樣，或其組合。
[0081] 應理解，在本發明範圍內中，本發明的上述各技術特徵和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特徵之間都可W互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限於篇幅，在 此不再一一累述。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0082] 圖1是本發明中含不同濃度半脫氨酸溶液的檢測混合液的比色檢測結果圖。
[0083] 圖2是本發明得到的檢測混合液的紫外可見光光譜吸收波長-半脫氨酸濃度曲線 圖。
[0084] 圖3是本發明檢測混合液（包括半脫氨酸樣品與其他20種胺基酸樣品）與對照 混合液的肉眼比色圖。
[0085] 圖4是本發明檢測混合液得到的相對紫外可見光吸收波長位移-半脫氨酸濃度標 準曲線。
[0086] 圖5是本發明方法檢測混合液得到的紫外波長位移的特異性結果。

【具體實施方式】
[0087] 本發明人經過長期而深入的研究，意外地發現，當銀納米片溶液中存在半脫氨酸 溶液，加入楓離子溶液時，半脫氨酸會阻擋楓離子與銀原子形成楓化銀複合物，從而使銀納 米片表面等離子體的共振吸收保持不變，呈現原來溶液的顏色，且上述的顯色反應非常明 顯，用肉眼即可判斷。基於上述發現，發明人完成了本發明。
[0088] 術語
[0089] 如本文所用，術語"樣品"指任何含有半脫氨酸的物質，如泥±樣品、環境樣品、生 物樣品等。優選地，若樣品為非水溶液狀態，可通過本領域的常規技術手段預處理，轉化為 水溶液狀態。所述的樣品水溶液中可w含有任何雜質，如金屬離子、有機可溶性雜質、微生 物、塵±等。本發明所述的樣品中半脫氨酸的含量沒有特別限制，可低至lO^M。
[0090] 如本文所用，術語"紫外可見光的波長位移"指待測樣品半脫氨酸檢測混合液的最 高吸收峰對應的波長（W)與對照混合液的最高吸收峰對應的波長（W0)的差值（W-W0)。
[0091] 術語"檢測混合液"指待測樣品與本發明的試劑W及含楓離子的溶液形成的混合 液。
[0092] 術語"標準樣品"是指已知溶液中半脫氨酸濃度的樣品，或空白樣品。
[0093] 術語"空白樣品"是指已知不含半脫氨酸的樣品。
[0094] 術語"對照混合液"指標準樣品與本發明的試劑W及含楓離子的溶液形成的混合 液。所述的標準樣品可W是已知半脫氨酸濃度的樣品，或不含半脫氨酸的空白樣品。
[0095] 半脫氨酸檢測試劑（試劑盒）
[0096] 本發明提供一種能夠快速、實時、準確和簡便地檢測出水溶液體系中半脫氨酸含 量的試劑。
[0097] 當初始的銀納米片溶液中加入一定濃度的半脫氨酸溶液時，半脫氨酸與銀納米片 結合，阻擋楓離子與銀原子形成楓化銀複合物，使得銀納米片表面等離子體的共振吸收保 持不變，呈現原來溶液的顏色。通過該種抗形貌改變的方法，實現對水溶液中半脫氨酸的實 時、快速、簡便的檢測。
[0098] 本發明的半脫氨酸檢測試劑包含銀納米片溶液，其中，所述的銀納米片溶液中含 有保護劑。
[0099] 所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可溶性的（對-賴醜 苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0100] 在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0101] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0102] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0103] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0104] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；鹼金屬 鹽、鹼±金屬鹽，或其組合。
[0105] 較佳地，所述的試劑的抑值為3-10,更佳地為4-9,最佳地為5-8。
[0106] 本發明的檢測試劑還可W製備成試劑盒形式，所述的試劑盒包括如本發明所述的 試劑。
