一種從北五味子中提取三萜類物質的方法
2023-04-30 18:21:26
專利名稱：一種從北五味子中提取三萜類物質的方法
技術領域：
本發明涉及一種從北五味子中提取三萜類物質的方法，具體的是涉及一種利用組
織破碎、纖維素酶和超聲萃取前處理物料，並利用超臨界流體萃取技術結合高速逆流色譜 技術分離提取出北五味子三萜類物質，為北五味子三萜類物質的分離純化提供一種有效的 方法。
背景技術：
五味子屬隸屬於五味子科，約27種，在我國除新疆、青海、海南外各省區都有分 布，其中約19種可供藥用，藥用價值最大的是五味子(習稱"北五味子")，其次是華中五味 子(習稱"南五味子")。其中北五味子藥用價值極高，具有抗病毒、抗腫瘤、提高人體免疫 力等功效。它包含多種功效成分，其中主要是木脂素、多糖和三萜類化合物。而目前國內外 對五味子研究多集中在南五味子，功能性成分研究業集中在木脂素類和多糖類物質上，而 關於北五味子三萜類物質提取報導較少，多數報導集中在結構鑑定和功能性方面。
目前北五味子三萜提取方法，多集中在乙醇或者丙酮溶液回流提取法，此法操作 過程繁雜，物料受熱溫度高，三萜類物質損失嚴重，提取率較低。現在，三萜類物質的分離與 純化通常採用柱色譜法，樣品在固定相的吸附導致回收率很低。
發明內容
本發明的目的是利用組織破碎、纖維素酶和超聲萃取前處理物料，並利用超臨界 流體萃取技術結合高速逆流色譜技術分離提取出北五味子三萜類物質，提取率比常規溶劑 提取法提高10-15%，而且操作過程簡單，能耗低，無汙染，回收率高，避免萃取物在高溫下 熱裂解，保護生理活性物質的活性。
本發明提供的技術方案是 以北五味子藤莖為主要原料，先將原料切成lcm-2cm長度後放入高速組織勻漿搗 碎機中，在12000rpm條件下保持15min後，按照液料比為13mL/lg的比例加入濃度80 %的 氯仿溶液後，再加入按照北五味子藤莖原料重量比為0. 5 %的纖維素酶，在超聲功率600W、 4(TC條件下，酶解20min後，再在75t:恆溫乾燥18h，粉碎過60目篩為粉末備用；
取過篩後粉末200-300g加入到超臨界萃取釜中，設定萃取溫度46t:、分離溫度 55t:開始萃取加壓，調節C02流量恆定在18L/h，萃取釜壓力恆定在18MPa後，啟動夾帶劑 泵，按照液料比為0. 8mL/lg比例、濃度為85%乙酸乙酯和液料比為0. 2mL/lg、濃度為80% 乙醇組成的複合夾帶劑混勻後，打入夾帶劑釜，萃取135min後，收集北五味子萃取液，減壓 回收溶劑，真空乾燥為乾燥粉末備用； 稱取真空乾燥後粉末，加入按照液料比為10mL/lg、濃度為80%正丙醇，液料比為 8mL/lg、濃度為75%乙酸乙酯，液料比為6mL/lg、濃度為90%氯仿，液料比為10mL/lg純淨 水組成的複合溶劑中，在分液漏鬥中平衡24h後，使用前分離成上相和下相，分別脫氣後備 用；
取上下相配製成樣品溶液，注入高速逆流色譜，轉速為850r/min，流量為3. 5mL/ min，檢測波長為254nm，時間為135_180min，收集流出液，進行濃縮、乾燥，製得北五味子三 萜粉末。 本發明利用組織破碎、纖維素酶和超聲萃取前處理物料，並利用超臨界流體萃取
技術結合高速逆流色譜技術分離提取出北五味子三萜類物質，其優點是1、提取率較常規 溶劑提取法明顯提高；2、操作過程簡單，能耗低，對生產環境無汙染；3、回收率高，避免了 萃取物在高溫下熱裂解，保護生理活性物質的活性；4工藝技術簡單，成本低廉，易於工業 化生產。
具體實施方式
