一種安全高效的動物精液消毒劑及其製備方法

2023-12-08 03:17:06

一種安全高效的動物精液消毒劑及其製備方法
【專利摘要】本發明為了填補市面上動物精液消毒劑的空白，提供了一種安全高效的動物精液消毒劑及其製備方法。按重量計，包括以下組分：聚維酮碘4.0％-6.0％、抗菌肽0.5％-1.0％、維生素0.2％-0.3％、乙二胺四乙酸0.1％－0.2％和蒸餾水餘量。採用聚維酮碘與抗菌肽的混合物作為精液消毒劑用於經濟動物的精液淨化消毒殺菌。經試驗證明它能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV）、豬圓環病毒（PCV-2）、豬偽狂犬病毒（PRV）、豬繁殖與呼吸綜合症病毒（PRRSV）、豬細小病毒（PPV），以及其他大多數病原微生物，同時對精子活力及保存時間有一定延長效果，對受精卵、胚胎無毒無害。
【專利說明】一種安全高效的動物精液消毒劑及其製備方法

【技術領域】
[0001] 本發明屬於動物防疫【技術領域】，具體涉及一種安全高效的動物精液消毒劑及其制 備方法。

【背景技術】
[0002] 現代畜牧業的大力發展得益於人工授精技術的快速發展。人工授精技術的優勢是 能夠通過人工採集優質精液，通過一定的技術手段使它能夠長時間保存運輸，為畜牧業品 種改良和提高生產績效帶來巨大經濟效益。但是人工授精技術也有它的天然缺陷，那就是 將供體精液裡面可能帶有的病原微生物都傳染給它的受體。以豬為例，公豬精液中通常含 有10 4~105 CFU/ml細菌以及可能汙染的未知病毒及其他病原微生物，這些細菌和病毒會影 響公豬精液的保存時間及精子的活率，並且能夠通過人工授精技術將公豬所可能攜帶病原 微生物傳染給母豬和小豬，導致母豬繁殖障礙、小豬疾病的流行和生產績效的大幅度下降， 造成嚴重的經濟損失。
[0003] -些學者的研究表明公豬精液中能檢出的危害養豬生產的主要病毒有：口蹄疫病 毒（FMDV)、豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環病毒（PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與呼吸綜合 症病毒（PRRSV)、豬細小病毒（PPV)、日本乙型腦炎病毒（JEV)。其中已證實CSFV、PRRSV、 PPV、PRV能通過人工受精感染母豬引起死胎、流產等繁殖障礙。種公豬精液帶毒是豬群病 毒病垂直傳播的一個重要途徑，也是制約人工受精技術發展和推廣的一大難題。
[0004] 針對公豬精液汙染，精液消毒劑開發的難度很大，原因在於：一方面是安全性的考 慮，首先要不損傷精子活率，不對受精卵、胚胎以及母豬的繁殖造成影響，對精子的遺傳性 能無影響；另一方面是有效性的考慮，對精子裡面的有害病原，特別是病毒有效，是這項技 術的關鍵。而安全性和有效性是一對矛盾，很難對立統一。因此，目前市而上還沒有商品化 的精液消毒劑。全世界的從業者都只有通過在精液稀釋液中加入抗生素(如青黴素、鏈黴 素、慶大黴素、林可黴素等）來抑菌，但是抗生素僅能抑殺精液中的部份細菌繁殖，而對病毒 無效，濫用抗生素帶來的是大量耐藥菌株的產生。
[0005] 201210055618. 9,名稱為"一種動物精液消毒液及其製備方法"的發明專利，公開 了一種動物精液的消毒液，是由聚乙烯吡咯烷酮、精碘、甘油、維生素 C、乙二胺四乙酸二鈉、 蒸餾水組成，按照配製聚乙烯吡咯烷酮-精碘混合物、配製維生素 C-甘油混合液、混料、檢 驗等步驟製備得到。該消毒液單獨採用碘製劑作為精液消毒劑，很難完全殺滅精液裡面汙 染的病原微生物，特別是精液常見病毒，缺乏這方面必要的數據來證明其對精液消毒的有 效性，也缺乏必要的數據證明其對精子的安全性。
[0006] 201410342549. 9,名稱為"一種複方活力碘消毒劑及其製備方法"的發明專利 申請，公開了一種複方活力碘消毒劑，該消毒劑包括下列各組分（wt%) :聚維酮碘PVP-I， 2. 0-10. 0% ;維生素 A，0. 05-0. 5% ;碘酸鉀 KI03,0. 5-1. 0% ;碘化鉀 KI，0. 5-1. 0% ;螯合劑， 0. 2-2. 0% ;有機溶劑，1. 0-10. 0% ;pH調節劑，適量；水，餘量。該消毒液只能作為體表消毒 齊U，不能用於動物精液消毒。


【發明內容】

[0007] 本發明為了填補市面上動物精液消毒劑的空白，提供了一種安全高效的動物精液 消毒劑及其製備方法。採用聚維酮碘與抗菌肽的混合物作為精液消毒劑用於經濟動物(主 要是豬、牛、羊）的精液淨化消毒殺菌。經試驗證明它能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五 種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環病毒（PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與 呼吸綜合症病毒（PRRSV)、豬細小病毒（PPV)，以及其他大多數病原微生物，同時對精子活 力及保存時間有一定延長效果，對受精卵、胚胎無毒無害。
[0008] 為實現上述發明目的，本發明採用如下的技術方案： 一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 餘量。
