一種銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法
2023-05-18 22:43:01 2
一種銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法
【專利摘要】本發明公開了一種銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，原料為銀杏葉提取物，經乙酸乙酯磁力攪拌提取後得到溶液，旋蒸濃縮至幹，採用甲醇溶解並超聲處理，作為檢測樣品，高效液相色譜-蒸發光散射檢測器分析檢測。本發明檢測結果與中國藥典方法檢測結果一致，在銀杏葉萜類內酯提取分離中，本發明更方便實用。檢測每個樣品時間低於12min(中國藥典方法45min)，大大提高了檢測效率，縮短試驗周期，節約成本，經濟環保。該方法可以用於銀杏葉內酯的定性與定量分析，本發明經方法學驗證表明，分離效果良好，方法線性、穩定性、重現性、加樣回收率等均符合要求。本發明還適用於檢測以單種或多種銀杏葉萜類內酯作為原料的製劑，適於工業化生產使用，有較大的應用價值。
【專利說明】一種銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及藥物檢測方法，具體涉及中藥提取物的檢測方法，尤其涉及一種檢測銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法。
【背景技術】
[0002]銀杏葉為銀杏科銀杏屬植物的葉子，主要化學成分為黃酮類和萜類內酯化合物，具有重要的藥用價值和市場價值，因此，市場上已開發了許多銀杏葉系列產品。隨著社會的進步和經濟的發展，銀杏葉萜類內酯的重要性越來越受人們的關注。銀杏葉萜類內酯是僅在銀杏葉中發現的一類具有特殊結構及顯著藥理活性的重要成分，迄今尚未發現存在於其他任何植物中，更重要的是它們具有獨特的藥理作用和治療價值，常見的銀杏葉萜類內酯為銀杏內酯A、B、C,白果內酯B,均為強血小板活化因子(platelet-activatingfactor, PAF)受體拮抗劑，具有很好的藥用價值，它們獨特的藥理作用和治療價值已引起世界範圍製藥工業的極大興趣。隨著對銀杏葉內酯的深度開發研究，準確、方便、快捷的內酯檢測方法有著關鍵性的作用。
[0003]蒸發光散射檢測器(ELSD)的檢測方法消除了常見於傳統HPLC檢測方法中的難點，它不同於紫外(UV)和螢光(FLD)檢測器，ELSD的響應不依賴與樣品的光學特性，任何揮發性低於流動相的樣品均能被檢測，不受其官能團的影響。ELSD的響應值與樣品的質量成正比，因而能用於測定樣品的純度或者檢測未知物。蒸發光散射檢測器靈敏度比示差折光檢測器高，對溫度變化不敏感，基線穩定，適合與梯度洗脫液相色譜聯用。《中國藥典》2010年版中對銀杏葉萜類內酯含量的測定，以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以正丙醇-四氫呋喃-水(1:15:84)為流動相；用蒸發光散射檢測器檢測。理論板數按白果內酯峰計算應不低於2500。但是每個樣品的檢測時間長達45min，因此，不能滿足銀杏葉內酯快速的測定，需要進一步改進檢測方法。
【發明內容】
[0004]本發明所要解決的技術問題在於克服上述不足之處，研究設計快速、準確檢測銀杏葉萜類內酯的方法，縮短試驗周期，提高檢測效率。本發明提供了一種銀杏葉萜類內酯的檢測方法，本發明的技術方案是:以銀杏葉提取物為原料，經乙酸乙酯磁力攪拌提取後得到銀杏葉萜類內酯組合物溶液，旋蒸濃縮至幹，採用甲醇溶解並超聲處理，作為檢測樣品，進行高效液相色譜-蒸發光散射檢測器檢測，以外標兩點法定量，色譜柱以十八烷基鍵合矽膠為填充劑，以甲醇或乙腈與水作為流動相，流動相流速為0.1?2.0mL/min，梯度洗脫，柱溫箱溫度20°C?50°C，蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度為60°C?110°C，載氣壓力為
1.0 ?5.0bar,氣體流速 0.5L/min ?3.5L/min)。
[0005]具體的，本發明方法包括以下步驟:
[0006](I)色譜條件與系統適用性試驗:色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以甲醇或乙腈為有機相，純化水為水相，梯度洗脫；蒸發光散射檢測器檢測(漂移管溫度為60。。~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min~3.5L/min)。理論板數按白果內酯峰計算應不低於3500 ；
