一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法
2023-05-19 14:25:06 1
專利名稱：一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法
技術領域：
本發明涉及標本的製作方法，具體涉及一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法。
背景技術：
真菌孢子的形態特徵是對真菌分類鑑定的主要特徵之一。製作叢枝菌根菌孢子的玻片標本，對於相關的教學、研究、技術推廣等具有重要的意義，也是生物標本廠一個很好的生產項目。叢枝菌根菌的孢子較大，多數種類的孢子直徑在100 200Mffl之間，大的可達 400Mm以上(如木薯球囊黴Glomus manihotis的孢子可達450Mm，易誤巨孢囊黴Gigaspora decipiens的孢子可達490 μ m)，而且這類孢子的壁不堅實，稍遇壓力即破裂，這給製作整體孢子的玻片標本造成了一定的困難。傳統的玻片標本製作方法是在載玻片上滴上少量的膠液，然後將孢子放在膠液中，再在上面蓋上蓋玻片，待膠液乾燥將蓋玻片黏著固定後，即成為永久玻片標本。由於多數叢枝菌根菌的孢子較大，無法用少量的膠液在載玻片與蓋玻片之間形成足以盛載孢子的位置，並將載玻片、孢子和蓋玻片黏著固定在一起。若用大量的膠液，雖然可在載玻片與蓋玻片之間形成足以盛載孢子的位置，並將載玻片、孢子和蓋玻片黏著固定在一起，但膠液在乾燥過程中收縮將使蓋玻片對孢子的壓力增大，致使孢子破裂，無法製作出整體孢子(孢子完整、不破裂)的玻片標本。
發明內容
本發明的目的是提供一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法。為實現上述目的，本發明採用了如下技術方案，一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，包括以下步驟
(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；
(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；
(2)藉助於體視顯微鏡，用毛細吸管從溼篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子， 用濾紙吸去孢子表面的水分後放置在膠液表面；
(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在烘箱中乾燥8 12個小時；
(5)取出烘乾的載玻片平放在操作臺上，用吸管在載玻片的凹口外圍塗上封片膠，然後蓋上蓋玻片；
(6)把上述制好的玻片標本平放在烘箱中，經8 12個小時乾燥，即製成整體孢子玻片標本。一個載玻片凹穴中的膠液表面可僅放1個孢子，也可放數個孢子；放數個孢子時， 使孢子間保持一定的距離，不要使孢子擠在一起，以免影響觀察效果。步驟(4)、(6)所述的烘箱的溫度為45 55°C。
所述的封片膠為作粘合劑的樹膠，優選加拿大樹膠。用本發明方法製作的叢枝菌根菌整體孢子玻片標本可利用體視顯微鏡觀察完整孢子的外觀形態特徵，並可長期保存。本發明的優點在於採用凹圓載玻片，將孢子封存在凹圓載玻片的凹穴中，凹圓載玻片的凹穴底部鋪一層膠，孢子被黏著固定在膠的表面，蓋玻片與孢子之間有一定的空間距離，可保證大而且壁不堅實的叢枝菌根菌孢子在永久玻片標本中保持完整的外觀形態， 不破裂。
具體實施例方式實施例1本實施例叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法如下所述
(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上。凹圓載玻片規格為長寬76X^mm，厚度1. 2 1. 5mm,凹穴直徑15 18mm，凹穴深度0. 6 0. 8mm ；
(2)用吸管向凹穴中滴一滴阿拉伯膠混合液，膠液的用量控制在液面距凹口處的距離要大於所用孢子的直徑；
阿拉伯膠混合液配方30g阿拉伯膠、200g水合三氯乙醛、20mL甘油、50mL蒸餾水；
配製方法將阿拉伯膠粉放入燒杯，徐徐加入蒸餾水並攪拌，同時將燒杯水浴加熱，然後慢慢加入水合三氯乙醛混合液，邊加邊攪拌均勻，最後加入甘油拌勻，倒入細頸瓶中，蓋上玻塞，置60 °C溫箱內Mh，並在溫箱中用潔淨玻璃棉和紗布過濾，保存在黑暗處，備用；
(3)藉助於體視顯微鏡，用毛細吸管從溼篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取單個孢子，用濾紙吸去孢子表面的水分後放置在膠液表面；
(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在50°C烘箱中乾燥12個小時；
(5)取出烘乾的載玻片平放在操作臺上，用吸管在凹圓載玻片的凹口外圍塗上加拿大樹膠，然後蓋上蓋玻片；塗膠液的範圍掌握在凹口外圍蓋玻片能蓋住的區域，膠液的用量掌握在蓋上蓋玻片後膠液不缺也不溢到凹穴內和蓋玻片外緣；蓋玻片的規格為長寬 22 X 22mm，或 24 X 24mm，或 24 X 32mm，厚度 0. 15mm 0. 19mm ；
(6)把上述制好的玻片標本平放在50°C烘箱中，經12個小時乾燥，即製成整體孢子玻片標本。
權利要求
1.一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，其特徵在於，包括如下步驟(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；(3)藉助於體視顯微鏡，用毛細吸管從溼篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子， 放置在膠液表面；(4)把步驟(3)中放置孢子的載玻片平放在烘箱中乾燥8 12h；(5)取出烘乾的載玻片平放在操作臺上，在載玻片的凹口外圍塗上封片膠，然後蓋上蓋玻片；(6)把上述制好的玻片標本平放在烘箱中，經8 1 乾燥，即製成整體孢子玻片標本。
2.根據權利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，其特徵在於，步驟(2)膠液的用量控制在液面距凹口處的距離大於所用孢子的直徑。
3.根據權利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，其特徵在於，步驟(4)、(6)所述的烘箱的溫度為45 55°C。
4.根據權利要求1所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，其特徵在於，所述的封片膠為作粘合劑的樹膠。
5.根據權利要求4所述的叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法，其特徵在於，所述的樹膠為加拿大樹膠。
全文摘要
本發明涉及標本的製作方法，具體涉及一種叢枝菌根菌整體孢子玻片標本的製作方法。該方法包括以下步驟(1)將凹圓載玻片平放在操作臺上，凹面向上；(2)向凹穴中滴加阿拉伯膠混合液；(3)藉助於體視顯微鏡，用毛細吸管從溼篩傾析法篩出的叢枝菌根菌孢子中吸取孢子，放在膠液表面；(4)把步驟(3)的載玻片平放在烘箱中乾燥8～12h；(5)取出烘乾的載玻片平放在操作臺上，在載玻片的凹口外圍塗上封片膠，然後蓋上蓋玻片；(6)把制好的標本平放在烘箱中，經8～12h乾燥，即製成整體孢子玻片標本。該方法製成的標本可使大且壁不堅實的菌根菌孢子在標本中保持完整的外觀形態，不破裂。
文檔編號G01N1/28GK102175497SQ20111005451
公開日2011年9月7日 申請日期2011年3月8日 優先權日2011年3月8日
發明者劉愛榮, 徐建強, 林曉民, 王少先, 胡梅 申請人:河南科技大學