一種分離和富集蓮子心總黃酮和總生物鹼的方法
2023-05-09 17:37:31 1
專利名稱：一種分離和富集蓮子心總黃酮和總生物鹼的方法
技術領域：
本發明屬於從蓮子心中分離純化有效部位的技術，具體涉及一種分離和富集蓮子心總黃酮和總生物鹼的方法。
背景技術：
蓮子心為睡蓮科植物蓮(Nelumbo nucifera Gaertn.)成熟種子的綠色胚芽及胚根，古名薏，味苦、性寒，主要產於我國湖南、湖北、浙江、福建和江西等地。據《本草綱目》記載，它能「清心去熱」，而《隨息居飲食譜》則記載它味「苦涼」，能「斂液、止汗、消熱、養神、止血、固精」，現代藥理分析證明它有強心降壓、逆轉腫瘤多藥耐藥之功效。研究發現，蓮子心中含有多種化學成分，其中主要為生物鹼、黃酮類、多糖及揮髮油等物質。其中蓮子心中生物鹼主要為蓮心鹼(liensinine)、異蓮心鹼(isoliensinine)、 甲基蓮心鹼(neferine)、荷葉鹼(nuciferine)、前荷葉鹼(pronuciferine)、蓮心季按鹼 (Lotusine)等，具有降血壓、抗心律失常、抗血小板聚集、降血糖、抗腫瘤、化療增敏等藥理作用。蓮子心中也含有含量較高的黃酮類物質，其主要成分為木犀草素(galuteoline)、蘆丁(rutin)、金絲桃甙(hyperin)等，藥理實驗結果說明，其具有抗氧化、清除自由基、抑制腫瘤細胞等藥理作用。歐陽明安等對蓮子心的高極性的水溶性次生代謝產物的種類進行了初步研究，分離純化得到了 14個化合物，其主要為黃酮和黃酮甙類化合物。潘揚等分別對蓮子心70%乙醇提取物、總生物鹼類成分及總黃酮類成分3個部位進行降血糖活性研究， 發現蓮子心中降血糖的活性部位為生物鹼類成分而非黃酮成分。這充分表明，蓮子心生物鹼與黃酮類物質可能具有不同的生物活性。蓮心生物鹼常用的純化方法為先用酸溶鹼沉法、有機溶劑萃取法等獲得脂溶性總鹼，再用矽膠柱層析法獲得有效部位，此類方法工藝複雜，使用較多有毒的有機溶劑，成品後處理繁瑣，對環境及人身危害較大，不適合大規模工業生產應用。公開號為CN1117735C 的中國專利公開了從蓮子心中提取純化異蓮心鹼和蓮心鹼的製備方法，但該方法採用有機溶劑萃取法，使用了大量氯仿、苯、乙醚等有毒有機溶劑，對環境和人身危害較大。公開號為 CN1670026A的中國專利公開了蓮子心生物鹼提取物的製備方法，該方法應用非極性大孔樹脂和大孔強酸聚苯乙烯系陽離子交換樹脂，工藝步驟複雜，而且，目標只是蓮子心總生物鹼，沒有將生物鹼和黃酮類組分綜合利用，導致藥材的綜合利用率較低。
發明內容
本發明的目的在於克服已有的蓮心生物鹼和黃酮類物質分離純化方法毒性大、純化步驟繁瑣、藥材綜合利用率低的缺點，提供了一種快速簡便、環境友好、藥材綜合利用率高的從蓮子心中分離、富集生物鹼和黃酮類物質的技術方案。本發明採用陽離子交換樹脂分離和富集蓮心生物鹼和黃酮類物質，改進之處為 1.將蓮心生物鹼和黃酮類物質集中到同一分離單元進行分離，提高了設備和材料的利用率，降低分離成本；2.根據蓮心生物鹼和黃酮類物質的結構特點，用不同洗脫劑對其分別洗脫，分布分離和富集有效成分，提高蓮子心藥材的綜合利用率。本發明的目的是通過如下技術方案實現的一種分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，具體包括以下步驟(1)將蓮子心用質量百分濃度50% 80%乙醇於提取設備中加熱回流提取，每次所用溶劑為生藥質量的6 12倍，提取1 3次，經過濾得到蓮子心提取液，減壓濃縮至生藥質量的3 5倍；(2)將步驟(1)所得到的提取液經澄清劑吸附澄清處理，除雜過濾，即為除雜液；(3)將步驟( 所得的除雜液經大孔弱酸型陽離子交換樹脂，先用純化水洗脫雜質，後用質量百分濃度50% -95%乙醇作為洗脫劑分離總黃酮，洗脫液濃縮乾燥後即得總黃酮組分富集物；(4)再用含NaCl的質量百分濃度50%-95%乙醇作為生物鹼洗脫劑分離總生物鹼，洗脫液濃縮至幹，熱乙醇少量多次洗滌，除去NaCl，合併洗滌液，冷藏，過濾，回收乙醇乾燥即得總生物鹼組分富集物。所述的步驟O)中，澄清劑為殼聚糖及ZTC1+1-II型天然澄清劑；所述的步驟(3)中，所用乙醇的質量百分濃度優選為70%。所述的步驟⑷中，所述的生物鹼洗脫劑為NaCl含量為0. 01 0. 04g/mL的70% 乙醇溶液；所述的步驟(3)和(4)中，所述的洗脫劑用量分別為5 10倍柱體積。與現有技術相比，本發明的優勢在於1、本發明採用大孔弱酸型陽離子交換樹脂在同一分離單元對蓮子心總生物鹼和總黃酮進行分離富集，選用不同的洗脫液洗脫，分步分離富集，提高了設備和材料利用率， 降低了分離成本，提高了藥材的綜合利用率。2、本發明工藝簡單快捷，生物鹼和黃酮類物質得率高，蓮子心藥材綜合利用率高， 設備及材料廉價易得，適合工業生產。
