從人工栽培的紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法

2023-05-05 06:10:46 2

專利名稱：從人工栽培的紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法
技術領域：
本發明內容屬於生化物品製備技術領域,涉及一種從人工栽培的紅豆 杉枝葉中提取紫杉醇的方法。
背景技術：
紫杉醇(paclitaxel， taxol)是一種由紅豆杉科(Taxaceae)紅豆杉屬 植物的樹皮、枝葉提取的化學結構複雜、作用機制獨特的抗腫 瘤藥物。天然紫杉醇的來源極為有限，其主要來源於紅豆杉或紫杉樹皮 (Wani等，J. Am. Chem. Soc. 1971， 93， 2325)。紅豆杉樹種生長極其緩慢， 一顆生長百年的老樹一般只能剝25 kg樹皮，若提取1 kg純紫杉醇提供1 萬2千例癌病患者使用，相當於需3萬株紅豆杉樹的樹皮。為了得到紫杉 醇，國內外開展了種植矮壯化的紅豆杉樹、組織培養、半合成和全合成紫 杉醇等方法獲取紫杉醇原料。但組織培養法獲得的產量很小，培養液價格
昂貴，全合成得率很小，且療效不及天然源紫杉醇，成本高，難以商業化 應用。半合成方法仍然需要天然紅豆杉分離出的紫杉醇半合成的前體10-去乙醯基巴卡丁III等作為起始原料。為了保護天然的紅豆杉資源，維護 生態環境，用生長快的、有效成分含量較高的人工種植的紅豆杉提取紫杉 醇是最為有效的途徑(高錦明等，紫杉醇資源開發研究，西北林學院學報, 1997， 12 (3): 94;高錦明等，抗癌新藥紫杉醇的構效關係，西北農業大 學學報，1997， 25 (5): 96;高錦明等，紫杉醇資源、生物活性和化學合
4成，世界林業研究，1997, 10 (6): 38; Gragg等，J.Nat. Prod., 1993, 56, 1657; Kingston, Phytochemistry, 2007, 68, 1844)。
Miller (J. Org. Chem.， 1981， 46， 1469)用(7tay窗腿/麵)樹 幹和樹葉，用甲醇提取、濃縮，在己烷和水中分配，用氯仿萃取，濃縮, 經幾次矽膠柱色譜分離；經二次逆流分配；最後用HPLC分離純化得到 184個組分，所得的紫杉醇純度99.1%。整個提取純化過程有八個步驟。 Senilh等(J. Nat. Prod., 1984， 47, 131)用甲醇提取歐洲紫杉(71 6accato) 樹皮，濃縮後，在二氯甲烷和水中分配，經矽膠柱色譜分離，然後經氧化 鋁柱色譜分離;再經中壓矽膠柱色譜分離;最後用製備高壓液相色譜純化。
Nalr (USP 5,279,949, 1994)發明了用紅豆杉(T. wW/a cv. Hicksii) 的新鮮枝葉提取紫杉醇及其類似物。新鮮枝葉用含水甲醇提取，水溶性組 分離心與含紫杉醇的固體沉澱分離，過濾後的濾液用活性炭脫色用硅藻土 過濾，濾液揮發至幹，經矽膠柱，液相分離得到產物。或者將硅藻土過濾 的濾液真空下脫甲醇後，用乙酸乙酯萃取，萃取液濃縮，經矽膠柱純化得 到產物。Nalr (USP5，478，736, 1995)用甲醇和丙酮萃取新鮮枝葉，可得 到較高的紫杉醇產量。二次柱色譜分離，低壓矽膠柱色譜分離粗紫杉醇， 反相色譜最後純化。
Polysciences公司從太平洋紫杉樹皮中分離紫杉醇。先甲醇或乙醇提 取樹皮，濃縮；濃縮液用二氯甲烷萃取，濃縮乾燥至粉末；粉末用丙醇和 裡格羅因(1: l)溶解，不溶組分過濾除去；濾液濃縮，溶於30%丙醇裡 格羅因溶液，經Fl0risil柱過濾；從柱中流出的紫杉醇組分結晶純化二次;
