一種簡便快速測定茶葉中γ-氨基丁酸的方法

2023-11-04 12:06:37

專利名稱：一種簡便快速測定茶葉中γ-氨基丁酸的方法
技術領域：
本發明涉及一種簡便快速測定茶葉中Y -氨基丁酸的方法。
技術背景
γ -氨基丁酸(GABA)茶具有顯著的降血壓及改善肝功能等保健功效，已成為近年 國內外研發熱點，這樣就迫切要求為富GABA茶的研發及質檢提供一種簡便快速準確的測 定方法，目前國內外大多利用Berthelot顯色反應原理的分光光度法對食品中的GABA進行 定量分析，但由於茶葉富含茶多酚等還原性很強的成分嚴重幹擾Berthelot顯色反應的問 題，影響檢測結果的穩定性及準確性。利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)吸附除去茶樣中 的茶多酚，然後進行基於Berthelot反應的分光光度法定量測定茶葉中r_氨基丁酸含量。 本發明為富GABA茶的研發及質檢提供了一種簡便快速定量測定茶葉中Y -氨基丁酸的改 良分光光度法。發明內容
本發明的目的是提供一種簡便快速測定茶葉中Y -氨基丁酸的方法，該方法測定 茶葉GABA含量具有較高的可靠性和穩定性。
本發明提供的技術方案是一種簡便快速測定茶葉中Y-氨基丁酸的方法，利用 不溶性聚乙烯吡咯烷酮(PVPP)去除茶樣中的茶多酚類物質，然後基於Berthelot反應的分 光光度法測定茶葉中r-氨基丁酸含量。
所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶樣中的茶多酚類物質為將粒度為40目 的茶葉粉碎樣2. O g置於研缽中，加體積百分比10%冰醋酸5 mL研磨成勻漿，再加入10%冰 醋酸5 mL混勻，然後轉移至三角燒瓶中，將三角燒瓶置於沸水浴中加熱浸提45min，趁熱抽 濾得濾液；按Iml濾液50-200mg不溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例，在濾液中加入不溶性聚乙 烯吡咯烷酮，有白色沉澱物產生，振蕩後放置30°C水浴鍋中，吸附10-30min，離心去沉澱， 取上清液；所述基於Berthelot反應的分光光度法測定茶葉中r_氨基丁酸含量為取上述 上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸鈉緩衝液lmL，體積百分比6%重蒸苯酚溶液lmL，有白色 絮狀物產生，振蕩溶解，混勻後再加入體積百分比7. 5%的Naao溶液5mL，振蕩；於沸水中 加熱IOmin後置於冰浴中5min，取上清液，加入體積百分比60%的乙醇溶液2. OmL，于波長 645nmUcm比色皿測定其吸光度，再據標準曲線便可計算出茶葉中Y-氨基丁酸含量。
本發明通過與紙電泳法的比較實驗、α-胺基酸的幹擾實驗及加標樣的回收實驗 確定該方法的特異性、穩定性及準確性。結果表明本發明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除 茶樣中的茶多酚類物質，消除茶多酚幹擾；利用本發明與紙電泳法兩種方法測得的茶葉中 GABA含量無顯著差異(t=3. 464 < t0.05=4. 303)；本發明測定茶葉GABA含量具有較高的可 靠性，平均加樣回收率為98.洲；同時α -胺基酸對該方法測定茶葉中GABA含量沒有明顯 幹擾(變異係數為1.47%<5%)，表明該法對於Y-胺基酸具有較好的特異性。
具體實施方式
茶葉樣品預處理稱取粒度為40目的茶葉粉碎樣2.0 g置於研缽中，加10% (V/V)冰醋酸5 mL研磨成 勻漿，再加入10% (V/V)冰醋酸5 mL混勻，將勻漿轉移至150 mL三角燒瓶中，取蒸餾水(已 沸騰)40mL，分3次衝洗研缽，將衝洗液倒入三角燒瓶後置於沸水浴中加熱浸提45min，趁熱 抽濾，濾液用蒸餾水定容至50mL得樣液。
