中藥組合物及由其製備中藥的方法和用途的製作方法

2023-05-18 22:50:01

專利名稱：中藥組合物及由其製備中藥的方法和用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物，及由該組合物製備中藥的方法和該組合物在製備治療心腦血管疾病藥物方面的用途，屬於中藥領域。
背景技術：
麝香在國內外均被視為珍貴的天然香料，同時還是名貴中藥，麝香方在醫藥中有著極其重要的作用，我國許多著名的中成藥都有麝香配伍。
麝鼠是齧齒目倉鼠科的草食性珍貴的毛皮獸，是一種較珍貴的經濟動物，其雄麝鼠繁殖季節由麝鼠香腺囊中分泌的乳白色物質；其性狀為乳白色狀物，易溶於有機溶劑，不溶於水中；氣味重和清香、濃鬱、留香持久。
美國Van Dorp等人(1973)從麝鼠香腺囊中分泌的乳白色物質中檢測出大環酮酯和脂肪酸類成份。麝鼠香的抗炎，耐缺氧減慢心率、降低血壓及降低心肌耗氧等負性肌力作用等天然麝香相似，同時還具有促進動力生長等多種活性。化學分析證明，麝鼠香含有微量的與天然麝香相同的麝香酮、降麝香酮、環十五、十七烷酮等主要成份，含脂酸22種、酯類19種、無機元素14種以及甾族化合物30種，理化反應與天然麝香接近，具有良好的生物活性，且易於儲存，毒性小，無刺激作用，作為麝香的替代產品，擁有麝香的藥用價值。
至今未見有與麝鼠香配伍的中成藥。

發明內容
本發明的目的在於提供一種中藥組合物，該組合物可用於製備治療心腦血管疾病藥物。
本發明的另一目的在於提供一種由上述藥物組合物製備藥物製劑的方法。
本發明的再一目的在於提供上述藥物組合物在製備治療心腦血管疾病藥物方面的用途。
上述藥物組合物包括如下重量份的組分三七 0.5-200葛根 0.5-240麝鼠香0.00001-10
所述的重量份可以是克、千克、斤、兩、錢等常用藥物重量單位。
上述三七優選50-200重量份。
上述葛根優選50-240重量份。
上述麝鼠香優選0.01-5重量份。
本發明藥物組合物經提取、純化後，可製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、合劑；所述劑型優選滴丸。
上述各種劑型的製備方法包括三七提取物的製備、葛根提取物的製備、最終製劑的製備三個步驟，其中，三七提取物的製備過程為將三七粉碎，過20～100目篩，加2-10倍重量的30-90％乙醇，加熱回流，提取1-5次，每次1-3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇後，加水至1-1.5倍三七藥材量，靜置12-30小時，濾過，濾液以1/3-1/2藥材量的大孔樹脂(乾重)純化，得提取物；葛根提取物的製備過程為葛根切製成飲片，加5-10倍量50-90％乙醇，加熱回流提取1-5次，每次0.5-3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇後，加水至1-1.5倍葛根藥材量，靜止12-30小時，濾過，濾液以1/3-1/2藥材量的大孔樹脂(乾重)純化，得提取物；最終製劑的製備是將三七、葛根提取物與麝鼠香混合均勻，按照藥劑學上通用方法，製備最終劑型的產品。
最終劑型優選滴丸劑，則上述步驟應將三七、葛根提取物與麝鼠香混合均勻，加入基質，加熱融化，混勻，在25～100℃保溫條件下滴入到溫度在0-30℃的冷卻劑等溶劑中滴製成丸。
上述基質用量為三七、葛根提取物與麝鼠香混合物的0.1～8倍重量。
所述的基質可以是聚乙二醇、硬脂酸鈉、甘油明膠、硬脂酸、單硬脂酸甘油酸或蟲臘；優選使用聚乙二醇。這些基質材料可以混配使用。
上述聚乙二醇可以是聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000、聚乙二醇1500或者是其中兩者的組合；優選使用聚乙二醇4000、聚乙二醇6000或者二者組合，組合使用時，聚乙二醇4000與聚乙二醇6000的重量比為3∶1。
所述的冷卻劑可以是二甲基矽油、液體石蠟、植物油、水、乙醇，冷卻劑材料可以混配使用；優選使用二甲基矽油。
上述應用大孔樹脂純化三七提取液的方法為以1/3-1/2倍藥材量的大孔樹脂(乾重)為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶2-1∶10，提取液上柱濃度為0.5-1g/ml藥材，上柱流速1-3倍柱體積/小時，吸附後，先用3-8倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以3-8倍柱體積的50-90％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
上述應用大孔樹脂純化葛根提取液的方法為以1/3-1/2倍藥材量的大孔樹脂(乾重)為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶2-1∶10，提取液上柱濃度為0.5-1g/ml藥材，上柱流速1-3倍體積/小時，吸附後，先用3-6倍體積蒸餾水洗脫雜質，再以3-6倍體積的30-95％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
所述的大孔樹脂可以是D101、AB-8或ZTC型大孔樹脂。


