用於免疫疾病的預防或治療劑以及方法
2023-11-06 00:12:52 1
專利名稱：用於免疫疾病的預防或治療劑以及方法
技術領域：
本發明涉及用於免疫疾病如變應性疾病或自身免疫病的預防或治
療劑，用於免疫疾病的預防或治療方法以及柳杉(Cedar)花粉抗原融 合蛋白。
背景技術：
十分期望利用免疫抑制機制開發能從根本上治療由免疫應答異常 導致的免疫疾病包括自身免疫病和變應性疾病的方法，因為這些疾病的 許多現有治療方法均為對症治療。作為免疫調節機制中涉及的主要細胞 群，NKT細胞、可誘導耐受的樹突細胞和調節性T細胞均已報導過。 因此，i人為通過這些免疫細胞利用免疫調節機制的方法是能從根本上治 療免疫疾病的方法。
以下報導作為利用免疫調節機制的方法是可行的，它們可以引領免 疫疾病的治療。
專利文件1公開了將OVA (卵清蛋白)蛋白封裝在包括a-GalCer (a-半乳糖神經醯胺)的脂質體腔中的方法以及上述脂質體對小鼠中抗 體產生的抑制效應。
非專利文獻1中描述了當小鼠骨髄細胞在IL-10存在下進行體外培 養時，CD45RB * CDllc低細胞增殖，還描述了脾中存在CD45RB高CDllc 低細胞，可以在小鼠中體外和體內地由幼稚CD4 + T細胞分化和增殖調節 性T細胞。
非專利文獻2中描述了由小鼠骨髓細胞人工產生調節性樹突細胞的 方法。
非專利文獻3中描述了小鼠脾中的低密度B220陽性B細胞具有通 過用細菌進行刺激而產生IL-IO的能力。
非專利文獻4中描述了，對小鼠脾臟中的低密度B細胞施用a-GalCer不能增強NKT細胞產生IL-4的能力，並且它們抑制DC激 活的NKT細胞產生IFN-y和IL-4的能力。
然而，尚未開發出選擇性增強NKT細胞多種功能中免疫抑制功能 的方法以及在體內有效地誘導抗原特異性免疫抑制的方法。
專利文件1:國際公開WO005/120574冊
非專利文獻1: Wakkach等，Immunity 18: 605-617 (2003)
非專利文獻2: Sato等，Immunity 18: 367-379 (2003)
非專利文獻3: Burke等，The Journal of Immunology 173: 2362-2372 (2004)
非專利文獻 4 : Bezbradica 等，The Journal of Immunology 174:4696-4705 (2005)
發明內容
待通過本發明解決的問題
因此，本發明的目的為提供在NKT細胞的多種功能中選擇性提高 免疫抑制功能的方法和在體內有效誘導抗原特異性免疫抑制的方法，以 及通過應用該方法獲得的藥物。
解決問題的手段
作為廣泛研究的結果，本發明人已發現，因為包含CDld配體和天 然或重組變應原的藥物遞送栽體特異性抑制所述變應原引起的IgE產 生，因此可以利用這些藥物遞送栽體特異性治療該變應原導致的變應性 疾病。另外，由於這些發現，他們設想利用以自身抗原代替變應原的藥 物遞送載體類似地特異性治療自身抗原引起的自身免疫病，因此完成了 本發明。
即，本發明提供下列發明等。上述[1的藥劑，其中所述靶抗原為變應原，所述免疫疾病為該 變應原引起的變應性疾病。的藥劑，其中所述藥物遞送載體為脂質體。上述[1的藥劑，其中所述CDld配體為a-GalCer。的藥劑，其中將所述CDld配體嵌入脂質體膜中，並將 所述變應原封裝在脂質體腔內。
9上述1的藥劑，其中所述靶抗原是自身抗原。
10包含柳杉花粉抗原、Cryjl蛋白和Cryj2蛋白的融合蛋白。
11上述[10]的融合蛋白，其中Cryjl蛋白為Cryjl成熟蛋白，Cryj2 蛋白為Cryj2成熟蛋白。
12]上述10]的融合蛋白，其中Cryjl蛋白和Cryj2蛋白直接連接 或通過肽接頭連接。