結晶的紫杉醇再用矽膠柱中分離，結構相似的產物三尖杉寧鹼從紫杉醇中分離出來；從柱中流出的紫杉醇重結晶二次，得到紫杉醇。Rao等(USP 5,380,916, 1992)介紹了用臭氧處理難分離的雜質組分三尖杉寧鹼而得紫 杉醇。經反相製備色譜法分離粗產品後，仍含有很難分開的三尖杉寧鹼， 通入臭氧氧化後，經過反相製備色譜分離得到純度較高的紫杉醇。該方法 要使用二甲硫醚處理溶液中殘留的臭氧及重結晶得到紫杉醇純品。 Kingston等(J. Nat Prod.， 1992 ， 55， 259)使用氧化劑四氧化鋨處理紫 杉醇和三尖杉寧鹼的混合物。紫杉醇不與四氧化鋨反應，三尖杉寧鹼的 C-13側鏈末端雙鍵被氧化，易與紫杉醇分開。Durand (USP 5,723,635， 1998)利用離心分配色譜法分離純化紫杉醇。用ds反相色譜柱從粗產物 中分離純化紫杉醇， 一次處理量較大。主要有四個步驟在製備規模下， 用反相色譜法處理紫杉醇粗提物；從吸附劑上洗脫紫杉醇和其它產物；從 洗脫的柱子中回收紫杉醇和類似物；使用臭氧處理最終產物，從而分離除 去紫杉醇的類似物。
Rao (USP 5,380,916， 1995)用95%甲醇提取樹皮，濃縮，氯仿和水 萃取。連續萃取3次，氯仿相濃縮，在C,8填料層析柱上用乙腈和水梯度 洗脫，分段接收含紫杉醇較髙的餾分，用熱水稀釋後，用反相柱再收集餾 分，經重結晶得到高純度的紫杉醇及其類似物。陳建民等發明了一種從種 植紅豆杉葉枝中製備紫杉醇的方法(ZL 1427002)。用乙醇浸泡，乙酸丁 酯萃取，濃縮，得到1%紫杉醇粗原料，再經矽膠柱層析，以環己垸和乙 酸乙酯梯度洗脫，收集含10%以上紫杉醇的餾分，濃縮後經反相高壓液 相色譜法分離，得到高純度紫杉醇。
對於紅豆杉提取紫杉醇的分離純化多為使用低級醇溶劑浸提樹皮，提取液先進行脫脂後氯仿萃取；氯仿層濃縮，經柱層析得到紫杉醇及其類似 物。常用的色譜柱層析法需要多次正、反相液相色譜法、離心分配色譜法 等，還包括結晶法、氧化去雜質法。分離過程步驟繁瑣，達到99%以上 純度的紫杉醇一次得率較低。溶劑、洗脫液等毒性大，造成嚴重的汙染。 此外，紫杉醇與三尖杉寧鹼、7-表-紫杉醇和7-表-10-去乙醯基紫杉醇的性 質相似，難以分離(Yang等，J. Chromatogr. A， 1998， 813, 201)。 從紫杉醇樣品中有效剔除這些結構類似物是提取高純度紫杉醇的關鍵所在。

發明內容
本發明的目的是提供一種從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的 方法，該方法工藝簡單，易於分離掉紫杉醇的結構類似物，所得的紫杉醇 純度高。
為達到上述目的，本發明採用的技術方案為
一種從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其依次包括如下
A、 將紅豆杉枝葉粉碎後，在40 50'C下用75% 95%甲醇浸泡3次，每 次4小時，將濾液濃縮後用體積比為4 : 1 1 : 1石油醚/水萃取；分出 下層水相；
B、 用乙酸丙酯萃取下層水相；乙酸丙酯萃取液濃縮，得到紫杉醇含量在 2% 5%以上紫杉醇粗提物；
C、 將2%以上紫杉醇粗提物同矽膠混合製備幹樣，填充了幹樣到矽膠
(200 300目)的色譜柱上端，分別用4 : i的石油醚-乙酸乙酯、i:i的石油醚-乙酸乙酯、i: 5的石油醚-乙酸乙酯及乙酸乙酯洗脫，按段