圖1為本發明滴丸劑製備流程示意圖。
具體實施例方式
實施例1三七200g，粉碎，過20目篩，加400g的90％乙醇回流提取3次，每次2小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至150ml，靜止12小時，濾過，濾液以120g乾重的D101大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶3，提取液上柱濃度為0.6g/ml藥材，上柱流速1倍柱體積/小時，吸附後，先用4倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以4倍體積的50％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
葛根飲片160g加900g的90％乙醇回流提取4次，每次1小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至200ml，靜止15小時，濾過，濾液以53g乾重的ZTC型大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶2，提取液上柱濃度為0.5g/ml藥材，上柱流速3倍柱體積/小時，吸附後，先用3倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以3倍柱體積的95％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
將上述二提取物與1g麝鼠香混合均勻，加入混合物8倍重量的聚乙二醇4000和聚乙二醇6000的混合物，其中聚乙二醇4000用量為聚乙二醇6000的3倍，加熱融化，混勻，在100℃下滴入20℃的二甲基矽油中滴製成丸，即得。
實施例2三七50g，粉碎，過40目篩，加150g的70％乙醇回流提取4次，每次1小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至300ml，靜止15小時，濾過，濾液以93g乾重的AB-8大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶8，提取液上柱濃度為0.8g/ml藥材，上柱流速3倍柱體積/小時，吸附後，先用7倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以7倍體積的60％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
葛根飲片240g加1440g的70％乙醇回流提取5次，每次0.5小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至300ml，靜止12小時，濾過，濾液以120g乾重的D101型大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶3，提取液上柱濃度為0.6g/ml藥材，上柱流速3倍柱體積/小時，吸附後，先用4倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以4倍柱體積的80％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
將上述二提取物與0.01g麝鼠香混合均勻，加入混合物5倍重量的聚乙二醇6000，加熱融化，混勻，在80℃下滴入到溫度在30℃液體石蠟中滴製成丸，即得。
實施例3三七100g，粉碎，過60目篩，加500g的50％乙醇回流提取5次，每次1小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至200ml，靜止18小時，濾過，濾液以78g乾重的D101大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶10，提取液上柱濃度為1g/ml藥材，上柱流速3倍柱體積/小時，吸附後，先用8倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以8倍體積的70％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
葛根飲片50g加500g的50％乙醇回流提取2次，每次2小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至150ml，靜止20小時，濾過，濾液以17g乾重的AB-8型大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶5，提取液上柱濃度為0.7g/ml藥材，上柱流速2倍柱體積/小時，吸附後，先用4倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以4倍柱體積的70％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
將上述二提取物與5g麝鼠香混合均勻，加入混合物0.1倍量聚乙二醇4000，加熱融化，混勻，在50℃下滴入到溫度在15℃植物油中滴製成丸，即得。
實施例4三七150g，粉碎，過80目篩，加1.2Kg的40％乙醇回流提取1次，每次3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至100ml，靜止25小時，濾過，濾液以116g乾重的AB-8大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶5，提取液上柱濃度為0.7g/ml藥材，上柱流速2倍柱體積/小時，吸附後，先用5倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以5倍體積的80％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
葛根飲片80g加640g的60％乙醇回流提取3次，每次1.5小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至100ml，靜止25小時，濾過，濾液以27g乾重的D101型大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶7，提取液上柱濃度為0.8g/ml藥材，上柱流速1倍柱體積/小時，吸附後，先用5倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以5倍柱體積的50％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
將上述二提取物與2g麝鼠香混合均勻，加入混合物0.5倍重量聚乙二醇600，加熱融化，混勻，在25℃下滴入0℃水中滴製成丸，即得。
實施例5三七80g，粉碎，過100目篩，加800g的30％乙醇回流提取2次，每次2小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至50ml，靜止30小時，濾過，濾液以140g乾重ZTC大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶2，提取液上柱濃度為0.5g/ml藥材，上柱流速1倍柱體積/小時，吸附後，先用3倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以3倍體積的90％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物。
葛根飲片200g加1400g的80％乙醇回流提取1次，每次3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇，加水至50ml，靜止30小時，濾過，濾液以100g乾重的AB-8型大孔樹脂為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶10，提取液上柱濃度為1.0g/ml藥材，上柱流速1倍柱體積/小時，吸附後，先用6倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以6倍柱體積的30％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物。
將上述二提取物與0.02g麝鼠香混合均勻，加入混合物2倍重量聚乙二醇1000和聚乙二醇400，其中聚乙二醇1000的用量是聚乙二醇400的2倍，加熱融化，混勻，在30℃下滴入5℃乙醇中滴製成丸，即得。
實施例6按照實施例1的製法，提取三七、葛根有效成分，與麝鼠香混合後，加蒸餾水至1000mL，製成注射劑。
實驗例1本實驗例說明了本發明組合物對心腦血管疾病的療效。
I.一般情況樣本56例，選擇符合中華醫學會制訂的高血壓、冠心病、高血脂、腦動脈硬化等病人診斷標準；收集已測血液流變學指標異常的住院病人，再進行臨床辨證，屬於中醫氣虛血癖型者，臨床表現為心悸怔忡，胸悶或痛，健忘失眠，氣短懶言，神疲乏力，頭暈目眩，肢體麻木，舌暗或痕斑，脈細或澀；其中男32例，女24例；高血壓病I1例，高脂血症6例，冠心病21例，腦動脈硬化症18例。年齡最小48歲，最大75歲，51-65歲47例，佔83.90％。
II.血液流變學指標測定採用PC-730血液細胞測定儀、血液粘度儀、DXC-300核孔濾膜紅細胞變形能力測定儀。
III.治療方法口服實施例1滴丸，1日3次，每次2丸，連服3月。每隔1月測血液流變學指標1次；治療期間停服其他對血液流變指標有影響的中西藥物。
IV.治療前後血液流變學指標的改變本組患者經服用實施例1產品1月後，血液流變指標均有明顯的改變，但繼續服藥2個月、3個月後所測數值基本維持在同一水平；所測指標中，經統計學處理，纖維蛋白元、全血粘度、紅細胞剛性指數治療前後有非常顯著的差異，P＜0.01；血漿粘度和紅細胞聚集指數治療前後也有顯著差異，P＜0.05；說明本發明產品能改善缺血性心腦血管病氣虛血痕型的血液流變學指標。詳見下表

V.主要臨床症狀改善情況根據等級資料的轉換數，對治療前後的臨床症狀進行療效分析，將治療後症狀恢復到輕度以下的病例數計算有效率，發現對缺血性心腦血管病常見的主要臨床症狀有較好的療效，包括胸悶或痛、氣短懶言、肢體麻木、健忘失眠、神疲乏力等。詳見下表

