炎性病況的預防和治療的製作方法
2023-05-09 02:15:06
相關申請的交叉引用
本申請要求於2014年12月9日提交的名為「炎性病況的預防和治療」的美國臨時專利申請第62/089,690號的優先權，將其通過引用整體併入本文。
發明背景
領域
本文一些實施方案涉及在肝臟炎性病況的預防和治療中調節ii型和/或i型nkt細胞的組合物和方法。
相關領域描述
在西方世界，過度飲酒是肝臟疾病的主要原因。在每天消費四杯或更多酒精飲料(對於男性，四杯12盎司的啤酒，四杯葡萄酒或者四盎司烈酒；或者對於女性則數量減半)的個體中，觀察到了肝臟損傷的證據。儘管未完全了解酒精如何損傷肝臟，但是慢性飲酒導致促炎性細胞因子(tnf-α、il6和il8)的分泌、氧化應激、脂質過氧化和乙醛毒性，進而導致炎症、細胞凋亡並最終導致肝細胞的纖維化。
酒精性肝病(ald)具有三個主要階段：酒精性脂肪肝、酒精性肝炎和肝硬化。如果個體戒酒幾周，則特徵為在肝臟中積聚脂肪酸的酒精性脂肪肝通常無症狀且可逆的。在一些情況下，可能經受虛弱、噁心、腹痛、食欲不振以及心神不安。儘管大多數酗酒者顯示出一定程度的脂肪肝，在一些情況下，大量飲酒僅需在少於一周內的時段內每天發生，僅五分之一的酗酒者發展為酒精性肝炎，而四分之一發展為肝硬化。酒精性肝炎的特徵為肝細胞的炎症，並且通常通過戒酒是可逆的。特徵如下的肝硬化通常是不可逆的：炎症、纖維化(細胞硬化)和受損的細胞膜阻止了體內對化學物質的解毒作用，結果導致結疤和壞死。
對於酒精性肝病中肝臟組織損傷在不同階段的細胞和分子機制知之甚少。儘管在一些領域取得了進展，但是仍缺乏阻止該疾病的有效治療方法。這一點部分是由於肝臟在免疫學上以及解剖學上是獨特的器官。例如，儘管肝實質細胞具有代謝功能，而非實質細胞發揮免疫功能。除了實質肝細胞，肝臟含有一些非實質細胞，如均可參與免疫的lsec、庫普弗(kupffer)細胞、樹突細胞、nk細胞和nkt細胞。如何精心安排免疫應答以給予針對酒精誘發的損傷的耐受或免疫是未知的。
發明概述
根據本文的一些實施方案，提供了緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的方法。該方法可以包括向對象施用足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑。
根據本文的一些實施方案，提供了緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的方法。該方法可以包括向對象施用一定量的nkt-2活化劑和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活對象中的ii型nkt細胞。
根據本文的一些實施方案，提供抑制對象中i型nkt細胞介導的組織損傷的方法。該方法可以包括向對象施用有效量的nkt-2活化劑，其中i型nkt細胞的激活降低。
根據本文的一些實施方案，提供了用於緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的組合物。該組合物可以包含足以激活對象中ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑。
根據本文的一些實施方案，提供了用於緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的組合物。該組合物可以包含一定量的nkt-2活化劑和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活對象中的ii型nkt細胞。
本文還提供了許多可選方案：
可選方案1包括緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的方法。該方法可以包括向對象施用足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑。
可選方案2包括可選方案1的方法，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案3包括可選方案1-2中任一項的方法，其中該方法還包括向對象施用足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑。
可選方案4包括可選方案3的方法，其中同時施用nkt-2活化劑和rar激動劑。
可選方案5包括可選方案3的方法，其中分開施用nkt-2活化劑和rar激動劑。
可選方案6包括可選方案3的方法，其中順序施用nkt-2活化劑和rar激動劑。
可選方案7包括可選方案1-6中任一項的方法，其中口服施用nkt-2活化劑。
可選方案8包括可選方案1-7中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新、米替福新類似物或磷脂中的至少一種。
可選方案9包含可選方案8的方法，其中磷脂包含溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、lpc類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm類似物。
可選方案10包括可選方案9的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一種。
可選方案11包括可選方案1-7中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案12包括可選方案8-11中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1或表2.2的化合物。
可選方案13包括可選方案8-11中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1的化合物。
可選方案14包括可選方案1-7中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案15包括可選方案3-14中任一項的方法，其中rar激動劑包含atra或異維a酸。
可選方案16包括可選方案3-14中任一項的方法，其中rar激動劑包含他扎羅汀。
可選方案17包括可選方案3-14中任一項的方法，其中rar激動劑包含視黃醇或視黃醇的酯。
可選方案18包括可選方案1-17中任一項的方法，其中ii型nkt細胞的激活包括下述中的至少一項：由ii型nkt細胞產生il-2、ii型nkt細胞的增殖、在ii型nkt細胞表面表達cd69。
可選方案19包括可選方案3-18中任一項的方法，其中i型nkt細胞激活的抑制包括α-galcer/cd1d-四聚體+tcr-β+細胞積聚的抑制。
可選方案20包括緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的方法，其包括向對象施用一定量的nkt-2活化劑和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活對象中的ii型nkt細胞。
可選方案21包括可選方案20的方法，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案22包括可選方案20或可選方案21的方法，其中同時施用硫苷脂和nkt-2活化劑。
可選方案23包括可選方案20或可選方案21的方法，其中分開施用硫苷脂和nkt-2活化劑。
可選方案24包括可選方案20-23中任一項的方法，其中口服施用nkt-2活化劑。
可選方案25包括可選方案20-24中任一項的方法，其中nkt-2活化劑的量足以激活對象中的ii型nkt細胞，並且硫苷脂的量足以激活對象中的ii型nkt細胞。
可選方案26包括可選方案20-25中任一項的方法，其中該方法還包括向對象施用足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑。
可選方案27包括可選方案26的方法，其中同時施用nkt-2活化劑和rar激動劑。
可選方案28包括可選方案26的方法，其中分開施用硫苷脂和nkt-2活化劑。
可選方案29包括可選方案26的方法，其中順序施用nkt-2活化劑和rar激動劑。
可選方案30包括可選方案20-29中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新、米替福新類似物或磷脂中的至少一種。
可選方案31包括可選方案30的方法，其中磷脂包含溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、lpc類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm類似物。
可選方案32包含可選方案31的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一種。
可選方案33包括可選方案20-29中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案34包括可選方案30-32中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1或表2.2的化合物。
可選方案35包括可選方案30-32中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1的化合物。
可選方案36包括可選方案20-29中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案37包括可選方案20-36中任一項的方法，其中硫苷脂具有下述化學結構：
其中r1選自：鍵、氫、c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基和c5至c12糖；r2選自：氫、羥基、甲氧基和烴氧基；r3選自：氫、羥基、甲氧基、乙氧基和烴氧基；r4選自：氫、羥基和烴氧基；r5選自：氫、羥基、羰基、烴氧基和鍵；r6選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；r7選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；以及r8選自：氫、羥基、羰基、烴氧基和鍵。
可選方案38包括可選方案20-36中任一項的方法，其中硫苷脂具有下述化學結構：
可選方案39包括可選方案20-35中任一項的方法，其中rar激動劑包含atra或異維a酸。
可選方案40包括可選方案20-38中任一項的方法，其中rar激動劑包含他扎羅汀。
可選方案41包括可選方案20-38中任一項的方法，其中rar激動劑包含視黃醇或視黃醇的酯。
可選方案42包括抑制對象中i型nkt細胞介導的組織損傷的方法，該方法包括向對象施用有效量的磷脂，其中i型nkt細胞的激活降低。
可選方案43包括可選方案42的方法，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案44包括可選方案42-43中任一項的方法，其中磷脂包含米替福新、米替福新類似物或磷脂中的至少一種。
可選方案45包括可選方案44的方法，其中磷脂包含溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、lpc類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm類似物。
可選方案46包括可選方案45的方法，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一種。
可選方案47包括可選方案42-43中任一項的方法，其中磷脂包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案48包括可選方案44-47中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1或表2.2的化合物。
可選方案49包括可選方案44-47中任一項的方法，其中米替福新類似物包含來自表2.1的化合物。
可選方案50包括可選方案42-43中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案51包括用於緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的組合物，該組合物包含足以激活對象中ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑。
可選方案52包括可選方案51的組合物，所述組合物還包含足以抑制對象中i型nkt細胞激活的量的rar激動劑。
可選方案53包括可選方案48-49中任一項的組合物，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、肝硬化、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、自身免疫性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案54包括可選方案51-53中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑包含米替福新、米替福新類似物或磷脂中的至少一種。
可選方案55包括可選方案54的組合物，其中磷脂包含溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、lpc類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm類似物。
