治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法
2023-12-01 09:07:11 3
專利名稱：治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法
技術領域：
本發明涉及中藥複方製劑及其製備方法，特別涉及一種治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法。
背景技術：
中醫是我國的國粹，傳統中醫的理論、臨床與現代研究均表明中醫藥治療腫瘤是中醫的一大特色，且具有顯著的療效。目前已有該領域相關的發明創造申請專利，如ZL 90106365.7、ZL 91110970.6、200410004442.X等。有關腫瘤發生的機理，多數醫家從氣陰虛損、熱毒與瘀血入手，投以益氣養陰、清熱解毒與活血化瘀之品，如200410063012.5，200410027218.2，200310103214.3等專利申請。儘管現有製劑的選材組方各不相同，但運用治法基本一致，沒有突破性的進展。大量研究表明不恰當的使用清熱解毒非但可損傷機體的陽氣，而且部分清熱解毒藥物還有明顯的免疫抑制作用，有的活血化瘀藥物還可能促使腫瘤的轉移。同時現有的多數體外實驗的複方製劑用藥量過大，假陽性多，因此可靠性欠佳。
我們根據多年的臨床實踐發現很多晚期腫瘤患者具有畏寒乏力、舌淡苔白、脈沉遲無力等臨床表現，進而根據《靈樞·百病始生》篇關於「積之始生，得寒乃成，厥乃成積」的論述提出陽虛寒凝是腫瘤發生的根本原因。陽虛寒凝是怎樣導致腫瘤發生的呢？《靈樞·百病始生》篇明確指出「溫氣不行，凝血蘊裡而不散，津液澀滲，著而不去，而積皆成矣」。可見腫瘤是在陽虛寒凝的基礎上寒痰凝結而成的。
發明內容
本發明的目的旨在克服上述不足之處，特別針對現有中藥複方製劑在治療寒痰凝結的晚期腫瘤上的缺陷，根據多年的臨床實踐與民間秘方，反覆臨床驗證拆方組方，提供一種有效治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法，應用於腫瘤的的治療。
為實現上述目的本發明的實施方式如下一種治療腫瘤的中藥複方製劑，其特徵在於該製劑採用經常規炮製的生藥，組方配比如下(重量％)附片1.2-30.5％；商陸1.0-30.3％；田七1.5-28.9％；土貝母1.9-28.3％；守宮3.6-33.1％。
一種實現權利要求1所述的治療腫瘤的中藥複方製劑的製備方法，包括備料、粉碎等常規基礎步驟，其特徵在於還包括依次進行的如下步驟醇提守宮在水浸提取前用甲醇抽提，將守宮粉以1-8倍甲醇30-80℃水浴浸提2-6小時、1-3小時各1次，提取液過濾，並揮發掉甲醇；水提將甲醇抽提後的守宮與附片、商陸、田七、土貝母混合，加1-8倍的水，在60-120℃條件下浸提1-3小時，並可多次水浸提，將所得水浸提液合併使用；除雜提取物可採用過濾、離心方法除雜；乾燥將醇提物與水提物乾燥，合併使用。
可將治療腫瘤的中藥複方製劑製成符合藥劑學要求的口服劑型。
該治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法與現有的藥物相比，其科學價值和應用的意義在於1、對惡性腫瘤具有較高的療效。例如原發性肝癌俗稱「癌王」，為我國常見惡性腫瘤之一，我國每年約有11萬人死於肝癌，佔全球肝癌死亡數的45％。肝移植雖然對早期肝癌有較好的療效，但高昂的手術及維持藥費致使大多患者無法行肝移植術且全球供肝來源嚴重不足。大多數肝癌一經發現即屬晚期，而中晚期患者無論是手術、放療、化療、介入治療療效均不理想。目前僅少數幾種化療藥如阿黴素、順鉑、替加氟對肝癌有明確的療效，但因其抑癌率較低而毒性反應較大，用於全身化療多無確切療效。相比之下該製劑對Bel-7402細胞的增殖具有很強的抑制作用。該製劑對Bel-7402細胞還有較強的細胞毒作用。該製劑也可顯著抑制人白血病HL-60細胞的存活，
並對HL-60細胞有很強的細胞毒作用。
