一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法

2023-05-09 08:29:41

一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法
【專利摘要】本發明公開一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法。具體步驟為：在反應罐中加入糖漿溶液攪拌，冷卻；加入三氯化鐵溶液攪拌，加入氫氧化鈉溶液，生成棕紅色凝膠；加入氫氧化鈉溶液所得沉澱物加入沉澱劑洗滌兩次，乾燥，即得多糖鐵複合物。本發明製備方法反應步驟少，反應條件溫和，重現性很好，工藝條件可靠，不需要製冷設備；反應中沒有廢氣體產生，減少了工業化生產中反應罐內壓力過大而又可能產生的爆炸性危險。本發明多糖鐵複合物含量測定方法準確度高，精密度好，專屬性、耐用性強，滿足線性要求，方法準確、靈敏且簡便。
【專利說明】一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種複合物的製備工藝及其質量檢測方法，特別涉及一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法。
【背景技術】
[0002]貧血是一種常見病，其類型大致可分為缺鐵性貧血、溶血性貧血、再生障礙性貧血和失血性貧血。導致貧血的主要原因是機體可利用鐵含量不足或利用障礙、骨髓造血功能減弱，這些因素均可導致紅細胞生成減少。
[0003]缺鐵性貧血是世界上最常見的兒童營養缺乏病之一，不僅影響兒童生長發育，而且影響免疫、腦功能、智力發育等，我國小兒缺鐵性貧血患病率為57.6%，目前國內外主要用鐵劑治療。缺鐵性貧血研究顯示，缺鐵性貧血嬰幼兒的智能發育障礙，補鐵後可恢復正常。
[0004]多糖鐵複合物是一種低分子多糖和鐵的有機複合物，其鐵元素含量為40—46%，具有穩定的高水溶性，能以分子形式完整地吸收，其吸收率高。多糖鐵複合物不含游離鐵離子，因此對胃腸黏膜無腐蝕和刺激作用。多糖鐵複合物在體內以分子形式存在，結構與腸黏膜細胞中的鐵蛋白核心 極為相似，能很容易地被小腸黏膜細胞吸收，其通過胃腸黏膜吸收閥調節血漿濃度，不易致急性中毒。多糖鐵複合物可防治缺鐵性貧血，也可用於預防嬰幼兒、兒童、青少年、婦女(尤其是孕婦)等特殊人群的缺鐵性貧血。
[0005]目前公開的生產多糖鐵的製備工藝，對生產產率的提高方面還不夠理想，因此有必要對多糖鐵複合物的工藝進行研究和改進。

【發明內容】

[0006]本發明目的在於公開一種多糖鐵複合物的製備工藝及其質量檢測方法。
[0007]本發明目的是通過如下方案實現的:
[0008]A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在10-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌；在60-90分鐘範圍內，連續加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，加熱升溫至55-85°C，充分攪拌，恆溫90分鐘以上；
[0009]B.加入等體積的無水乙醇，離心固液分離,所得沉澱物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次，乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0010]本發明多糖鐵複合物製備方法中，反應罐可以是夾層反應罐。
[0011]優選為是夾層搪玻璃反應罐或者夾層鈦反應罐。
[0012]本發明多糖鐵複合物的製備工藝，其特徵在於該方法通過以下步驟實現:
[0013]A:將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在15-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌；在60-90分鐘範圍內，連續加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘，然後加熱升溫至75_85°C，恆溫90分鐘以上；
[0014]B.加入等體積的無水乙醇，離心固液分離，所得沉澱物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次，乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0015]本發明多糖鐵複合物的製備工藝，其特徵在於該方法通過以下步驟實現:
[0016]A.將90~100重量份糖漿和90~100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在15-25°C ;加入90~100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌，在60-90分鐘範圍內，連續加入220~250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120~160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至55~65°C，攪拌15~30分鐘，然後加熱升溫至76~81°C，恆溫90分鐘以上； [0017]B.加入等體積的乙醇，離心固液分離，所得沉澱物再加入40%_80%的乙醇洗滌二次乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0018]本發明多糖鐵複合物的優選製備工藝方法如下:
[0019]A.將97.75重量份糖漿和97.75重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在15-25°C ;加入93重量份三氯化鐵和194重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌在75分鐘內，連續加入244重量份的15%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將123重量份的15%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至60°C，攪拌22分鐘，然後加熱升溫至80。。，恆溫105分鐘；
[0020]B.加入等體積的無水乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0021]本發明多糖鐵複合物的優選製備工藝方法如下:
[0022]A.將92.50重量份糖漿和92.50重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在20°C，加入91重量份三氯化鐵和205重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌在85分鐘內，連續加入225重量份的13%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將150重量份的13%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至62°C，攪拌25分鐘，然後加熱升溫至78°C，恆溫95分鐘；
[0023]B加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0024]本發明多糖鐵複合物的優選製備工藝方法如下:
[0025]A.將95重量份糖漿和91重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在18°C;加入98重量份三氯化鐵和192重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌，在65分鐘內，連續加入225重量份的17%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將122重量份的17%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至56°C，攪拌18分鐘，然後加熱升溫至77°C，恆溫115分鐘；
[0026]B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
[0027]本發明多糖鐵複合物的優選製備工藝方法如下:
[0028]B步驟的乾燥可以為烘乾或者噴霧乾燥。烘乾的優選溫度為60°C以下。
[0029]噴霧乾燥優選為加入純化水或蒸餾水配合10%_15%的溶液，噴霧乾燥。
[0030] 以上方案中的糖漿是一種多糖的混合液，可以為市售糖漿，可以用澱粉為原料，經酶法分解轉化為葡萄糖和多糖的混合液。
[0031]所有本發明的糖漿也可以是低聚糖，可以採用李志達的《雙酶協同作用酶解澱粉製取麥芽低聚糖的工藝研究》中提到的工藝，該文章發表在1994年12月的《中國糧油學報》。第49頁2.2實驗方法:「稱取1009木薯(或玉米)澱粉，加水200ml於500ml反應容器中，攪拌成澱粉漿，加人適量5%Na2Co3調節pH6.2~6.3，再加入適量5%CaCI2溶液，於80~90°C水浴上加熱、攪拌，當漿料溫度上升至澱粉糊化前適當溫度加人a-澱粉酶，邊加熱邊攪拌:繼續升溫至液化溫度(70 土 2V )，恆溫攪拌Smin (累計約15min)，則液化反應結束；冷卻至50°C，調節5.03，再加入a-澱粉酶和枝切酶(異澱粉酶或普魯蘭酶)，攪拌糖化6h，取樣測定糖化液DE值(30 土 I)，判斷反應終點。迅速升溫至95°C 5~IOmin將酶滅活、過濾，濾液加脫色劑脫色，過濾，濃縮得固形物70%糖漿或噴霧乾燥得粉劑。」
[0032]本發明多糖鐵複合物的質量檢測方法包括如下含量測定和/或鑑別方法中的一種或幾種。
[0033]A.鑑別:
[0034]取本發明多糖鐵複合物30_50mg，加水4_6ml使溶解，加氨試液，應無沉澱析出?』另取本發明多糖鐵複合物70-90mg，加水10-30ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應;
[0035]取本發明多糖鐵複合物0.2-0.4g，加水20-40ml使溶解，加鹽酸6_10ml，水浴加熱8-12分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱；
[0036]B.含量測定:
[0037]取本發明多糖鐵複合物0.2-0.4g，精密稱定，置碘量瓶中，加水20_40ml溶解後，加鹽酸8-12ml，置水浴中加熱4-6分鐘，放冷，加碘化鉀試液10_30ml，密塞，在暗處放置10-20分鐘，加水40-60ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液
2.8-3.2ml,繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
[0038]本發明多糖鐵複合物的質量檢測方法優選如下鑑別和/或含量測定方法:
[0039]A.鑑別:
[0040]取本發明多糖鐵複合物40mg,加水5ml使溶解,加氨試液,應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物80mg，加水20ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應；
[0041]取本發明多糖鐵複合物0.3g，加水30ml使溶解，加鹽酸8ml，水浴加熱10分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱；