實施例l 北五味子藤莖1000g，先將原料切成lcm長度後放入高速組織勻漿搗碎機在 12000rpm條件下保持15min後，按照液料比[溶劑體積(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加入 濃度80 %氯仿溶液13000mL後，再加入原料重量比為0. 5 %纖維素酶5g (酶活力為40000U/ g，食品級)，在超聲功率600W，4(TC條件下，酶解20min後，再在75。C恆溫乾燥18h，粉碎過 60目篩為粉末備用。 取過篩後粉末200g加入到超臨界萃取釜中，設定萃取溫度46t:、分離器溫度55t: 開始萃取加壓，調節(A流量恆定在18L/h，萃取釜壓力恆定在18MPa後，啟動夾帶劑泵， 按照液料比[溶劑體積(mL)/過篩後粉末重量(g)]為0.8mL : lg、濃度為85%乙酸乙酯 160mL和液料比為0. 2mL : lg、濃度為80%乙醇40mL組成的複合夾帶劑混勻後，打入夾帶 劑釜，萃取135min後，收集北五味子萃取液，減壓回收溶劑，真空乾燥為乾燥粉末備用。
稱取真空乾燥後粉末10g，加入按照液料比[溶劑體積(mL)/真空乾燥後粉末重 量(g)]為10mL : lg、濃度為80X正丙醇100mL，液料比為8mL : lg濃度為75X乙酸乙酯 80mL，液料比為6mL : lg、濃度為90%氯仿60mL，液料比為10mL : lg純淨水100mL組成的 複合溶劑中，在分液漏鬥中平衡24h後，使用前分離成上相(固定相)和下相(流動相)， 分別脫氣後備用，取上下相配製成樣品溶液，注入高速逆流色譜，選擇轉速850r/min、流量 3. 5mL/min、檢測波長為254nm、收集時間135_180min，對流出液進行濃縮、乾燥，製得北五
味子三萜粉末。
實施例2 北五味子藤莖1000g，先將原料切成1. 5cm長度後放入高速組織勻漿搗碎機在 12000rpm條件下保持15min後，按照液料比[溶劑體積(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入濃度80 %氯仿溶液13000mL後，再加入北五味子藤莖原料重量比為0. 5 %纖維素酶5g，在 超聲功率600W、4(TC條件下，酶解20min後，再在75。C恆溫乾燥18h，粉碎過60目篩為粉末 備用。 取過篩後粉末250g加入到超臨界萃取釜中，設定萃取溫度46°C 、分離器溫度55°C 開始萃取加壓，調節(A流量恆定在18L/h，萃取釜壓力恆定在18MPa後，啟動夾帶劑泵， 按照液料比[溶劑體積(mL)/過篩後粉末重量(g)]為0.8mL : lg、濃度為85%乙酸乙酯 200mL和液料比為0. 2mL : lg、濃度為80%乙醇50mL組成的複合夾帶劑混勻後，打入夾帶 劑釜，萃取135min後，收集北五味子萃取液，減壓回收溶劑，真空乾燥為乾燥粉末備用。
稱取真空乾燥後粉末10g，加入按照液料比[溶劑體積(mL)/真空乾燥後粉末重 量(g)]為10mL : lg、濃度為80X正丙醇100mL，液料比為8mL : lg、濃度為75%乙酸乙酯 80mL，液料比為6mL : lg、濃度為90%氯仿60mL，液料比為10mL : lg純淨水(市場上提供 的純淨水)100mL組成的複合溶劑中，在分液漏鬥中平衡24h後，使用前分離成上相(固定 相)和下相(流動相)，分別脫氣後備用，取上下相配製成樣品溶液，注入高速逆流色譜，選 擇轉速為850r/min、流量為3. 5mL/min、檢測波長為254nm，收集時間135-180min，對流出液
進行濃縮、乾燥，製得北五味子三萜粉末。