本實驗例表明，本發明組合物對缺血性心腦血管病血液流變學指標確有明顯的改善作用。尤其是能降低全血粘度和血漿粘度，提高紅細胞變形能力，改變yI_細胞和血小板的聚集性，通過實際觀察，隨著血液流變學指標的改善，病人的症狀明顯減輕。
本實驗例病人經治療後，心悸怔忡、胸悶胸痛、健忘失眠、氣短懶言、神疲乏力、頭暈目眩、肢體麻木等主要症狀均有較明顯的好轉，其有效率均在80％以上，這些症狀均是缺血性心腦血管病的表現。
實驗例2本實驗例通過對犬血液動力學的影響，說明本發明組合物有利於心臟在心肌缺血狀態下的心功能調整。
1、實驗方法健康成年犬30隻，雌雄兼用，體重12～16kg；隨機分為5組。即(1)空白對照組；(2)實施例1滴丸高劑量組；(3)實施例1滴丸中劑量組；(4)實施例1滴丸低劑量組；(5)陽性對照組(丹參滴丸)。
試驗時犬經靜脈注射戊巴比妥鈉(30mg·kg-1體重)麻醉，右側臥位固定於手術臺上，剪去頸部、胸部和後肢內側的毛，分離股靜脈插入靜脈插管，以備輸液；頸部正中切口，分離氣管並做氣管插管，以備連通人工呼吸機；分離頸總動脈，並插管連通八道生理記錄儀血壓測試系統；在左側第4～5肋間橫向切開皮膚，分離肌肉，切開胸腔，用開胸器撐開胸腔切口，暴露心臟，同時開動人工呼吸機。縱向切開心包膜，縫製心包籃，使心臟固定於適宜位置，然後分離升主動脈根部和左冠狀動脈前降支上部，分別放置適宜內徑的電子流量計探頭，分別測量心輸出量(主動脈流量)(CO)和冠狀動脈血流量(CF)。將動脈插管內和心室插管內分別充滿肝素生理鹽水。動脈插管插入頸總動脈，測量動脈血壓(BP)；左心室插管經左心室心尖部插入左心室心腔內測量左心室內壓(LDP)。將針狀電極插入犬四肢皮下。記錄第II導聯心電圖及測量心率(HR)。再將左室內壓電信號輸入電子微分器測量左室內壓變化速率(dp/dt)。上述各項指標同步記錄於八道生理記錄儀上，上腹部正中切口，分離十二指腸並做十二指腸插管，以備給藥。
手術完畢後，待動物基本穩定後，首先記錄一段給藥前上述指標的正常曲線，然後經十二指腸插管注入受試藥品，劑量分別為實施例1滴丸高劑量組300mg·kg-1體重；實施例1滴丸中劑量組200mg·kg-1體重；實施例1滴丸低劑量組100mg·kg-1體重；陽性對照組(丹參滴丸)300mg·kg-1體重；對照組給予同劑量蒸餾水。
分別記錄給藥後30、60、120、180min上述各項觀測指標變化，並對其變化的百分率進行統計學處理，組間差異的顯著性檢驗用t-檢驗。
2、實驗結果(1)實施例1滴丸對正常麻醉犬血壓、心率的影響連續觀察表明，各組動物的血壓均呈下降趨勢，其中實施例1滴丸300mg·kg-1體重給藥組動物在給藥後30-180min時段內血壓下降程度明顯低於給藥前，實施例1滴丸200mg·kg-1體重給藥組動物血壓在給藥後60-120min後下降幅度大於同期給藥前。表明實施例1滴丸300mg·kg-1體重給藥組和200mg·kg-1體重給藥組對麻醉犬血壓下降有一定的促進作用。其它劑量組作用不明顯。詳見表9。
表9 實施例1滴丸對麻醉犬動脈血壓的影響(kPa x±s n＝6)


與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。與給藥前比較##P＜0.01，#P＜0.05。
給藥後連續觀察180min，各組動物給藥前後心率未見顯著性變化，結果表明實施例1滴丸對正常犬心率無明顯的影響。結果詳見表10。
表10 實施例1滴丸對麻醉犬心率的影響(x±s；次/分；n＝6)

(2)實施例1滴丸對麻醉犬左室內壓(LDP)及左室內壓最大上升速率(+dp/dt)的影響給藥後連續觀察180min，實施例1滴丸各組動物左室內壓與給藥前比較均有不同程度的下降趨勢，給藥組與對照組比較統計學檢查未見顯著性差異。提示實施例1滴丸對麻醉犬左室內壓變化影響不明顯。結果見表11。
表11 實施例1滴丸對犬左室內壓(LDP)的影響(kPa；x±s；n＝6)

與給藥前比較**P＜0.01，*P＜0.05。
左室內壓最大上升速率(+dp/dt)觀察結果表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重給藥組在給藥後30min時左室內壓最大上升速率與對照組比較有顯著性差異。結果見表12。
表12 滴丸對犬左室內壓最大上升速率的影響(kPa/cm/s；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05(3)實施例1滴丸對麻醉犬主動脈流量的影響結果發現，實驗各組動物在觀察期間，主動脈流量均呈下降趨勢。各組間比較表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和丹參滴丸300mg·kg-1體重給藥組，藥後30分鐘和120分鐘區間內，主動脈流量下降程度明顯低於同期對照組，實施例1滴丸200mg·kg-1體重給藥組在藥後60-120min區間內主動脈流量下降程度明顯低於同期對照組，表明實施例1滴丸對麻醉犬主動脈流量下降有拮抗作用。
實施例1滴丸100mg·kg-1體重給藥組主動脈流量與同期對照組比較下降程度有所減緩，但統計學未見顯著性差異，結果見表13。
表13 實施例1滴丸對犬主動脈流量的影響(L/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
(4)實施例1滴丸對麻醉犬冠狀動脈流量的影響冠狀動脈血流量監測表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和200mg·kg-1體重及丹參滴丸300mg·kg-1體重給藥組，在藥後30-120min區間內冠狀動脈血流量明顯高於同期對照組。提示實施例1滴丸能明顯增加冠狀動脈流量。見表14。
表14 實施例1滴丸對犬冠狀動脈流量的影響(ml/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
(5)實施例1 滴丸對麻醉犬總外周阻力的影響結果表明，對照組動物觀察期內血管總外周阻力隨時間推移呈明顯的上升趨勢，與同期對照組比較，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和200mg·kg-1體重及丹參滴丸300mg·kg-1體重給藥組總外周阻力明顯降低。表明實施例1滴丸可降低實驗動物血管總外周阻力。見表15。
表15 實施例1滴丸對犬總外周阻力的影響(Kpa s/L；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
(6)實施例1 滴丸對麻醉犬心臟指數的影響從數據表中表看出實施例1滴丸對犬心臟指數的影響。給藥前後比較表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和200mg·kg-1體重給藥組在給藥後30-180min區間內可明顯提高動物心臟指數，表明實施例1滴丸對心臟功能有明顯的調節作用。見表16。
表16 實施例1滴丸對犬心臟指數的影響(L/min.M2；x±s；n＝6)


與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
(7)實施例1滴丸對麻醉犬心肌耗氧量的影響給藥後連續觀察180min，結果表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和200mg·kg-1體重給藥組，在藥後30min、60min和120min心肌耗氧量明顯低於同期對照組，結果提示實施例1滴丸能夠降低動物心肌耗氧量。見表17。
表17 實施例1滴丸對犬心肌耗氧量的影響(ml/100g/min；x±s；n＝6)