可選方案56包括可選方案55的組合物，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一種。
可選方案57包括可選方案51-53中任一項的組合物，其中磷脂包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案58包括可選方案54-57中任一項的組合物，其中米替福新類似物包含來自表2.1或表2.2的化合物。
可選方案59包括可選方案51-57中任一項的組合物，其中米替福新類似物包含來自表2.1的化合物。
可選方案60包括可選方案51-53中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案61包括可選方案52-60中任一項的組合物，其中rar激動劑包含atra或異維a酸。
可選方案62包括可選方案52-60中任一項的組合物，其中rar激動劑包含他扎羅汀。
可選方案63包括可選方案52-60中任一項的組合物，其中rar激動劑包含視黃醇或視黃醇的酯。
可選方案64包括可選方案51-63中任一項的組合物，其中將該組合物配製為口服施用。
可選方案65包括用於緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的組合物，該組合物包含一定量的nkt-2活化劑和一定量的硫苷脂，其中nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活對象中的ii型nkt細胞。
可選方案66包括可選方案61的組合物，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、自身免疫性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案67包括可選方案65-66中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑的量足以激活對象中的ii型nkt細胞，並且硫苷脂的量足以激活對象中的ii型nkt細胞。
可選方案68包括可選方案65-67中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑包含米替福新、米替福新類似物或磷脂中的至少一種。
可選方案69包括可選方案68的組合物，其中磷脂包含溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、lpc類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)或lsm類似物。
可選方案70包括可選方案69的組合物，其中lpc包含lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))或ligna(lpc)(c24:0)中的一種。
可選方案71包括可選方案65-67中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案72包括可選方案68-71中任一項的組合物，其中米替福新類似物包含來自表2.1或表2.2的化合物。
可選方案73包括可選方案68-71中任一項的組合物，其中米替福新類似物包含來自表2.1的化合物。
可選方案74包括可選方案65-67中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案75包括可選方案65-74中任一項的組合物，其中硫苷脂具有下述化學結構：
其中r1選自：鍵、氫、c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基和c5至c12糖；r2選自：氫、羥基、甲氧基和烴氧基；r3選自：氫、羥基、甲氧基、乙氧基和烴氧基；r4選自：氫、羥基和烴氧基；r5選自：氫、羥基、羰基、烴氧基和鍵；r6選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；r7選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；以及r8選自：氫、羥基、羰基、烴氧基和鍵。
可選方案76包括可選方案65-74中任一項的組合物，其中硫苷脂具有下述化學結構：
可選方案77包括可選方案65-76中任一項的組合物，其中該組合物還包含足以抑制對象中i型nkt細胞激活的量的rar激動劑。
可選方案78包括可選方案77的組合物，其中rar激動劑包含atra或異維a酸。
可選方案79包括可選方案77的組合物，其中rar激動劑包含他扎羅汀。
可選方案80包括可選方案77的組合物，其中rar激動劑包含視黃醇或視黃醇的酯。
可選方案81包括可選方案1-50中任一項的方法，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案82包括可選方案1-50或81中任一項的方法，其中nkt-2活化劑的量足以激活對象肝臟中的cd8αα+t細胞。
可選方案83包括可選方案1-50或81-82中任一項的方法，其還包括向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案84包括可選方案82-83之一的方法，其中在施用nkt-2活化劑之前，向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案85包括可選方案82-83之一的方法，其中向對象同時施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞和nkt-2活化劑。
可選方案86包括可選方案82-83之一的方法，其中在施用nkt-2活化劑之後，向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案87包括可選方案82-87中任一項的方法，並且還包括從哺乳動物獲得細胞樣品，從所述細胞樣品分離cd8αα+、tcrαβ+t細胞，以及擴增所述分離的t細胞。
可選方案88包括可選方案87的方法，其中哺乳動物是所述對象。
可選方案89包括可選方案87的方法，其中哺乳動物是除所述對象之外的有機體。
可選方案90包括可選方案82-89中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+。
可選方案91包括可選方案82-89中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd122+。
可選方案92包括可選方案82-89中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+。
可選方案93包括可選方案82-92中任一項的方法，其中分離的t細胞是下述中兩種或更多種的混合物：cd8αα+tcrαβ+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞。
可選方案94包括緩解或預防對象中的至少一種炎性病況的方法，該方法包括向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞，以及施用足以激活對象中ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑。
可選方案95包括可選方案94的方法，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案96包括可選方案94-95中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新或米替福新類似物中的至少一種。
可選方案97包括可選方案94-95中任一項的方法，其中nkt-2活化劑包含米替福新。
可選方案98包括可選方案94-97中任一項的方法，其中nkt-2活化劑的量足以激活對象肝臟中的cd8αα+t細胞。
可選方案99包括可選方案94-98中任一項的方法，其中在施用nkt-2活化劑之前，向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案100包括可選方案94-98中任一項的方法，其中向對象同時施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞和nkt-2活化劑。
可選方案101包括可選方案94-98中任一項的方法，其中在施用nkt-2活化劑之後，向對象施用分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案102包括可選方案94-101中任一項的方法，並且還包括從哺乳動物獲得細胞樣品，分離來自所述細胞樣品的cd8αα+、tcrαβ+t細胞，以及擴增所述分離的t細胞。
可選方案103包括可選方案102的方法，其中哺乳動物是所述對象。
可選方案104包括可選方案102的方法，其中哺乳動物是除所述對象之外的有機體。
可選方案105包括可選方案94-104中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+。
可選方案106包括可選方案94-104中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd122+。
可選方案107包括可選方案94-104中任一項的方法，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+。
可選方案108包括可選方案94-104中任一項的方法，其中分離的t細胞包括下述中兩種或更多種的混合物：cd8αα+tcrαβ+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞。
可選方案109包括可選方案51-80中任一項的組合物，其中炎性病況選自：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
可選方案110包括可選方案51-80或109中任一項的組合物，其中nkt-2活化劑的量足以激活對象肝臟中的cd8αα+t細胞。
可選方案111包括可選方案51-80、或109、或110中任一項的組合物，其還包含用於向對象施用的分離的cd8αα+、tcrαβ+t細胞。
可選方案112包括可選方案111的組合物，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+。
可選方案113包括可選方案111的組合物，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd122+。可選方案114包括可選方案111的組合物，其中分離的t細胞是cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+。
可選方案115包括可選方案111的組合物，其中分離的t細胞包含下述中兩種或更多種的混合物：cd8αα+tcrαβ+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞、cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞。
附圖說明
圖1為描述根據本文的一些實施方案，由米替福新刺激ii型nkt細胞的圖。
圖2a為描述根據本文的一些實施方案，在注射米替福新之後抑制i型nkt細胞擴增的圖。
圖2b為描述根據本文的一些實施方案，在注射米替福新之後顯示抑制i型nkt細胞擴增的流式細胞術數據的一系列圖。
圖3a為描述根據本文的一些實施方案，在用米替福新處理之後抑制cona-誘導的肝炎的圖。
圖3b為描述根據本文的一些實施方案，在用米替福新處理之後抑制cona-誘導的肝炎的一系列顯微鏡圖像。圖3c為圖3b的黑白複製品。
圖4a為描述根據本文的一些實施方案，用米替福新治療小鼠中的酒精性肝病(ald)期間抑制i型nkt細胞積聚的圖。
圖4b為描述根據本文的一些實施方案，用米替福新治療小鼠中的酒精性肝病(ald)期間顯示抑制i型nkt細胞積聚的流式細胞術數據的一系列圖。
圖4c為描述根據本文的一些實施方案，在用米替福新治療小鼠中的酒精性肝病(ald)期間抑制激活的(cd69+)i型nkt細胞積聚的圖。
圖4d為描述根據本文的一些實施方案，在用米替福新治療小鼠中酒精性肝病(ald)期間抑制中性粒細胞積聚的圖。
圖5為描述根據本文的一些實施方案，用米替福新治療慢性和復發實驗的自身免疫性腦脊髓炎(eae)，即多發性硬化的原型的圖。
圖6為描述用硫苷脂治療慢性實驗的自身免疫性腦脊髓炎(eae)，即多發性硬化原型的圖。
圖7為描述根據本文的一些實施方案，在用米替福新治療之後抑制人pbmc中i型nkt細胞的體外擴增的圖。
圖8a和8b為描述根據本文的一些實施方案，按照用注射mbpac1-9(髓鞘鹼性蛋白)誘導eae之後的天數，接受不同量的擴增的treg細胞群的小鼠的平均疾病評分的一對圖。圖8a描述注入有2d11細胞的小鼠的結果。圖8b描述注入有p42-50-反應性t細胞系的小鼠的結果。
圖9a-9c為根據本文的一些實施方案，顯示用激動性抗-vβ6mab治療小鼠在體內導致激活cd8αα+vβ6+t細胞和預防eae的一系列圖。圖9a描述通過流式細胞術表徵細胞。圖9b描述基於實時pcr數據的vβ6和vβ8.2的相對數量。圖9c描述tl-四聚體/cd8+t細胞的百分數。
發明詳述