[0107] 在另一優選例中，本發明的檢測試劑還可W製備成如下的試劑盒形式：
[0108] 所述的試劑盒包括組分：
[0109] (i)銀納米粒子前驅體；
[0110] (u)還原性試劑；和
[0111] (iii)保護劑。
[0112] 使用時，將銀納米粒子前驅體與還原性試劑、保護劑混合，從而形成銀納米片溶 齊U，用於檢測半脫氨酸。
[0113] 在另一優選例中，所述的銀納米粒子前驅體是可溶性銀鹽。
[0114] 在另一優選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，或其水溶液。所述的可溶性 測酸鹽優選為測氨化軸、測氨化鍾，或其組合。
[0115] 在另一優選例中，所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可 溶性的（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0116] 在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0117] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0118] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0119] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0120] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；鹼金屬 鹽、鹼±金屬鹽，或其組合。
[0121] 所述的試劑盒還可W包括含有楓離子的溶液，如楓化鍾溶液。
[0122] 優選地，所述的試劑盒還包括抑調節試劑，用於調節銀納米片溶液的抑至適合檢 測的範圍。
[0123] 在另一優選例中，所述的抑調節試劑是強酸和/或強鹼，較佳地，所述的抑調節 試劑選自下組：氨氧化軸、氨氧化鍾、硫酸、硝酸。
[0124] 半脫氨酸檢測方法
[0125] 本發明人探索出了一種新的方法，能夠快速、及時、簡便、準確地檢測出水溶液中 低濃度的半脫氨酸，對應用於環境分析及生物醫學分析等領域，具有重要的應用價值。
[0126] 具體地，本發明提供了一種半脫氨酸的檢測方法，所述的檢測方法包括：用如本發 明所述的試劑或試劑盒對待測樣品進行檢測。
[0127] 在本發明的一個優選例中，所述的方法包括步驟：
[012引提供一本發明的檢測試劑；
[0129] 提供一樣品水溶液；
[0130] 將所述的試劑加入樣品中使其反應，再加入含楓離子的溶液，形成檢測混合液；
[0131] 通過所述檢測混合液光譜學特徵，判斷所述樣品中是否存在半脫氨酸，和/或判 斷樣品中半脫氨酸的含量。
[0132] 所述的光譜學特徵可W是（但並不限於）選自下組的特徵；顏色、光吸收強度、吸 收光譜峰，或其組合。
[0133] 所述的光譜學特徵可W通過肉眼觀察，如用肉眼觀察所述檢測混合液的顏色；或 通過儀器分析方法檢測所述檢測混合液的顏色，如通過W下的儀器分析方法；分光光度檢 測法、紫外-可見吸收光譜法等。
[0134] 在另一優選例中，還可W製備一對照混合液，通過比較檢測組和對照組的光譜學 特徵差異，從而定性或定量地檢測待測樣品中的半脫氨酸。
[0135] 在另一優選例中，所述的對照混合液可W通過W下方法製備：
[0136] 提供一空白對比溶液；
[0137] 將所述的試劑加入空白對比溶液中，並加入含楓離子的溶液，形成對照混合液。
[0138] 通過所述對照混合液和所述檢測混合液的光譜學特徵差異，可W判斷所述樣品中 是否存在半脫氨酸。
[0139] 所述的對照混合液可W是用不含半脫氨酸的空白溶液製備的檢測混合液，或用已 知濃度的標準樣品製備的檢測混合液。在本發明中，也可W根據行業標準或國家標準，配製 具有特定濃度半脫氨酸的標準樣品並製備對照混合液，並與待測樣品製備的檢測混合液對 比，從而得出待測樣品中半脫氨酸的濃度是否符合標準。
[0140] 在另一優選例中，所述方法還包括；用肉眼分別觀察所述檢測混合液和所述對照 混合液的顏色。
[0141] 在另一優選例中，所述方法還包括；用儀器分析方法分別檢測所述檢測混合液和 所述對照混合液的光譜學特徵。