與對照組比較**P＜0.01，*P＜0.05。
綜上所述，實施例1滴丸高劑量組和中劑量組可不同程度的降低血壓、心室內壓、心室內壓上升速率，增加動物主動脈和冠脈流量、降低心肌耗氧量，增加心臟指數，降低總外周阻力，對動物心率無明顯的影響。
3、實驗結論本實驗以麻醉犬為研究對象，通過八道生理記錄儀，觀察了實施例1滴丸對動物血壓、心率、左室內壓、左室內壓變化速率、主動脈血流量、冠狀動脈血流量、總外周阻力、心臟指數、心肌耗氧量等指標的影響。結果表明，實施例1滴丸(300mg·kg-1、150mg·kg-1體重)可輕度降低血壓，增加冠狀動脈血流量和抑制主動脈流量下降趨勢，提高心臟指數、降低總外周阻力，降低心肌耗氧量。對心率和左室內壓沒有明顯的影響，提示實施例1滴丸對心臟血液動力學有一定的調節作用。有利於心臟有心肌缺血狀態下的心功能調整。與同劑量丹參滴丸比較未見顯著性差異。
實驗例3本實驗例通過對異丙腎上腺素亞急性心肌缺血動物模型的影響，說明了本發明組合物對藥物所致的心肌細缺血模型有改善作用。
1、實驗方法選取標準II導聯心電圖正常的48隻大鼠，雌雄兼用，體重250-270克，隨機分成6組空白對照組、模型組、陽性對照組(丹參滴丸)、實施例1滴丸高劑量組、中劑量組和低劑量組給藥組。每組8隻。
各組大鼠按實驗設計劑量給藥，實施例1滴丸高劑量組口服給予實施例1滴丸600mg·kg-1體重；中劑量組300mg·kg-1體重；低劑量組150mg·kg-1體重；陽性對照藥組(丹參滴丸)600mg·kg-1體重。空白對照組與模型組給予同劑量蒸餾水。連續給藥14天，並從給藥第12天起，除空白對照組外，其它各組大鼠口服給藥同時，經腹腔注射異丙腎上腺素10mg·kg-1體重。連續注射3天。空白對照組注射同劑量生理鹽水。
於第3次注射異丙腎上腺素後24小時，大鼠仰臥位固定在大鼠固定臺上，在清醒狀態下記錄標準II導聯心電圖。觀察心電圖的變化情況，以心電圖J點上升(＞1.5mv)，或T波低平(＜原波高50％)，或雙向、倒置，或ST段下移(＞0.5mv)。有其中一項即為心肌缺血陽性，計算各組動物心肌缺血發生率(％)。計算各組大鼠各S-T段變化的總毫伏數(∑-ST)，即心肌缺血程度。
經腹主動脈取血，生化分析儀檢測血漿磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)。
心肌缺血發生率經X2檢驗，各組S-T段變化的總毫伏數比較用t檢驗。
2、實驗結果(1)實施例1滴丸對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血發生率的影響結果表明，模型組動物心肌缺血發生率為100％，而實施例1滴丸600mg·kg-1體重給藥組及陽性對照藥(丹參滴丸600mg·kg-1體重)組大鼠心肌缺血發生率(％)明顯低於對照組，實施例1滴丸中劑量組和低劑量組大鼠心肌缺血發生率(％)也有下降趨勢，但無統計學意義。結果見表1。
表1 對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血發生率(N-ST)的影響

與模型對照組比較*P＜0.05。
(2)實施例1滴丸對急性心肌缺血模型大鼠心肌缺血程度的影響各組大鼠心肌缺血程度(∑-ST)比較表明，實施例1滴丸高劑量組(600mg·kg-1體重)動物心電圖∑-ST值小於模型組。實施例1滴丸中劑量組和低劑量組與模型組比較未見顯著性差異。提示一定劑量的實施例1滴丸對大鼠異丙腎上腺素心肌缺血模型有改善作用。結果詳見表3。
表2 實施例1滴丸對急性心肌缺血程度(∑-ST)的影響(x±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
(3)實施例1滴丸對急性心肌缺血模型大鼠血漿LDH和CK含量的影響結果表明大鼠連續注射異丙腎上腺素，可造成明顯的心肌損傷，表現為大鼠血漿中CK和LDH水平明顯高於對照組。
與模型組比較，實施例1滴丸600mg·kg-1組和300mg·kg-1組可明顯降低實驗性心肌缺血大鼠血漿中CK含量(P＜0.05)，實施例1滴丸600mg·kg-1體重給藥組大鼠LDH水平低於模型組(P＜0.05)，其它給藥各組CK和LDH也有一定下降趨勢，但統計學未見顯著性差異(P＞0.05)。提示實施例1滴丸對於大鼠異丙腎上腺素所致大鼠心肌缺血性損傷有一定的保護作用。結果詳見附表3。
表3 實施例1滴丸對心肌缺血大鼠血漿LDH和CK值的影響(x±s)