[0042]B.含量測定:
[0043]取本發明多糖鐵複合物0.3g，精密稱定，置碘量瓶中，加水30ml溶解後，加鹽酸10ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液20ml，密塞，在暗處放置15分鐘，加水50ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液3ml，繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg 的 Fe。
[0044]本發明多糖鐵複合物的質量檢測方法優選如下鑑別和/或含量測定方法:
[0045]A.鑑別:
[0046]取本發明多糖鐵複合物35mg,加水4.2ml使溶解,加氨試液,應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物85mg，加水12ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾 過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應；
[0047]取本發明多糖鐵複合物0.25g，加水38ml使溶解，加鹽酸7ml，水浴加熱9分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱；
[0048]B.含量測定:
[0049]取本發明多糖鐵複合物0.23g，精密稱定，置碘量瓶中，加水25ml溶解後，加鹽酸9ml，置水浴中加熱4分鐘，放冷，加碘化鉀試液15ml，密塞，在暗處放置12分鐘，加水45ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液2.9ml，繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
[0050]本發明多糖鐵複合物的質量檢測方法包括如下鑑別和/或含量測定方法:
[0051]A.鑑別:
[0052]取本發明多糖鐵複合物45mg,加水5.5ml使溶解,加氨試液,應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物75mg，加水28ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應；
[0053]取本發明多糖鐵複合物0.35，加水25ml使溶解，加鹽酸9ml，水浴加熱11分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱；
[0054]B.含量測定:
[0055]取本發明多糖鐵複合物0.35g，精密稱定，置碘量瓶中，加水35ml溶解後，加鹽酸11ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液25ml，密塞，在暗處放置18分鐘，加水55ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液3.1ml,繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg 的 Fe。
[0056]所述本發明多糖鐵複合物為氫氧化鐵與澱粉經水解生成的單糖和低聚糖製成的絡合物，按乾燥品計算，含鐵應為40.0%—46.0%。
[0057]本發明多糖鐵複合物的製備方法反應步驟少，反應條件溫和，多糖鐵複合物合成反應容易掌握，只要按所述的配料和操作條件進行反應即可達到收率。生產多糖鐵複合物的工藝流程簡單，反應條件溫和，重現性很好，工藝條件可靠，不需要製冷設備，具有可操作性；且反應中沒有廢氣體產生,減少了工業化生產中反應罐內壓力過大而又可能產生的爆炸性危險，也不涉及有毒的化學試劑。本發明多糖鐵複合物的製備方法通過大量實驗篩選，確定使用夾層反應罐，加入特定濃度、特定濃度的三氯化鐵水溶液、糖漿後，用自來水冷卻至室溫；在60-90分鐘範圍內，加入特定濃度特定量的氫氧化鈉水溶液。使用高速離心機能夠增加收率,提高產率,雜質較少。通過特定條件的限定,本發明多糖鐵複合物的收率更高。本發明多糖鐵複合物含量測定方法實驗表明，本方法準確度高，精密度好，專屬性、耐用性強，滿足線性要求，方法準確、靈敏且簡便。實驗數據表明本發明多糖鐵複合物工藝製備的複合物均有明顯的升高缺鐵性貧血小鼠的血紅蛋白及紅細胞的作用，能有顯著改善鐵缺鐵性貧血的功能。
[0058]下述實驗例和實施例用於進一步說明但不限於本發明。
[0059]實驗例I本發明多糖鐵複合物製備方法操作過程與工藝條件實驗
[0060]1.配料:
[0061]計劃產量:33 kg ;
[0062]I)原料A:三氯化鐵溶液(32%)
[0063]稱取三氯化鐵93 kg於溶解罐中，加純化水194 kg，溶解，備用。
[0064]2)原料B:氫氧化鈉溶液(15%)
[0065]稱取氫氧化鈉(固鹼)57 kg於溶解釜中，加入310 kg純化水，溶解，備用。
[0066]3)原料C:糖漿(固含量25%)
[0067]稱取糖漿(固含量50%) 97.75 kg於溶解釜中，加97.75 kg純化水，溶解，備用。
[0068]2.反應過程
[0069]I)將配製好的糖漿溶液加入1000L反應罐中，開啟攪拌，攪拌10~15分鐘，使其混合均勻，並通入自來水冷卻；
[0070]2)將配製好的三氯化鐵溶液加入1000L反應罐中；
[0071]3)使用氣動泵連續加入配製好的氫氧化鈉溶液三分之二(加入速度控制在60~90分鐘)，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠(如沒有生成凝膠，繼續補加氫氧化鈉溶液，直到生成凝膠為止)停止加入，取樣測PH值；撤去冷凝水，繼續攪拌40~60分鐘；