[0142] 在另一優選例中，所述的儀器分析方法選自下組；分光光度檢測法、紫外-可見吸 收光譜法，或其組合。
[0143] 在所述的檢測方法中，本發明所述的試劑可W是市售的已配好的試劑，也可W是 現制的。如在本發明的另一優選例中，所述的試劑可W通過包括W下步驟的方法製備：
[0144] 提供一溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液；
[0145] 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
[0146] 在另一優選例中，所述的銀納米粒子前驅體是可溶性銀鹽。
[0147] 在另一優選例中，所述的還原性試劑為可溶性測酸鹽，優選測氨化軸、測氨化鍾水 溶液，或其組合。
[014引在另一優選例中，所述的試劑是用本發明的試劑盒製備的。
[0149] 在另一優選例中，所述的溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液也可W是現制的，女口 通過W下步驟製備：
[0150] 將銀納米粒子前驅體和保護劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅體的 水溶液。
[0151] 其中，所述的保護劑選自下組；巧樣酸、巧樣酸鹽、聚己帰化咯焼麗、可溶性的 (對-賴醜苯基）苯基麟化鹽，或其組合。
[0152] 在另一優選例中，所述的保護劑包括選自下組（a)和選自下組化）的保護劑：
[0153] (a)巧樣酸、巧樣酸鹽，或其組合；
[0154] 化）聚己帰化咯焼麗、可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽溶液，或其組合。
[0155] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0156] 在另一優選例中，所述的可溶性（對-賴醜苯基）苯基麟化鹽選自下組；鹼金屬 鹽、鹼±金屬鹽，或其組合。
[0157] 在另一優選例中，所述的巧樣酸鹽是巧樣酸鹼金屬鹽，較佳地，所述的巧樣酸鹽選 自下組：巧樣酸鍾、巧樣酸軸，或其組合。
[0158] 在另一優選例中，所述的檢測方法還包括；用抑調節試劑調節樣品溶液抑至 3-10。
[0159] 在另一優選例中，用抑調節試劑調節樣品溶液至抑值為4-9,較佳地為5-8。
[0160] 在另一優選例中，所述的方法還包括步驟：
[0161] 用所述檢測混合液與標準樣品進行比較，判斷待測樣品中是否存在半脫氨酸和/ 或判斷待測樣品中半脫氨酸的濃度。
[0162] 其中，所述的標準樣品是預製的標準樣品，可W是用含有某一特定濃度（如含有 某種質量標準中臨界點的半脫氨酸濃度）的半脫氨酸的水溶液與本發明的檢測試劑及含 有楓離子的溶液混合製得的標準樣品，或用一系列含有特定濃度的半脫氨酸的水溶液與本 發明的檢測試劑及含有楓離子的溶液混合製得的標準樣品組合。
[0163] 在另一優選例中，還可W預製標準曲線，並對所述檢測混合液作光譜分析，將分析 所得的光譜學特徵代入標準曲線，從而定量測定所述檢測混合液中的半脫氨酸。標準曲線 的製備可W參考本領域的通用方法，或按照W下的步驟：
[0164] 在另一優選例中，所述的標準曲線是通過如下方法製得：
[0165] 配製一系列含有不同濃度的半脫氨酸的檢測混合液，並加入如本發明第一方面所 述的試劑；
[0166] 測量各檢測混合液的光譜學特徵；
[0167] W標準樣品中半脫氨酸的濃度作為橫坐標狂)，W各個樣品的光譜學特徵（如吸 收峰值的波長W)，與空白混合液的相應光譜學特徵（如吸收峰值的波長W0)的差值（W-W0) 目P，波長位移作為縱坐標（Y)，得出其散點圖，並計算出二者的線性關係。
[016引一個典型實施例的結果如圖4。在測定未知濃度的檢測液時，W含有各個濃度的半 脫氨酸混合液的吸收峰值的波長（W)與空白混合液的吸收峰值的波長（W0)的差值（W-W0) 代入圖4的公式Y中，即可獲得半脫氨酸的濃度數值。
[0169] 在另一優選例中，還可W製備標準比色卡，用於與本發明的檢測混合液進行對比， 從而定性或定量地檢測樣品中的半脫氨酸。
[0170] 本發明中，所述的樣品沒有特別的限制，可W是選自下組的樣品經過或未經過預 處理製成的溶液：環境水樣、生物樣品、固態環境樣品、食品、化妝品、人體尿液、人體血樣， 或其組合。