2、根據腫瘤寒痰凝結的病機，從溫化寒痰立法，研製了該製劑，與目前常規的從氣陰虛損、熱毒與瘀血入手，投以益氣養陰、清熱解毒與活血化瘀藥物的研究有很大的不同。有研究表明不恰當的使用清熱解毒非但可損傷機體的陽氣，而且部分清熱解毒藥物有明顯的免疫抑制作用，活血化瘀藥物尚可促進腫瘤的轉移。
3、多數體外實驗的複方製劑用藥量過大，假陽性多，可靠性欠佳。而該製劑體外實驗最低濃度僅75μg/ml，作為天然藥複方提取物，其體外研究的用藥量很小(通常單一天然藥的粗提物體外研究可從250μg/ml起逐步稀釋)，研究結果較為可靠。
4、現代醫學認為腫瘤細胞是由機體正常細胞突變而來，其顯著的生物學行為改變就在於腫瘤的惡性生長(包括腫瘤細胞的增殖旺盛與凋亡受阻)與分化低下。腫瘤本質上是一種遺傳性細胞周期病，即細胞周期驅動機制與監測機制異常導致的細胞周期界面機制異常，如增殖旺盛、分化低下與凋亡受阻。目前尚缺少中藥逆轉腫瘤生長、分化、凋亡與細胞周期等腫瘤細胞生物學行為異常的系統研究。該製劑可通過抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞分化與凋亡，逆轉腫瘤細胞的生物學行為改變。該製劑還可調節腫瘤細胞周期，使G0期細胞顯著減少，S期細胞增加。並可通過對腫瘤細胞的細胞毒作用直接殺傷腫瘤細胞。
圖1為該製劑作用於Bel-7402細胞的生長曲線示意圖；圖2為該製劑作用於Bel-7402細胞的存活率曲線示意圖；圖3為未添加該製劑時肝癌Bel-7402細胞顯微鏡下檢測圖像；圖4為該製劑作用於肝癌Bel-7402細胞的細胞毒顯微鏡下檢測效果圖像；圖5為未添加該製劑時肝癌Bel-7402細胞凋亡的流式細胞儀檢測圖；圖6為三氧化二砷對肝癌Bel-7402細胞凋亡的影響流式細胞儀檢測圖；圖7為該製劑對肝癌Bel-7402細胞凋亡的影響流式細胞儀檢測圖；
圖8為未添加該製劑時肝癌Bel-7402細胞周期的流式細胞儀檢測圖；圖9為三氧化二砷對肝癌Bel-7402細胞周期的影響流式細胞儀檢測圖；圖10為該製劑對肝癌Bel-7402細胞周期的影響流式細胞儀檢測圖；圖11為未添加該製劑時肝癌Bel-7402細胞顯微鏡下檢測圖像；圖12為ATRA誘導肝癌Bel-7402細胞分化顯微鏡下檢測效果圖像；圖13為該製劑誘導肝癌Bel-7402細胞分化顯微鏡下檢測效果圖像；圖14為該製劑作用於HL-60細胞的生長曲線示意圖；圖15為該製劑作用於HL-60細胞的存活率曲線示意圖。
具體實施例方式
以下結合附圖及較佳實施例，對依據本發明提供的具體實施方式
詳述如下實施例1實施步驟是採用經常規炮製的生藥，稱取附片4％、商陸30.3％、田七16％、土貝母21.7％、守宮28％分別粉碎為粗末，過1號篩，將守宮粉以1-8倍甲醇30-80℃水浴浸提2-6小時、1-3小時各1次，可用4層紗布過濾，榨盡藥汁，藥汁揮去甲醇，乾燥；將甲醇抽提後的守宮與附片、商陸、田七、土貝母混合，加1-8倍的水，在60-120℃條件下浸提1-3小時，並可多次水浸提，將所得水浸提液合併使用；水提液可過濾、濾液經1200-12000轉/分鐘離心5-30分鐘，也可選擇其它方法除雜，真空乾燥，合併水提取物與甲醇提取物。
實施例2採用經常規炮製的生藥，稱取附片30.5％、商陸23％、田七9％、土貝母22％、守宮15.5％分別粉碎為粗末，過1號篩，將守宮粉以1-8倍甲醇30-80℃水浴浸提2-6小時、1-3小時各1次，可用多層紗布過濾，榨盡藥汁，藥汁揮去甲醇，乾燥；將甲醇抽提後的守宮與附片、商陸、田七、土貝母混合，加1-8倍的水，在60-120℃條件下浸提1-3小時，並可多次水浸提，將所得水浸提液合併使用；水提液可過濾、濾液經1200-12000轉/分鐘離心5-30分鐘，也可選擇其它方法除雜，真空乾燥，合併水提取物與甲醇提取物。