處理茶樣在Iml樣液中加入50-200mg的PVPP，有白色沉澱物產生，振蕩後放置30°C水浴鍋中， 吸附時間10-30min，離心去沉澱，取上清液待用。
茶葉中GABA含量的分光光度法的測定取上述上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸鈉緩衝液lmL，6% (體積百分比)重蒸苯酚溶 液lmL，有白色絮狀物產生，振蕩溶解，混勻後再加入7.5% (V/V)NaaO溶液5mL，振蕩。於 沸水中加熱IOmin後置於冰浴中5min，取上清液，加入60% (V/V)的乙醇溶液2. OmL,于波 長645nm、lcm比色皿測定其吸光度，再據標準曲線便可計算出茶葉中GABA含量。
通過上述分光光度法測得的3個富GABA茶樣的GABA含量分別為1.725、 2. 675和1. 650mg/g,與紙電泳法兩種方法測得的茶葉中GABA含量無顯著差異(t=3. 464 < to. 05=4. 303)。
權利要求
1.一種簡便快速測定茶葉中Y-氨基丁酸的方法，利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶 樣中的茶多酚類物質，然後基於Berthelot反應的分光光度法測定茶葉中r_氨基丁酸含量。
2.根據權利要求1所述的方法，其特徵在於所述利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶 樣中的茶多酚類物質為將粒度為40目的茶葉粉碎樣2. O g置於研缽中，加體積百分比10% 冰醋酸5 mL研磨成勻漿，再加入體積百分比10%冰醋酸5 mL混勻，將勻漿轉移至三角燒瓶 中，將三角燒瓶置於沸水浴中加熱浸提45min，趁熱抽濾得濾液；按Iml濾液50-200mg不 溶性聚乙烯吡咯烷酮的比例，在濾液中加入不溶性聚乙烯吡咯烷酮，有白色沉澱物產生，振 蕩後放置30°C水浴鍋中，吸附10-30min，離心去沉澱，取上清液；所述基於Berthelot反應 的分光光度法測定茶葉中r-氨基丁酸含量為取上述上清液1ml，加0. 01 mol/L四硼酸鈉 緩衝液lmL，體積百分比6%重蒸苯酚溶液lmL，有白色絮狀物產生，振蕩溶解，混勻後再加 入體積百分比7. 5% Natno溶液5mL，振蕩；於沸水中加熱IOmin後置於冰浴中5min，取上 清液，加入體積百分比60%的乙醇溶液2. OmL,于波長645nm、Icm比色皿測定其吸光度，再 據標準曲線便可計算出茶葉中Y-氨基丁酸含量。
全文摘要
本發明涉及一種簡便快速測定茶葉中γ-氨基丁酸的方法，利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶樣中的茶多酚類物質，然後基於Berthelot反應的分光光度法測定茶葉中r-氨基丁酸含量。本發明通過與紙電泳法的比較實驗、α-胺基酸的幹擾實驗及加標樣的回收實驗確定該方法的特異性、穩定性及準確性。結果表明本發明利用不溶性聚乙烯吡咯烷酮去除茶樣中的茶多酚類物質，消除茶多酚幹擾；利用本發明與紙電泳法兩種方法測得的茶葉中GABA含量無顯著差異；本發明測定茶葉GABA含量具有較高的可靠性，平均加樣回收率為98.2%；同時α-胺基酸對該方法測定茶葉中GABA含量沒有明顯幹擾，表明該法對於γ-胺基酸具有較好的特異性。
文檔編號G01N21/31GK102033047SQ20101056091
公開日2011年4月27日 申請日期2010年11月26日 優先權日2010年11月26日
發明者劉仲華, 施玲, 李順文, 楊新河, 毛清黎, 毛雅慧, 龔雨順 申請人:毛清黎