實施例3 北五味子藤莖1000g，先將原料切成2cm長度後放入高速組織勻漿搗碎機在 12000rpm條件下保持15min後，按照液料比[溶劑體積(mL)/原料重量(g)]13mL : lg加 入濃度80 %氯仿溶液13000mL後，再加入北五味子藤莖原料重量比為0. 5 %纖維素酶5g，在 超聲功率600W、4(TC條件下，酶解20min後，再在75。C恆溫乾燥18h，粉碎過60目篩為粉末 備用。 取過篩後粉末300g加入到超臨界萃取釜中，設定萃取溫度46°C 、分離溫度55°C開 始萃取加壓，調節C(V流量恆定在18L/h，萃取釜壓力恆定在18MPa後，啟動夾帶劑泵，按照 液料比[溶劑體積(mL)/過篩後粉末重量(g)]為0.8mL : lg、濃度為85%乙酸乙酯240mL 和液料比為0. 2mL : lg、濃度為80%乙醇60mL組成的複合夾帶劑混勻後，打入夾帶劑釜， 萃取135min後，收集北五味子萃取液，減壓回收溶劑，真空乾燥為乾燥粉末備用。
稱取真空乾燥後粉末10g，加入按照液料比[溶劑體積(mL)/真空乾燥後粉末重 量(g)]為10mL : lg、濃度為80%正丙醇100mL，液料比為8mL : lg、濃度為75X乙酸乙 酯80mL，液料比為6mL : lg、濃度為90%氯仿60mL，液料比為10mL : lg純淨水100mL組 成的複合溶劑中，在分液漏鬥中平衡24h後，使用前分離成上相(固定相)和下相(流動 相)，分別脫氣後備用，取上下相配製成樣品溶液，注入高速逆流色譜，選擇轉速850r/min， 流量3. 5mL/min，檢測波長為254nm，收集時間135-180min，對流出液進行濃縮、乾燥，製得 北五味子三萜粉末。
權利要求
一種從北五味子中提取三萜類物質的方法，其特徵是以北五味子藤莖為主要原料，先將原料切成1cm-2cm長度後放入高速組織勻漿搗碎機中，在12000rpm條件下保持15min後，按照液料比為13mL/1g的比例加入濃度80％的氯仿溶液後，再加入按照北五味子藤莖原料重量比為0.5％的纖維素酶，在超聲功率600W、40℃條件下，酶解20min後，再在75℃恆溫乾燥18h，粉碎過60目篩為粉末備用；取過篩後粉末200-300g加入到超臨界萃取釜中，設定萃取溫度46℃、分離溫度55℃開始萃取加壓，調節CO2流量恆定在18L/h，萃取釜壓力恆定在18MPa後，啟動夾帶劑泵，按照液料比為0.8mL/1g比例、濃度為85％乙酸乙酯和液料比為0.2mL/1g、濃度為80％乙醇組成的複合夾帶劑混勻後，打入夾帶劑釜，萃取135min後，收集北五味子萃取液，減壓回收溶劑，真空乾燥為乾燥粉末備用；稱取真空乾燥後粉末，加入按照液料比為10mL/1g、濃度為80％正丙醇，液料比為8mL/1g、濃度為75％乙酸乙酯，液料比為6mL/1g、濃度為90％氯仿，液料比為10mL/1g純淨水組成的複合溶劑中，在分液漏鬥中平衡24h後，使用前分離成上相和下相，分別脫氣後備用；取上下相配製成樣品溶液，注入高速逆流色譜，轉速為850r/min，流量為3.5mL/min，檢測波長為254nm，時間為135-180min，收集流出液，進行濃縮、乾燥，製得北五味子三萜粉末。
全文摘要
本發明涉及一種從北五味子中提取三萜類物質的方法。該法以北五味子藤莖為主要原料，先通過組織破碎、纖維素酶和超聲萃取的方法將要萃取的物質從原料中分離出來，然後利用超臨界萃取技術，通過選用不同的複合夾帶劑和操作工藝參數，結合高速逆流色譜技術分離提取出北五味子三萜類物質，為北五味子三萜類物質的分離純化提供一種有效的方法。該方法提取出的北五味子三萜類物質，提取率高，而且操作過程簡單，能耗低，無汙染，回收率高，避免了萃取物在高溫下熱裂解，保護生理活性物質的活性等優點。
文檔編號A61K135/00GK101708215SQ200910220188
公開日2010年5月19日 申請日期2009年11月27日 優先權日2009年11月27日
發明者孟憲軍, 張琦, 李斌 申請人:瀋陽農業大學