[0072]4)剩餘的氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入，繼續攪拌40~60分鐘；
[0073]5)加熱升溫至60°C，取樣並用自來水稀釋，如10分鐘後無渾濁現象則加熱升溫至80°C，否則繼續攪拌，直至符合要求再加熱升溫至80°C ；
[0074]6) 80°C恆溫90~120分鐘，直至PH值穩定在12 ；
[0075]7)停止加熱，通入冷卻水，冷卻至室溫，停止攪拌，將反應液730L轉移至醇沉罐中。
[0076]3.多糖鐵複合物原料藥的粗製
[0077]3.1第一次粗製:
[0078]向反應液中加入乙醇717 kg，使含醇量達50%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，得泥狀多糖鐵複合物粗品100~140 kg ；[0079]3.2第二次粗製
[0080]將第一次多糖鐵複合物粗品用100~133 kg純化水溶解，攪拌均勻，再加入乙醇301 kg，使含醇量達70%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，得泥狀多糖鐵複合物粗品100~140 kg ；
[0081]4.多糖鐵複合物原料藥的精製:
[0082]將所得多糖鐵複合物粗品加入100-120 kg純化水溶解，攪拌均勻，再加入乙醇365kg，使含醇量達75%(V/V)，攪拌60分鐘，離心，收集泥狀多糖鐵複合物純品175~190 kg ；
[0083]5.噴霧乾燥
[0084]將多糖鐵複合物純品加入純化水，按多糖鐵複合物的折乾量，配成10~15%的多糖鐵複合物溶液，利用高速離心噴霧乾燥機進行乾燥。得多糖鐵複合物原料藥成品，33 kg。
[0085]6.生產工藝、質量控制檢查
[0086]6.1反應升溫至60°C時，取樣用自來水稀釋，10分鐘後應無渾濁，通過此實驗判斷反應液中已無凝膠。
[0087]6.2噴霧乾燥出 來的半成品，按照多糖鐵複合物半成品質量標準檢測。
[0088]本發明製備方法通過實驗，在第一次加入鹼液時對鹼液的量、濃度及加入的鹼液速度進行了控制，改變聚合物的結構和組成，並影響凝膠的結構和性質，該反應中多糖鐵複合物主要是通過大聚合物與多糖發生反應，如加入過快或過量則生成固相沉澱物，其在後期的縮聚反應中不會發生脫質子反應。本發明製備方法通過實驗證明反應通入冷卻水進行保護能更穩定地生成多糖鐵複合物；使用高速離心機進行固液分離，提高分離效果；反應時間充分，保證了絡合生成多糖鐵複合物收率；升溫過程採取在55-65°C恆溫15-30分鐘，不易使物料溶解而出現渾濁現象。
[0089]本發明製備方法反應步驟少，反應條件溫和，重現性很好，工藝條件可靠，不需要製冷設備；反應中沒有廢氣體產生，減少了工業化生產中反應罐內壓力過大而又可能產生的爆炸性危險。
[0090]實驗例2本發明製備方法所得多糖鐵複合物抗缺鐵性貧血的作用比較實驗
[0091]1.實驗目的
[0092]通過低鐵飼料餵養與失血造模的方法複製缺鐵性貧血小鼠動物模型，來考察本發明製備方法所製備多糖鐵複合物的藥效學作用.[0093]2.材料與方法
[0094]2.1.材料
[0095]2.1.1 藥物:
[0096]採用實施例1所述製備方法製備的多糖鐵複合物給藥組3組，分別為高劑量組，中劑量組和低劑量組。均由天然藥物研究室提供。
[0097]力蜚能，德國許瓦茲製藥集團美國分公司生產，產品批號435260101
[0098]各給藥組每日灌胃給藥前用2%的CMC-Na配成不同濃度的混懸藥液。模型組和正常對照組灌胃給2%的CMC-Na。
[0099]2.1.2.動物:
[0100]昆明種小鼠，11-13.5g,雄性，120隻
[0101]2.1.3 飼料:
[0102]①一般動物飼料。②低鐵飼料:按低鐵飼料配方配製(其中玉米澱粉54%，奶粉40%，豆油5%，食鹽1%)
[0103]2.1.4.儀器:
[0104]F-820型全自動血球計數儀，由日本貝斯特公司生產；SysnexDB_l樣杯(內塗溶血抑制劑)
[0105]2.1.5.試劑:
[0106]Sysnex溶血素，稀釋液，蒸餾水
[0107]2.2.實驗方法:
[0108]2.2.1.缺鐵性貧血小鼠模型的複製:
[0109]取健康小鼠92隻，8隻作為正常對照，飼餵一般飼料，飲用自來水。另112隻小鼠飼養在不鏽鋼籠中，飼餵低鐵飼料及飲用蒸餾水.連續餵服低鐵飼料3天後，除正常對照組外，每隻小鼠由尾靜脈放血10滴，放血後繼續飼餵低鐵飼料及飲用蒸餾水.於放血五天後，除正常對照組外，每隻小鼠由尾靜脈放血15滴，此次放血24h後取血測血紅蛋白(Hb)、紅細胞〔RBC〕.小鼠Hb由正常12.23±0.79下降至8.23±1.94，並且與正常組小鼠比較有統計意義，同時動物出現精神萎靡，皮毛蓬鬆、不活躍等症狀，證明缺鐵性貧血模型已建成。
[0110]2.2.2.對缺鐵 性貧血小鼠的作用:
[0111]將上述64隻缺鐵性貧血的小鼠進行篩選，Hb在11.00以下的全部入選。將入選的缺鐵性貧血的小鼠根據數據隨機分為6組，分別為力蜚能組(力蜚能組107mg/kg)，模型組(2%的CMC-Na組)，3個多糖鐵組(高劑量組為107mg/kg，中劑量組為53.5mg/kg，低劑量組為26.8mg/kg)。除正常對照組飼餵一般飼料外，其餘各組繼續飼餵低鐵飼料。各組小鼠分別灌胃給予上述藥物，給藥體積0.5ml/20g, I次/d,連續9d,力蜚能組和五個多糖鐵組每日給藥前現用現配，模型組及正常對照組每天給予同體積的2%的CMC-Na.於第8天取血測Hb, RBC,結果採用t檢驗進行統計。
[0112]3.實驗結果
[0113]實驗結果見下表:
[0114]表1多糖鐵複合物對缺鐵性貧血小鼠血紅蛋白及紅細胞的影響
[0115]
【權利要求】