[0009] 聚維酮碘是目前畜禽養殖場常用的碘製劑之一，是將碘載於強鹼性陰離子樹脂上 形成的一種接觸型消毒劑，可殺死大部分細菌、真菌和病毒。但是，在對精子安全的濃度範 圍內，聚維酮碘對部份細菌和病毒有很好的效果，但不能完全殺滅精液裡面常見五種病毒， 特別是豬偽狂犬病毒和豬瘟病毒效果不佳。
[0010] 抗菌肽是生物體內經誘導產生的一種具有生物活性的小分子多肽，分子量在 2000?7000左右，由20?60個胺基酸殘基組成，對細菌和病毒都有廣譜殺滅效果，且對精 子安全性非常好，特別是對精液常見病毒特別是豬瘟病毒、偽狂犬病毒、藍耳病病毒有很好 的殺滅作用，和聚維酮碘配合使用有強烈互補性。
[0011] 本發明的精液消毒劑對動物精子、受精卵、胚胎無毒，能有效殺滅動物精液中的病 毒、細菌、真菌、支原體、衣原體等致病微生物，且不汙染環境。
[0012] 優選地，本發明的動物精液消毒劑按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 餘量。
[0013] 蜂膠的抗菌範圍十分廣泛，具有抗細菌、抗真菌、抗黴菌、抗寄生蟲和抗病毒等作 用，是不可多得的天然廣譜抗菌和抗病毒物質。在本發明的配方含量下，蜂膠對精子安全， 而且對精子的活率和保存時間有促進作用，特別是對精液的低溫保存有保護作用，對聚維 酮碘和抗菌肽的殺滅病毒組合配方有協同作用。
[0014] 進一步優選地，所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機 溶劑，增強抗菌效果的同時，不會影響精子活力。
[0015] 進一步優選地，本發明的動物精液消毒劑按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 甘油 2%-3% 蒸餾水 餘量。
[0016] 加入甘油的目的是：對公豬精子活率和保存時間有明顯的促進作用。
[0017] 優選地，所述的抗菌肽為蟑螂內源性抗菌肽。
[0018] 本發明選用蟑螂內源性抗菌肽，其胺基酸序列為SEQID NO: 1。這種抗菌肽具有良 好穩定性以及廣譜高效抗菌、抗病毒等特點，且生產工藝成熟和完善，其生產工藝是以蟑螂 內源性抗菌肽的胺基酸序列為模版，以固相多肽合成方法將胺基酸序列重組後用工程菌表 達發酵，得到重組廣譜抗菌肽純品。
[0019] 本發明所述的維生素是指水溶性維生素C、維生素A和維生素E中的一種或者兩種 以上的組合。能有效保護精子的功能，配合使用能更好促進精子活力，提高精子保存時間， 有利於精子的保存運輸。
[0020] 本發明的動物精液消毒劑配製方法如下： 第一步、配製9. 5 % - 10.0 %聚維酮碘水溶液A ; 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用。
[0021] 優選地，32-37°C下攪拌15-20分鐘配成蜂膠溶液，促進充分融合，保證生物活性。
[0022] 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全 溶解後待用。
[0023] 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低 速攪拌10-20分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌20-40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸 液過濾、灌裝得成品。
[0024] 所述的第三步，水溶性維生素完全溶解後，加入甘油攪拌均勻待用。
[0025] 優選地，所述的低速攪拌是指15-20轉/分，完全混合不起泡，混懸液穩定。
[0026] 常規的消毒劑對公豬精子毒性很強，因此不能直接添加到公豬精液中。而廣泛應 用於皮膚和黏膜消毒的高分子有機碘，具有較高的安全性，對細菌和病毒都有較強的殺滅 作用，但高分子有機碘由於組份複雜也對公豬精子有較強殺滅作用。本研究的精液消毒劑 在小於或等於1%的低濃度下對公豬精子是安全無害的，不但不會影響精子活率和保存時 間，還可適當提高活率和延長保存時間。因此，可應用於豬人工受精技術精液淨化消毒，同 時也可以運用於的精液採集和輸精過程皮膚、生殖器等消毒。具體的有益效果體現在於： 1、本發明的精液消毒劑中，含聚維酮碘按有效碘計算，為標示量的8. 5%?12. 0% ;採 用聚維酮碘與抗菌肽配合使用，用於經濟動物的精液淨化消毒殺菌，具有強烈的互補性。 能夠完全殺滅公豬精液中最常見的五種危害最大的病毒：豬瘟病毒（CSFV)、豬圓環病毒 (PCV-2)、豬偽狂犬病毒（PRV)、豬繁殖與呼吸綜合症病毒（PRRSV)、豬細小病毒（PPV)，以及 其他大多數病原微生物；同時本發明的精液消毒劑對精子活力及保存時間有一定延長效 果，對受精卵、胚胎無毒無害。
[0027] 2、本發明的配方中添加蜂膠，特別是不含任何有機溶劑的天然蜂膠，且對精子安 全，而且對精子的活率和保存時間有促進作用，特別是對精液的低溫保存有保護作用；對聚 維酮碘和抗菌肽的殺滅病毒組合配方有協同作用，不會影響精子活力，同時具有增強配方 抗菌效果的作用。
[0028] 3、本發明選用蟑螂內源性抗菌肽，這種抗菌肽具有良好穩定性以及廣譜高效抗 菌、抗病毒等特點，且生產工藝成熟和完善，易於產業化生產。