與模型對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
3、結論採用異丙腎上腺素多次給藥法複製亞急性心肌缺血模型，觀察實施例1滴丸對心肌缺血模型大鼠心肌缺損發生率和損傷程度的影響及血清肌酸磷酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)變化的影響。結果表明，實施例1滴丸600mg·kg-1和300mg·kg-1給藥可明顯降低異丙腎上腺素所致的動物心肌缺血的發生率，並不同程度的減輕心肌損傷的程度。說明實施例1滴丸對藥物所致的心肌細缺血模型有改善作用。
實驗例4本實驗例通過實施例1滴丸對犬急性心肌缺血模型的影響，說明實施例1滴丸對結紮犬冠狀動脈所致心肌缺血、損傷有改善作用。
採用結紮犬冠狀動脈前降支法複製心肌缺血模型，分別觀察了心肌缺血後30、60、120、180分鐘的心外膜心電圖，以結紮前後∑-ST的差值表示心肌損傷的程度。以N-ST≥2mV的電極數為N-ST，表示心肌壞死區的範圍。
採用生化分析儀檢測結紮前、結紮後180分鐘、360分鐘血漿磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。
採用分光光度法測定心肌組織勻漿液SOD、MDA含量；
採用定量組織測定N-BT染色法結合圖像掃描技術觀察對心肌梗死面積的影響。
1、實驗方法選用健康家犬30隻，雌雄兼用，體重10-15kg。隨機分為5組。每組6隻。
採用結紮犬冠狀動脈前降支法複製心肌缺血模型。
手術剝離左冠狀動脈，於前降支的1/3至1/2，或下1/3選一結紮點穿一絲線，以備結紮。
記錄一段各測試點(12個測試點，一個對照點)心外膜電位圖。完畢後結紮法結紮冠狀動脈。15分鐘後描記各測試點心外膜電位圖，作為給藥前對照。然後經十二指腸給藥，實施例1滴丸給藥組劑量分別為高劑量組300mg·kg-1體重，中劑量組200mg·kg-1體重，低劑量組100mg·kg-1體重。陽性對照組(丹參滴丸)300g·kg-1體重，對照組給予同劑量蒸餾水。然後分別記錄給藥後30、60、120、180分鐘的心外膜心電圖，360分鐘後處死動物取心臟。
觀察指標計算各標點的平均ST段抬高的mV值和ST段抬高的總毫伏數(∑-ST)，以結紮前後∑-ST的差值表示心肌損傷的程度。以ST≥2mV的電極數為N-ST，表示心肌壞死區的範圍。
同時分別在冠狀動脈結紮前，結紮後180min、360min經犬股動脈各取血一次。每次取血5ml，3000r/min離心10min，取血清，液氮速凍，置-40℃冰箱保存待測。生化分析儀測定血清磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)。
於冠狀動脈結紮後360min將心臟取下，用鹽水衝洗，除去血汙，剔除血管脂肪等非心肌組織，用濾紙吸去水分，將心臟放入低溫冰箱(-80℃)冷凍10min。取出后冠狀切面切成約1cm厚的心肌5片，採用定量組織測定N-BT染色法進行心肌染色，切片心肌放入0.1％的硝基四氮唑蘭(N-BT)。在37℃二氧化碳孵箱中溫育5～7分鐘。染色過程中不時攪拌染色液，使之與心肌有充分的接觸機會。染色後立即用水衝洗，洗去多餘的染料。數位相機拍攝照片後，醫學圖像分析系統掃描每片心肌的總面積和壞死區面積，累積計算心肌總壞死面積佔整個心肌總面積的百分比。
2、實驗結果(1)實施例1滴丸對心肌缺血模型動物心肌缺血程度及缺血範圍的影響實施例1滴丸高劑量組(300mg·kg-1)在給藥30-120min內，心肌缺血區心外膜心電圖ST段升高總毫伏數(∑-ST)明顯低於同期模型對照組(P＜0.05，P＜0.01)。中劑量組(200mg·kg-1)在給藥60-120min內∑-ST與同期模型對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，低劑量組與模型組比較未見顯著性差異(P＞0.05)。陽性對照組(丹參滴丸)動物心肌缺血時心外膜心電圖ST段升高總毫伏(∑-ST)在給藥後60-120min與模型組比較有顯著差異。提示實施例1滴丸對犬心肌缺血程度(∑-ST)有明顯的改善作用。結果見表4。
表4實施例1滴丸對急性心肌缺血模型動物心肌缺血程度(∑-ST mV)的影響(x±s N＝6)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
對心肌缺血範圍(N-ST)的影響觀察表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重給藥組給藥120min、180min心肌缺血範圍(N-ST)與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，中劑量組和低劑量組與對照組比較未見顯著性差異(P＞0.05)，表明實施例1滴丸對減小心肌缺血的範圍有一定的作用。結果見表5。
表5 實施例1滴丸對急性心肌缺血模型心肌缺血範圍(N-ST)的影響(x±s，N＝6)

(2)實施例1滴丸對心肌缺血模型動物梗死區面積的影響(染色法)染色法觀察心肌缺血區範圍結果表明，實施例1滴丸300mg·kg-1體重和200mg·kg-1體重給藥組及陽性對照組動物心肌壞死面積的百分比明顯低於模型組(P＜0.05)。低劑量組與模型組比較未見顯著性差異(P＞0.05)。同劑量實施例1滴丸與陽性對照組(丹參滴丸)比較無顯著性差異。結果表明實施例1滴丸有減小心肌梗死面積的作用。結果見表6。
表6 實施例1滴丸對犬急性心肌梗死面積的影響(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001。
(3)實施例1滴丸對心肌缺血模型動物血漿酶含量的影響實驗中分別於冠狀動脈結紮前和結紮後180min和360min取血，生化分析儀檢測血漿磷酸肌酸激酶(CK)和乳酸脫氫酶(LDH)含量變化。
結果表明，與結紮前比較，藥後180分鐘時，各組動物血清LDH均明顯高於結紮前，CK升高不明顯，結紮後360分鐘檢測表明，各組動物的CK和LDH均明顯高於結紮前。表明心肌缺血時伴有血清相關酶含量增加並與缺血時間有關。
組間差異比較表明，與對照組比較，實施例1滴丸300mg·kg-1體重給藥組在給藥後180min和360min時血清CK、LDH含量均明顯低於對照組，200mg·kg-1體重給藥組動物在給藥後180min時血漿LDH含量與對照組比較有顯著性差異。給藥後360分鐘時血清CK、LDH含量均明顯低於對照組。100mg·kg-1體重給藥組在給藥後360分鐘時血清CK、LDH含量均明顯低於對照組。結果表明，實施例1滴丸可明顯降低心肌缺血損傷動物的血清酶含量，提示實施例1滴丸對心肌缺血損傷有一定的保護作用。結果見表7、8。
表7 各組動物血清LDH含量變化的比較(x±s，N＝6)

與結紮前比較，**P＜0.01 ***P＜0.001。
與模型組比較※P＜0.05，※※P＜0.01。
表8 各組動物血清CK含量變化的比較(x±s，N＝6)