實施例3採用經常規炮製的生藥，稱取附片8％、商陸24.7％、田七10％、土貝母28.3％、守宮29％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例4採用經常規炮製的生藥，稱取附片10％、商陸25％、田七15％、土貝母28％、守宮22％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例5採用經常規炮製的生藥，稱取附片26％、商陸14％、田七28.9％、土貝母22％、守宮9.1％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例6採用經常規炮製的生藥，稱取附片30.5％、商陸29.5％、田七1.5％、土貝母5.5％、守宮33％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例7採用經常規炮製的生藥，稱取附片20％、商陸30％、田七15％、土貝母25％、守宮10％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例8採用經常規炮製的生藥，稱取附片27.4％、商陸29％、田七23％、土貝母17％、守宮3.6％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例9採用經常規炮製的生藥，稱取附片27％、商陸30％、田七15.1％、土貝母1.9％、守宮26％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例10採用經常規炮製的生藥，稱取附片29％、商陸1.0％、田七28％、土貝母21％、守宮21％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例11採用經常規炮製的生藥，稱取附片18％、商陸12％、田七9％、土貝母27.9％、守宮33.1％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
實施例12採用經常規炮製的生藥，稱取附片1.2％、商陸9.8％、田七28％、土貝母28％、守宮33％分別粉碎為粗末，按實施例1所述步驟將真空乾燥後的水提取物與甲醇提取物合併。
應用該製劑製成符合藥劑學要求的口服劑型應用實施例1製備口服液該製劑提取物，超濾除雜、除菌、除熱原、無菌分裝為10ml/支。
應用實施例2製備膠囊該製劑提取物，裝入空心膠囊，每粒50mg，封口、除粉、裝瓶。
應用實施例3製備片劑該製劑提取物，加糊精2份、澱粉2份、糖粉1份，氫氧化凝膠達總量的3％，壓片為50mg/片，裝瓶。
應用實施例4製備丸劑該製劑提取物，用蜜或水糊丸、乾燥、裝瓶。
實驗效果舉例1該製劑對人肝癌Bel-7402細胞增殖與細胞存活的影響。
1材料與方法材料Bel-7402細胞購自四川大學分子生物學開放實驗室；RPMI-1640培養基，美國GIBCO公司產品；該製劑用雙蒸水溶解，超濾除雜，配製成150mg/ml的儲備液，臨用前以RPMI-1640培養液配製成所需濃度。
方法Bel-7402細胞在5％CO2孵箱中培養，培養基為含10％滅活小牛血清的RPMI-1640，含1％雙抗(青黴素和鏈黴素)。每2-3天傳代一次，取對數生長期細胞用於實驗。12孔板每孔接種0.3×104/ml個細胞，接種後24小時加藥培養，分設該製劑高劑量組(750μg/ml)、中劑量組(250μg/ml)、低劑量組(75μg/ml)與PBS陰性對照組。分別於加藥後30分鐘、1-6天分別收集細胞，臺盼藍染色，計數活細胞，分別計數活細胞與死細胞，作生長曲線，計算抑癌率與細胞存活率。統計方法採用多重比較，全部統計由統計軟體包SPSS(version11.0，Chicago，USA)完成。
2結果該製劑高劑量組與中劑量組分別在加藥後2天與4天Bel-7402細胞全部死亡，臺盼藍染色鏡下無活細胞。低劑量組在加藥後24小時就可顯著抑制Bel-7402細胞的生長與存活，抑癌率最高達58.33％，表明該製劑對Bel-7402細胞的增殖與存活具有很強的抑制作用，參見圖1、圖2。