[0007](2)對照品溶液的製備:分別精密稱取白果內酯對照品、銀杏內酯A對照品、銀杏內酯B對照品和銀杏內酯C對照品適量,加甲醇製成每ImL各含2mg、lmg、lmg、lmg的混合溶液，作為對照品溶液；
[0008](3)供試品溶液的製備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恆溫提取3次(分別用30mL、20mL、1mL)，同時磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合併3次提取液，旋轉蒸發儀回收乙酸乙酯至幹，殘渣用甲醇溶解並轉移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續濾液即得；
[0009](4)測定法:分別精密吸取對照品溶液5 μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定，外標兩點法對數方程分別計算白果內酯、銀杏內酯Α、銀杏內酯B和銀杏內酯C的含量，各內酯總量即為銀杏內酯含量。
[0010]本發明方法所述色譜柱填料為十八烷基矽烷鍵合矽膠。
[0011]所述蒸發光散射檢測器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar,氣體流速 0.5L/min ~3.5L/min。
[0012]所述流動相條件:流動相為有機相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機相為色譜級甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
[0013]柱溫箱溫度20V~50°C。
[0014]流動相流速0.1 ~2.0mL/min。
[0015]梯度洗脫程序:
[0016]
【權利要求】
1.一種銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，使用高效液相色譜-蒸發光散射檢測器分析檢測，其特徵在於，該方法包括以下步驟: (1)色譜條件與系統適用性試驗:色譜柱以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑，以有機相/水相為流動相，梯度洗脫；蒸發光散射檢測器檢測，理論板數按白果內酯峰計算應不低於 3500 ； (2)對照品溶液的製備:分別精密稱取白果內酯對照品、銀杏內酯A對照品、銀杏內酯B對照品和銀杏內酯C對照品適量,加甲醇製成每ImL各含2mg、Img> Img> Img的混合溶液，作為對照品溶液； (3)供試品溶液的製備:取銀杏葉提取物0.15g，精密稱定，用乙酸乙酯40°C恆溫分別用30mL、20mL、10mL提取3次，同時磁力攪拌器攪拌，每次lOmin，合併3次提取液，旋轉蒸發儀回收乙酸乙酯至幹，殘渣用甲醇溶解並轉移至5mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，以0.45 μ m濾膜過濾，取續濾液即得； (4)測定法:分別精密吸取對照品溶液5μ L、10 μ L，供試品溶液10 μ L，注入液相色譜儀，測定，外標兩點法對數方程分別計算白果內酯、銀杏內酯Α、銀杏內酯B和銀杏內酯C的含量，各內酯總量即為銀杏內酯含量。
2.根據權利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，其特徵在於，所述步驟(I)色譜柱的柱溫箱溫度20°C~50°C。
3.根據權利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，其特徵在於，所述步驟(I)蒸發光散射檢測器的漂移管溫度為60°C~110°C，載氣壓力為1.0~5.0bar，氣體流速0.5L/min ~3.5L/min。
4.根據權利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，其特徵在於，所述步驟(I)流動相為有機相/水相，二者體積比為20:80~70:30 ;有機相為色譜級甲醇或乙腈或它們的混合溶液，所述混合溶液中甲醇與乙腈的體積比為10:90~80:20，水相為純化水。
5.根據權利要求1所述銀杏葉提取物中萜類內酯的檢測方法，其特徵在於，所述步驟(I)流動相流速0.1~2.0mL/min ； 梯度洗脫程序:
【文檔編號】G01N30/02GK104034826SQ201410321649
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2014年7月8日 優先權日:2014年7月8日
【發明者】孫蓉, 尹小華, 呂署一, 李丁, 肖志勇 申請人:上海信誼百路達藥業有限公司