與結紮前比較，**P＜0.01 ***P＜0.001。
與模型組比較※P＜0.05，※※P＜0.01。
結論實施例1滴丸300mg·kg-1、150mg·kg-1體重給藥可明顯減輕心肌損傷的程度，縮小壞死區範圍，降低血漿磷酸肌酸激酶(CK)、乳酸脫氫酶(LDH)含量，說明實施例1滴丸對結紮犬冠狀動脈所致心肌缺血、損傷有改善作用。
實驗例5本實驗例採用容器密閉法，觀察單位體積內小鼠無氧氣補給情況下的存活時間，說明了實施例1滴丸的抗缺氧作用。
1、實驗動物(1)Wistar大鼠，雌雄兼用，體重250-270克。由長春高新醫學動物實驗研究中心提供。合格證號SCXK(吉)2003-0004。
(2)昆明小白鼠雌雄各半，體重18-22g。由長春高新醫學動物實驗研究中心提供。合格證號SCXK(吉)2003-0004。
(3)犬普通健康家犬，雌雄不限。體重12-17kg。
2、實驗藥品(1)實施例1滴丸吉林康乃爾藥業有限公司提供，20mg/粒。批號030806。
(2)垂體後葉素注射液上海禾豐製藥有限公司。批號030501。
(3)複方丹參滴丸天津天士力製藥股份有限公司。批號20040204。
(4)鹽酸異丙腎上腺素注射液上海天豐藥廠。批號020302(5)肝素上海進口分裝，配製濃度0.1％。
(6)氯化硝基四氮唑藍中國醫藥(集團)上海化學試劑公司，規格0.25g/瓶，批號20030102。
(7)SOD、MDA測試藥盒南京建成生物工程研究所提供。
3、實驗儀器(1)生理記錄儀日本光電公司(RM-6000型)。
(2)高速數據記錄儀澳大利亞(ML-785Powerlab/8sp)。
(3)電磁血流量計日本光電公司(MFV3200)。
(4)人工呼吸機上海醫療器械廠(3-C)。
(5)醫用離心機北京醫用離心機廠(LDZ5-2)。
(6)電子稱上海第二天平儀器廠(MP120-1)。
(7)多功能血液凝集儀上海通用機電技術研究所(TYXN-96)。
(8)血液流變儀北京泰諾德(BV-100型)。
(9)生化分析儀深圳邁瑞公司產品(BA-90型)。
(10)體內血栓形成儀包頭醫學院心血管研究室產品(BT-87-3型)。
(11)恆溫培養箱美國(C-5420)。
(12)醫學圖像分析系統成都泰盟科技有限公司(BI-2000)。
4、實驗方法取昆明小鼠50隻，體重20-22g，隨機分為5組，即正常對照組，實施例1滴丸高、中、低劑組陽性藥(丹參滴丸)對照組。每組10隻。
各組小鼠經灌胃給藥，劑量分別為實施例1滴丸高劑量組1200mg·kg-1體重；中劑量組600mg·kg-1體重，低劑量組300mg·kg-1體重；陽性對照藥組(丹參滴丸)1200mg·kg-1體重；空白對照組給同劑量蒸餾水。
連續給藥5天，於末次給藥後30min，將各組動物分別裝入200ml磨口瓶中(瓶中預先放置鈉石灰10g；瓶口塗以凡士林)，用瓶蓋將瓶密封，開動秒表計時。以小鼠存活時間作為觀察指標。各組數據經統計學處理。以均數加減標準差表示(X±S)。組間的差異性檢驗用t檢驗。
5、實驗結果結果表明，實施例1滴丸(1200mg·kg-1)和丹參滴丸(1200mg·kg-1)給藥組可延長動物在常壓缺氧條件下存活時間，實施例1滴丸(600mg·kg-1)和實施例1滴丸(300mg·kg-1)給藥組動物存活時間與對照組比較未見顯著性差異。表明一定劑量的實施例1滴丸可提高動物的耐缺氧能力。結果見表22。
表22 各組小鼠常壓缺氧條件下存活時間的比較(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。
結論結果表明，實施例1滴丸(1200mg·kg-1體重)給藥動物在缺氧境下的存活時間明顯長於空白對照組，表明實施例1滴丸可以不同程度的提高動物耐缺氧能力。
實驗例6-9是本發明組合物活血化瘀作用的試驗研究。
實驗例6本實驗例說明了實施例1滴丸對瘀血模型動物血液流變學的影響。
1、實驗方法(1)試驗動物選用Wistar大鼠60隻，雌雄各半，體重250-300g。隨機分為6組，每組10隻。
(2)試驗藥品實施例1滴丸(同前)。
(3)給藥途徑、方法及劑量所有動物灌胃給藥，每天灌胃給藥一次。給藥劑量分別為實施例1滴丸高劑量組600mg·kg-1體重；中劑量組300mg·kg-1體重；低劑量組150mg·kg-1體重；陽性對照藥組(丹參滴丸)600mg·kg-1體重。空白對照組與模型組給予同劑量蒸餾水。每天灌胃1次，連續灌胃給藥14天。
(4)血瘀證模型的複製於末次給藥後30分鐘造模，除空白組外，其它各組動物經皮下注射鹽酸腎上腺素1mg/kg。2小時後，將動物放入冰水中(4℃)浸泡5分鐘，取出，2小時後再次注射同劑量鹽酸腎上腺素。禁食20小時後，在乙醚麻醉下經腹主動脈穿刺取血，肝素抗凝。血液流變儀測試全血粘度、血漿粘度。
(5)各組測試結果數據以均數加減標準差表示，組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。
2、實驗結果結果表明，大鼠在腎上腺素及冰水刺激下，全血粘度、血漿粘度與對照組比較均明顯升高。表明皮下注射鹽酸腎上腺素加冰水刺激可造成動物急性血流循環障礙。
與模型組比較，在同樣造模的條件下，實施例1滴丸(600mg·kg-1)給藥組動物高切變率、中切變率、低切變率下的全血粘度及血漿粘度均明顯低於模型組實施例1滴丸(300mg·kg-1)給藥組動物血漿粘度均明顯低於模型組。提示實施例1滴丸可降低瘀血動物模型血液高粘狀態，改善血液循環，有利於缺血心肌的血液供應。實施例1滴丸(600mg·kg-1)與同劑量丹參滴丸組比較未見顯著性差異。結果見表18表18 實施例1滴丸對瘀血模型動物血液流變學的影響(ηBmPa.s x±s)