根據本文的一些實施方案，包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑的組合物可用於緩解或預防許多炎性病況中的任一種。不受理論的限制，本文預期激活後，ii型nkt細胞可以抑制i型nkt細胞的激活，因此，可以緩解或預防i型nkt細胞介導的與炎症相關的損傷。因此，在一些實施方案中，緩解或預防炎性病況的方法包括施用包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑，例如米替福新或米替福新的類似物的組合物。任選地，組合物可以包含足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂。任選地，組合物可以包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑。
nkt細胞
肝臟含有先天性免疫系統的許多特化細胞，包括庫普弗(kupffer)細胞、自然殺傷(nk)細胞、自然殺傷t(nkt)細胞和樹突細胞。nkt細胞是獨特的，因為它們共享nk細胞(例如，nk1.1)的細胞表面受體，此外，它們表達t細胞受體(tcr)，使得它們能夠在cd1d分子的環境中識別脂質抗原並橋接先天性免疫應答與適應性免疫。nkt細胞能夠調節其它細胞的活性，所述其它細胞有助於組織炎症和相關的細胞損傷。在激活後，nkt細胞迅速分泌大量的ifn-γ、il-4、粒細胞巨噬細胞集落刺激因子，以及多種其它細胞因子和趨化因子。由於nkt細胞能夠分泌th1和th2細胞因子，可能難以預測體內nkt細胞激活的後果。根據上下文，nkt細胞激活觸發促進或抑制不同免疫應答的事件的級聯。在一些環境中，nkt細胞的激活導致nk細胞、樹突細胞(dc)和b細胞的激活。nkt細胞的方面討論於kumar,「nkt-cellsubsets:promotersandprotectorsininflammatoryliverdisease」journalofhepatology,2013,59:618-620中，將其通過引用整體併入本文。
nkt細胞識別呈遞在單型mhci類樣分子cd1d的環境中的脂質抗原。cd1d限制性nkt細胞，被分類為i型(也被稱為「i型nkt細胞」或「nkt-1」細胞)和ii型(也被稱為「ii型nkt細胞」或「nkt-2」細胞)，其識別由cd1d分子呈遞的不同脂質抗原。雖然兩個nkt細胞亞群主要為nk1.1+(小鼠)或cd161+/cd56+(人)，但在小鼠和人中它們的相對數是不同的，因此，當i型nkt細胞在小鼠中佔優勢時，ii型nkt細胞亞群在人中佔優勢。
i型，也被稱為不變nkt細胞，表達在小鼠中以vα14-jα18和vβ8.2、vβ7或vβ2為特徵，或在人中以vα24-jαq和vβ11為特徵的半不變t細胞受體(tcr)，與海綿來源的糖脂α-半乳糖基神經醯胺(「α-galcer」或「αgalcer」)為具有強反應性，以及在流式細胞術中通過α-galcer/cd1d-四聚體鑑定。i型nkt細胞也識別基於脂質的抗原，如細菌來源的脂質和自身糖脂、異球三己糖苷神經醯胺(isoglobotrihexosylceramide(igb3))。i型nkt細胞顯示記憶標誌物，並且在儲存細胞因子的預先形成的mrna中是獨特的。沒有jα18基因的小鼠(jα18小鼠)僅缺乏i型nkt細胞。
與i型nkt細胞不同的ii型nkt細胞為調節細胞，其可以調控數種其它細胞亞群(包括i型nkt細胞)的活性。ii型nkt細胞識別小鼠和人中的自身糖脂、硫苷脂(3』-磺基半乳糖基神經醯胺)。可以在流式細胞術中使用硫苷脂/cd1d-四聚體鑑定的ii型nkt細胞的主要亞群，主要利用vβ8.1/vβ3.1-jβ2.7和vα1/vα3-jα7基因片段，並且可與硫苷脂反應。通過評估ii型nkt細胞對候選試劑的體外增殖反應，以及通過針對ifn-γ、il-4或il-13的細胞內細胞因子染色或實時pcr來評估cd69表達和細胞因子分泌概況，可以評價ii型nkt細胞的激活。另外，使用cf8e稀釋分析和α-galcer/co1d四聚體細胞的細胞內細胞因子染色，通過評估i型nkt細胞對α-galcer(i型nkt細胞的有效活化劑)的增殖反應，可以評價激活的ii型nkt細胞使i型nkt細胞無反應性(anergize)的能力。根據本文的一些實施方案的nkt細胞(i型或ii型)的激活，可以基於胸苷摻入被量化為刺激指數(參見，例如圖2a)。
如本文所用，「nkt-2活化劑」(包括該詞根術語的變化)是指這樣的化合物，其在與ii型nkt細胞接觸後誘導以下至少一種：由ii型nkt細胞分泌il-2、ii型nkt細胞的增殖、或在ii型nkt細胞表面上升高的cd69表達。根據本文的方法、試劑盒和組合物，合適的示例性nkt-2活化劑包括但不限於：米替福新、米替福新類似物(例如表2.1和表2.2中列出的化合物)、磷脂，如溶血磷脂醯膽鹼(lpc)(例如，lpc(c18:0)、lpc(c16:0)、lpc(c18:1(9z))、lpc(c18:1(1油烯基))和/或ligna(lpc)(c24:0))、lpc的類似物、溶血血小板活化因子(lpaf)、溶血鞘磷脂(lsm)和/或lsm的類似物。不受任何理論的限制，預期根據本文的一些實施方案的nkt-2活化劑，因此可以激活ii型nkt細胞，其繼而可以抑制i型nkt細胞的激活。
在一些實施方案中，ii型nkt細胞的激活包括：由ii型nkt細胞分泌il-2、ii型nkt細胞的增殖、在ii型nkt細胞表面上升高的cd69表達、這些中的任何兩種、這些中的任何三種、或這些中的全部四種。
在一些實施方案中，i型nkt細胞激活的抑制包括：i型nkt細胞增殖的抑制、減少的i型nkt細胞積聚、在i型nkt細胞表面上降低的cd69表達、這些中的任何兩種、或這些中的全部三種。
缺血再灌注損傷後的nkt-2活化劑及i型和ii型nkt細胞
當缺血一段時間之後，將血液供應恢復至器官或組織時，發生再灌注損傷。肝臟再灌注損傷的發生通常與手術或創傷有關，並且在肝移植之後移植組織的質量和功能中發揮主要作用。缺血再灌注損傷(iri)的發展，在至少兩個階段發生：初始階段(再灌注之後約1小時至約6小時)，其由庫普弗細胞激活、活性氧類的釋放、cd4+細胞募集和促炎細胞因子的分泌主導；和後期階段(再灌注的初始階段之後約6小時至約48小時)，其特徵在於中性粒細胞積聚和壞死的誘導。通常，i型nkt細胞也在缺血再灌注之後被激活並分泌ifn-γ。因為已經顯示，nkt-2活化劑如米替福新的施用，可以刺激ii型nkt細胞(參見圖1)和抑制i型nkt細胞擴增(參見圖2a和圖2b)，預期根據本文一些實施方案的nkt-2活化劑如米替福新和米替福新的類似物及磷脂，可以用於抑制與缺血再灌注相關的i型nkt激活。
因此，在一些實施方案中，提供包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑，例如米替福新或米替福新類似物、或磷脂的組合物，用於治療、改善、預防或降低發展缺血再灌注損傷的風險。任選地，組合物還包含足以抑制i型nkt細胞的量的rar激動劑，例如他扎羅汀。任選地，組合物還包含足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂。在一些實施方案中，將組合物施用於罹患缺血再灌注損傷或處於發展缺血再灌注損傷風險的對象。
在一些實施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)和一定量的硫苷脂的組合物用於治療、改善、預防或降低發展缺血再灌注損傷的風險，nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt細胞。任選地，組合物還包含足以抑制i型nkt細胞的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)。在一些實施方案中，將組合物施用於罹患缺血再灌注損傷或處於發展缺血再灌注損傷風險的對象。任選地，口服施用該組合物。
在一些實施方案中，將足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)，施用於罹患iri或處於iri風險的對象。任選地，將足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)施用於所述對象。任選地，所述施用為口服的。任選地，將足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂進一步施用於所述對象。在一些實施方案中，同時施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，分開施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用nkt-2活化劑，隨後施用rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用rar激動劑，隨後施用nkt-2活化劑。在一些實施方案中，進行rar激動劑和nkt-2活化劑的交替施用。
在肝病中的nkt-2活化劑和激活的i型和ii型nkt細胞
如美國專利第8,044,029號和美國公開第2011/0118197號和美國公開第2014/0187504號中所述(將其各自通過引用整體併入本文)，自身糖脂配體、硫苷脂以及合成硫苷脂類似物的施用，可以調控i型和ii型nkt細胞的活性。不受任何理論的限制，硫苷脂的cd1d-依賴性識別激活ii型nkt細胞，並且主要激活漿細胞樣樹突細胞(pdc)，而非常規的樹突細胞(cdc)群(其通常被1型nkt細胞激活)，導致以il-12和mip2-依賴性方式將i型nkt細胞迅速募集至肝臟中。然而，募集的i型nkt細胞不被激活、不分泌細胞因子並且是無變應性的。已經顯示，體內施用硫苷脂a)抑制響應於α-galcer的刺激的i型nkt細胞的體內增殖，和b)增加具有胞質內ifn-γ染色的硫苷脂/cd1d-四聚體+細胞的百分數。
已經觀察到，與未處理的動物相比，在缺血和再灌注損傷的早期，由肝臟i型nkt細胞分泌的ifn-γ在接受硫苷脂的小鼠中顯著降低。此外，由於jα18-/-小鼠中沒有i型nkt細胞，在用硫苷脂治療的小鼠中缺血/再灌注之後的肝損傷顯著降低。該觀察結果表明，在介導肝臟缺血和再灌注損傷中i型nkt細胞的致病作用。不受任何理論的限制，i型nkt細胞的ifn-γ分泌的作用，可為缺血器官損傷的共同特徵，因為腎缺血和再灌注損傷也在沒有1型nkt的jα18-/-小鼠中減弱。
類似於iri，硫苷脂或nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)的施用，可以免受伴刀豆球蛋白a(cona)-誘導的肝炎，如通過減少的肝細胞壞死及減少的丙氨酸氨基轉移酶(alt)和天冬氨酸氨基轉移酶(ast)(肝細胞損傷的標誌物)的血漿水平所指示的。此外，在cona之前12小時施用米替福新，在隨後24小時降低alt的血漿水平(圖3a)，以及減少細胞壞死，如通過肝臟切片的h&e染色所確定的(圖3b)。不受任何理論的限制，這些觀察結果表明，i型nkt細胞在cona-誘導的肝炎中的致病作用，以及硫苷脂和/或磷脂(例如米替福新或米替福新類似物)的保護作用。
不受任何理論的限制，來自肝損傷、iri和cona-誘導的肝炎的模型的數據與免疫調節途徑一致，其中在由多種原因引起的肝臟炎症中，i型nkt細胞起不利作用，而硫苷脂/nkt-2活化劑-反應性ii型nkt細胞起保護作用。此類保護與由i型nkt細胞引起的細胞因子分泌的抑制(抑制的表型)和不成熟髓樣細胞(cd11b+gr-1+)cd11b+gr-1-和nk細胞的肝臟募集的顯著減少有關。i型nkt細胞中的抑制也與常規樹突細胞(cdc)的耐受或修飾有關，它們和受抑制的i型nkt細胞一起抑制適應性th1/th17cd4+/cd8+t細胞的激活/擴增。這產生了這樣的模型，其中硫苷脂和/或nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新的類似物或磷脂)的施用刺激ii型nkt細胞的活性，這繼而抑制i型nkt細胞活性和由i型nkt細胞介導的炎症引起的肝損傷。
因此，在一些實施方案中，提供包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)的組合物，用於治療肝損傷或肝疾病。任選地，組合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)。任選地，組合物還包含足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂。在一些實施方案中，將組合物施用於罹患肝損傷或處於發展肝損傷或肝疾病風險的對象，所述肝損傷或肝疾病例如，脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、肝硬化、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎。
在一些實施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)和一定量的硫苷脂的組合物，用於治療、改善、預防或降低發展肝損傷或肝疾病的風險，所述nkt-2活化劑的量和所述硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt細胞。任選地，組合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)。在一些實施方案中，將組合物施用於罹患肝損傷或肝疾病或處於發展肝損傷或肝疾病風險的對象，所述肝損傷或肝疾病例如，脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、肝硬化、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎。