13上述[10的融合蛋白，其中Cryjl蛋白位於其N端一側，Cryj2 成熟蛋白位於其C端一側。 至[9中任一項用於該免疫疾病的預防或治療劑。
15上述14的用於預防和治療免疫疾病的方法，其中所述受試者 為患有免疫疾病的人患者。
圖1顯示來自施用了 a-GalCer或a-GC ( a-GalCer )-脂質體的小鼠 脾臟的樹突細胞(DC )和B細胞中IFN-y、 IL-4和IL-10的產生。"ND，， 未檢測到。
圖2A顯示通過流式細胞儀分析低密度(LD )B細胞和高密度(HD ) B細胞。
圖2B顯示通過將低密度(LD ) B細胞或高密度(HD) B細胞與全 脾細胞共培養而在培養基中分泌的IL-10的量。
圖3顯示用aGC-脂質體脈衝處理的邊緣區B細胞實現的IL-10產 生。"ND":未檢測到。
圖4顯示小鼠血中特異性針對抗Cryjl的IgE濃度，所述小鼠以天 然類型Cryjl致敏，並施用aGC-天然類型Cryjl-脂質體、aGC-脂質體 或單獨的脂質體。
圖5顯示Cryjl/2基因的核苷酸序列(SEQ ID NO:8 )。在SEQ ID NO:8展示的核苷酸序列中，由第l至第57位核苷酸殘基(帶下劃線的) 組成的核苷酸序列為來自pET47b載體的His標記區核芬酸序列；由第 58至第1119位核苷酸殘基組成的核苷酸序列為編碼Cryjl成熟蛋白氨 基酸序列(該胺基酸序列SEQ ID NO:IO由登記為GenBank登錄號 BAA07020的胺基酸序列中第21至第374位胺基酸殘基組成)的核苦 酸序列；由第1120至2283位核苷酸殘基組成的核苷酸序列為編碼Cryj2 成熟蛋白胺基酸序列(該胺基酸序列SEQ ID NO:ll由登記為GenBank 登錄號P43212的胺基酸序列中第46至第433位胺基酸殘基組成)的核 苷酸序列。
圖6顯示Cryjl/2蛋白的胺基酸序列(SEQ ID NO:9 )。在SEQ ID NO:9展示的胺基酸序列中，由第1至第19位胺基酸殘基組成的胺基酸 序列(帶下劃線的)為來自pET47b載體的His標記區胺基酸序列；由 第20至第373位胺基酸殘基組成的胺基酸序列為Cryjl成熟蛋白(該 胺基酸序列SEQ ID NO:10由登記為GenBank登錄號BAA07020的氨 基酸序列中第21個至第374位胺基酸殘基組成)的胺基酸序列；由第374至第761位胺基酸殘基組成的胺基酸序列為Cryj2成熟蛋白(該氨 基酸序列SEQ ID NO:ll由登記為GenBank登錄號P43212的胺基酸序 列中第46至第433位胺基酸殘基組成)的胺基酸序列。
圖7顯示小鼠血清中特異性針對天然類型Cryjl的IgE抗體效價， 所述小鼠用天然類型Cryjl蛋白或recCryjl/2蛋白進行過免疫。*:等 於或低於檢測限度。
圖8顯示小鼠血清中特異性針對recCryjl/2的IgE抗體效價，所述 小鼠用天然類型Cryjl蛋白或recCryjl/2蛋白進行過免疫。
圖9顯示小鼠血清中特異性針對天然類型Cryjl的IgG抗體效價， 所述小鼠用天然類型Cryjl蛋白或recCryjl/2蛋白進行過免疫。
圖10顯示用天然類型Cryjl進行過免疫的小鼠的血清中，利用 recCryjl/2蛋白抑制特異性針對天然類型Cryjl的IgE抗體效價的提 高。
圖11顯示用天然類型Cryjl致敏並施用aGC-重組Cryjl/2融合蛋 白-脂質體、aGC-脂質體或鹽水的小鼠的血中抗Cryjl IgE的濃度。
優選實施方案詳述
在一個實施方案中，本發明提供用於克疫疾病的預防或治療劑，其 包含含有CDld配體和靶抗原並具有腔的藥物遞送載體(在下文中必要 時稱為藥物遞送栽體、具有腔的藥物遞送栽體、包含CDld配體的藥物 遞送栽體或者包含靶抗體的藥物遞送栽體)。