與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 ***P＜0.001。
採用皮下注射腎上腺素與冰水刺激相結合的方法複製大鼠血瘀證模型，觀察實施例1滴丸對血瘀證大鼠血液流變學的影響，結果實施例1滴丸600mg·kg-1、300mg·kg-1體重給藥對瘀血證大鼠不同切變率下的全血粘度升高有明顯的改善作用，對血漿粘度升高有一定改善作用。
本試驗以腎上腺素與冰水刺激為致瘀因素複製大鼠血瘀證動物模型，觀察實施例1滴丸對血瘀證模型動物全血不同切變率下的粘度變化及血漿粘度變化。
實驗例7本實驗例說明了實施例1滴丸對大鼠體內動脈血栓形成的影響。
本實驗採用電刺激大鼠頸總動脈血栓形成法，觀察不同劑量受試藥物對動脈內血栓形成(堵塞動脈)時間(OT)的影響。
1、實驗方法(1)實驗動物及分組選取大鼠50隻，雌雄各半，隨機分為實施例1滴丸高劑量組、中劑量組、低劑量組、陽性藥對照組(丹參滴丸)和空白對照組，每組10隻。
(2)給藥方法與劑量各組動物通過灌胃給藥，給藥劑量分別為實施例1滴丸高劑量組600mg·kg-1體重；中劑量組300mg·kg-1體重；低劑量組150mg·kg-1體重；陽性對照藥組(丹參滴丸)600mg·kg-1體重；空白對照組給予同劑量蒸餾水。每天灌胃1次，連續7天。於末次給藥後30分鐘腹腔注射3％戊巴比妥鈉(1.2ml/kg體重)。切開頸部皮膚，剝離左側頸總動脈，在動脈近端下放刺激電極，遠端下放連接儀器之溫度探頭，打開儀器開關，通過刺激電極給予1.5mv直流電刺激5分鐘。當儀器報警時，記錄從刺激開始至報警時間(OT值)。
(3)觀察指標及統計學處理觀察比較各組動物動脈血栓形成的時間，各組數據以均數加減標準差表示(x±s)，組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。
2、實驗結果結果表明，與對照組比較，實施例1滴丸600mg·kg-1體重和300mg·kg-1體重給藥組動物血栓形成(堵塞動脈)時間(OT)明顯延長，實施例1滴丸150mg·kg-1體重給藥組與對照組比較血栓形成(堵塞動脈)時間未見顯著性差異。提示實施例1滴丸對動脈血栓形成有一定程度的抑制作用，結果見表19。
表19 實驗各組大鼠動脈血栓形成時間的比較(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 ***P＜0.001。
3、結論本實驗採用電刺激大鼠頸總動脈血栓形成法，觀察不同劑量受試藥物對動脈內血栓形成(堵塞動脈)時間(OT)的影響，結果表明，實施例1滴丸(600mg·kg-1、300mg·kg-1體重)給藥可明顯延長電刺激大鼠頸總動脈血栓形成法時間(堵塞動脈)，表明實施例1滴丸具有抑制血栓形成作用。
實驗例8本實驗例說明了實施例1滴丸對大鼠在體靜脈血栓形成的影響。
本試驗結紮靜脈，阻斷血流，血液停留於局部，以致於缺氧導致血管內皮損傷，激活凝血系統，致使局部形成血栓。
1、實驗方法(1)實驗動物及分組選用大鼠50隻，體重200-250g，雌雄各半。實驗時隨機分為5組，具體分組如下對照組、陽性藥對照組、實施例1滴丸高、中、低劑量組。每組10隻。
(2)給藥方法與劑量各組動物通過灌胃給藥，給藥劑量分別為實施例1滴丸高劑量組600mg·kg-1體重；中劑量組300mg·kg-1體重；低劑量組150mg·kg-1體重；陽性對照藥組(丹參滴丸)600mg·kg-1體重。對照組給予同等劑量的蒸餾水，動物按上述劑量分批灌胃給藥，連續給藥7天。
(3)末次給藥後30分鐘，大鼠以3％戊巴比妥鈉腹腔給藥麻醉。腹部正中切口切開腹腔，剝離下腔靜脈，與左腎靜脈下方用粗絲線結紮下腔靜脈，縫合腹腔，結紮4小時後，處死大鼠，打開腹腔，在結紮下方2cm處夾閉管腔，取出瘀血段血管，剖開管腔，取出血栓，放在濾紙上，吸乾血液，用微量電子天秤稱取血栓溼重(mg)，然後將血栓在室溫下放置24小時，稱取血栓乾重(mg)。
(3)觀察指標與統計學處理血栓的溼重、乾重。各組實驗數據以均數加減標準差表示，進行統計學處理，組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。
2、實驗結果結果表明，實施例1滴丸(600mg·kg-1)和丹參滴丸(600mg·kg-1)給藥組均可明顯降低靜脈血栓溼重及乾重；實施例1滴丸300mg·kg-1體重與實施例1滴丸150mg·kg-1體重給藥組動物靜脈血栓溼重及乾重與對照組比較均無顯著性差異。結果提示實施例1滴丸對動物靜脈血栓形成有一定的抑制作用。
表20 實驗各組大鼠靜脈血栓溼重乾重比較(x±s)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 ***P＜0.001。
3、結論實施例1滴丸(600mg·kg-1體重)給藥可降低動物靜脈血栓溼重和乾重，實施例1滴丸300mg·kg-1、150mg·kg-1體重給藥對靜脈血栓形成也有一定的抑制趨勢，表明實施例1滴丸對靜脈血栓形成有抑制作用。
實驗例9本實驗例說明了實施例1滴丸對大鼠血小板聚集率的影響。
本試驗採用正常大鼠富含血小板的血漿，以5-腺苷二磷酸二鈉鹽(ADP)為促凝劑，通過血小板聚集儀觀測血小板聚集曲線，以血小板凝集1分鐘(PAG1)、3分鐘(PAG3)、5分鐘(PAG5)和最大峰值(PAGM)為觀測指標，比較給藥各組與空白對照組(生理鹽水)血小板聚集率。
1、實驗方法(1)富含血小板血漿(PRP)的製備實驗時取大鼠動脈血，以3.8％枸櫞酸鈉抗凝(9∶1)，混勻。分裝於試管中，自動平衡水平式離心機，1000轉/分離心5-8分鐘(20-25℃條件下)，用取樣器，小心吸取上層液，即富含血小板血漿(PRP)，室溫下放置備用。
(2)受試藥品的準備實施例1滴丸(不含賦形劑)配製成10％的混懸液，超聲震蕩充分溶解，用雙層濾紙過濾。濾液再用0.45μm微孔濾膜抽濾，濾液倍比稀釋用於試驗。
(3)血小板促凝劑的準備用1/10000天秤精確稱取ADP5mg，用PH 7.4的0.2M磷酸鹽緩衝液溶解，最終配製成濃度為2uM。
(4)測試步驟a)TYXN-96多功能血液凝集儀開機後預熱。
b)用移液器取富含血小板血漿(PRP)液200ul，注入測試杯中(杯中預先放置攪拌珠)。將測試杯放入預熱孔中預熱。
c)用微量注射器抽取ADP11ul備用。
d)將測試杯放入檢測孔內，啟動檢測鍵，同時加入ADP。自動記錄血小板凝集曲線。
(5)各組樣品的測試實驗分組實驗共分5組，每組測試10例。試驗時每測試試管中加入過濾液10ul(分別含實施例1滴丸100mg/ml、50mg/ml、25mg/ml)，加樣體積均為10微升，對照組加入同體積生理鹽水。丹參滴丸同法處理。
觀察指標及統計學處理觀察1分鐘血小板聚集性(PAG-1)，3分鐘血小板聚集性(PAG-3)，5分鐘血小板聚集性(PAG-5)和血小板聚集性最大峰值(PAG-M)。分別統計各組樣本1分鐘血小板聚集性(PAG-1)，3分鐘血小板聚集性(PAG-3)，5分鐘血小板聚集性(PAG-5)和血小板聚集性最大峰值(PAG-M)。組間差異的顯著性檢驗用t檢驗。
2、實驗結果結果表明，與對照組比較，實施例1滴丸體外100mg/ml和50mg/ml給藥在1min、3min、5min測試點上血小板聚集率明顯低於對照組，血小板聚集最大峰值也低於對照組，25mg/ml給藥對血小板聚集未見明顯的抑制作用。提示實施例1滴丸體外給藥對ADP所致的血小板聚集有一定的抑制作用。詳見表21。
表21 各組血小板聚集性的比較(x±s，N＝10)