實驗效果舉例2該製劑對Bel-7402細胞的細胞毒作用。
1材料與方法材料Bel-7402細胞購自四川大學分子生物學開放實驗室；RPMI-1640培養基，美國GIBCO公司產品；該製劑用雙蒸水溶解，超濾除雜，配製成150mg/ml的儲備液，臨用前以RPMI-1640培養液配製成所需濃度。
方法Bel-7402細胞在5％CO2孵箱中培養，培養基為含10％滅活小牛血清的RPMI-1640。每2-3天傳代一次，取對數生長期細胞用於實驗。6孔板每孔接種0.5×104/ml個細胞，接種後24小時換液加藥培養，分設該製劑高劑量組(250μg/ml)、低劑量組(75μg/ml)與生理鹽水陰性對照組。於加藥後4天，棄去培養液，PBS洗2次，鏡下觀察細胞形態。
2結果肝癌細胞對細胞毒藥物有很強的耐受性，目前僅少數幾種化療藥如阿黴素、順鉑、替加氟等對肝癌有一定療效，但因其抑癌率較低而毒性反應很大，用於全身化療多無確切療效。該製劑作用後的Bel-7402細胞大量變圓，不貼壁。棄去培養液，PBS洗2次後鏡下存活細胞變大，胞漿有較多空泡，提示該製劑對肝癌細胞有較強的細胞毒作用，參見圖4並與圖3未添加該製劑的對照組比較，效果顯而易見。
實驗效果舉例3該製劑對Bel-7402細胞凋亡與細胞周期的影響。
1材料與方法材料Bel-7402細胞購自四川大學分子生物學開放實驗室；RPMI-1640培養基，美國GIBCO公司產品；三氧化二砷(AS2O3)購自Sigma公司、應用PBS配製成10mmol/L的儲備液，於4℃保存；該製劑用雙蒸水溶解，超濾除雜，配製成150mg/ml的儲備液，臨用前以RPMI-1640培養液配製成所需濃度。
方法Bel-7402細胞在5％CO2孵箱中培養，培養基為含10％滅活小牛血清的RPMI-1640。每2-3天傳代一次，取對數生長期細胞用於實驗。6孔板每孔接種0.5×104/ml個細胞，接種後24小、時換液加藥培養，分設該製劑高劑量組(250μg/ml)、低劑量組(75μg/ml)、生理鹽水陰性對照組、AS2O3陽性對照組。於加藥後4天收集細胞，流式細胞儀分析細胞凋亡與細胞周期。
2結果該製劑高、低劑量組均顯著誘導Bel-7402細胞凋亡，高劑量組凋亡率為35.9％，優於AS2O3，低劑量組凋亡率為19.9％，AS2O3組凋亡率為22.5％，其對比效果參見圖5-圖7。研究結果表明該製劑能顯著誘導人肝癌Bel-7402細胞的凋亡，細胞周期分析該製劑使G0/G1期細胞減少，S期細胞增加，細胞被阻滯於S期，其對比效果參見圖8-圖10。該製劑對腫瘤細胞周期的調節作用將影響腫瘤細胞的如下生物學行為①影響細胞DNA複製進而抑制細胞增殖。②肝癌細胞對細胞毒藥物有很強的耐受性，目前僅少數幾種化療藥對肝癌有一定療效，但因其抑癌率較低而毒性反應很大，用於全身化療多無確切療效。每個療程的細胞毒治療可以殺死一定比例的分裂期細胞而不是恆定數量的細胞，G0期細胞對細胞毒藥物不敏感。該製劑使G0/G1期細胞顯著減少，S期細胞增加，從而增加了腫瘤細胞對其細胞毒作用的敏感性，提示該製劑提高腫瘤細胞對其自身的藥物敏感性。該製劑使細胞周期同步化，因而與S期特異性的細胞毒藥物聯合應用可能會進一步提高肝癌的療效。③AS2O3使細胞周期阻滯於G2/M期，阻止細胞分裂並誘導細胞凋亡。該製劑使細胞阻滯於S期並誘導細胞凋亡，顯示了不同於AS2O3的作用機理。④ATRA使G1增加，G2減少，阻止細胞進入S期進而誘導細胞分化。該製劑使G0/G1期細胞減少，S期細胞增加，並誘導細胞分化，顯示了不同於ATRA的作用機理。
實驗效果舉例4該製劑對Bel-7402細胞的誘導分化作用。
1材料與方法材料Bel-7402細胞購自四川大學分子生物學開放實驗室；RPMI-1640培養基，美國GIBCO公司產品；全反式維甲酸(ATRA)購自Sigma公司、應用PBS配製成10mmol/L的儲備液，於4℃保存；該製劑用雙蒸水溶解，超濾除雜，配製成150mg/ml的儲備液，臨用前以RPMI-1640培養液配製成所需濃度。