在一些實施方案中，將足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)，施用於罹患肝損傷或肝疾病或處於肝損傷或肝疾病風險的對象。任選地，將足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)施用於所述對象。任選地，施用為口服的。任選地，將足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂進一步施用於所述對象。在一些實施方案中，同時施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，分開施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用nkt-2活化劑，隨後施用rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用rar激動劑，隨後施用nkt-2活化劑。在一些實施方案中，進行rar激動劑和nkt-2活化劑的交替施用。在一些實施方案中，對象罹患肝損傷或肝疾病或處於發展肝損傷或肝疾病的風險，所述肝損傷或肝疾病例如，脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、肝硬化、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎。
酒精性肝病中的nkt細胞
由於過量飲酒引起肝細胞損傷進而發展酒精性肝病(ald)。在觀察到ald的臨床表現之前，可能需要多種損害(insults)。然而，已經觀察到，長期飲酒之後在肝臟中觀察到顯著增加數目的i型nkt細胞(α-galcer/cd1d-四聚體+細胞)、cd4+細胞和cd11b+gr-1+髓樣細胞，而非ii型nkt細胞或cd11b+gr-1-細胞。增強的cd69標誌物的表達進一步表明i型nkt細胞至少部分被激活。因此，過量飲酒之後，即使在沒有疾病的任何臨床症狀(臨床前期)下，介導炎症應答的細胞在肝臟中積聚。長期飲酒之後，在沒有i型nkt細胞(jα18-/-小鼠)下，cd11b+gr-1+髓樣細胞在肝臟中的積聚顯著減少。不受任何理論的限制，這些數據表明，i型nkt細胞參與介導ald的臨床前期。
與表明i型nkt細胞在ald的臨床前期中的作用的數據一致，過量飲酒之後肝損傷的臨床表現顯著減少，如例如，通過在i型nkt細胞缺乏的(jα18-/-)小鼠中進行組織學和肝酶分析所測量的。不受任何理論的限制，這些數據表明，i型nkt細胞在肝臟的酒精性損傷中起重要作用。
nkt細胞表達t細胞受體，這使得它們能夠在cd1d分子的環境中識別脂質抗原。不希望受特定理論的束縛，在飲酒後由表達cd1d的抗原呈遞細胞(apc)局部呈遞氧化的自身脂質，i型nkt細胞在肝臟中被激活。然後，激活的i型nkt細胞引發多級過程，導致庫普弗細胞激活、粒細胞的募集/激活，隨後是肝細胞的炎症損傷。
如圖4a和圖4b所示，在酒精性肝病的鼠模型中，與僅施用乙醇相比，將米替福新與乙醇結合施用抑制了i型nkt細胞的積聚。此外，如圖4c中所示，與僅施用乙醇相比，將米替福新與乙醇結合施用也減少了激活的(cd69+)nkt細胞水平。此外，如圖4d中所示，與僅施用乙醇相比，將米替福新與乙醇結合施用也減少了中性粒細胞水平。
飲酒之後nkt細胞亞型之間的相互作用設定肝損傷的階段，在嚴重情況下，為酒精性肝病(ald)。本文所述的若干實施方案涉及用於操作i型nkt細胞和ii型nkt細胞的相反作用以及它們與其它肝細胞相互作用的方法和組合物，以治療、緩解或預防飲酒之後對肝臟的損傷。
硫苷脂治療導致過量飲酒之後幾乎完全保護免於肝損傷。不希望受特定理論的束縛，硫苷脂的保護作用可以通過直接激活ii型nkt細胞來介導，其對i型nkt細胞和cdc發揮抑制作用。
因此，本文的一些實施方案涉及調控nkt細胞亞型的活性，以治療、改善和/或預防酒精誘導的肝臟損傷。如本文所述，nkt-2活化劑(例如米替福新)、硫苷脂或視黃酸受體(rar)激動劑的施用，抑制酒精誘導的肝損傷。例如，米替福新的口服施用減少由乙醇誘導的i型nkt細胞積聚和激活，以及中性粒細胞積聚(參見圖4a、4b、4c和4d)。
若干實施方案涉及與硫苷脂反應的ii型nkt細胞的主要亞群在酒精誘導的肝損傷中的保護作用。通過硫苷脂激活這種nkt細胞亞群抑制了過量飲酒之後i型nkt細胞介導的損傷。硫苷脂介導的保護與ii型nkt細胞的激活和由肝臟i型nkt細胞引起的ifn-γ分泌的抑制以及i型nkt細胞介導的髓樣細胞(例如，cd11b+gr-1int和gr-1-亞群及nk細胞)募集至肝臟的抑制有關。
因此，在一些實施方案中，提供包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物)的組合物，用於治療、改善或預防酒精性肝病。任選地，化合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)。任選地，口服施用該組合物。
在一些實施方案中，提供包含一定量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物)和一定量的硫苷脂的組合物用於治療、改善、預防或降低酒精性肝病的風險，nkt-2活化劑的量和硫苷脂的量合在一起足以激活ii型nkt細胞。任選地，組合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)。任選地，口服施用該組合物。
在一些實施方案中，將足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物)，施用於罹患酒精性肝病或處於發展酒精性肝病風險的對象。任選地，將足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑(例如，他扎羅汀)施用於所述對象。任選地，施用為口服的。任選地，將足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂進一步施用於所述對象。在一些實施方案中，同時施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，分開施用nkt-2活化劑和rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用nkt-2活化劑，隨後施用rar激動劑。在一些實施方案中，首先施用rar激動劑，隨後施用nkt-2活化劑。在一些實施方案中，進行rar激動劑和nkt-2活化劑的交替施用。
硫苷脂
在一些實施方案中，硫苷脂包括，例如牛腦來源的硫苷脂，其為獲自sigmainc.(chicago,il,usa)的約20種不同物質的混合物。在其它實施方案中，硫苷脂為半合成的，包括單種硫苷脂，例如，獲自maitreyainc,(pleasantgap,pa,usa)的順二十四碳烯醯硫苷脂或溶硫苷脂(lysosulfatide)。在其它實施方案中，硫苷脂可以為完全合成的硫苷脂。
來自牛腦髓磷脂的硫苷脂由飽和/不飽和的主要醯基鏈(c24)以2:1混合物組成，其中不飽和現象發生在c19。若干實施方案涉及合成硫苷脂類似物的用途，所述合成硫苷脂類似物如具有飽和醯基鏈(c24)和不飽和鏈(c24:1)的類似物，以及由在脂肪酸或鞘氨醇部分(較短的以及較長的，例如，c18、c32)中不同長度的醯基鏈組成的類似物並且在半乳糖部分上具有3'相對於4'-硫酸基的位置異構體(3'-803相對於4'-803)。
在一些實施方案中，硫苷脂具有下述化學式i：
式i
其中r1可以為鍵、氫、c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基、或c5至c12糖；r2可以為氫、羥基、甲氧基或烴氧基；r3可以為氫、羥基、甲氧基、乙氧基或烴氧基；r4可以為氫、羥基或烴氧基；r5可以為氫、羥基、羰基、烴氧基或鍵；r6可以為c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基、或c1至c40炔基；r7可以為c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基、或c1至c40炔基；以及r8可以為氫、羥基、羰基、烴氧基或鍵。
在其它實施方案中，硫苷脂具有下述化學式ii：
式ii
其中r1選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基；以及r2選自：氫、羥基、羰基、烴氧基和鍵。
在另外實施方案中，硫苷脂具有下述化學結構：
式iii
如本文所用，術語「烷基」意為任何無支鏈的或分支的飽和烴。術語「取代的烷基」意為任何無支鏈的或分支的取代的飽和烴。環狀化合物(具有雜原子的環狀烴和環狀化合物)在「烷基」的含義內。
如本文所用，術語「取代的」意為用官能團任意取代氫原子。
如本文所用，術語「官能團」具有其常用定義，並且是指優選選自以下的化學部分：滷素原子、c1-c20烷基、取代的c1-c20烷基、全滷化烷基、環烷基、取代的環烷基、芳基、取代的芳基、苄基、雜芳基、取代的雜芳基、氰基和硝基。
如本文所用，術語「滷素」和「滷素原子」是指元素周期表第17列的放射性穩定的原子中任一種，優選氟、氯、溴或碘，其中氟和氯為特別優選的。
如本文所用，術語「烯基」意為任何無支鏈的或分支的、取代或未取代的不飽和烴。術語「取代的烯基」意為被一個或多個官能團取代的任何無支鏈的或分支的、取代的不飽和烴，其中無支鏈的c2-c6烯基仲胺、取代的c2-c6烯基仲胺和無支鏈的c2-c6烯基叔胺在「取代的烷基」的定義內。環狀化合物(具有雜原子的不飽和的環狀烴和環狀化合物)在「烯基」的含義內。
如本文所用，術語「烴氧基」是指任何無支鏈的或分支的、取代或未取代的、飽和或不飽和的醚。
如本文所用，術語「硫苷脂」保留其一般慣常的含義，並且是指在分子的糖部分含有一個或多個硫酸基團的腦苷脂硫酸酯。
如本文所用，術語「腦苷脂」是指含有糖的任何脂質化合物，並且通常為腦和神經組織中發現的類型。
式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以呈其藥學可接受的無毒鹽形式。式(i)、(ii)和(iii)的鹽包括：酸加成鹽，如無機酸(例如，鹽酸、硫酸、硝酸和磷酸)的鹽或有機酸(例如，乙酸、丙酸、馬來酸、油酸、棕櫚酸、檸檬酸、琥珀酸、酒石酸、富馬酸、穀氨酸、泛酸、月桂基磺酸、甲磺酸和鄰苯二甲酸)的鹽。
式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以呈其溶劑合物(例如，水合物)的形式。
式(i)、(ii)和(iii)的化合物可以通過任何有目的的方法製備以合成硫苷脂。
式(i)、(ii)和(iii)的化合物也可以分離自天然產物(例如，生物有機體)，並且通過柱色譜法等進行純化。
在一個實施方案中，硫苷脂具有化學式：(2s,3r,4e)-n-神經酸(nervonic)-1-[-d-(3-硫酸酯)-半乳吡喃糖基]-2-氨基-十八烯-3-醇。該化學式也被稱為順二十四碳烯醯硫苷脂。
在一些實施方案中，施用於患者的硫苷脂的特定量，將根據治療的疾病或病況以及正治療患者的年齡、體重和性別而變化。通常，為了在例如腸和血液中實現這樣的最終濃度，在本申請實施方案的單一劑量組合物中，硫苷脂分子的量通常為：約0.1毫克至約100毫克，優選約2.0毫克至約60毫克，更優選約20毫克至約50毫克。同樣地，在本申請實施方案的單一口服劑量組合物中，第二治療化合物的量的範圍通常為：約0.01毫克至約1000毫克，更優選約0.1毫克至約100毫克。明顯地，確切的劑量將隨著正治療的疾病或病症而變化，優選的範圍是容易確定的。在一些實施方案中，患者為人。
在一些實施方案中，向對象施用0.1-10mg/kg體重的硫苷脂，例如約0.1mg/kg體重、0.2mg/kg體重、0.3mg/kg體重、0.5mg/kg體重、1mg/kg體重、2mg/kg體重、3mg/kg體重、5mg/kg體重、9mg/kg體重，或諸如0.2-0.5mg/kg體重、0.2-1mg/kg體重、0.2-5mg/kg體重、0.2-10mg/kg體重、0.5-1mg/kg體重、0.5-5mg/kg體重、0.5-10mg/kg體重、1-5mg/kg體重、1-10mg/kg體重、2-5mg/kg體重、2-10mg/kg體重、或5-10mg/kg體重範圍的硫苷脂。優選地，根據需要重複該劑量。任選地，可以重複該劑量。任選地，劑量可以每天重複五次、每天四次、每天三次、每天兩次、每天一次、或頻率更低，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天一次，包括所列數值中的任何兩個之間的範圍，例如每1-2天、每1-3天、每1-5天、每1-10天、每1-20天、每2-3天、每3-5天、每3-10天、每3-20天、每5-10天、或每5-20天。
視黃酸受體(rar)激動劑
如本文所述，視黃酸受體(rar)激動劑(全反式視黃酸(atra))的施用，顯著抑制由飲酒引起的肝損傷。乙醇攝取消耗肝臟視黃酯，並且改變全反式視黃酸(atra)的生理水平，全反式視黃酸是維生素a的生物活性形式，其支持許多生理功能，並且可以增強初始cd4+t細胞分化成foxp3+tregs的產生、穩定性和功能，甚至在il-6存在下亦如此。本文所述的若干實施方案涉及以下發現：atra抑制i型nkt細胞效應物功能，包括抑制這些細胞的細胞因子分泌。此外，atra對i型nkt細胞活性具有直接的抑制作用，在沒有抗原呈遞細胞的情況下發揮其抑制作用。另外，atra不直接抑制識別蛋白質抗原(如髓磷脂鹼性蛋白或mbpac1-9)的常規mhc-限制性cd4+t細胞的活性。不希望受特定理論的束縛，這些數據表明，atra通過抑制i型nkt細胞來保護以免於由過量飲酒引起的肝損傷。