[0171] 本發明中，一種優選的快速檢測溶液中的半脫氨酸的方法具體步驟如下：
[0172] (1)在水溶液中加入巧樣酸化合物，邊攬拌的條件下，加入聚己帰化咯焼麗化合物 作為保護劑，再加入適量的可溶性銀鹽W及適量的雙氧水，上述混合物加完後攬拌五分鐘， 再快速加入現制的測氨化軸溶液，繼續攬拌Imin取下，在周圍環境下放置30min即可得到 藍寶石色的銀納米片檢測液；並配置一定濃度的楓化鍾溶液。
[0173] (2)配製不含半脫氨酸的水溶液作為空白對比溶液，將對比溶液W及與對比溶液 等體積的被檢測水溶液，並將溶液調節成弱酸/弱鹼性。從步驟（1)中製得的檢測液，量取 兩份體積相同的檢測液樣品，加入到等量的空白對比溶液和被檢測溶液中，形成第一混合 液和第二混合液；
[0174] (3)往步驟（2)中的第一混合液和第二混合液加入相同量的（1)中配好的楓化鍾 溶液。對比第二混合液與第一混合液的顏色或紫外可見吸收強度、峰值的變化，判斷被檢測 溶液中是否存在半脫氨酸。
[01巧]上述檢測過程中，第一檢測混合液（無半脫氨酸）時的顏色為淺紅色，當第二檢測 混合液的顏色相對於第一檢測混合液的顏色變為深紅色或變為藍色時，則判定待測樣本中 含有半脫氨酸，並且半脫氨酸的濃度大於或等於2. 5 X l(T8mol/L。沒有發生顏色變化，則待 測樣品中不一定含有半脫氨酸。若含有半脫氨酸其濃度低於2. 5X l(T8mol/l，並對未變色 的檢測混合液進行紫外可見分光光度計測量進一步確定待測樣品中是否存在半脫氨酸。
[0176] 作為優選，提供能夠反映水溶液中半脫氨酸濃度與紫外可見吸收波長關係的標準 曲線圖，從而通過本發明得到的第二混合液的紫外可見吸收波長與該標準曲線圖進行對 比，獲得第二混合液中半脫氨酸的濃度。該標準曲線圖的具體繪製方法如下：
[0177] 按照所述的第二混合液的配製方法配製一系列不同濃度的半脫氨酸溶液，在波長 250?900nm區間內掃描其紫外可見吸收波長，W混合液的紫外可見吸收峰值所對應的波 長與空白樣品形成的對照混合液的吸收峰值所對應的波長的差值為縱坐標（波長位移）， 混合液中含有的半脫氨酸濃度為橫坐標繪製曲線，即獲得標準曲線圖，如圖4 ;
[0178] 通過實驗發現，標準曲線圖繪製時，隨著半脫氨酸濃度的增加，紫外可見吸收峰值 所對應的波長範圍優選為500?720nm。得到相對紫外可見光波長位移與半脫氨酸濃度的 關係圖，如圖4。
[0179] 所述的可溶性銀鹽包括硝酸銀、亞硝酸銀和高氯酸銀等，但不限於中的一種或多 種；選用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴格的限制，可為任意比例。
[0180] 所述的聚己帰化咯焼麗包括不同分子量，但不限於及其衍生物的一種或多種；選 用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴格的限制，可為任意比例。
[0181] 所述的巧樣酸化合物包括但不限於指及其類似物，優選為巧樣酸、巧樣酸軸、巧樣 酸鍾；選用兩種W上時，各化合物之間的比例沒有嚴格的限制，可為任意比例。
[0182] 所述的反應時間為5-20分鐘；
[0183] 所述的被檢測水溶液可W是環境中的水樣，例如，河水、湖水W及海水等；可W是 液態樣品經過處理後獲得的樣品，如血液製品、尿液製品等；可W是固態的環境樣品（如食 品與蔬菜製品等）經過處理後獲得的水溶液。
[0184] 作為優選，在步驟（2)中的被檢測液進行的抑的調節，使其抑值為5到8之間， 然後進行步驟（3)的操作，不僅可W節省檢測時間，而且還可W提高檢測限和靈敏度。對於 強鹼性待測樣品溶液，優選強酸，優先選用硝酸調節抑值；對於強酸性待測樣品溶液，優選 強鹼，特別優選利用氨氧化軸/氨氧化鍾溶液調節抑值。
[0185] 本發明的主要優點
[0186] (1)本發明提供了一種用於檢測水溶液中半脫氨酸的方法，所述的方法可W直接 通過肉眼判別溶液顏色的變化實現對溶液中半脫氨酸的裸眼比色檢測，也可W通過簡單的 儀器設備快速檢測溶液體系中的半脫氨酸的含量，從而實現對被檢測液中半脫氨酸的定性 和定量檢測。
[0187] (2)本發明的檢測方法操作簡單方便、快速、成本低廉、靈敏度高，並且可W在普通 的實驗室，乃至在採樣現場進行快速檢測，適用於生活用水的監測W及生物醫學分析等領 域，具有廣泛的應用價值。