[0029] 4、本發明對精液消毒劑的製備方法嚴格控制，按製備方法中的順序添加配方中各 組分，不會產生沉澱，得到產品的穩定性好，37°C恆溫箱放置三個月後碘含量下降率低於 4 %，六個月碘含量下降率低於8 %。
[0030] 5、由於安全性和有效性的考慮，精液消毒劑開發的難度很大，目前精液消毒劑還 沒有市售同類產品，只有普通用於動物體表、圈舍、環境等消毒劑，本發明的精液消毒劑已 經得到全國超過100家大中型養豬企業的生產驗證，在使用本發明產品後生產成績大幅改 善的有超過50%，普遍反映母豬繁殖障礙疾病大幅降低，疾病發生率顯著下降，小豬好養， 生產績效普遍提高，具有顯著經濟效益和社會效益。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0031] 圖1為本發明的不同濃度精液消毒劑對精子活率的影響示意圖。

【具體實施方式】
[0032] 下面結合【具體實施方式】對本發明的實質性內容作進一步詳細的描述。
[0033] 實施例1 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 維生素C 0.2% 乙二胺四乙酸 0.1% 蒸餾水 餘量。
[0034] 實施例2 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 維生素A 0. 3% 乙二胺四乙酸 0.2% 蒸餾水 餘量。
[0035] 實施例3 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 5.0% 抗菌肽 0.6% 維生素 C和A 0. 22% 乙二胺四乙酸 0.12% 蒸餾水 餘量。
[0036] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機溶劑。 [0037] 所述的抗菌肽為蟑螂內源性抗菌肽。
[0038] 實施例4 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 蜂膠 2% 維生素 C和E 0. 2% 乙二胺四乙酸 0.1% 蒸餾水 餘量。
[0039] 實施例5 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 蜂膠 4% 維生素C、A、E 0. 3% 乙二胺四乙酸 0.2% 蒸餾水 餘量。
[0040] 所述的抗菌肽為蟑螂內源性抗菌肽。
[0041] 實施例6 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 5. 5% 抗菌肽 0.8% 蜂膠 3% 維生素 C、A、E 0. 25% 乙二胺四乙酸 0.15% 蒸餾水 餘量。
[0042] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機溶劑。
[0043] 實施例7 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% 抗菌肽 0.5% 蜂膠 2 % % 維生素C、A、E 0. 2% 乙二胺四乙酸 0.1% 甘油 2% 蒸餾水 餘量。
[0044] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機溶劑。
[0045] 實施例8 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 6.0% 抗菌肽 1.0% 蜂膠 4% 維生素E 0.3% 乙二胺四乙酸 0.2% 甘油 3% 蒸餾水 餘量。
[0046] 實施例9 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 5.2% 抗菌肽 0.7% 蜂膠 3.2% 維生素 C、A、E 0. 26% 乙二胺四乙酸 0.16% 甘油 2.5% 蒸餾水 餘量。
[0047] 實施例10 一種安全高效的動物精液消毒劑，按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4. 5% 抗菌肽 0.9% 蜂膠 2.5% 維生素 C、A、E 0. 28% 乙二胺四乙酸 0.18% 甘油 2.2% 蒸餾水 餘量。
[0048] 所述的蜂膠為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機溶劑。
[0049] 所述的抗菌肽為蟑螂內源性抗菌肽。
[0050] 實施例11 本發明動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製9. 5%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌10分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌20分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0051] 實施例12 本發明動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製10. 