從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝的製作方法
2023-05-09 03:12:46 3
專利名稱：從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝。
背景技術：
螺旋藻(Spirulina platensis， SP)是藍藻門，藍藻綱，斷增藻目，顫藻科中的螺旋藻屬低等 水生植物。螺旋藻不僅具有很高的營養價值，而且含有大量的對人體有益的生理活性物質， 在食品、醫藥和生物工程領域有廣泛應用。螺旋藻中含有豐富的蛋白質、葉綠素、多糖、P-胡蘿蔔素以及Y-亞麻酸、脂肪等生物活性物質。螺旋藻的主要成分是蛋白質，佔乾重的60% -70%，且包含人體所需的8種胺基酸及多種生物活性物質，具有特殊的醫療保健作用。葉綠 素的含量也很高，能達到1.5g/100g。
由於螺旋藻所含以上多種生物活性物質可作為新型的藥食兩用資源，現己成為當前微藻 研究的焦點之一。現在對螺旋藻的應用基本上是以原藻乾粉或其他劑型的形式進入市場，其 技術含量較低，對生物活性成分的開發利用不足。現有技術中雖有螺旋藻活性物質提取工藝 的報導，但往往只是針對某一單一的活性物質，不能兼顧多種生物活性物質，從而不能充分 有效地利用現有的螺旋藻資源，造成資源的浪費。因此，進行螺旋藻的綜合利用和深度開發， 實現螺旋藻中多種活性成分的綜合開發，對螺旋藻產業發展具有積極的意義。
發明內容
針對上述現有技術，本發明提供了一種從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖 的綜合提取工藝。
本發明是通過以下技術方案實現的
一種從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝，包括以下步驟
1) 前處理取新鮮螺旋藻，稱重，離心洗滌1 3次，稱重藻泥，向上清中加0.5 4倍 藻泥重量的水，攪拌均勻，凍融兩次(使細胞壁破裂)，第二次溶解後，再加入藻泥2 8倍 重量的水，放置2 8h，離心，得上清液和沉澱A,沉澱A經乙醇索式提取，分為提取液和 沉澱B，其中上清液用於藻藍蛋白的提取；沉澱A用於葉綠素鋅鈉鹽的提取；沉澱B用於螺 旋藻多糖的提取；
2) 藻藍蛋白的提取取上述上清液，用4 6mol/L鹽酸調pH到4.0 4.5，攪拌半小時 後，4000卬m離心15min，取上清，用分子量6k的超濾膜超濾一次，再加4倍體積蒸餾水超 濾一次，調pH到7.0後冷凍乾燥，即得藻藍蛋白粉末；3) 葉綠素鋅鈉鹽的提取沉澱A經乙醇索式提取6 12h (90%乙醇，加入過量硫酸鋅， 鹽酸調pH2 3),得提取液，用10^NaOH溶液調pH到7 8，過濾除去不溶性雜質，濾液 繼續調pH到11 12，維持pH11 12， 60'C攪拌下皂化1 2h，用石油醚萃取至醚層顯淡黃 色，濃縮皂化液至l/3體積，用鹽酸調節pH至2 3，有沉澱析出，過濾，濾餅依次用水、 石油醚洗滌各兩次後(洗滌順序為水、水、石油醚、石油醚)，用丙酮溶解濾餅，再用10% NaOH乙醇溶液調pH到11 12，過濾，烘乾，即得葉綠素鋅鈉鹽；
4) 向沉澱B中加入藻泥(含水量一般在80%)乾重10倍量的水，用0.5 5%的中性蛋 白酶(pH=7.0)在35 45。C攪拌下酶解2 5h， 4000卬m離心15min，將上清液減壓濃縮至 1/6體積，加入2 5倍量的95%乙醇，4'C放置4 12h,過濾，濾餅用無水乙醇洗1 3次， 烘乾，即得螺旋藻多糖。
所述步驟l)中凍融的方法是先20'C冷凍過夜(約12h)，再室溫溶解。 本發明的提取工藝集藻藍蛋白、葉綠素、螺旋藻多糖等活性物質的提取於一體，充分有
效地利用了現有的螺旋藻資源，避免了資源的浪費。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步的說明
實施例1從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖，步驟如下
1) 取新鮮螺旋藻6kg，離心洗滌l次，稱重藻泥重量為2kg，向上清中加2L水，攪拌均 勻，凍融兩次(2(TC冷凍過夜，室溫溶解)，第二次溶解後，再加入6L水，放置3h，離心， 得上清液和沉澱A。
2) 取上述上清液，用6mol/L鹽酸調pH到4.2 4.5,攪拌半小時後離心(4000rpm、 15min)， 上清經分子量6k的超濾膜超濾一次，再加4倍蒸餾水超濾一次，調pH到7.0後冷凍乾燥， 即得藻藍蛋白粉末。
