一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器的製作方法
2023-05-05 20:04:11 2
專利名稱：一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器的製作方法
技術領域：
本實用新型涉及一種用於挑取幹細胞單克隆的口吸器。
背景技術：
生命科學是20世紀發展最為迅速的學科之一，已成為自然科學中最為引人注目 的領域。幹細胞研究是21世紀生命科學領域的一大熱門課題，研究的熱點首推胚胎幹細胞 (Embryonic Stem cells，ES細胞)。1999年末美國《kience》將人類胚胎幹細胞研究成 果評為當年世界十大科技進展之首，2000年，((Time))周刊將其列為20世紀末世界十大科 技成就之首，並認為胚胎幹細胞和人類基因組將同時成為新世紀最具發展和應用前景的領 域。幹細胞如此受到重視是基於其研究對人類生命健康有重大意義。胚胎幹細胞(Embryonic Stem Cells, ES細胞)是從附植前早期胚胎內細胞團 (ICM)或附植後原始生殖細胞(Primordial Germ Cells,PGCs)分離克隆出來的一種具無限 增殖能力和全向分化能力的細胞，即這些細胞可以通過細胞分裂維持自身細胞群的大小， 同時又可以在一定條件下進一步分化成為各種不同的組織細胞，從而構成機體各種複雜的 組織器官，並具有形成嵌合體的能力(包括生殖系嵌合體)。ES細胞是研究動物胚胎早期 發生、細胞分化、基因調控等發育生物學基本問題的理想模型，也是組織工程、藥理學和臨 床醫學研究的重要工具。目前，實驗室內獨立製備ES細胞面臨諸多的技術難點，其中之一 是內細胞團形成單克隆的挑取。
實用新型內容本實用新型是為了解決在製備ES細胞的過程中難以完成挑取ES細胞單克隆的問 題，從而提供一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器。一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，它包括一號橡膠導管、塑料導管、二號 橡膠導管和玻璃針頭，所述一號橡膠導管的一端是口吸端，所述一號橡膠導管的另一端與 塑料導管的一端連通，所述塑料導管的另一端與二號橡膠導管的一端連通，二號橡膠導管 的另一端與玻璃針頭的基體連通，玻璃針頭的針尖是小鼠幹細胞單克隆的挑取端；所述塑 料導管內填充脫脂棉。本實用新型在使用時，將玻璃針頭的針尖伸入小鼠幹細胞團內實現克隆的挑取。 本實用新型操作簡單，吸取成功率較高。
圖1是本實用新型的結構示意圖；圖2是具體實施方式
三的結構示意圖。
具體實施方式
具體實施方式
一、結合圖1說明本具體實施方式
，一種用於挑取小鼠幹細胞單克 隆的口吸器，它包括一號橡膠導管1、塑料導管2、二號橡膠導管3和玻璃針頭4，所述一號橡膠導管1的一端是口吸端，所述一號橡膠導管1的另一端與塑料導管2的一端連通，所述 塑料導管2的另一端與二號橡膠導管3的一端連通，二號橡膠導管3的另一端與玻璃針頭 4的基體41連通，玻璃針頭4的針尖42是小鼠幹細胞單克隆的挑取端；所述塑料導管2內 填充脫脂棉。本實施方式中，玻璃針頭4的針尖在製備過程中，在酒精燈外焰燒2-3秒，使其開 口端平滑，避免劃傷細胞。進行小鼠胚胎幹細胞(ES)單克隆挑取方法包括以下操作1、飼養單層的製備(1)將冷凍後的MEF(小鼠胚胎成纖維細胞製作的飼養層細胞)進行解凍並培養至 80% 90% (鋪滿培養皿底部)，換成含10 μ g/ml絲裂黴素C的培養液，在培養箱中作用 2 5小時。(2)事先用明膠覆蓋培養板孔0. 5小時，使用前吸去明膠。去除飼養層細胞培養液 中的絲裂黴素C，胰酶消化，IOOOrp離心5分鐘，並接種到預先用明膠鋪底的培養板孔中，在 溫度為37°C、濃度為5%的(X)2下，飽和溼度的培養箱中培養。2、小鼠胚胎幹細胞分離(一)實驗用胚胎的獲得(1)下午15:00挑選10隻雌性昆明小鼠，並腹腔注射PMSG10IU/只，4 後腹腔注 射HCG10IU/只，同時與雄鼠1 1合籠，次日晨8:00左右檢查陰栓並標記為0. 