如本文所述，rar激動劑誘導i型nkt細胞的抑制。此外，通過施用rar激動劑，可以預防、減少或減輕由過量飲酒造成的i型nkt細胞介導的炎症引起的肝損傷。由於各種不同的原因，肝臟會發炎。例如，肝臟炎症可以由細菌或病毒感染、損傷、或自身免疫系統的攻擊引起。雖然炎症通常為保護性反應和癒合過程的必需步驟，但長期或慢性炎症可引起損傷。本文所述的若干實施方案涉及rar激動劑介導的對導致炎症之後、與炎症相關或由其炎症引起的肝損傷的先天性免疫機制的調控。一些實施方案涉及rar激動劑介導的i型nkt細胞活性抑制的方法和組合物，其調控先天免疫系統組分之間的相互作用，以提供對腸來源的或代謝物來源的抗原的耐受性，而不影響或最低程度地影響對非自身鑑定的病原體的先天性免疫應答。
因為rar激動劑可以直接使i型nkt細胞無反應性，所以rar激動劑可以用於治療i型nkt細胞起致病作用的任何適應症。可以通過本公開實施方案治療的疾病的一些實例包括：酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化和炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
在一些實施方案中，通過rar激動劑介導的i型nkt細胞活性的抑制，來治療、預防或減輕自身免疫或免疫相關的疾病或病症的多種適應症。具體地，本申請實施方案的一個方面涉及用有效量的rar激動劑治療患有以下症狀的患者的方法：自身免疫或免疫相關疾病或病症，如，例如，多發性硬化、全身性紅斑狼瘡、aids、阿爾茨海默病、類風溼性關節炎、胰島素依賴性糖尿病、自身免疫性肝炎、哮喘、乳糜瀉、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症。在一些實施方案中，rar激動劑介導的i型nkt細胞活性的抑制，治療、預防或減輕哮喘症狀。在一些實施方案中，患者為人。
一些實施方案涉及通過施用rar激動劑來抑制或預防缺血再灌注之後i型nkt細胞介導的炎症的方法。i型nkt細胞在諸如缺血和再灌注損傷的病況中起致病作用。當缺血一段時間之後恢復血液供應時，可以在多個組織中發生再灌注損傷。實例包括：擠壓損傷後的骨骼肌組織，與心肌梗死或心臟手術、或缺血性心臟病相關的心肌，與中風或腦外傷相關的神經組織，以及與手術或創傷相關的肝組織和腎組織。缺血再灌注損傷也在器官移植中的移植組織的質量和功能中起主要作用。缺血和再灌注損傷是增加的住院治療的長度和降低的長期移植存活率的主要原因。在一些實施方案中，rar激動劑介導的i型nkt細胞活性的抑制，抑制或預防了與手術或創傷相關的肝臟缺血再灌注損傷。
本文所述的實施方案涉及通過一種或多種視黃酸受體(rar)激動劑來抑制i型nkt細胞活性。視黃酸受體包括三種主要亞型：rarα、rarβ和rarγ。一些實施方案涉及通過一種或多種泛活性(pan-active)rar激動劑、此類泛活性rar激動劑的前體和它們的混合物，來抑制i型nkt細胞活性。如本文所用，術語「泛活性rar激動劑」是指這樣的rar激動劑，其基本上同等地或非選擇性地影響，例如，激活rarα、rarβ和rarγ。一些實施方案涉及通過對選擇性地或甚至特異性地影響，例如，激活rarβ和rarγ(相對於rarα而言)中的至少一種，並且優選rarβ和rarγ兩者有效的一種或多種有活性的rar激動劑、此類有活性的rar激動劑的前體和它們的混合物，來抑制i型nkt細胞活性。如本文中所用的，術語「選擇性地」意為相對於rarα，rar激動劑、rar激動劑的前體和它們的混合物在影響rarβ和rarγ中的至少一種，並且優選rarβ和rarγ兩者中更有效，優選有效至少約10倍或約100倍至約1000倍或更多。一些實施方案涉及通過一種或多種亞型-選擇性rar激動劑、此類亞型-選擇性rar激動劑的前體和它們的混合物，抑制i型nkt細胞活性。如本文所用，術語「亞型-選擇性rar激動劑」是指這樣的rar激動劑，其選擇性地影響，例如，激活一種rar亞型。具有rarα、rarβ和rarγ-選擇性的類視色素化合物為本領域已知的，並且公開於，例如，美國專利第6,534,544號和第6,025,388號中，將其通過引用整體併入本文。
一些實施方案涉及通過施用一種或多種視黃酸受體(rar)激動劑來抑制促炎i型nkt細胞活性的方法。rar激動劑的實例包括但不限於表1中列出的rar激動劑。
表1：rar激動劑
在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種選自以下的rar激動劑抑制：atra、視黃醇、9-順式-ra或13-順式-ra、維a酸、am580、ac55649、cd1530或他扎羅汀。在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種聚烯烴類視色素，如異維a酸和阿曲汀(acitretin)抑制。在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種選自以下的rar激動劑抑制：依曲替酯、阿曲汀和異維a酸。
若干實施方案涉及通過他扎羅汀、他扎羅汀酸(tazarotenicacid)或它們的混合物來抑制促炎i型nkt細胞活性。他扎羅汀為一種乙酯前藥，其被代謝成相應的游離酸，即他扎羅汀酸。他扎羅汀具有剛性環鎖結構，與全反式視黃酸(視黃酸受體(rar)的天然配體)相比，其提供有限的構象柔性。該結構變化賦予他扎羅汀酸對rar的特異性和對rarβ和rarγ的選擇性。
rar激動劑的實例還包括順式-和反式-視黃酸的酯，例如，烷基酯，如伯、仲或叔醇，包括但不限於：甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、己基、庚基、乙基己基、辛基、壬基、月桂基、油烯基、硬脂醯基、羥乙基、羥丙基、苄基、α-甲基苄基、α-丙基苯基、戊基、異戊基、茴香基、鯨蠟基、薄荷基、肉桂基、頻哪醇、呋喃基或肉豆蔻基。
rar激動劑的藥學可接受的鹽也可以用於抑制i型nkt細胞活性。本文公開的化合物具有足夠酸性、足夠鹼性或前述兩種官能團，因此其能夠與許多有機或無機鹼、及無機和有機酸中的任一種反應以形成鹽。
可以用於由具有鹼性基團的rar激動劑形成酸加成鹽的酸的實例包括：無機酸，如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等；和有機酸，如對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。此類鹽的實例包括：硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、重亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。
可以用於由具有酸性基團的rar激動劑形成鹼加成鹽的鹼的實例包括但不限於：鹼金屬，如鈉、鉀和鋰的氫氧化物；鹼土金屬，如鈣和鎂的氫氧化物；其它金屬，如鋁和鋅的氫氧化物；氨和有機胺，如未取代的或羥基取代的單-、二-或三烷基胺；二環己基胺；三丁基胺；吡啶；n-甲基、n-乙胺；二乙胺；三乙胺；單-、雙-、或三-(2-羥基-低級烷基胺)，如單-、雙-、或三-(2-羥乙基)胺、2-羥基-叔丁胺或三-(羥甲基)甲胺、n,n-二-低級烷基-n-(羥基低級烷基)-胺，如n,n-二甲基-n-(2-羥乙基)胺或三-(2-羥乙基)胺；n-甲基-d-葡糖胺；和胺基酸，如精氨酸、賴氨酸等。
如本文所用，術語「患者」或「對象」是指治療性治療的接受者，並且包括動物界內的所有生物體。在優選實施方案中，動物在哺乳動物家族內，如人、牛科動物、綿羊、豬、貓科動物、水牛、犬、山羊、馬、驢、鹿和靈長類動物。在一些實施方案中，動物包括非人哺乳動物。最優選的動物為人。因此，在一些實施方案中，患者或對象為人。
如本文所用，術語「治療(treat)」、「治療(treating)」和「治療(treatment)」分別包括「預防(prevent)」、「預防(preventing)」和「預防(prevention)」。
如本文所用，術語藥劑的「有效量」為足以治療、抑制或預防由促炎1型nkt細胞活性造成的肝損傷的量。
一些實施方案涉及在臨床表現ald之前，用硫苷脂和/或rar激動劑預處理患者。在若干實施方案中，在放縱飲酒之前，用有效量的硫苷脂和/或rar激動劑治療患者。在一些其它實施方案中，在放縱飲酒之前約0.5小時至約18小時，用有效量的硫苷脂和/或rar激動劑治療患者。在一些其它實施方案中，在長期飲酒期間用有效量的硫苷脂和/或rar激動劑治療患者。在一些實施方案中，患者為人。
在一些實施方案中，施用於患者的rar激動劑的特定量將根據治療的疾病或病況以及正治療患者的年齡、體重和性別而變化。通常，為了在例如腸和血液中實現這樣的最終濃度，本申請實施方案的單一劑量組合物中rar激動劑的量通常為約0.1毫克至約100毫克，優選約2.0毫克至約60毫克，更優選約20毫克至約50毫克。合適劑量的實例包括：約0.1至約10mg/天；約0.5至約2mg/天；約0.01-100mg/天；約1至約50mg/天；約0.1mg/天至約1.0mg/天；約1.0mg/天至約5.0mg/天；約5.0mg/天至約10.0mg/天；約10.0mg/天至約15mg/天；約15.0mg/天至約20.0mg/天；約20.0mg/天至約25.0mg/天；約30.0mg/天至約35.0mg/天；約35.0mg/天至約40.0mg/天；約40.0mg/天至約45.0mg/天；約45.0mg/天至約50.0mg/天；約50.0mg/天至約55.0mg/天；約55.0至約60.0mg/天；約60.0mg/天至約65.0mg/天；約65.0mg/天至約70.0mg/天；約70.0mg/天至約75.0mg/天；約75.0mg/天至約80.0mg/天；約80.0mg/天至約85.0mg/天；約85.0至約90.0mg/天；約85.0mg/天至約90.0mg/天；約90.0mg/天至約95.0mg/天；和約95.0mg/天至約100.0mg/天。明顯地，確切的劑量將隨著正治療的疾病或病症而變化，優選的範圍是容易確定的。在一些實施方案中，患者為人。
當口服施用他扎羅汀以實現i型nkt細胞活性降低時，他扎羅汀的每日劑量優選在約0.3mg/天至約7mg/天或約8mg/天的範圍內，更優選在約0.6mg/天至約6.5mg/天或約7mg/天的範圍內。在一些實施方案中，口服施用的他扎羅汀以下述每日劑量的他扎羅汀施用，包括0.4mg/天、0.75mg/天、1.5mg/天、2.8mg/天、3mg/天、4.5mg/天、6mg/天和6.3mg/天。
根據實施方案，可以施用rar激動劑以緩解患者的症狀，或可以施用rar激動劑以抵抗病症本身的機制。在某些實施方案中，可以作為預防措施施用rar激動劑。在一些實施方案中，施用多劑量的rar激動劑。本領域技術人員應理解，這些治療目的通常是相關的，並且可以基於多種因素調整特定患者的治療。這些因素可以包括患者的年齡、性別或健康，以及自身免疫或免疫相關疾病或病症的進展。患者的治療方法可以針對以下因素相應地調整：劑量、施用時間、施用途徑和其它療法的同時或順序施用。在一些實施方案中，患者為人。
在一些實施方案中，一種或多種rar激動劑化合物可以單獨施用或與另外的治療化合物組合施用。例如，一種或多種rar激動劑化合物可以與硫苷脂組合施用。可以使用任何當前已知用於治療酒精性肝病、炎性疾病、自身免疫疾病或再灌注損傷的治療化合物。在一些實施方案中，rar激動劑可以與硫化氫(h2s)組合使用。在一些實施方案中，rar激動劑可以與抗氧化劑組合施用。在一些實施方案中，rar激動劑可以與以下物質組合施用：例如，皮質類固醇、生物製劑(例如抗-tnf-α和抗-il-6)、免疫調節劑(例如ru-486)、疾病修飾抗風溼病藥物(dmards，如來氟米特)、cox-2抑制劑(塞來昔布)、非甾體抗炎藥(nsaids，如萘普生)、口服抗糖尿病劑(oad，如二甲雙胍或西格列汀(sitaglipten))、glp-1激動劑、胰島素、ppar激動劑/拮抗劑、egf介質(抗癌劑)、其它有效治療肝癌的藥劑、基於細胞的肝癌療法；用於C型肝炎、多發性硬化或紅斑狼瘡的幹擾素(ifn)；和lfa-1拮抗劑。
本文所述的rar激動劑化合物和硫苷脂化合物可以用作摻入藥物組合物中的活性成分。在一些實施方案中，藥物組合物可以包含單一活性成分。在一些實施方案中，藥物組合物可以包含兩種、三種、四種、五種或更多種活性成分。預期了所有的施用模式，例如，口服、直腸、腸胃外、局部、或通過靜脈內、肌內、胸骨內或皮下注射或以適合吸入的形式。在適當的情況下，製劑可以方便地以離散劑量單位呈現，並且可以通過藥學領域眾所周知的任何方法製備。根據已知和建立的實踐，通常將活性成分與一種或多種藥學可接受的賦形劑一起配製。因此，藥物組合物可以被配製成液體、粉末、酏劑、注射液、懸液、栓劑等。
在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種選自以下的rar激動劑抑制：atra、視黃醇、9-順式-ra或13-順式-ra、維a酸、am580、ac55649、cd1530或他扎羅汀。在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種聚烯烴類視色素，如異維a酸和阿曲汀抑制。在一些實施方案中，促炎i型nkt細胞活性被一種或多種選自以下的rar激動劑抑制：依曲替酯、阿曲汀和異維a酸。
若干實施方案涉及通過他扎羅汀、他扎羅汀酸或它們的混合物來抑制促炎i型nkt細胞活性。他扎羅汀為一種乙酯前藥，其被代謝成相應的游離酸，即他扎羅汀酸。他扎羅汀具有剛性環鎖結構，與全反式視黃酸(視黃酸受體(rar)的天然配體)相比，其提供有限的構象柔性。該結構變化賦予他扎羅汀酸對rar的特異性和對rarβ和rarγ的選擇性。