0%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，37°C下攪拌15分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌20分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0052] 實施例13 本發明動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製9. 6%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，32°C下攪拌20分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌15分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌30分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0053] 所述的低速攪拌是指15轉/分。
[0054] 實施例14 本發明動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製9. 7%聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，35°C下攪拌16分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌16分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌25分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0055] 所述的低速攪拌是指20轉/分。
[0056] 實施例15 本發明動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製9. 8 %聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，36°C下攪拌18分鐘 配成蜂膠溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後加入甘油攪拌均勻待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌14分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌28分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過濾、灌 裝得成品。
[0057] 所述的低速攪拌是指16轉/分。
[0058] 實施例16 本發明涉及的蟑螂內源性抗菌肽生產工藝，採用蟑螂內源性抗菌肽基因轉化酵母發酵 生產方法： (1) 搖瓶培養：將含蟑螂內源性抗菌肽基因質粒轉化的酵母作為菌種接入三角瓶中，在 28-32°C，搖床轉速150-300轉/分的條件下，培養24-72小時； (2) 發酵罐培養：將（1)中已培養好的種子接入發酵罐，接種量為2-20%，在28-322， 攪拌速度180-400轉/分，罐壓0. 04-0. 12兆帕，風量1 : 0. 5-1 : 1. 8體積/體積/分， pH6. 5-7. 5的條件下，培養24-96小時。
[0059] 培養過程中加入1%甲醇誘導，將發酵所得抗菌肽在90-1KTC下加熱8-20分鐘； 其中所用的培養基組分及重量百分含量為：酵母粉〇. 1-3%、蛋白腖0. 5-4%、糖0. 1-3%， pH 6. 5-7. 5〇 實施例17 毒理學試驗 採用動物試驗觀察其急性毒性、亞急性毒性及刺激性毒性結果。
[0060] 結果：本發明精液消毒劑（1%稀釋)對大鼠和小鼠急性經口 LD50均大於5000 mg/ kg ? BW，其原液對兔眼、完整皮膚及破損皮膚無刺激性；給藥劑量在1000 mg/kg ? BW以下， 與陰性對照組比較，對大鼠的體重、血常規及血液生物化學指標無顯著影響，試驗動物各髒 器均未見明顯病理改變。
[0061] 仔豬口服精液淨化保護劑原液，每天兩次，每次1ml，連續兩天給藥，用藥前後試驗 仔豬可食用組織中碘濃度均低於最高殘留限量，精液消毒劑在豬使用時無休藥期。精液淨 化保護劑在使用濃度下毒理學是安全的。
[0062] 實施例18 本發明的成品檢驗項目與操作方法： 1.有效碘含量檢測 按照《中華人民共和國獸藥典》（2005版）有效碘檢測方法，本品含聚維酮碘按有效碘 (I)計算，應為標示量的8. 5%?12. 0%。
[0063] 【性狀】本品為紅棕色液體。
[0064] 【鑑別】 (1)取本品1?5漓，加水IOml與澱粉指示液1滴，即顯藍紫色。
[0065] (2)取本品IOml,置50ml錐形瓶中（瓶內頸切勿沾汙），瓶口覆蓋一張用澱粉指示 液溼潤的濾紙，放置80秒鐘，不顯藍色。
[0066] 【檢查】pH值應為3.0?6.0。
[0067] 2.公豬精子安全性檢測 採集公豬精液，用精液稀釋液分別配製濃度為2%、I. 5%、1%的精液淨化保護劑，將所有 稀釋液置於37°C水浴鍋中溫浴備用。