將紫杉醇含量在15% 40%之間的洗脫液餾分集中起來，經濃縮、幹 燥，製得中間產品； D、將步驟C所得的中間產品用體積比為30 : 70的乙腈和含0.1%三氟醋 酸水溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為d8矽膠填料，以含三氟醋 酸十八垸基吡啶季銨鹽的乙腈和含0. 1%三氟醋酸水為流動相，收集洗 脫液，濃縮，析出紫杉醇晶體和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽固體的混 合物。
此混合物經離心，水洗，再離心，水洗，過濾，冷凍千燥，得到純度為 99.6%以上的紫杉醇。
上述的洗脫液和流動相中的溶劑經過精餾後可重複使用。 上述的步驟A中人工栽培的紅豆杉為曼地亞紅豆杉、雲南紅豆杉或東北紅 豆杉。
上述的步驟D中的三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽濃度為2 15 mg/mL。 上述的步驟D中的流動相乙腈-0.1%三氟醋酸水的體積比為30 : 70。 上述的步驟D所得到的三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽，經過水洗，離心過
濾，冷凍乾燥後可重複使用。 本發明相對於現有技術，其優點如下
該方法工藝簡單、成本低、溶劑、洗脫劑可以回收，適合於工業化生 產，且保護了植物資源。


圖1是從紅豆杉枝葉中提取純化紫杉醇的工藝流程圖；圖2是紅豆杉枝葉粗提物的高效液相色譜圖； 圖3是紫杉醇含量在15%以上的高效液相色譜圖4是紫杉醇晶體和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的高效液相色譜圖； 圖5是分離純度99. 6%以上紫杉醇的高效液相色譜圖。
具體實施例方式
本發明是以人工栽培的曼地亞紅豆杉、雲南紅豆杉、南方紅豆杉或東 北紅豆杉的枝葉為原料，經甲醇浸泡提取、依次用石油醚和乙酸丙酯萃取， 然後用常壓正相矽膠柱層析法及反相高壓液相色譜分離法得到高純度紫 杉醇。
本發明所採用的技術方案是:一種從人工栽培的紅豆杉枝葉中提取紫 杉醇的方法，依次包括如下步驟
(1 )將人工栽培的三年紅豆杉的樹枝葉粉碎後，在40 5(TC下，用75 95%的甲醇浸泡三次，每次4小時，合併濾液，濃縮，後用體積比為 4:l石油醚/水萃取，分出下層，用等體積的乙酸丙酯萃取下層水相；
(2) 將乙酸丙酯萃取液濃縮，得到紫杉醇含量在2%以上的紫杉醇濃縮 液；
(3) 將2%以上的紫杉醇濃縮液與矽膠伴樣，並填充於矽膠柱上，用洗 脫液梯度洗脫，分別加入石油醚和乙酸乙酯(4:1)、石油醚和乙酸乙 酯(1:1)、石油醚和乙酸乙酯(1:5)、乙酸乙酯，洗脫液流出色譜柱 後分段收集餾分，按段將紫杉醇含量15% 40%之間的洗脫液餾分收 集合併，經濃縮、乾燥，製得中間產品；(4) 將步驟(3)和步驟(4)所得的中間產品用乙腈和含0.1%三氟醋 酸水(30:70)溶解，用d8反相高壓液相色譜分離，以含三氟醋酸十八 烷基吡啶季銨鹽的乙腈和含0.1%三氟醋酸水(30:70)為流動相，而後 將分離後的含紫杉醇的流動相濃縮到一定體積，析出紫杉醇晶體和三氟 醋酸十八烷基吡啶季銨鹽固體的混合物。
(5) 將步驟(4)所得的紫杉醇和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的混合 物，經
離心，水洗，再離心，過濾，冷凍乾燥，得到純度達99.6%以上的紫杉醇。
步驟(i)中的紅豆杉為曼地亞紅豆杉(r.附e^a)、雲南紅豆杉(r.