5dPc。(2) 3. 5天後將小鼠頸椎脫白法處死，然後打開腹腔，暴露子宮，顯微鏡下利用操作 液(PBI)衝洗子宮，獲得囊胚。(二)分離方法(1)將囊腔充分擴展的胚胎在PH為2的酸液中處理30s左右，去掉透明帶，在無 鈣鎂離子的磷酸鹽緩衝液(PBS)中清洗，然後將去透明帶的囊胚移植到製備好的飼養單層 上，換上ES培養基。(2)48小時左右胚胎貼壁，滋養層細胞舒展開並貼附著培養皿表面生長，內細胞團 位於滋養層細胞層的中央部位，向上隆起生長。(3)繼續培養2至4天，內細胞團繼續增大，觀察到內細胞團明顯隆起生長時利用 口吸管將其挑出。(4)用末埠徑比內細胞團塊稍大的自製口吸器的毛細針挑起內細胞團，吸至消 化液小滴內。(5)將內細胞團逐一吸至消化液小滴，在室溫下作用1至3分鐘。改用末埠徑比 內細胞團小的自製口吸器的毛細針，輕輕吸吹內細胞團塊，使之分散至3至4個細胞在一起 的小團塊。(6)將分散的內細胞團小塊吸至新製備的添加ES培養基的飼養單層上進行培養， 3-4天可獲得小鼠胚胎幹細胞(ES)克隆。
具體實施方式
二、本具體實施方式
與具體實施方式
一所述的一種用於挑取小鼠幹 細胞單克隆的口吸器的區別在於，它還包括吸嘴5，所述吸嘴5為一段塑料管，所述吸嘴5與 一號橡膠導管1的口吸端連通。
具體實施方式
三、結合圖2說明本具體實施方式
，本具體實施方式
與具體實施方式
一或二所述的一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器的區別在於，玻璃針頭4的針尖 42與玻璃針頭4的基體41之間的角度為90° 180°。本實施方式更方便深入到培養皿中吸取內細胞團形成的克隆。
具體實施方式
四、本具體實施方式
與具體實施方式
一所述的一種用於挑取小鼠幹 細胞單克隆的口吸器的區別在於，玻璃針頭4的針尖42與玻璃針頭4的基體41之間的角 度為120°。
權利要求1.一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，其特徵是它包括一號橡膠導管(1)、塑 料導管O)、二號橡膠導管C3)和玻璃針頭G)，所述一號橡膠導管(1)的一端是口吸端，所 述一號橡膠導管(1)的另一端與塑料導管O)的一端連通，所述塑料導管O)的另一端與 二號橡膠導管(3)的一端連通，二號橡膠導管(3)的另一端與玻璃針頭(4)的基體連 通，玻璃針頭(4)的針尖0 是小鼠幹細胞單克隆的挑取端；所述塑料導管O)內填充脫 月旨棉。
2.根據權利要求1所述的一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，其特徵在於它還 包括吸嘴(5)，所述吸嘴(5)為一段塑料管，所述吸嘴(5)與一號橡膠導管(1)的口吸端連通。
3.根據權利要求1或2所述的一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，其特徵在於 玻璃針頭的針尖G2)與玻璃針頭的基體Gl)之間的角度為90° 180°。
4.根據權利要求3所述的一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，其特徵在於玻璃 針頭的針尖G2)與玻璃針頭的基體Gl)之間的角度為120°。
專利摘要一種用於挑取小鼠幹細胞單克隆的口吸器，涉及一種用於挑取幹細胞單克隆的口吸器，解決了在獨立製備ES細胞的過程中難以完成挑取ES細胞單克隆的問題。它的一號橡膠導管的一端是口吸端，一號橡膠導管的另一端與塑料導管的一端連通，所述塑料導管的另一端與二號橡膠導管的一端連通，二號橡膠導管的另一端與玻璃針頭的基體連通，玻璃針頭的針尖是小鼠幹細胞單克隆的挑取端；塑料導管內填充脫脂棉。本實用新型適用於製備小鼠幹細胞單克隆。
文檔編號C12M1/26GK201908091SQ20102069350
公開日2011年7月27日 申請日期2010年12月31日 優先權日2010年12月31日
發明者梁洋 申請人:東北林業大學