本發明使用的藥物遞送載體無特別限制，只要它能將藥物遞送至動 物並且具有腔即可，包括如脂質體和微球。
脂質體指通過封閉微團(通過聚集具有親水區和疏水區的兩性分子 而獲得的水溶性顆粒)而獲得的小泡結構。當本發明的藥物包含脂質體 作為藥物遞送載體時，可將CDld配體嵌入脂質體膜，並將變應原封裝 在脂質體腔內。使用脂質體作為藥物遞送載體時，可以通過國際公開WO2005/120574中所述方法產生這些脂質體。詳細地i兌，可以按照 PCT/JP 2005/10254所述的標準方法，通過將組成脂質體的脂質與包含 CDld配體的有機溶劑溶液混合、接著乾燥、然後在其中加入水並進行 超聲處理而獲得包含CDld配體如a-GalCer的脂質體。可以通過將組 成脂質體的脂質與包含CDld配體的有機溶劑溶液混合、接著乾燥、然 後在其中加入靶抗原水溶液並進行超聲處理而獲得封裝了耙抗原的脂 質體。
微球指使用可體內降解的聚合物作為基質的細小的球形物質。微球 包括如多孔型微球和膠嚢型微球。
CDld配體指表達CDld的抗原呈遞細胞(APC)上呈遞的並因而 能夠活化NKT細胞的物質。CDld配體包括如體內存在的a-GalCer及 其衍生物以及IGb3 (isoglobo-糖鞘脂)，優選a-GalCer。
靶抗原無特別限制，只要期望在體內抑制針對該抗原的免疫應答即 可。靶抗原可以是天然抗原、重組蛋白或化學合成的化合物，並包括如 變應原、自身抗原和移植異型抗原。下文將對應用於變應性疾病和自身 免疫病情況的本發明藥物進行詳細描述。
變應性疾病的應用l
變應原無特別限制，只要它是暴露、攝取或應用於體內時能夠引起 變態反應的因素即可。這樣的變應原包括如包含在以下物質中能引起變 態反應的因素花粉(如柳杉、日本扁柏(Japanese Cypress )、豚草屬、 稻、樺木屬、鴨茅和艾菊的)、食品(如牛奶、蕎麥麵條、蛋類、花生、 小麥、大豆、魚類和貝類、水果或其加工食品)、非人類生物或其來源 的材料(如蟎、真菌、動物或禽類的體毛、蜂毒)、化學品(如基於阿 司匹林的抗生素、磺胺類藥物、巴比妥酸鹽衍生物)、醫療裝備(如天 然橡膠手套)、生活用品(如金屬飾品)、其它物質或組合物(如膠乳)。
在包含含有變應原作為靶抗原的藥物遞送載體時，本發明的藥物可 用作特異性針對該變應原引起的變應性疾病的治療劑。本發明人已發 現，由於包含CDld配體和變應原的該藥物遞送載體特異性抑制由該變 應原引起的IgE產生，因此可以使用這樣的藥物遞送載體特異性治療由該變應原引起的變應性疾病。能使用本發明的藥物遞送載體進行特異性 治療的變應性疾病包括如特應性支氣管哞喘、特應性皮炎、變應性鼻炎 (如花粉症)、變應性結膜炎、食物過敏和藥物過敏，
變應原的優選實例可為柳杉花粉抗原(例如蛋白質如Cryjl和 Cryj2)。柳杉花粉抗原的重組融合蛋白質也優選作為變應原。這些融合 蛋白包括如Cryjl蛋白和Cryj2蛋白的融合蛋白(下文在需要時稱為"融 合蛋白")。
Cryjl成熟蛋白是通過至少部分地移除位於Cryjl基因表達的多肽 內N端側的信號區而獲得的多肽。例如，參考GenBank登錄號 BAA07020，由374個胺基酸殘基組成的多肽已登記為Cryjl蛋白。在 登記為BAA07020的由374個胺基酸殘基組成的多肽中，Cryjl成熟蛋 白對應於由第22至第374位胺基酸殘基組成的多肽。在登記為 BAA07020的由374個胺基酸殘基組成的多肽中，由第1至第21位氨 基酸殘基組成的區域為信號區。