yunnanensis)、或東北紅豆杉(r. c譁/cfato)。
本發明提取紫杉醇的方法過程如圖1所示。圖1所示的工藝過程分為三 個過程。
第一過程利用人工栽培的新鮮或乾燥的紅豆杉枝葉粉碎後，在40 50。C用75% 95%甲醇浸泡三次，每次4小時，原料和甲醇的投料體積 比1:3 1:8浸泡液過濾去除濾渣，濾液(HPLC分析見圖2)置於旋轉蒸 發儀或濃縮罐中濃縮，加入體積比為1 : l石油醚/水萃取，攪拌30min, 放置約20 30 min，形成上層淡綠色清液及下層深綠色膠狀液，分出上 層石油醚相，連續萃取3次。下層水相用同體積的乙酸丙酯萃取後，乙酸 丙酯萃取液，放置0.5 1小時後，將乙酸丙酯層與水層分開，取乙酸丙 酯層蒸發濃縮乾燥得到暗綠色或棕色粉末，所得紫杉醇含量在2%以上。第二過程將紫杉醇含量在2%以上的粗提物，用丙酮溶解，與矽膠
(200-300目)混合製備幹樣。將幹樣置於矽膠柱上端，用石油醚和乙酸 乙酯的混合溶劑梯度洗脫，用相同體積的容器接收得到相同體積的餾分 l-20。餾分9-15蒸乾後，為黃色或綠黃色固體粉末,其紫杉醇含量在15.0 40.0%之間(圖3)。該過程中紫杉醇含量在15.0 40.0%之間的餾分合 並蒸乾，用乙腈和含0.1%三氟醋酸水(30:70)溶解，進行紫杉醇的下一 步純化。
第三過程用018反相高效液相色譜柱，注入25%紫杉醇粗提物10 克乙腈水溶液，以含三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的乙腈和含0.1%三氟 醋酸水(30:70)為流動相，承接得到餾分1-35。該過程中，餾分15-25 在旋轉蒸發儀中真空濃縮到一定體積後，析出紫杉醇和三氟醋酸十八烷基 吡啶季銨鹽的混合物(圖4)，再通過離心，水洗，再離心，過濾，冷凍 乾燥，得到純度為99.9%以上的紫杉醇(圖5)。
本發明方法與現有的紫杉醇提取工藝相比步驟少、工藝簡單、生產 成本低，有利於紫杉醇的工業化大生產，且不破壞天然資源、有利於生態
環境保護；不使用毒性較大的試劑、溶劑，符合環保要求；紫杉醇的一次 得率高，純度可達99.6%以上。
本發明所用的石油醚、乙酸丙酯、乙酸乙酯、甲醇、三氟醋酸、醋酸、 三氟醋酸十八垸基吡啶季餒鹽等均為分析純。乙腈為HPLC級，使用的 水為HPLC級和去離子水。
原料、中間產品及紫杉醇的分析均採用美國Waters高壓液相色譜儀， 色譜柱為美國Waters產品SymmetryShield RP 18矽膠色譜柱(50 x 4.6mm),安裝加拿大Missisawaga公司生產的Warters產品SymmetryShidd Cw保護柱(3.9 x20 mm),填料尺寸均為3.5阿，Waters 996 二級管陣列 檢測器(210 500 nm),流動相為乙腈+水+0.P/。TFA,乙腈比例從20 %上升到80%，流速為lml/min,自動進樣，進樣量為10^iL。色譜柱用 恆溫箱，柱溫為2(TC,計算機操作，色譜軟體為Millennium32。
高純度紫杉醇製備採用美國Waters高壓液相色譜儀系統，色譜柱為 美國JM Science公司生產的Shiseido Capcell Pak C18,填料尺寸為5阿、 色譜柱尺寸為4.6 mm x 250 mm或4.6 cm x 150 cm，分析波長為227 nm， 流動相為含三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的乙腈+0.1。/。TFA水(30+70)， 流速為1.0ml/min，自動進樣，每20min收集。
高分辨質譜分析在英國Micromass公司生產的Micromass Waters Q-TOF Global質譜儀上進行，十ESI源。 實施例l:
如圖l所示，從人工栽培的紅豆杉枝葉中提取紫杉醇的方法為 (1)取人工栽培的曼地亞紅豆杉幹枝葉1 kg,用破碎機粉碎，5L圓 底燒瓶中，加入90%甲醇3 L，攪拌均勻，在40 5(TC下浸泡三次，每 次4 6小時。放置過程中攪拌3 6次，浸泡完成後，過濾，去除廢渣， 將濾液濃縮至呈淺綠色粘稠液，體積約為50ml。向溶液加入2L石油醚, 混合均勻後加入2L水，攪拌30min,放置約25 min,形成上層淡綠色清 液及下層深綠色膠狀液，分出上層石油醚相，如此連續萃取3次，除去脂 溶性色素等雜質。向分出的下層水相中加入2L乙酸丙酯，攪拌30min， 放置約25min，連續萃取3次，合併三次乙酸丙酯萃取液。(2) 將乙酸丙酯萃取液減壓蒸發至幹，形成棕色粉末，重量為12.6 克，經測定紫杉醇含量為3.28%,下層混懸液中不含紫杉醇。
(3) 將含量3.28%以上乙酸丙酯粉末，用丙酮溶解，同矽膠混合製備 幹樣。幹樣置於矽膠柱上端，分別用0.3 L的石油醚-乙酸乙酯(4 : 1)、 0.3 L的石油醚-乙酸乙酯(l : 1)、 0.5 L的石油醚-乙酸乙酯(l : 5)和0.2 L乙酸 乙酯洗脫，用相同體積的容器接收得到相同體積的餾分1-20。餾分6-8 中，含有較多7-表-10-去乙醯基紫杉醇及7-表紫杉醇，餾分9-15蒸乾後， 為黃色或綠黃色固體粉末。餾分9-15中紫杉醇含量在15.0% 35.0%之間。
(4) 稱取含量27.5%紫杉醇樣品10克，用50 ml的乙腈和含0.1%三 氟醋酸水(30:70)溶解，經ds反相高壓液相色譜法分離純化，加入27.5 %紫杉醇乙腈-水溶液，以含三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽(3mg/mL) 的乙腈和含0.1°/。三氟醋酸水(30:70)為流動相，流速為lml/min，收 集餾分1-3S。餾分1-14蒸乾後分析表明為雜質組分，含有較多量三尖杉 寧鹼，少量紫杉醇(2.8%以下)及7-表-10-去乙醯基紫杉醇。餾分15-25, 濃縮到一定體積,析出紫杉醇晶體和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽固體的 混合物。
(5)將步驟(4)所得到的紫杉醇和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的混 合物，通過離心，水洗，離心，過濾，冷凍乾燥，如此重複3次，得到產 品2.82克。HPLC測定表明，紫杉醇純度為99.9%以上(圖5)。
洗脫液和流動相中的溶劑經過精餾後可重複使用。水洗所得的三氟醋 酸十八烷基吡啶季銨鹽，濃縮，冷凍乾燥後可重複使用。該產品為白色結晶，旋光度問025=-54.6((:=0.2， MeOH),熔點為236 237'C， 500 MHz核磁共振圖譜驗證與紫杉醇標樣相同，高分辨質譜 (HR-ESI-MS) w/2 854.3397([M+H]+)，相應的分子式為C47H51N014。該產 品與標準樣品在HPLC分析中保留時間一致。 實施例2.*
(1)取人工栽培的3年樹齡的曼地亞紅豆杉的鮮枝葉100kg,用破 碎機粉碎後置於2mS的提取罐中，然後加入卯X甲醇550L,攪拌均勻， 在40 5(TC下間歇攪拌浸泡4小時。浸泡完成後，放出提取罐中的溶液， 然後用同樣方法浸泡3次。放出的甲醇溶液合併，置於濃縮罐中濃縮，至 體積約為25L。提取罐中，向該溶液加入約250L石油醚，混合均勻後加 250L水攪拌l小時，放置約30min形成兩層，分出下層。向下層溶液加 入約250 L乙酸丙酯，混合均勻後，攪拌1小時，放置約30 min形成兩 層。
(2) 放出下層乙酸丙酯萃取液，減壓蒸發至幹，形成棕色粉末1032 克，經測定紫杉醇含量為3.31%。
(3) 將含3.31%的紫杉醇棕色粉末lkg,用丙酮溶解，同2kg的矽 膠混合製備幹樣。幹樣置於裝有10 kg矽膠柱上，分別用30 L的石油醚-乙酸乙酯(4 : 1)、 30 L的石油醚-乙酸乙酯(l : 1)、 50 L的石油醚-乙酸乙 酯(l : 5)和20 L乙酸乙酯洗脫液，每10 L收集一個餾分，用相同體積的 容器接收得到相同體積的餾分1-20。餾分9-15蒸乾後，為黃色或綠黃色 固體粉末。餾分9-15中紫杉醇含量在15.0%~30.0%之間。(4) 將紫杉醇含量在20.3%的樣品，溶解於乙腈和含0.1%三氟醋酸 水(30 : 70)中，經d8反相高壓液相色譜法分離，以含三氟醋酸十八垸 基吡啶季銨鹽(5mg/mL)的乙腈和含0.1%三氟醋酸水(30 : 70)為流 動相，流速為lml/min，收集餾分1-35。餾分15-25,濃縮，得到紫杉醇 晶體和三氟醋酸十八垸基吡啶季銨鹽固體的混合物。