方法將肝癌細胞株Bel-7402培養於含10％新生小牛血清的RPMI-I640培養基，1×105/ml接種於20ml培養瓶中，於37℃、體積為5％CO2、飽和溼度的恆溫孵箱中培養。接種24小時後換液，分別用含該製劑250μg/ml、75μg/ml、ATRA 3μg/ml與等體積NS的PRMI1640培養基培養4天。觀察細胞形態，檢測甲胎球蛋白(AFP)與白蛋白(ALB)。
2結果ATRA可誘導Bel-7402細胞分化為多邊形細胞，而該製劑作用後的7402細胞形態明顯改變，呈紡錘狀，並可見細胞周圍有大量分泌物存在。
該製劑作用後的Bel-7402細胞ALP下降，ALB分泌上升，提示該製劑可誘導Bel-7402細胞往成熟的肝細胞方向分化，對比效果參見圖11-圖13。
實驗效果舉例5該製劑對人早幼粒白血病HL-60細胞增殖與存活的影響。
1材料與方法材料HL-60細胞購自四川大學分子生物學開放實驗室；RPMI-1640培養基，美國GIBCO公司產品；該製劑用雙蒸水溶解，超濾除雜，配製成150mg/ml的儲備液，臨用前以RPMI-1640培養液配製成所需濃度。
方法HL-60細胞在5％CO2孵箱中培養，培養基為含1O％滅活小牛血清的RPMI-1640。每4-6天傳代一次，取對數生長期細胞用於實驗。12孔板每孔接種0.5×104/ml個細胞，接種後24小時加藥培養，分設該製劑高劑量組(7.5mg/ml)、中劑量組(750μg/ml)、低劑量組(75μg/ml)與PBS陰性對照組。分別於加藥後30分鐘、1-6天分別收集細胞，臺盼藍染色，分別計數活細胞與死細胞，作生長曲線、抑癌率與細胞存活率計算。統計方法採用多重比較，全部統計由統計軟體包SPSS完成。
2結果該製劑高劑量組在加藥後半小時HL-60細胞已全部死亡，臺盼藍染色鏡下無活細胞。中劑量與低劑量組在加藥後24小時就可顯著抑制HL-60細胞的生長與存活，抑癌率最高達70.8％，表明該製劑對HL-60細胞的增殖與存活具有很強的抑制作用，參見圖14、圖15。
綜上所述，本發明根據「寒痰凝結」是腫瘤產生的根源這一理論與實踐的探索，研製出有效治療腫瘤的中藥複方製劑，給廣大腫瘤患者戰勝病魔帶來福音。
權利要求
1.一種治療腫瘤的中藥複方製劑，其特徵在於該製劑採用經常規炮製的生藥，組方配比如下(重量％)附片1.2-30.5％；商陸1.0-30.3％；田七1.5-28.9％；土貝母 1.9-28.3％；守宮3.6-33.1％。
2.一種實現權利要求1所述的治療腫瘤的中藥複方製劑的製備方法，包括備料、粉碎等常規基礎步驟，其特徵在於還包括依次進行的如下步驟醇提守宮在水浸提取前用甲醇抽提，將守宮粉以1-8倍甲醇30-80℃水浴浸提2-6小時、1-3小時各1次，提取液過濾，並揮發掉甲醇；水提將甲醇抽提後的守宮與附片、商陸、田七、土貝母混合，加1-8倍的水，在60-120℃條件下浸提1-3小時，並可多次水浸提，將所得水浸提液合併使用；除雜提取物可採用過濾、離心方法除雜；乾燥將醇提物與水提物乾燥，合併使用。
3.根據權利要求2所述的治療腫瘤的中藥複方製劑的製備方法，其特徵在於將其製成符合藥劑學要求的口服劑型。
全文摘要
本發明涉及一種治療腫瘤的中藥複方製劑及其製備方法。該製劑組方配比如下(重量％)附片1.2－30.5％、商陸1.0－30.3％、田七1.5－28.9％、土貝母1.9－28.3％、守宮3.6－33.1％。將上述組分按比例配製，經粉碎，守宮先用甲醇提取，揮去甲醇，藥渣與其它組分用水浸、煎煮、過濾、離心、乾燥，製成膠囊、口服液、片劑等劑型。該複方製劑可抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞分化與凋亡，逆轉腫瘤細胞的生物學行為改變；同時調節腫瘤細胞周期，使G
文檔編號A61P35/00GK1733196SQ20051001477
公開日2006年2月15日 申請日期2005年8月19日 優先權日2005年8月19日
發明者吳雄志, 陳丹 申請人:吳雄志