1.一種多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟: A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在10-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌；在60-90分鐘範圍內，連續加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，加熱升溫至55-85 0C，充分攪拌，恆溫90分鐘以上； B.加入等體積的無水乙醇，離心固液分離，所得沉澱物再加入40%-80%的乙醇洗滌二次，乾燥，即得多糖鐵複合物。
2.如權利要求1所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於反應罐是夾層反應罐。
3.如權利要求2所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於反應罐是夾層搪玻璃反應罐或者夾層鈦反應罐。
4.如權利要求1至3任一所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法的A步驟為:將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在15-25度；加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌；在60-90分鐘範圍內，連續加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘， 然後加熱升溫至75_85°C，恆溫90分鐘以上。
5.如權利要求4所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟: A.將90~100重量份糖漿和90-100重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐罐中，反應溫度控制在15-25°C ;加入90-100重量份三氯化鐵和190-210重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌，在60-90分鐘範圍內，連續加入220-250重量份的10%_20%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將120-160重量份的10%-20%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至55-65°C，攪拌15-30分鐘，然後加熱升溫至76-81°C，恆溫90分鐘以上； B.加入等體積的無水乙醇，離心固液分離，所得沉澱物再加入40%-80%的乙醇洗滌二次，乾燥，即得多糖鐵複合物。
6.如權利要求5所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟: A.將97.75重量份糖漿和97.75重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在15-25°C;加入93重量份三氯化鐵和194重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌；在75分鐘內，連續加入244重量份的15%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將123重量份的15%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至60°C，攪拌22分鐘，然後加熱升溫至80°C，恆溫105分鐘； B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
7.如權利要求5所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟: A.將92.50重量份糖漿和92.50重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在20°C ;加入91重量份三氯化鐵和205重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌在85分鐘內，連續加入225重量份的13%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將150重量份的13%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至62°C，攪拌25分鐘，然後加熱升溫至78°C，恆溫95分鐘； B.加入等體積的無水乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入75%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
8.如權利要求5所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法包括如下步驟: A.將95重量份糖漿和91重量份純化水或蒸餾水加入1000L反應罐中，反應溫度控制在18°C ;加入98重量份三氯化鐵和192重量份純化水或蒸餾水配成的溶液，充分攪拌，在65分鐘內，連續加入225重量份的17%氫氧化鈉溶液，在加入過程中，反應液逐漸變稠，最後生成棕紅色凝膠，停止加入，繼續攪拌至反應完畢；將122重量份的17%氫氧化鈉溶液在15分鐘內加入反應罐中，先加熱升溫至56°C，攪拌18分鐘，然後加熱升溫至77°C，恆溫115分鐘； B.加入等體積的乙醇溶液，離心固液分離，第一次離心所得固體加入60%乙醇洗滌沉澱，第二次離心所得固體加入70%乙醇洗滌沉澱，乾燥，即得多糖鐵複合物。