[0068] 採集好精液後，迅速用精子自動形態分析儀檢測原精液精子的活率。將原精液平 均分成4份，分別與不同濃度的精液淨化保護劑等體積混合，以不含精液消毒劑的精液稀 釋液所稀釋的精液為對照組。混合後精液消毒劑的終濃度分別為1%、7.5%、0. 5%。
[0069] 將各組稀釋好的精液分裝，置於17°C恆溫冰箱，每隔24小時檢測一次各組的精子 活率並記錄，直至精子活率低50%則停止檢測。精子活率指呈直線運動的精子佔總精子數 的比率，用百分率表示。精子有效存活時間定義為精子活率在50%以上的保存時間。
[0070] 成品檢驗結果如圖1所示，檢驗標準為1%、0. 75%、0. 5%三組精子活率及保存時間 均應高於對照組。
[0071] 3、常見五種豬精液汙染病毒殺滅效果檢驗方法 3. 1必備材料和方法 3. 1.1藥物本明的精液消毒劑 3. 1. 2細胞和毒株：ST細胞、Marc-145細胞、PK15-ZJU細胞；豬繁殖與呼吸症候群病毒 (PRRSV)JXAl-R株、偽狂犬病毒（PRV) SE株、豬瘟病毒（CFSV)Thiveral株、細小病毒（PPV) SCl株，和圓環病毒2型（PCV-2) ZJ/C株。
[0072] 3. 1. 3細胞培養相關試劑和儀器設備： 3. 2檢驗方法及操作步驟： 3. 2. 1、檢測ST、Marc-145、PK15-ZJU細胞對不同稀釋度精液消毒劑溶液（PBS稀釋）的 耐受性，得出對應於每種細胞的精液消毒劑的安全濃度。 3. 2. 2、精液消毒劑對PBS稀釋的病毒殺滅實驗方法(體外實驗）：在精液消毒劑安全濃 度範圍內，將不同濃度精液消毒劑溶液分別與一定濃度的五種病毒溶液等體積混合置37°C 作用lh，然後接種於對應細胞中，通過觀察細胞病變程度判定精液消毒劑對病毒的體外殺 滅作用。
[0073] 判定標準：若病毒接種於相應細胞能引起典型病變，且除開病毒的其他試劑不引 起細胞病變，實驗成立，此時，精液消毒劑與病毒混合作用後接種細胞，精液消毒劑的殺滅 作用與細胞病變程度成反比，即：無細胞病變，表明精液消毒劑對病毒有完全殺滅作用。見 表1。
[0074] 表1 96孔板中各病毒檢測加入試劑說明

【權利要求】
1. 一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：按重量計，包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 餘量。
2. 根據權利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：按重量計， 包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 蒸餾水 餘量。
3. 根據權利要求2所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：所述的蜂膠 為天然蜂膠，黃酮含量不低於8mg / ml，不含任何有機溶劑。
4. 根據權利要求2所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：按重量計， 包括以下組分： 聚維酮碘 4.0% - 6.0% 抗菌肽 0.5%- 1.0% 蜂膠 2% - 4% 維生素 0.2%-0.3% 乙二胺四乙酸 0.1%-0.2% 甘油 2%-3% 蒸餾水 餘量。
5. 根據權利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：所述的抗菌 肽為蟑螂內源性抗菌肽。
6. 根據權利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑，其特徵在於：所述的維生 素是指水溶性維生素C、維生素A和維生素E中的一種或者兩種以上的組合。
7. 根據權利要求1所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的製備方法，其特徵在於：所述動物精液消毒劑的配製方法如下： 第一步、配製9. 5 % - 10.0 %聚維酮碘水溶液A待用； 第二步、配製抗菌肽與蜂膠混合物B :將蜂膠溶液加入適量蒸餾水，攪拌混合配成蜂膠 溶液，冷卻至常溫後，加入抗菌肽低速攪拌待完全溶解後待用； 第三步、配製維生素混合液C :採用水溶性維生素加入蒸餾水中低速攪拌，待完全溶解 後待用； 第四步：將乙二胺四乙酸加入蒸餾水攪拌，待完全溶解後依次加入C液、B液，低速攪 拌10-20分鐘，混合均勻後加入A液，低速攪拌20-40分鐘，得到紅棕色混懸液，將混懸液過 濾、灌裝得成品。
8. 根據權利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的製備方法，其特徵在於：所述的第三步，水溶性維生素完全溶解後，加入甘油攪拌均勻待用。
9. 根據權利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的製備方法，其特徵在於：所述的第二步，32-37°C下攪拌15-20分鐘配成蜂膠溶液。
10. 根據權利要求7所述的一種安全高效的動物精液消毒劑的製備方法，其特徵在 於：所述的低速攪拌是指15-20轉/分。
【文檔編號】A01N1/02GK104304237SQ201410628740
【公開日】2015年1月28日 申請日期:2014年11月11日 優先權日:2014年11月11日
【發明者】況洪 申請人:成都美強獸醫技術服務有限公司