[018引 做使用銀納米片濃度為> 3nM的檢測試劑，本發明的方法僅通過肉眼比色，即可 達到最低2. 5Xl(T8mol/L的檢測下限；通過本發明方法結合儀器分析手段，還能夠檢測出 更低濃度的半脫氨酸水溶液樣品，具有非常高的靈敏度。
[0189] 下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，該些實施例僅用於說明本發明 而不用於限制本發明的範圍。下列實施例中未註明具體條件的實驗方法，通常按照常規條 件，或按照製造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數按重量計算。
[0190] <材料來源〉
[01川 1.巧樣酸軸：購自國藥化學試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 2.硝酸銀：購自國藥化學試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 3.聚己帰化咯焼麗；購自阿拉下試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[0194] 4.雙氧水：購自國藥化學試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 5.半脫氨酸：購自國藥化學試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[019引 6.楓化鍾；購自阿拉下試劑有限公司；型號；分析純（AR)。
[0197] 通用方法：標準曲線的製備
[019引 （1)製備本發明的檢測液：所述的檢測液可W通過W下方法製備：
[0199] 往99. 5血的水中依次加入6血30mM的巧樣酸軸、6血0. 7mM的聚己帰化咯焼麗、 500 y L20mM硝酸銀、240 y L30wt%的雙氧水（W上試劑邊攬拌邊加入），加完後混勻攬拌 5min，再迅速加入1血0. 1M測氨化軸溶液，反應Imin後，取下放置30min，即可得到由巧樣酸 根、聚己帰化咯焼麗作為保護劑的藍色的銀納米片溶液，作為檢測樣品液；並配置1(T 4M的 楓化鍾溶液。
[0200] (2)製備標準樣品；用去離子水和半脫氨酸配製一系列半脫氨酸濃度依次為 0. 050 y M、0. 075 y M、0. 10 y M、0. 25 y M、0. 50 y M和1. 0 y M的標準溶液，分別取不同濃度的 標準溶液各0. ImL，並各自加入0. 85mL步驟1所製備的檢測樣品液，並加入（1)中製備的楓 化鍾溶液（50 y L)。靜置15分鐘。
[0201] (3)繪製標準曲線：對上述製備得到的標準樣品進行紫外可見分光光度計測量， 在250?900皿區間內測得的紫外可見吸收波長的變化，並記錄500皿與720皿處之間的 吸收峰值波長，並計算各個樣品在500?720nm處的吸收峰值波長的差值，W標準樣品的濃 度作為橫坐標，峰值波長的差值作為縱坐標(波長位移)，繪製標準曲線。繪製的標準曲線如 圖4所示。
[0202] 樣品的紫外可見光譜檢測
[0203] 等量的銀納米片溶液（850uL)中加入不同濃度的半脫氨酸（lOOuL)，再加入 50uL1〇- 4M KI，反應15min後，進行紫外測試。在250?900皿區間內測得的紫外可見吸收 波長的變化，得到檢測混合液的紫外可見光光譜吸收波長-半脫氨酸濃度曲線圖（圖2)。
[0204] 不同種類胺基酸的吸收度檢測
[0205] 分別配製20種天然胺基酸的水溶液，其中半脫氨酸的濃度為5 y M，其他胺基酸的 濃度為500 uM，各取0. ImL加入到等量等濃度的銀納米片溶液中，再加入等量等濃度的KI 溶液，反應15min，得到檢測混合液的紫外峰值對應的波長與空白對照混合液的峰值對應的 波長的差值，作為縱坐標作柱狀圖，如圖5所示。結果顯示，本發明的試劑能夠特異性地檢 測半脫氨酸。
[0206] 實施例1 ;河水、湖水、海水水樣中半脫氨酸的檢測
[0207] (1)製備檢測液；往99. 5血的水中依次加入6血30mM的巧樣酸軸、6血0. 7mM的聚 己帰化咯焼麗、500 L20mM硝酸銀、240 y L30wt%的雙氧水（W上試劑邊攬拌邊加入），加完 後混勻攬拌5min，再迅速加入ImlO. 1M測氨化軸溶液，反應Imin後，取下放置30min，即可 得到由巧樣酸根、聚己帰化咯焼麗作為保護劑的藍色的銀納米片溶液，作為檢測樣品液；並 配置1(T 4M的楓化鍾溶液。