9.如權利要求5至8任一所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法B步驟中的乾燥為烘乾或噴霧乾燥。
10.如權利要求9所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法B步驟中的烘乾溫度在60°C以下。
11.如權利要求9所述的多糖鐵複合物的製備方法，其特徵在於該方法B步驟中的乾燥為加入純化水或蒸餾水配合10%-15%的溶液，噴霧乾燥。
12.如權利要求5-8、10-11任一所述的多糖鐵複合物的質量檢測方法，其特徵在於包括如下鑑別和/或含量測定方法: A.鑑別: 取本發明多糖鐵複合物30-50mg，加水4-6ml使溶解，加氨試液，應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物70-90mg，加水10-30ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應； 取本發明多糖鐵複合物0.2-0.4g，加水20-40ml使溶解，加鹽酸6-10ml，水浴加熱8-12分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱； B.含量測定: 取本發明多糖鐵複合物0.2-0.4g，精密稱定，置碘量瓶中，加水20-40ml溶解後，加鹽酸8-12ml，置水浴中加熱4-6分鐘，放冷，加碘化鉀試液10-30ml，密塞，在暗處放置10-20分鐘，加水40-60ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液.2.8-3.2ml,繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
13.如權利要求12所述的多糖鐵複合物的質量檢測方法，其特徵在於包括如下鑑別和/或含量測定方法: A.鑑別: 取本發明多糖鐵複合物40mg，加水5ml使溶解，加氨試液，應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物80mg，加水20ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應； 取本發明多糖鐵複合物0.3g，加水30ml使溶解，加鹽酸8ml，水浴加熱10分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱； B.含量測定: 取本發明多糖鐵複合物0.3g，精密稱定，置碘量瓶中，加水30ml溶解後，加鹽酸10ml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液20ml，密塞，在暗處放置15分鐘，加水50ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液3ml，繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
14.如權利要求12所述的多糖鐵複合物的質量檢測方法，其特徵在於包括如下鑑別和/或含量測定方法: A.鑑別: 取本發明多糖鐵複合物35mg，加水4.2ml使溶解，加氨試液，應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物85mg， 加水12ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應； 取本發明多糖鐵複合物0.25g，加水38ml使溶解，加鹽酸7ml，水浴加熱9分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱； B.含量測定: 取本發明多糖鐵複合物0.23g，精密稱定，置碘量瓶中，加水25ml溶解後，加鹽酸9ml，置水浴中加熱4分鐘，放冷，加碘化鉀試液15ml，密塞，在暗處放置12分鐘，加水45ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液2.9ml，繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
15.如權利要求12所述的多糖鐵複合物的質量檢測方法，其特徵在於包括如下鑑別和/或含量測定方法: A.鑑別: 取本發明多糖鐵複合物45mg，加水5.5ml使溶解，加氨試液，應無沉澱析出；另取本發明多糖鐵複合物75mg，加水28ml滴加鹽酸並加熱使成淡黃色溶液，放冷後，加過量的氨試液，產生紅棕色沉澱，濾過，沉澱用水洗滌，加鹽酸使溶解，溶液顯鐵鹽的鑑別反應； 取本發明多糖鐵複合物0.35，加水25ml使溶解，加鹽酸9ml，水浴加熱11分鐘，放冷，滴加氫氧化鈉飽和溶液調至鹼性，過濾，濾液滴加鹼性酒石酸銅試液，加熱，漸生成紅色沉澱； B.含量測定: 取本發明多糖鐵複合物0.35g，精密稱定，置碘量瓶中，加水35ml溶解後，加鹽酸I Iml，置水浴中加熱5分鐘，放冷，加碘化鉀試液25ml，密塞，在暗處放置18分鐘，加水55ml，用硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L滴定，至近終點時，加澱粉指示液3.1ml,繼續滴定至藍色消失，並將滴定的結果用空白試驗校正，每Iml的硫代硫酸鈉滴定液0.lml/L相當於5.585mg的Fe。
16.如權利要求12-15所述的多糖鐵複合物的質量檢測方法，其特徵在於本發明多糖鐵複合物為氫氧化鐵與澱粉經水解生成的單糖和低聚糖製成的絡合物，按乾燥品計算，含鐵應為 40.0%—46 .0%。
【文檔編號】A61P7/06GK103641875SQ201310590326
【公開日】2014年3月19日 申請日期:2013年11月20日 優先權日:2013年11月20日
【發明者】王京端, 展莜林, 姜作玲, 張朋言 申請人:青島國風藥業股份有限公司