Cryjl成熟蛋白可以是天然Cryjl成熟蛋白或者突變蛋白，所述突 變蛋白在天然Cryjl成熟蛋白中具有一個或多個(如1至10個、優選1 至7個、更優選1至5個、最優選l、 2或3個)修飾(例如，替換、 添加、插入、缺失)或與天然Cryjl成熟蛋白的胺基酸序列具有至少約 95%、優選約97%、更優選約98%、最優選約99%的胺基酸序列同一 性，並且保留天然Cryjl成熟蛋白中的表位。天然Cryjl成熟蛋白包括 登記為BAA07020的由374個胺基酸殘基組成的多肽+由第22至第374 位胺基酸殘基組成的多肽及其天然存在的同種型(參閱如GenBank登 錄號D34639、 D26544、 D26545、 AB081309和AB081310 )。所述突變 蛋白可以是經修飾而保留Cryjl成熟蛋白中一個、兩個或多個、優選所 有表位(例如T細胞表位和B細胞表位)的蛋白質。
Cryj2成熟蛋白是由分別移除位於成熟蛋白編碼區N端側的信號區 以及位於N端和C端的兩個pro區而獲得的多肽。例如，參考GenBank 登錄號P43212，由514個胺基酸殘基組成的多肽已登記為Cryj2蛋白。 在登記為GenBank登錄號P43212的由514個胺基酸殘基組成的多肽 中，Cryj2成熟蛋白對應於由第46至第433位胺基酸殘基組成的多肽。 在登記為P43212的由514個胺基酸殘基組成的多肽中，由第1至第22位胺基酸殘基組成的區域為信號區，由第23至第45位胺基酸殘基以及 由第434至第514位胺基酸殘基組成的區域為pro區。
Cryj2成熟蛋白可以是天然Cryj2成熟蛋白或者突變蛋白，該突變 蛋白在天然Cryj2成熟蛋白中具有一個或多個(如1至10個、優選1 至7個、更優選1至5個、最優選l、 2或3個)修飾(例如，替換、 添加、插入、缺失)或與天然Cryj2成熟蛋白的胺基酸序列具有至少約 95%、優選約97%、更優選約98%、最優選約99。/。的胺基酸序列同一 性，並且保留天然Cryj2成熟蛋白中的表位。天然Cryj2成熟蛋白包括 登記為P43212的由514個胺基酸殘基組成的多肽中由i 46至第433位 胺基酸殘基組成的多肽及其天然存在的同種型(參閱如GenBank登錄 號D37765、 D29772、 E10716、 AB081403、 AB081404和AB081405 )。 所述突變蛋白可以是經修飾而保留Cryj2成熟蛋白中一個、兩個或多個、 優選所有表位(例如T細胞表位和B細胞表位)的蛋白質。
可以以默認設置使用普遍用於本領域的程序(如，BLAST, FASTA) 測定胺基酸序列同一性(％ )。同一性(％ )也可以使用公知的任選算 法測定，例如Needleman等，(1970)( J. Mol. Biol" 48: 444-453 )，或Myers 和Miller (CABIOS， 1998， 4: 11-17)的算法。Needleman等的算法整合 在GCG軟體包中的GAP程序(可在www.gcg.com得到)中，同一性 (% )也可以使用如BLOSUM62矩陣或PAM250矩陣中的任一種以及 缺口權重16、 14、 12、 10、 8、 6或4和長度權重1、 2、 3、 4、 5或 6來測定。Myers和Miller算法整合在ALIGN程序中，該程序是GCG 序列比對軟體包的一部分。例如，當使用ALIGN程序比較胺基酸序列 時，可以使用PAM120權重殘基表，缺口長度罰分12,缺口罰分4。氨 基酸序列同一性可以通過上述任一方法來測定，在計算時可以使用顯示 最低值的方法。
在融合蛋白中，Cryjl成熟蛋白可以位於N端一側，Cryj2成熟蛋 白可以位於C端一側；或者Cryjl成熟蛋白可以位於C端一側，Cryj2 成熟蛋白可以位於N端一側。融合蛋白可以在Cryjl成熟蛋白和Cryj2 成熟蛋白之間含有或不含有肽接頭。本領域技術人員可以利用本領域的 技術常識適當地設計肽接頭。例如，肽接頭的長度可以為約30個或更 少、優選約25個或更少、更優選約20個或更少、更優選約15個或更少、最優選約10個或5個或更少的胺基酸殘基。