3) 沉澱A經乙醇索氏提取8h (90%乙醇，力n入過量硫酸鋅，鹽酸調pH2 3),上清用 10MNaOH溶液調pH7 8，過濾除去不溶性雜質，濾液繼續調pHl 1 12，維持pH11 12, 60'C下攪拌皂化1.5h，用石油醚萃取至醚層顯淡黃色，濃縮皂化液至1/3體積，用鹽酸調節 pH值2-3，有沉澱析出，過濾，濾餅依次用水，石油醚洗滌各兩次後，用丙酮溶解濾餅，再 用10XNaOH乙醇溶液調pH11 12，過濾，烘千，即得葉綠素鋅鈉鹽。
4) 向沉澱B中加入藻泥(含水量一般在80%)乾重10倍量的水，2%中性蛋白酶^11=7.0) 40。C攪拌提取3h,離心(4000卬m、 15min)，上清液減壓濃縮至1/6體積，加入3倍量95% 乙醇，4'C靜置6h，過濾後，濾餅用無水乙醇洗2次，烘乾，即得螺旋藻多糖。實施例2從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖，步驟如下-
1) 取新鮮螺旋藻10kg，離心洗滌1次，稱重藻泥重量為4kg，加4L水，攪拌均勻，凍 融兩次(20'C冷凍過夜，室溫溶解)，第二次溶解後，再加入12L水，放置3h,離心，得上 清液和沉澱A。
2) 取上述上清液，用5mol/L鹽酸調pH到4.2~4.5，攪拌半小時後離心(4000卬m、 15min), 上清經分子量6k的超濾膜超濾一次，再加4倍蒸餾水超濾一次，調pH7.0後冷凍乾燥即得藻 藍蛋白粉末。
3) 沉澱A經乙醇索氏提取10h (90%乙醇，加入過量硫酸鋅，鹽酸調pH2 3)，上清用 10^NaOH溶液調pH7 8，過濾除去不溶性雜質，濾液繼續調pH11 12，維持pH11 12 , 60'C下攪拌皂化1.5h，用石油醚萃取至醚層顯淡黃色，濃縮皂化液至1/3體積，用鹽酸調節 pH值2-3，有沉澱析出，過濾，濾餅依次用水，石油醚洗滌各兩次後，用丙酮溶解濾餅，再 用10^NaOH乙醇溶液調pHll-12，過濾，烘乾，即得葉綠素鋅鈉鹽。
4) 向沉澱B中加入藻泥(含水量一般在80%)乾重IO倍量的水，3%中性蛋白酶 11=7.0) 4(TC攪拌提取4h，離心(4000rpm、 15min),上清液減壓濃縮至1/6體積，加入3倍量95% 乙醇，4'C靜置8h,過濾後，濾餅用無水乙醇洗2次，烘乾，即得螺旋藻多糖。
權利要求
1.一種從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝，包括以下步驟1)前處理取新鮮螺旋藻，稱重，離心洗滌1～3次，稱重藻泥，向上清中加0.5～4倍藻泥重量的水，攪拌均勻，凍融兩次，第二次溶解後，再加入藻泥2～8倍重量的水，放置2～8h，離心，得上清液和沉澱A，沉澱A經乙醇索式提取，分為提取液和沉澱B，其中上清液用於藻藍蛋白的提取；沉澱A用於葉綠素鋅鈉鹽的提取；沉澱B用於螺旋藻多糖的提取；2)藻藍蛋白的提取取上述上清液，用4～6mol/L鹽酸調pH到4.0～4.5，攪拌半小時後，4000rpm離心15min，取上清，用分子量6k的超濾膜超濾一次，再加4倍體積蒸餾水超濾一次，調pH到7.0後冷凍乾燥，即得藻藍蛋白粉末；3)葉綠素鋅鈉鹽的提取沉澱A經乙醇索式提取6～12h，得提取液，用10％NaOH溶液調pH到7～8，過濾除去不溶性雜質，濾液繼續調pH到11～12，維持pH11～12，60℃攪拌下皂化1～2h，用石油醚萃取至醚層顯淡黃色，濃縮皂化液至1/3體積，用鹽酸調節pH至2～3，有沉澱析出，過濾，濾餅依次用水、石油醚洗滌各兩次後，用丙酮溶解濾餅，再用10％NaOH乙醇溶液調pH到11～12，過濾，烘乾，即得葉綠素鋅鈉鹽；4)向沉澱B中加入藻泥乾重10倍量的水，用0.5～5％的中性蛋白酶在35～45℃攪拌下酶解2～5h，4000rpm離心15min，將上清液減壓濃縮至1/6體積，加入2～5倍量的95％乙醇，4℃放置4～12h，過濾，濾餅用無水乙醇洗1～3次，烘乾，即得螺旋藻多糖。
2. 根據權利要求l所述的從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝，其特徵在 於所述步驟l)中凍融的方法是先2(TC冷凍12h，再室溫溶解。
全文摘要
本發明公開了一種從螺旋藻中提取藻藍蛋白、葉綠素和螺旋藻多糖的工藝，包括以下步驟取新鮮螺旋藻，稱重，離心洗滌，稱重藻泥，向上清中加水，攪拌均勻，凍融兩次(使細胞壁破裂)，第二次溶解後，再加入水，放置2～8h，離心，得上清液和沉澱A，沉澱A經乙醇索式提取，分為提取液和沉澱B，其中上清液用於藻藍蛋白的提取；沉澱A用於葉綠素鋅鈉鹽的提取；沉澱B用於螺旋藻多糖的提取。本發明的提取工藝集藻藍蛋白、葉綠素、螺旋藻多糖等活性物質的提取於一體，充分有效地利用了現有的螺旋藻資源，避免了資源的浪費。
文檔編號C07D487/00GK101607988SQ20091001668
公開日2009年12月23日 申請日期2009年7月3日 優先權日2009年7月3日
發明者朱道鵬, 李志良, 杜紀斌 申請人:威海格瑞安生物工程有限公司