rar激動劑的實例還包括順式-和反式-視黃酸的酯，例如，烷基酯，如伯、仲或叔醇，包括但不限於：甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、己基、庚基、乙基己基、辛基、壬基、月桂基、油烯基、硬脂醯基、羥乙基、羥丙基、苄基、α-甲基苄基、α-丙基苯基、戊基、異戊基、茴香基、鯨蠟基、薄荷基、肉桂基、頻哪醇、呋喃基或肉豆蔻基。
rar激動劑的藥學可接受的鹽也可以用於抑制i型nkt細胞活性。本文公開的化合物具有足夠酸性、足夠鹼性或前述兩種官能團，因此其能夠與許多有機或無機鹼、及無機和有機酸中的任一種反應以形成鹽。
可以用於由具有鹼性基團的rar激動劑形成酸加成鹽的酸的實例包括：無機酸，如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸等；和有機酸，如對甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、對溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、檸檬酸、苯甲酸、乙酸等。此類鹽的實例包括：硫酸鹽、焦硫酸鹽、硫酸氫鹽、亞硫酸鹽、重亞硫酸鹽、磷酸鹽、磷酸一氫鹽、磷酸二氫鹽、偏磷酸鹽、焦磷酸鹽、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸鹽、丙酸鹽、癸酸鹽、辛酸鹽、丙烯酸鹽、甲酸鹽、異丁酸鹽、己酸鹽、庚酸鹽、丙炔酸鹽、草酸鹽、丙二酸鹽、琥珀酸鹽、辛二酸鹽、癸二酸鹽、延胡索酸鹽、馬來酸鹽、丁炔-1,4-二酸鹽、己炔-1,6-二酸鹽、苯甲酸鹽、氯苯甲酸鹽、甲基苯甲酸鹽、二硝基苯甲酸鹽、羥基苯甲酸鹽、甲氧基苯甲酸鹽、鄰苯二甲酸鹽、磺酸鹽、二甲苯磺酸鹽、苯基乙酸鹽、苯基丙酸鹽、苯基丁酸鹽、檸檬酸鹽、乳酸鹽、γ-羥基丁酸鹽、乙醇酸鹽、酒石酸鹽、甲磺酸鹽、丙磺酸鹽、萘-1-磺酸鹽、萘-2-磺酸鹽、扁桃酸鹽等。
可以用於由具有酸性基團的rar激動劑形成鹼加成鹽的鹼的實例包括但不限於：鹼金屬，如鈉、鉀和鋰的氫氧化物；鹼土金屬，如鈣和鎂的氫氧化物；其它金屬，如鋁和鋅的氫氧化物；氨和有機胺，如未取代的或羥基取代的單-、二-或三烷基胺；二環己基胺；三丁基胺；吡啶；n-甲基、n-乙胺；二乙胺；三乙胺；單-、雙-、或三-(2-羥基-低級烷基胺)，如單-、雙-、或三-(2-羥乙基)胺、2-羥基-叔丁胺或三-(羥甲基)甲胺、n,n-二-低級烷基-n-(羥基低級烷基)-胺，如n,n-二甲基-n-(2-羥乙基)胺或三-(2-羥乙基)胺；n-甲基-d-葡糖胺；和胺基酸，如精氨酸、賴氨酸等。
在一些實施方案中，施用於患者的rar激動劑的特定量將根據治療的疾病或病況以及正治療患者的年齡、體重和性別而變化。通常，為了在例如腸和血液中實現這樣的最終濃度，本申請實施方案的單一劑量組合物中rar激動劑的量通常為約0.1毫克至約100毫克，優選約2.0毫克至約60毫克，更優選約20毫克至約50毫克。合適劑量的實例包括：約0.1至約10mg/天；約0.5至約2mg/天；約0.01-100mg/天；約1至約50mg/天；約0.1mg/天至約1.0mg/天；約1.0mg/天至約5.0mg/天；約5.0mg/天至約10.0mg/天；約10.0mg/天至約15mg/天；約15.0mg/天至約20.0mg/天；約20.0mg/天至約25.0mg/天；約30.0mg/天至約35.0mg/天；約35.0mg/天至約40.0mg/天；約40.0mg/天至約45.0mg/天；約45.0mg/天至約50.0mg/天；約50.0mg/天至約55.0mg/天；約55.0至約60.0mg/天；約60.0mg/天至約65.0mg/天；約65.0mg/天至約70.0mg/天；約70.0mg/天至約75.0mg/天；約75.0mg/天至約80.0mg/天；約80.0mg/天至約85.0mg/天；約85.0至約90.0mg/天；約85.0mg/天至約90.0mg/天；約90.0mg/天至約95.0mg/天；和約95.0mg/天至約100.0mg/天。明顯地，確切的劑量將隨著正治療的疾病或病症而變化，優選的範圍是容易確定的。在一些實施方案中，患者為人。
當口服施用他扎羅汀以實現i型nkt細胞活性降低時，他扎羅汀的每日劑量優選在約0.3mg/天至約7mg/天或約8mg/天的範圍內，更優選在約0.6mg/天至約6.5mg/天或約7mg/天的範圍內。在一些實施方案中，口服施用的他扎羅汀以包括0.4mg/天、0.75mg/天、1.5mg/天、2.8mg/天、3mg/天、4.5mg/天、6mg/天和6.3mg/天在內的每日劑量的他扎羅汀施用。
根據實施方案，可以施用rar激動劑以緩解患者的症狀，或可以施用rar激動劑以抵抗病症本身的機制。在某些實施方案中，可以作為預防措施施用rar激動劑。在一些實施方案中，施用多劑量的rar激動劑。本領域技術人員應理解，這些治療目的通常是相關的，並且可以基於多種因素調整特定患者的治療。這些因素可以包括患者的年齡、性別或健康，以及自身免疫或免疫相關疾病或病症的進展。患者的治療方法可以針對以下因素相應地調整：劑量、施用時間、施用途徑和其它療法的同時或順序施用。在一些實施方案中，患者為人。
在一些實施方案中，一種或多種rar激動劑化合物可以單獨施用或與另外的治療化合物組合施用。例如，一種或多種rar激動劑化合物可以與nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)、硫苷脂、或nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)和硫苷脂組合施用。
nkt-2活化劑
根據本文的一些實施方案，可以使用許多nkt-2活化劑。在一些實施方案中，nkt-2活化劑包括磷脂，例如溶血磷脂，例如溶血磷脂醯膽鹼(lpc)、米替福新或米替福新類似物。一些lpc化合物對ii型nkt細胞的影響，已經描述於maricic等人,「recognitionoflysophosphatidylcholinebytypeiinktcellsandprotectionfromaninflammatoryliverdisease」j.immunology,publishedonlineseptember262014,1400699，將其通過引用整體併入本文。
在一些實施方案中，nkt-2活化劑包含具有式iv的lpc：
式iv
其中r選自：c1至c40烷基、c1至c40取代的烷基、c1至c40烯基、c1至c40取代的烯基和c1至c40炔基。實例lpc包括lpc(c18:0)，下文描述其結構：
lpc(c16:0)，下文描述其結構，
lpc(c18:1(9z))，下文描述其結構，
lpc(c18:1(1油烯基))，下文描述其結構，
和ligna(lpc(c24:0))，下文描述其結構，
預期作為合適的nkt-2活化劑的另外的示例性磷脂包括但不限於溶血血小板激活因子(lpaf)，如lpaf(c18:0)，下文描述其結構，
和溶血鞘磷脂(lsm)，下文描述其結構，
在一些實施方案中，nkt-2活化劑包括米替福新。下文顯示米替福新的結構：
在一些實施方案中，nkt-2活化劑包括米替福新類似物。如本文所用，「米替福新類似物」在廣義上指米替福新的結構類似物和米替福新的功能類似物。根據本文的一些實施方案，一些米替福新類似物包括式v的化合物：
式v
其中r選自：c1至c30烷基、c1至c30取代的烷基、c1至c30烯基、c1至c30取代的烯基和c1至c30炔基。
根據本文的一些實施方案可以使用的示例性米替福新類似物包括但不限於下文表2.1和2.2列出的化合物。
表2.1：米替福新類似物
表2.2:米替福新類似物
在一些實施方案中，米替福新類似物包含表2.1所示的任何化合物，由表2.1所示的任何化合物組成，或者基本由表2.1所示的任何化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含選自表2.1的化合物，由選自表2.1的化合物組成，或者基本由選自表2.1的化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含表2.1或表2.2所示的任何化合物，由表2.1或表2.2所示的任何化合物組成，或者基本由表2.1或表2.2所示的任何化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含選自表2.1或表2.2的化合物，由選自表2.1或表2.2的化合物組成，或者基本由選自表2.1或表2.2的化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含表2.2所示的任何化合物，由表2.2所示的任何化合物組成，或者基本由表2.2所示的任何化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含選自表2.2的化合物，由選自表2.2的化合物組成，或者基本由選自表2.2的化合物組成。在一些實施方案中，米替福新類似物包含式v的化合物，由式v的化合物組成，或者基本由式v的化合物組成。
本文涵蓋米替福新和米替福新類似物的所有施用模式，例如口服施用、直腸施用、腸胃外施用、局部施用，或者通過靜脈注射、肌肉注射、胸骨內注射或皮下注射施用，或者以任何適於吸入的方式施用。在適當的情況下，可以便利地以離散的劑量單位呈現該製劑，並且可以通過製藥領域眾所周知的任何方法來製備。通常根據已知的以及已建立的實踐，將活性成分與一種或多種藥學可接受的賦形劑一起配製。因此，可將藥物組合物配製為液體、粉末、酏劑、注射液、懸液、栓劑等。
米替福新可以適合於口服或局部施用。如此，在一些實施方案中，口服施用米替福新或米替福新類似物。在一些實施方案中，局部施用米替福新或米替福新類似物。在一些實施方案中，通過靜脈注射、肌肉注射、胸骨內注射或皮下注射，或者以適於吸入的形式施用米替福新或米替福新類似物。
根據本文的一些實施方案，向對象施用的米替福新或米替福新類似物的具體量，將根據待治療的疾病或病況以及待治療的患者的年齡、體重和性別而改變。在一些實施方案中，以約0.1-10mg/kg體重的劑量施用米替福新或米替福新類似物。在一些實施方案中，以下述劑量施用米替福新或米替福新類似物：約0.1mg/kg體重、0.2mg/kg體重、0.3mg/kg體重、0.5mg/kg體重、1mg/kg體重、2mg/kg體重、3mg/kg體重、4mg/kg體重,5mg/kg體重、6mg/kg體重、7mg/kg體重、8mg/kg體重、9mg/kg體重，包括任何兩個所列數值之間的範圍，例如約0.2-0.5mg/kg體重、0.2-1mg/kg體重、0.2-5mg/kg體重、0.2-10mg/kg體重、0.5-1mg/kg體重、0.5-3mg/kg體重、0.5-5mg/kg體重、0.5-10mg/kg體重、1-3mg/kg體重、1-5mg/kg體重、1-10mg/kg體重、2-3mg/kg體重、2-5mg/kg體重、2-10mg/kg體重、或5-10mg/kg體重。優選地，視需要重複該劑量。任選地，可將該劑量每天重複五次，每天重複四次，每天重複三次，每天重複兩次，每天重複一次或者頻率更低，例如每2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19或20天重複一次，包括任何兩個所列數值之間的範圍，例如每1-2天、每1-3天、每1-5天、每1-10天、每1-20天、每2-3天、每3-5天、每3-10天、每3-20天、每5-10天、或每5-20天重複一次。在一些實施方案中，施用至少2個劑量，例如2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、45、50、60、70、80、90或100個劑量，包括任何兩個所列數值之間的範圍，例如2-10、2-20、2-50、2-100、5-10、5-50、5-100、10-20、10-50、10-100、20-50或20-100個劑量。在一些實施方案中，患者是人。
在一些實施方案中，施用米替福新或米替福新類似物的對象患有炎性病況，例如脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、自身免疫性肝炎、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
藥物組合物
可將本文所述的nkt-2活化劑(如米替福新或米替福新類似物或磷脂)、rar激動劑化合物以及硫苷脂化合物用作活性成分摻入藥物組合物中。在一些實施方案中，藥物組合物可以包含單一活性成分。在一些實施方案中，藥物組合物可以包含兩種、三種、四種、五種或更多種活性成分。可將任何下述nkt-2活化劑組合物用於治療、緩解或預防炎性病況，例如脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
在一些實施方案中，藥物組合物包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)。任選地，藥物組合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的諸如視黃酸的rar激動劑，例如他扎羅汀。
在一些實施方案中，藥物組合物包含一定量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)和一定量的硫苷脂，所述量合在一起足以激活ii型nk細胞。
在一些實施方案中，藥物組合物包含一定量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)和一定量的硫苷脂，所述量合在一起足以激活ii型nk細胞，並且藥物組合物還包含足以抑制i型nkt細胞激活的量的rar激動劑，如視黃酸(例如他扎羅汀)。
在一些實施方案中，藥物組合物包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)，以及足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂。