(5) 將此紫杉醇和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽混合物。通過離心， 水洗(300 ml)，再離心，過濾，如此重複3次，冷凍乾燥。得到純度為 99.7%以上的紫杉醇，收率為91%。
權利要求
1、一種從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其特徵在於依次包括如下步驟A、將紅豆杉枝葉粉碎後，在40～50℃下用75％～95％甲醇浸泡3次，每次4小時，將濾液濃縮後用體積比為4∶1～1∶1石油醚/水萃取；分出下層水相；B、用乙酸丙酯萃取下層水相；乙酸丙酯萃取液濃縮，得到紫杉醇含量在2％～5％以上紫杉醇粗提物；C、將2％以上紫杉醇粗提物同矽膠混合製備幹樣，填充了幹樣到矽膠(200～300目)的色譜柱上端，分別用4∶1的石油醚-乙酸乙酯、1∶1的石油醚-乙酸乙酯、1∶5的石油醚-乙酸乙酯及乙酸乙酯洗脫，按段將紫杉醇含量在15％～40％之間的洗脫液餾分集中起來，經濃縮、乾燥，製得中間產品；D、將步驟C所得的中間產品用體積比為30∶70的乙腈和含0.1％三氟醋酸水溶解，用高壓液相色譜分離，色譜柱為C18矽膠填料，以含三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽的乙腈和含0.1％三氟醋酸水為流動相，收集洗脫液，濃縮，析出紫杉醇晶體和三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽固體的混合物。此混合物經離心，水洗，再離心，水洗，過濾，冷凍乾燥，得到純度為99.6％以上的紫杉醇。
2、 根據權利要求1所述的從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法， 其特徵在於所述的洗脫液和流動相中的溶劑經過精餾後可重複使用。
3、 根據權利要求1所述的從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其特徵在於步驟A中人工栽培的紅豆杉為曼地亞紅豆杉、雲南紅豆 杉或東北紅豆杉。
4、 根據權利要求1所述的從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其特徵在於步驟D中的三氟醋酸十八垸基吡啶季銨鹽濃度為2 15 mg/mL。
5、 根據權利要求1所述的從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其特徵在於步驟D中的流動相乙腈_ 0. 1%三氟醋酸水的體積比為 30 : 70。
6、 根據權利要求1所述的從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法，其特徵在於步驟D所得到的三氟醋酸十八烷基吡啶季銨鹽，經過水 洗，離心，過濾，冷凍乾燥後可重複使用。
全文摘要
本發明是一種從人工栽培的紅豆杉枝葉中製備紫杉醇的方法。為了得到紫杉醇，國內外開展了種植矮壯化的紅豆杉樹、組織培養、半合成和全合成紫杉醇等方法獲取紫杉醇原料，但組織培養法獲得的產量很小，培養液價格昂貴，全合成得率很小，且療效不及天然源紫杉醇，成本高，難以商業化應用。本發明是以人工栽培的曼地亞紅豆杉、雲南紅豆杉、南方紅豆杉或東北紅豆杉的枝葉為原料，經甲醇浸泡提取、依次用石油醚和乙酸丙酯萃取，然後用常壓正相矽膠柱層析法及反相高壓液相色譜分離法得到99.6％以上的高純度紫杉醇。該方法工藝簡單、成本低、溶劑、洗脫劑可以回收，適合於工業化生產，且保護了植物資源。
文檔編號C07D305/14GK101560197SQ20091002275
公開日2009年10月21日 申請日期2009年6月1日 優先權日2009年6月1日
發明者張保健, 王俊儒, 高錦明 申請人:西北農林科技大學