在融合蛋白中，可以向N端或C端加入或在兩者中同時加入其他肽 部分。這些肽部分無特別限制，只要將其加入融合蛋白時保留該融合蛋 白的特性即可。這些肽部分包括，例如，用於純化的標籤(如組氨酸(His ) 標籤、FLAG標籤、Myc標籤)。這些肽部分的長度可以為約30個或更 少、優選約25個或更少、更優選約20個或更少的胺基酸殘基。
融合蛋白可以是可溶性蛋白。當融合蛋白是在可溶性級分中獲得的 可溶性蛋白時，該融合蛋白具有可通過一般純化方法如柱層析進行高純 度純化和易於修飾的優點。即使融合蛋白在不溶性級分中獲得，它也可 以通過增溶處理而以可溶性蛋白而獲得，從而具有上述優點。
過敏反應是由信號傳入細胞內而引起的，所述信號由變應原與結合 在肥大細胞表面的IgE抗體結合而產生。融合蛋白不僅不誘導產生特異 性針對柳杉花粉抗原(如天然類型Cryjl)的IgE抗體，而且能利用柳 杉花粉抗原抑制產生特異性針對柳杉花粉抗原的IgE抗體。同時，融合 蛋白可以擁有Cryjl成熟蛋白和Cryj2成熟蛋白中的一個或多個(優選 所有)T細胞表位，因此，融合蛋白具有以下優勢融合蛋白可以是不 能導致過敏性反應的安全的變應原，有可能充分地誘導特異性針對柳杉 花粉抗原的免疫(如細胞免疫、體液免疫如IgG),能夠抑制由柳杉花 粉引起的過敏反應程度，並且可以覆蓋所有柳杉花粉症患者的T細胞抗 原表位，因為該融合蛋白不能與特異性針對天然類型Cryjl或Cryj2的 IgE抗體結合。(銨鹽)(PEG-PE; Avanti Polar Lipids )溶於250 氯仿/甲醇(1:1)溶劑中。另將0.16 mg a-半乳糖 神經酖胺(由RIKEN Research Center for Allergy and immunology制 得)溶於250 nL氯仿/甲醇(1:1)溶劑中。隨後，將兩者混合併在蒸發 器中乾燥，在乾燥器中真空乾燥過夜。然後，加入200 nL含有濃度為 0.4 mg/mL的recCryjl/2蛋白的水溶液(實施例7 )。將混合物用超聲粉 碎機處理10分鐘，並通過0.22 nm孔徑的膜以除菌。隨後，在裝入了 100 nm孔徑聚碳酸酯膜的LiposoFast-Basic擠壓機(Avestin Inc.)中通 過25次來分選顆粒。通過以下步驟除去未封裝進脂質體的recCryjl/2 蛋白4吏用Amicon Ultra-4離心濾器(PL-100 ) (Millipore)濃縮封裝 了 recCryjl/2的脂質體，用純淨水洗滌並用純淨水最終調整為800 水溶液。利用SDS電泳分析含有封裝了 recCryjl/2的脂質體(aGC-recCryjl/2脂質體)的水溶液。結果鑑定出recCryjl/2蛋白的 濃度為25嗎/mL。假設所有的a-GalCer均已摻入脂質體膜中，則 Lipo-aGC + Cryjl溶液中a-GalCer的終濃度為200 pg/mL。實施例10:通過施用含有a-半乳糖神經醯胺和recCryjl/2 (重組融合蛋 白)的脂質體抑制體內三級IgE抗體的產生對用天然類型Cryjl ( 0.5 pg/小鼠，Seikagaku Kogyo Co" Ltd.)和 氫氧化鋁凝膠(2 mg/小鼠)致敏兩次、其後用天然類型Cryjl (1 pg/ 小鼠，Seikagaku Kogyo Co" Ltd.)加強免疫的BDF1小鼠，在致敏後 第105、 112和119天腹膜內施用aGC-recCryjl/2-脂質體(aGC: 2 ng， recCryjl/2: 0.5 [ig/小鼠)、aGC-脂質體(aGC: 2嗎/小鼠)或單獨的脂 質體三次。在第126天時，用天然類型Cryjl (lpg/小鼠)進行第二次 加強免疫。