在一些實施方案中，藥物組合物包含足以激活ii型nkt細胞的量的nkt-2活化劑(例如米替福新或米替福新類似物或磷脂)、足以激活ii型nkt細胞的量的硫苷脂，以及足以抑制i型nkt細胞激活的量的諸如視黃酸的rar激動劑(例如他扎羅汀)。
在一些實施方案中，藥物組合物包含足以激活ii型nkt細胞的量的米替福新或米替福新類似物，以及足以抑制i型nkt細胞激活的量的他扎羅汀。
本文涵蓋所有施用模式，例如口服施用、直腸施用、腸胃外施用、局部施用，或者通過靜脈注射、肌肉注射、胸骨內注射或皮下注射施用，或者以適於吸入的形式施用。在適當的情況下，可以便利地以離散的劑量單位呈現該製劑，並且可以通過製藥領域眾所周知的任何方法來製備。通常根據已知的以及已建立的實踐，將活性成分與一種或多種藥學可接受的賦形劑一起配製。因此，可將藥物組合物配製為液體、粉末、酏劑、注射液、懸液、栓劑等。藥物配製的方法詳細描述於remington'spharmaceuticalsciences，第18版,a.r.gennaro,ed.,mackpublishingcompany(1995)中，在此將其通過引用整體併入本文。
根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於口服施用的片劑、硬明膠膠囊、軟明膠膠囊，其包含粉末、與賦形劑的混合物、液體或溶液、懸液、固溶體形式的活性成分。根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於口內施用(舌下或口腔)的快速溶解的固體劑型或泡騰片、薄膜、口腔薄片(buccalwafer)，或者配製為液體或半固體形式，如凝膠、溶液、乳狀液、懸液。根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於注射施用的水性或非水性溶液、懸液或乳狀液。基於油的溶液和懸液包含諸如下述天然或合成的油的混合物：大豆油、棉籽油、礦物油、芝麻油、蓖麻油、氫化植物油、蜂蠟。根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於經皮施用的面霜、凝膠、乳狀液、基於水的溶液、基於油的溶液、懸液、膜、貼劑、泡沫。根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於鼻內施用的粉末、懸液、溶液、乳狀液。根據一些實施方案的活性成分，可配製為用於肺部遞送施用的微粒化的粉末。口服施用與首過代謝以及代謝酶的誘導相關。因此，為了最佳效果可調整口服施用的視黃酸的劑量強度和給藥方案。相對於口服施用，可以優選可選的遞送途徑，例如舌下施用、頰部施用、注射施用、肺部施用和經皮施用。諸如所述的那些可選施用途徑，避免了首過代謝和gi吸收，顯示了較少的酶誘導並提供了穩定的重複劑量藥代動力學。
根據本發明的藥物製劑，可以立即釋放或者改進釋放(例如持續釋放(sustainedrelease)、脈衝式釋放、控釋、延遲釋放、緩慢釋放(slowrelease))。由於其立即具有活性，藥理學量的口服施用視黃酸異構體可能具有副作用。這些副作用已經成為療法中使用口服視黃酸的嚴重限制。儘管局部應用的視黃酸具有極少致畸傾向，但是存在其他限制其用途的與該施用途徑相關的毒性，包括皮膚刺激。口服和局部毒性的主要原因均為，視黃酸一經施用則完全且立即可用。憑藉可將視黃酸製備為在體內更緩慢且更連續地可用的方法，可避免視黃酸可用性中的峰和谷，從而在更長的一段時間內提供有效的體內化合物水平，以及也避免或大幅降低通常由過量物質突然的可用性導致的毒性。可以以周為單位，肌肉內施用下述物質的基於油的可注射製劑：視黃醇,視黃醇的酯，以及特別是視黃醇的脂肪酸酯、視黃酸或視黃酸酯，並根據此類原則提供系統性緩釋遞送。
一些實施方案涉及如本文所述的一種或多種活性成分的口服劑型的製劑。在略微升高的溫度下，將10g視黃酸溶於蜂蠟、叔丁基羥基茴香醚、乙二胺四乙酸二鈉、氫化大豆油片、氫化植物油以及大豆油醇的混合物中，並且伴隨著高剪切性混合。將化合物以2mg、5mg和10mg的劑量強度密封於軟明膠膠囊中用於口服施用。
一些實施方案涉及含有本發明實施方案的一種或多種活性成分的生物粘附性口腔片的製劑。製備包含下述物質的賦形劑混合物：24％活性成分、21％hpmc、18％玉米澱粉、24％乳糖、1％二氧化矽、2.5％聚卡波非(noveon)、7.5％卡波姆974p、1.2％滑石以及0.7％硬脂酸鎂。將混合物壓入直徑大約1cm的片劑。
一些實施方案涉及含有本發明的實施方案的一種或多種活性成分的舌下膜的製劑。將下述物質在50g水中混合：3g甲基纖維素e5、5g甲基纖維素e50、1g羥丙基纖維素、1g麥芽糊精、1g檸檬酸、3g三氯蔗糖、5g橙味香精、0.2g尼泊金、0.1乙二胺四乙酸鈉以及5g山梨醇。添加1g視黃酸，並且將混合物脫氣並攪拌。將組合物在聚酯膜支持物上薄薄地分散，並在無任何直射光的情況下允許其晾乾以避免降解。然後將該膜切成一定的尺寸以產生2至10mg的劑量。
一些實施方案涉及試劑盒，其可以包含一種或多種硫苷脂、rar激動劑或其任何組合，優選作為藥物組合物。在一些實施方案中，提供藥學可接受的載體中的順式-二十四碳烯醯基。在一些實施方案中，提供藥學可接受的載體中的atra。在一些實施方案中，提供藥學可接受的載體中的他扎羅汀。在數個實施方案中，可以任選地提供硫化氫(h2s)。在數個實施方案中，可以任選地提供一種或多種抗氧化劑。在數個實施方案中，試劑盒還可以包含合適的包裝和/或使用說明。試劑盒還可以包含用於遞送一種或多種硫苷脂、rar激動劑或其任何組合的裝置，如吸入器、噴霧分配器(例如鼻用噴霧)、注射器、針、iv袋或用於膠囊、片劑、栓劑的壓力包。一種或多種硫苷脂、rar激動劑或其任何組合，可以是乾燥形式或凍幹形式，或者是溶液特別是無菌溶液形式。當為乾燥形式時，試劑盒可以包含用於製備液體製劑的藥學可接受的稀釋劑。試劑盒可以包含用於施用或者用於分配組合物的裝置，其包括但不限於：注射器、移液器、經皮貼劑或吸入器。一些實施方案涉及這樣的試劑盒，其包含足夠劑量的化合物或組合物，以在延長的時段內為個體提供有效治療，所述延長的時段如1周、2周、3周、4周、6周或8周或更多周。
cd8調節性t細胞
預期根據本文一些實施方案將施用cd8treg細胞與施用nkt-2活化劑進行組合，可以用於治療或預防炎性病況，例如自身免疫性疾病。在一些實施方案中，向患有炎性病況或者處於發展炎性病況的風險的對象施用cd8treg細胞。也可以向對象施用nkt-2抑制劑。任選地，nkt-2抑制劑包含米替福新。任選地，炎性病況包括下述中的至少一種或者這些所列項目中的兩種或更多種的組合：脂肪肝、酒精誘發的肝炎、非酒精性脂肪性肝炎、自身免疫性肝炎、肝硬化、非酒精性脂肪肝、纖維化、原發性硬化性膽管炎、原發性膽道硬化症、爆發性肝硬化、特發性肝炎、病毒誘發的肝炎(a、b、c以及其它)、與肝-膽癌相關的炎性肝炎、多發性硬化、1型糖尿病、缺血再灌注損傷、實體器官移植、全身性紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、肌萎縮側索硬化以及炎性腸病(克羅恩氏病和結腸炎)。
免疫系統維持平衡狀態，同時響應外來抗原以及自身抗原。用於在對外來抗原進行免疫應答之後維持平衡或者用於預防或終止針對自身抗原的有害應答的控制機制，包括ctla-4介導的t細胞抑制、激活誘導的細胞死亡(aicd)、il-2介導的調節以及調節性t細胞(treg)(1abbas,a.k.,lohr,j.,knoechel,b.&nagabhushanam,v.tcelltoleranceandautoimmunity.autoimmunrev3,471-5(2004))。cd8treg細胞的誘導也描述於pct公開第wo2007/136518號以及美國公開第2007/0286849號中，將其各自通過引用整體併入本文。
利用消耗性抗體或者具有特定基因敲除的動物的實驗，指示了cd8+淋巴細胞在自身免疫性疾病(koh,d.r.etal.lessmortalitybutmorerelapsesinexperimentalallergicencephalomyelitisincd8-/-mice.science256,1210-3(1992))、移植耐受(seydel,k.etal.anti-cd8abrogateseffectofanti-cd4-mediatedisletallograftsurvivalinratmodel.diabetes40,1430-4(1991))、新生耐受(field,a.c.,caccavelli,l.,bloch,m.f.&bellon,b.regulatorycd8+tcellscontrolneonataltolerancetoath2-mediatedautoimmunity.jimmunol170,2508-15(2003))以及正常細胞和體液免疫應答的穩態(nanda,n.k.&sercarz,e.atruncatedtcellreceptorrepertoirerevealsunderlyingimmunogenicityofanantigenicdeterminant.jexpmed184,1037-43(1996))中的重要調節作用。
例如，在多發性硬化中，免疫系統病理性地將一些來自髓鞘膜的自身抗原識別為外來物，並引發針對其的免疫應答。這導致脫髓鞘(髓鞘的破壞性移除)，髓鞘是保護神經細胞(神經元)的絕緣性及保護性脂肪蛋白。多發性硬化中的脫髓鞘由t細胞引導的免疫應答介導，所述免疫應答起始於cns中的抗原遞呈事件，或者在全身性分子擬態應答的外圍激活之後誘導。
在不受任何理論限制的情況下，cd8αα+、tcrαβ+treg細胞可以用於治療和/或預防自身免疫以及免疫相關的疾病和病症的適應症。諸如米替福新的nkt-2抑制劑，可以誘導對象肝臟中的cd8treg細胞(參見，例如圖8a-b)。如此，在一些實施方案中，向患有本文所述的炎性病況或者處於患如本文所述的炎性病況的風險的對象施用cd8treg細胞。任選地，進一步向對象施用nkt-2抑制劑。在一些實施方案中，nkt-2抑制劑包含米替福新。任選地，施用的cd8treg細胞來自所述對象(即「自體」cd8treg細胞)。任選地，施用的cd8treg細胞來自另一個體(即「同種異體」cd8treg細胞)。任選地，在向對象施用之前，擴增施用的cd8treg細胞，例如可以體外擴增細胞。預期可以治療、或減弱、或消除源於炎性病況(如自身免疫性疾病或病症)的病理性自身反應性免疫應答。
通常，為了在例如腸或血液中達到有效終濃度，在根據本文實施方案的單劑量組合物中，擴增的treg細胞群的量一般為：約10,000至約1萬億個細胞，優選約100,000至約100百萬個細胞，更優選約100萬至約5000萬個細胞，甚至更優選約1000萬至約3000萬個細胞，甚至更優選約1500萬至約2500萬個細胞，以及甚至更優選約2000萬個細胞。同樣地，在本發明實施方案的單一口服劑量組合物中，第二治療化合物的量通常在下述範圍內：約0.01毫克至約1000毫克，更優選約0.1毫克至約100毫克。顯而易見地，準確的劑量將根據待治療的疾病或病症而改變，優選劑量容易確定。
在一些實施方案中，可將擴增的treg細胞群與藥學可接受的媒介物組合。合適的藥學可接受的媒介物包括，例如磷酸鹽緩衝鹽水。在一個實施方案中，向患者施用約1,000至約3,000,000個細胞/kg體重的treg細胞。優選地，施用約100,000至約1百萬個細胞/kg體重的treg細胞。可以視需要每小時、每天、每周、每月或者不定時地重複該劑量。以下討論了示例性的劑量和給藥安排。
在一些實施方案中，施用的treg細胞包含cd8αα+、tcrαβ+、cd200+細胞。在一些實施方案中，施用的treg細胞包含cd8αα+、tcrαβ+、il-2rβ+(cd122+)。在一些實施方案中，施用的treg細胞包含cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+。在不受任何理論限制的情況下，預期cd8αα+、tcrαβ+、cd200+treg細胞，cd8αα+、tcrαβ+、cd122+treg細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+、cd122+treg細胞，各自也控制體內激活的vβ8.2+cd4t細胞群，並且可用與本文所述的cd8αα+、tcrαβ+treg細胞類似的方式使用。
在一些實施方案中，將調節性t細胞施用於其所獲自的同一對象。在其它實施方案中，可以將調節性t細胞施用於除其所獲自的對象之外的對象。在其它實施方案中，調節性t細胞可以獲自不作為對象的哺乳動物。在一些實施方案中，施用的調節性t細胞包含獲自下述對象中至少兩個對象的細胞的混合物：施用調節性t細胞的對象、除施用調節性t細胞的對象之外的對象，以及不作為對象的哺乳動物。
在一些實施方案中，使用含有生長因子(如il-2、il-7和il-15)的抗cd3包被的板來擴增t細胞群。在一些實施方案中，使用重組的tcr蛋白或肽，例如來源於tcrvβ8.2鏈的p42-50，可以體外擴增treg。任選地，可以確定疾病特異性的病原性t細胞所利用的tcrvβ或vα鏈基因。然後可將對應於那些tcrvβ或vα鏈基因的蛋白引入體內，以激活合適的treg細胞群。
根據本文所述的實施方案，治療性treg細胞群的許多不同的施用模式和方法是合適的。在一些實施方案中，遞送途徑包括，例如靜脈內施用施用、腹膜內施用、吸入施用、肌肉內施用、皮下施用、鼻部和口服施用或者本領域可用的任何其它遞送途徑。根據具體的施用途徑，劑型可以是，例如固體、半固體、液體、蒸汽或氣霧劑製劑。劑型可以包含，例如藥物配製領域可用的那些添加劑、潤滑劑、穩定劑、緩衝劑、包衣以及賦形劑。