[020引（2)待檢測水樣採集；用水樣採集瓶在河、湖中H個不同地點的一定深度（20? 50cm)處採集水樣，得到的混合液用硝酸或氨氧化軸（取決於檢測液樣品的酸鹼度）調節其 水樣的抑呈弱酸性，W免雜質影響檢測效果，並用濾紙過濾水樣，獲得的濾液為待檢測水 樣。
[0209] (3)準備兩個同樣規格的試管A和試管B，分別向試管A和試管B中加入相同體積 (0.85血）的檢測液樣品。
[0210] (4)分別向試管A和試管B中加入等體積（0. ImL)的超純水和待檢測水樣，混勻 後，再加入（1)中製備的楓化鍾溶液（50 y L)。觀察試管A和試管B中水溶液顏色變化的情 況。
[0211] 檢測結果；15分鐘內，如果試管B中水溶液相對於試管A中水溶液的顏色發生變 化（變深紅或變藍），則判定待檢巧IJ水樣中含有半脫氨酸，且濃度大於或等於2. 5 X 10可1〇1/ L ;若試管B中水溶液相對於試管A中水溶液的顏色沒有發生變化，則判定待檢測水樣中半 脫氨酸濃度低於2. 5X l(T8mol/L。
[0212] 對檢測混合液進行紫外可見分光光度計測量，在250?900nm區間內測得的紫外 可見吸收波長的變化，並將500nm及720nm處的吸光度差值代入圖4進行比對計算，得到待 檢測液中半脫氨酸的濃度。
[0213] 測定結果：

【權利要求】
1. 一種用於檢測半胱氨酸的試劑，其特徵在於，所述的試劑包含銀納米片溶液；其中， 所述的銀納米片溶液中含有保護劑。
2. 如權利要求1所述的試劑，其特徵在於，所述的保護劑選自下組：檸檬酸、檸檬酸鹽、 聚乙烯吡咯烷酮、可溶性的（對-磺醯苯基）苯基膦化鹽，或其組合。
3. -種用於檢測半胱氨酸的試劑盒，其特徵在於，所述的試劑盒包括如權利要求1所 述的試劑；或 所述的試劑盒包括組分： (i) 銀納米粒子前驅體； (ii) 還原性試劑；和 (iii) 保護劑。
4. 如權利要求3所述的試劑盒，其特徵在於，所述的試劑盒還包括：含有碘離子的溶 液。
5. -種檢測待測樣品中的半胱氨酸的方法，其特徵在於，包括：用如權利要求1所述的 試劑，或如權利要求3所述的試劑盒對樣品進行檢測。
6. 如權利要求5所述的方法，其特徵在於，包括步驟： 提供一如權利要求1所述的試劑； 提供一樣品水溶液； 將所述的試劑加入樣品中使其反應，再加入含碘離子的溶液，形成檢測混合液； 通過所述檢測混合液光譜學特徵，判斷所述樣品中是否存在半胱氨酸，和/或判斷樣 品中半胱氨酸的含量。
7. 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述方法還包括：提供一對照混合液，通過 比較所述檢測混合液和所述對照混合液的光譜學特徵差異，判斷所述樣品中是否存在半胱 氨酸，和/或判斷樣品中半胱氨酸的含量。
8. 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述的如權利要求1所述的試劑通過包括以 下步驟的方法製備： 提供一溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液； 往上述水溶液中加入還原性試劑，得到銀納米片。
9. 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述的溶解有銀納米粒子前驅體的水溶液 通過以下步驟製備： 將銀納米粒子前驅體和保護劑加入去離子水中，形成溶解有銀納米粒子前驅體的水溶 液。
10. 如權利要求6所述的方法，其特徵在於，包括步驟： 用所述檢測混合液與已知濃度的標準樣品進行比較，判斷待測樣品中是否存在半胱氨 酸和/或判斷待測樣品中半胱氨酸的濃度； 或所述方法包括： 檢測所述檢測混合液的光譜學特徵，並將所得結果代入標準曲線，得到待測樣品中半 胱氨酸的濃度。
【文檔編號】G01N21/77GK104422688SQ201310367104
【公開日】2015年3月18日 申請日期:2013年8月21日 優先權日:2013年8月21日
【發明者】吳愛國, 李永龍, 沈折玉, 高月霞, 汪竹青 申請人:中國科學院寧波材料技術與工程研究所