在致敏前以及致敏後第14、 28、 56、 98、 126、 140和160 天時收集血樣。通過ELISA測量血清中抗Cryjl IgE抗體的水平。結果， 與僅施用脂質體的陰性對照相比，在施用aGC-脂質體或 aGC-recCryjl/2-脂質體的組中，施用後血液中IgE抗體效價明顯降低，並且在第二次加強免疫後三級IgE抗體產生的提高也被抑制(施用 aGC-recCryjl/2-脂質體的組中的抑制效果具有統計學顯著性)(圖11 )。 根據以上的結果提出，可以預期aGC-脂質體在過敏發生後對於降低高 IgE抗體效價具有治療效果，並且該效果可以通過在脂質體中封裝無變 應原特性的抗原而進一步增強。工業適用性本發明的藥劑可用於特異性治療由靶抗原引起的疾病，所述藥劑含 有包括CDld配體和靶抗原(例如變應原、自身抗原)並具有腔的藥物 遞送載體。本發明的藥劑可包含柳杉花粉抗原的融合蛋白。可以包含在本發明 藥劑中的融合蛋白具有很好的效果，表現為所述融合蛋白能成為不會 引起過敏反應的安全變應原，能抑制由柳杉花粉引起的過敏反應程度， 能充分誘導特異性針對柳杉花粉抗原的免疫力以及覆蓋所有柳杉花粉 症患者中的T細胞表位。因此，本發明的藥劑可用於新型脫敏治療和/ 或作為藥物(如治療性疫苗)。本申請基於2006年1月13日提交申請的JP-2006-005658,其內容通 過參考併入本文中。
權利要求
1.用於由靶抗原引起的免疫疾病的預防或治療劑，其含有包括CD1d配體和目標抗原並具有腔的藥物遞送載體。
2. 根據權利要求l的藥劑，其中所述目標抗原為變應原，並且所 述免疫疾病為該變應原引起的變應性疾病。
3. 根據權利要求l的藥劑，其中所述藥物遞送載體為脂質體。
4. 根據權利要求l的藥劑，其中所述CDld配體為a-GalCer。
5. 根據權利要求2的藥劑，其中所述變應原為柳杉花粉。
6. 根據權利要求2的藥劑，其中所述變應原為Cryjl成熟蛋白和 Cryj2成熟蛋白的融合蛋白。
7. 根據權利要求5的藥劑，其中在融合蛋白中，所述Cryjl成熟 蛋白位於Cryj2成熟蛋白的N端一側。
8. 根據權利要求2的藥劑，其中所述CDld配體嵌入脂質體膜中， 所迷變應原封裝在脂質體腔內。
9. 根據權利要求l的藥劑，其中所述目標抗原為自身抗原。
10. 融合蛋白，其包含柳杉花粉抗原、Cryjl蛋白和Cryj2蛋白。
11. 根據權利要求10的融合蛋白，其中所述Cryjl蛋白為Cryjl 成熟蛋白，所述Cryj2蛋白為Cryj2成熟蛋白。
12. 根據權利要求10的融合蛋白，其中所述Cryjl蛋白和Cryj2 蛋白直接連接或通過肽接頭連接。
13. 根據權利要求10的融合蛋白，其中所述Cryjl蛋白位於其N 端側，所述Cryj2成熟蛋白位於其C端側。
14. 用於預防或治療免疫疾病的方法，所述方法包含向需要這種治 療的受試者施用治療有效量的根據權利要求1至9中任一項的免疫 疾病預防或治療劑的步驟。
15. 根據權利要求14的用於預防或治療免疫疾病的方法，其中所 述受試者為患所述免疫疾病的人患者。
全文摘要
本發明提供在NKT細胞的多種功能中選擇性地增強免疫抑制功能的方法、有效地在體內誘導抗原特異性免疫抑制的方法以及應用所述方法獲得的藥物。更具體地，本發明提供含有CD1d配體和靶抗原(如變應原、自身抗原)的藥物(例如，免疫疾病如變應性疾病和自身免疫病的預防或治療劑)。優選地，所述藥物含有藥物遞送載體，所述載體包含CD1d配體和靶抗原，並具有腔。
文檔編號A61K45/06GK101309705SQ200780000109
公開日2008年11月19日 申請日期2007年1月12日 優先權日2006年1月13日
發明者松井有紀子, 石井保之, 野澤理咲 申請人:獨立行政法人理化學研究所