根據本文所述的實施方案，涵蓋許多不同的藥物製劑。在一些實施方案中，藥物製劑包含cd8treg細胞和如本文所述的nkt-2活化劑。在一些實施方案中，藥物製劑包含cd8treg細胞和米替福新。在一些實施方案中，藥物製劑包含下述cd8treg細胞類型中的至少一種：cd8αα+tcrαβ+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞，並且還包含如本文所述的nkt-2活化劑。在一些實施方案中，藥物製劑包含下述cd8treg細胞類型中的至少一種：cd8αα+tcrαβ+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞，並且還包含米替福新。在一些實施方案中，第一藥物製劑包含cd8treg細胞，並且第二藥物製劑包含如本文所述的nkt-2活化劑。
在一些實施方案中，第一藥物製劑包含cd8treg細胞，並且第二藥物製劑包含米替福新。在一些實施方案中，第一藥物製劑包含下述cd8treg細胞類型中的至少一種：cd8αα+tcrαβ+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞，並且第二藥物製劑包含nkt-2活化劑。在一些實施方案中，第一藥物製劑包含下述cd8treg細胞類型中的至少一種：cd8αα+tcrαβ+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd200+t細胞，cd8αα+tcrαβ+cd122+t細胞，以及cd8αα+、tcrαβ+、cd200+cd122+t細胞，並且第二藥物製劑包含米替福新。在一些實施方案中，同時施用第一和第二藥物製劑。在一些實施方案中，在不同時間施用第一和第二藥物製劑。在一些實施方案中，在第二藥物製劑之前施用第一藥物製劑。在一些實施方案中，在第一藥物製劑之前施用第二藥物製劑。任選地，可以通過常規方法利用下述藥學可接受的媒介物等製備本文所述的任何藥物製劑：賦形劑如溶劑(例如水、生理鹽水)、膨脹劑和填充劑(例如乳糖、澱粉、結晶纖維素、甘露醇、麥芽糖、磷酸氫鈣、軟矽酸酸酐和碳酸鈣)；助劑如增溶劑(例如乙醇和聚山梨醇酯)、結合劑(例如澱粉、聚乙烯吡咯烷、羥丙基纖維素、乙基纖維素、羧甲基纖維素和阿拉伯膠)、崩解劑(例如澱粉和羧甲基纖維素鈣)、潤滑劑(例如硬脂酸鎂、滑石和氫化油)、穩定劑(例如乳糖、甘露醇、麥芽糖、聚山梨醇酯、聚乙二醇和聚氧乙烯氫化蓖麻油)、等滲劑、潤溼劑、潤滑劑、分散劑、緩衝劑和增溶劑；以及添加劑，如抗氧化劑、防腐劑、調味劑和芳香劑、止痛劑、穩定劑、著色劑以及甜味劑。
僅出於說明性目的提供下述實施例，並且其不以任何方式意圖限制本文所述的實施方案。
實施例1
在板結合的cd1d分析中，米替福新能夠刺激ii型nkt細胞雜交瘤hy19.3。將cd1d蛋白包被的96孔板用指定的液體孵育6hr，洗滌並添加ii型nkt細胞hy19.3(50,000個細胞/孔)，並在16hr之後測量上清液中的il-2。lsf，溶血硫苷脂；lpc，溶血磷脂醯膽鹼。
這些數據顯示，溶血磷脂醯膽鹼(lpc)的類似物米替福新可以結合cd1d分子並刺激ii型nkt細胞。
實施例2
利用口服強飼，每天用dmso(對照)或米替福新1mg(溶於dmso，並稀釋至pbs中)處理初始b6小鼠，持續7天。在α-galcer存在或不存在的情況下，將脾細胞體外培養90hr。在10ng/ml的α-galcer濃度下i型nkt細胞的刺激(作為刺激指數)和擴增(使用α-galcer/cd1d-四聚體+細胞，作為facs染色)，顯示於圖2a和圖2b中。
圖2a和圖2b中的數據顯示，在米替福新處理的動物中，在其認知配體α-galcer的存在下，存在i型nkt細胞增殖和擴增的顯著抑制。
這些數據與其它脂質如硫苷脂(糖脂)或溶血磷脂醯膽鹼(lpc，磷脂)激活ii型nkt細胞，導致i型nkt細胞的失活或抑制的現象一致。
實施例3
在cona施用前12hr，向bl/6小鼠組施用dmso/pbs或米替福新，並通過肝臟切片的h&e染色和24hr之後檢測的肝臟酶(如血清中的alt)，確定肝臟損傷(圖3a和圖3b)。顯示的數據表示2次獨立的實驗。
如圖3b所示，在用cona處理的肝臟切片中，觀察到指示壞死的染色(紅色h&e染色)1，但是在用cona和米替福新處理的肝臟切片中，觀察到指示減弱的壞死的染色(減弱的紅色h&e染色)2。
因此，在用米替福新處理之後，觀察到cona誘發的肝炎抑制。這些數據顯示，與硫苷脂或lpc類似，用米替福新處理小鼠導致cona注射之後的肝臟損傷的顯著抑制。
實施例4
用含有米替福新(～500微克/天)或dmso/pbs的液態醇(etoh)飲食或等熱量對照(對照)飲食，飼養c57bl/6小鼠組10天。在第11天，在過度飼餵之後9hr(長期加過度飼餵)，在肝臟中檢測到i型nkt細胞(α-galcer/cd1d-四聚體+細胞)或中性粒細胞(ly-6g+cd11b+)的積聚和激活，如圖4a和圖4b中所示，與對照飲食組相比，在飼餵液體長期加過度飼餵etoh飲食的小鼠中，i型nkt細胞在肝臟中積聚。也如圖4c和圖4d中所示，i型nkt細胞成為激活的(如通過α-galcer/cd1d-四聚體+細胞中cd69的細胞表面表達所檢測的)，連同中性粒細胞(ly-6g+cd11b+細胞)在肝臟中積聚。激活的i型nkt細胞和中性粒細胞的積聚導致炎症級聯反應，在ald期間致使肝細胞損傷。顯著地，在用米替福新處理的小鼠中，這兩種細胞均不積聚，導致保護肝臟不受損傷。
這些數據顯示了，在用米替福新處理的小鼠的酒精性肝病(ald)期間，激活的i型nkt細胞以及中性粒細胞的積聚的抑制。如此，預期米替福新可以用於治療炎性肝臟疾病，包括ald、nash、pbc、psc、病毒性肝炎等。
實施例5
已經觀察到，用硫苷脂處理導致sjl/j小鼠中慢性復發性eae的顯著抑制。但是，如圖6所示，當口服給予時，用硫苷脂進行的口服處理儘管在最初抑制了疾病，但是並非十分有效。在不受任何理論限制的情況下，預期硫苷脂在腸中並不十分穩定，這與觀察到的低效力一致。參考圖6，將b6小鼠組用硫苷脂(200微克溶於200微升pbs中)口服處理7天，開始於疾病誘發前一天。每天監測臨床性麻痺，並且評分為1至5。儘管最初存在4-5天的保護，但是之後兩組中的小鼠患有類似嚴重性的疾病。在不受任何理論限制的情況下，觀察到的兩組中的相似性與腸中硫苷脂的不穩定性一致。
如圖5所示，對於用米替福新(其被認為是相對穩定的)進行的口服處理是否能夠抑制慢性和復發性eae(多發性硬化的原型)進行檢測。將sjl小鼠組用米替福新(1mg溶於200微升10％的dmso/pbs)或對照(dmso/pbs)進行口服強飼，如箭頭所示每周兩次。每天監測兩組小鼠中作為麻痺的疾病的臨床嚴重性，評分為1至5，並且如所示。
圖5中的數據總結了用米替福新處理多發性硬化的原型慢性和復發性實驗性自身免疫性腦脊髓炎(eae)的結果。這些實驗顯示，可用米替福新治療t細胞介導的自身免疫性疾病，包括ms、t1dd、ra、系統性紅斑狼瘡和ibd等。
實施例6
將pbmc(1x106/孔)用100ng/mlαgalcer、100ng/mlαgalcer+5μg/ml米替福新進行體外刺激或者不進行刺激。12天之後，收穫細胞，並通過流式細胞術評估i型nkt細胞的百分數。利用bdfacscanto收集染色的細胞。利用flowjo軟體分析數據。將人i型nkt細胞鑑定為cd3+/vα24jα18tcr+細胞(cd1d-限制性i型nkt細胞)，並且在圖7中顯示為門控區域內的％nkt細胞。各圖內顯示了來自新鮮pbmc(未培養)和體外擴增之後的pbmc的i型nkt細胞的百分數。圖7中顯示的數據表示超過5次獨立實驗。
因此，顯示根據本文的一些實施方案，米替福新處理可以導致人i型nkt細胞的擴增。
在本申請中，使用的單數可以包括複數，除非另外特別指明，或者除非如本領域技術人員根據本公開所理解的，單數是唯一的功能性實施方案。因此，例如「一個/一種(a)」可以意為多個/多種，並且「一個實施方案」可以意為所述描述適合於多個實施方案。
前述描述和實施例詳細描述了某些實施方案。但是應理解，不管文本中可能出現前述的如何詳細描述，可以以多種方式實踐本發明，並且應當根據所附權利要求及其任何等同物來解釋本發明。
實施例7
在疾病進程前或期間，如圖2所示，使雌性sjl/j小鼠組口服施用1mg米替福新。在第59天，殺死小鼠。用cd4、cd8α和cd8βmab染色的肝臟單核細胞的流式細胞術特徵顯示於圖8a-8b中。有意思的是，儘管在肝臟中調節性cd8αα+t細胞顯著增加，但是對照vs.治療組中的其它cd4+和cd8αβ+t細胞沒有區別。
因此，根據本文一些實施方案，施用nkt-2抑制劑如米替福新可以增加肝臟中cd8αα+t細胞的誘導。
實施例8
為了確定cd8treg的體內調節潛力，將2d11細胞靜脈過繼性轉移至同基因小鼠中。24小時之後，用mbpac1-9/cfa/pt免疫接受者以誘發eae，每天監測臨床症狀並在1-5的範圍內評分，持續35-45天：1，尾部麻痺；2，後肢麻痺；3，後側身體麻痺；4，後肢及部分身體麻痺；以及5，全身麻痺或瀕死。如圖8a中所示，注射1百萬個2d11細胞的小鼠比對照組中的那些更快地從溫和性疾病中恢復。為了排除控制疾病的能力是特定克隆長期培養的人為現象的可能性，產生短期p42-50反應性t細胞系並將其用於類似的過繼性轉移實驗。如圖8b所示，接受500萬個p42-50反應性t細胞系的小鼠完全不受mbp誘發的eae的損傷，並且僅轉移100萬個細胞就能夠從溫和性麻痺中更快速地恢復。針對兩種不相關的tcr肽產生的短期t細胞系的適應性轉移，對於eae無影響(數據未顯示)。參見圖8a-8b。
因此，根據本文一些實施方案的cd8treg系和克隆的過繼性轉移，導致eae的快速恢復和保護。因此，預期根據本文一些實施方案的cd8treg系和克隆的過繼性轉移，能夠緩解和/或預防至少一種炎性病況。
實施例9
通過檢測用抗vβ6mab處理的小鼠對於cd8treg全體功能和mbpac1-9誘發的eae進程是否具有任何影響，顯示了cd8treg的tcrvβ6鏈的主要用法。單次靜脈注射抗-tcrvβ6mab(rr4-7,300μg/小鼠)之後，在不同時間檢測體內脾細胞中vβ6+細胞的存在。如所預期的，如通過早期激活標誌物cd69的表達所確定的，抗-tcrvβ6mab注射導致體內tcrvβ6+t細胞的早期激活(圖9a，第二列)，隨後細胞表面vβ6的表達下調(圖9a，第一列)。抗-tcrvβ6mab的影響是tcr特異性的，因為在相同的實驗條件下，vβ8+t細胞不受影響(圖9a，第三和第四列)。對來自抗tcrvβ6處理的小鼠的脾細胞中tcrvβ6mrna的表達進行實時rt-pcr分析揭示，在連續處理之後，大部分但並不是全部tcrvβ6+t細胞耗盡(圖9b以及未顯示的數據)。
主要存在於腸內的上皮內淋巴細胞(iel)中的cd8ααt細胞，對於自身-激動劑的消耗相對具有抗性，並且其可在針對通過t細胞受體引起的激活的應答方面區別於cd8αβt細胞。利用tl-四聚體染色，檢測抗-tcrvβ6mab的施用是否導致外周中cd8ααt細胞的消耗或激活。圖9c中的數據顯示，在抗體施用之後tl-四聚體+cd8+細胞未被消耗。事實上，在抗體處理的小鼠中觀察到，針對p42-50的體外回憶應答的略微增加(數據未顯示)。為了進一步測試cd8αα+vβ6+t細胞激活之後的調節功能，用mbpac1-9/cfa/pt免疫小鼠組以誘發eae。一天以及一周之後，靜脈注射低劑量的抗-tcrvβ6mab(100μg/小鼠)、同種型對照mab(100μg/小鼠)或pbs。第二次注射之後每天監測臨床症狀。圖9d和表4中的數據顯示，在b10.pl小鼠中，用抗tcrvβ6mab體內激活vβ6+t細胞導致不受eae損傷。相比之下，注射有同種型對照mab或不相關的mab的組內的動物，未被保護不受疾病損傷(數據未顯示)。
單次靜脈注射抗-tcrvβ6mab(300μg/小鼠)之後，激活(cd69表達)，隨後vβ6+而非vβ8+t細胞下調/消耗。在第0、1和3天，用tcrvβ6-fitc/cd8α-pe/cd69-percp(第一和第二列)或tcrvβ8-fitc/cd8α-pe/cd69-percp(第三和第四列)對脾細胞進行染色。對於tcrvβ6/cd8α+t細胞(第二列)或tcrvβ8/cd8α+t細胞(第四列)進行細胞門控，以分析早期激活標誌物cd69的表達。數據表示兩次獨立的實驗。(b)如通過實時pcr所測定的，抗-vβ6注射之後vβ6+t細胞消耗顯著。將mrna的表達表示為針對兩個內參對照基因(l32和親環素)標準化之後的相對量。數據表示兩次獨立的實驗。(c)在抗-tcrvβ6注射之後，tl-四聚體+cd8t細胞未消耗。在抗體注射後的指定天數，用cd8α-fitc/tl-四聚體-pe對脾細胞進行染色。數據表示兩次獨立的實驗。(d)注射有抗-tcrvβ6mab抗體的小鼠被保護不受eae損傷。在用mbpac1-9/cfa/pt誘發eae之後一天以及七天，用抗-tcrvβ6mab(100μg/小鼠)或igg同種型對照或pbs注射小鼠組。如方法中所述監測麻痺疾病。數據組合自三次獨立的實驗。
表3：cd8αα+t細胞克隆1的應答特徵
1.在來源於不同的h-2單體型的抗原遞呈細胞(apc)的存在下，檢測在針對p42-50的應答中cd8ααtreg克隆2d11的增殖或細胞因子分泌。顯示了h-2k、d、l、qa-1和qa-2單體型。
2.h-2單體型。
3.最後一列中的「+」和「-」分別指針對p42-50的陽性應答或無應答。陽性應答被定義為刺激指數(si)高於3(7.25+/-1.93至58.06+/-18.69)。
表4：tcrvβ6+t細胞的激活導致保護不受eae損傷
1.在mbpac1-9免疫(第0天)之後第1天和第8天i.v.注射抗體(100μg)。
因此，根據本文一些實施方案，tcrvβ6+t細胞的體內激活導致保護不受eae損傷。