與對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01 ***P＜0.001。
3、結論與對照組比較，實施例1滴丸體外100mg/ml和50mg/ml各測試點(1min、3min、5min)血小板聚集率及最大聚集峰值均明顯小於對照組，提示實施例1滴丸體外給藥對ADP所致的血小板聚集均有明顯的抑制作用。
權利要求
1.一種中藥組合物，其特徵在於，所述藥物組合物原料包括如下重量份的組分三七0.5-200葛根0.5-240麝鼠香 0.00001-10。
2.根據權利要求1所述的組合物，其特徵在於，所述藥物組合物原料中，三七為50-200重量份和/或葛根為50-240重量份和/或麝鼠香為0.01-5重量份。
3.由權利要求1或2所述藥物組合物原料製備藥物製劑的方法，包括三七提取物的製備、葛根提取物的製備、最終製劑的製備三個步驟。
4.根據權利要求3所述的方法，其特徵在於，所述三七提取物的製備過程為將三七粉碎，過20～100目篩，加2-10倍重量的30-90％乙醇，加熱回流，提取1-5次，每次1-3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇後，加水至1-1.5倍三七藥材量，靜置12-30小時，濾過，濾液以1/3-1/2藥材量的大孔樹脂(乾重)純化，得提取物；所述葛根提取物的製備過程為葛根切製成飲片，加5-10倍量50-90％乙醇，加熱回流提取1-5次，每次0.5-3小時，合併提取液，濾過，濾液回收乙醇後，加水至1-1.5倍葛根藥材量，靜止12-30小時，濾過，濾液以1/3-1/2藥材量的大孔樹脂(乾重)純化，得提取物；所述最終製劑的製備是將三七、葛根提取物與麝鼠香混合均勻，按照藥劑學上通用方法，製備最終劑型的產品。
5.根據權利要求4所述的方法，其特徵在於，所述最終劑型為片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、合劑。
6.根據權利要求5所述的方法，其特徵在於，所述劑型優選滴丸。
7.根據權利要求6所述的方法，其特徵在於，所述最終製劑的製備步驟應將三七、葛根提取物與麝鼠香混合均勻，加入基質，加熱融化，混勻，在25～100℃保溫條件下滴入到溫度在0-30℃的冷卻劑等溶劑中滴製成丸；所述基質用量為三七、葛根提取物與麝鼠香混合物的0.1～8倍重量。
8.根據權利要求7所述的方法，其特徵在於，所述的基質可以是聚乙二醇、硬脂酸鈉、甘油明膠、硬脂酸、單硬脂酸甘油酸或蟲臘，這些基質材料可以混配使用；優選使用聚乙二醇；上述聚乙二醇可以是聚乙二醇4000、聚乙二醇6000、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000或聚乙二醇1500；優選使用聚乙二醇4000或聚乙二醇6000或者二者組合，組合使用時，聚乙二醇4000與聚乙二醇6000的重量比為3∶1；所述的冷卻劑可以是二甲基矽油、液體石蠟、植物油、水、乙醇，這些冷卻劑材料可以混配使用；優選使用二甲基矽油。
9.根據權利要求4-8所述的方法，其特徵在於，所述應用大孔樹脂純化三七提取液的方法為以1/3-1/2倍藥材量的大孔樹脂(乾重)為純化樹脂，溼法裝柱，徑高比為1∶2-1∶10，提取液上柱濃度為0.5-1g/ml藥材，上柱流速1-3倍柱體積/小時，吸附後，先用3-8倍柱體積蒸餾水洗脫雜質，再以3-8倍柱體積的50-90％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得三七提取物；所述應用大孔樹脂純化葛根提取液的方法為以1/3-1/2倍藥材量的大孔樹脂(乾重)為純化樹脂，溼法裝柱，「徑高比」為1∶2-1∶10，提取液上柱濃度為0.5-1g/ml藥材，上柱流速1-3倍體積/小時，吸附後，先用3-6倍體積蒸餾水洗脫雜質，再以3-6倍體積的30-95％乙醇為洗脫劑，全速洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，乾燥，得提取物；所述的大孔樹脂可以是D101、AB-8或ZTC型大孔樹脂。
10.權利要求1或2所述藥物組合物原料在製備治療心腦血管疾病藥物方面的用途。
全文摘要
本發明涉及一種中藥組合物，該藥物組合物原料包括如下重量份的組分三七0.5－200、葛根0.5－240、麝鼠香0.00001－10。由該組合物原料經提取、純化後，可製成片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑、散劑、合劑；優選滴丸，可用於治療心腦血管疾病。本發明同時提供由上述藥物組合物製備藥物製劑的方法，包括三七提取物的製備、葛根提取物的製備、最終製劑的製備三個步驟。
文檔編號A61P9/00GK1907320SQ20051008914
公開日2007年2月7日 申請日期2005年8月4日 優先權日2005年8月4日
發明者宋治國 申請人:吉林康乃爾藥業有限公司