具體實施例方式下面結合實例對本發明進行詳細描述，但是它並不僅限於實施例或類似實例。實施例1 取蓮子心藥材100g，用8倍於藥材質量的70% (質量百分濃度)乙醇回流提取 60min，過濾。藥渣再用10倍於藥材質量的70% (質量百分濃度)乙醇回流提取45min，過濾，合併濾液，減壓濃縮至生藥質量的5倍，用殼聚糖除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D152樹脂30mL裝入內徑15mm，高40mm的玻璃柱內，加入上述製備所得的蓮子心除雜液，以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質。然後用 IOBV 70%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用5BV NaCl含量為0. 02g/mL的70% (質量百分濃度)乙醇溶液以2 BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I乾燥後得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為87. 8% ；洗脫液II乾燥後得總生物鹼，其甲基蓮心鹼含量為 38. 85%，異蓮心鹼含量為16. 21%，蓮心鹼含量為12. 35%。實施例2 取蓮子心藥材lOOOg，用10倍於藥材質量的60% (質量百分濃度)乙醇回流提取兩次，合併提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容至生藥質量的3倍，用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D152樹脂300mL裝入內徑15mm，高40mm的玻璃柱內，加入上述製備所得的，蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質。IOBV 70%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用7BV NaCl含量為0. 01g/mL的70%乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I乾燥後得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為84. 2%;洗脫液II乾燥後得總生物鹼，其甲基蓮心鹼含量為36. 36%，異蓮心鹼含量為15. 34%，蓮心鹼含量為12. 21%。實施例3 取蓮子心藥材lOOOg，用12倍於藥材質量的70% (質量百分濃度)乙醇回流提取兩次，合併提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容生藥質量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D001-CC型陽離子樹脂300mL裝入內徑15mm，高40mm的玻璃柱內。加入上述製備所得的蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質。5BV 50%乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用IOBV NaCl含量為0. 05g/ mL的50% (質量百分濃度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。洗脫液I乾燥後得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為76. 2% ；洗脫液II乾燥後得總生物鹼，其甲基蓮心鹼含量為35. 72%，異蓮心鹼含量為14. 78%，蓮心鹼含量為11.87%。實施例4 取蓮子心藥材lOOOg，用8倍於藥材質量的50% (質量百分濃度)乙醇回流提取三次，合併提取液，回收乙醇至完全，加純化水定容至生藥質量的5倍。用ZTC1+1-II型澄清劑除雜處理，過濾，得除雜液。將已預處理好的D113型陽離子樹脂300mL裝入內徑15mm，高40mm的玻璃柱內。 加入上述製備所得的蓮子心除雜液。以約5倍柱體積純化水，2BV/h的流速洗去水溶性雜質。10BV 95% (質量百分濃度)乙醇以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液I。再用7BV NaCl 含量為0. 02g/mL的95% (質量百分濃度)乙醇溶液以2BV/h的流速洗脫，收集洗脫液II。 洗脫液I乾燥後得蓮子心總黃酮粗品，總黃酮含量為84. 6%;洗脫液II乾燥後得總生物鹼， 其甲基蓮心鹼含量為37.沈％，異蓮心鹼含量為16. 13%，蓮心鹼含量為12. 58%。
權利要求
1.一種分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，其特徵在於，具體包括以下步驟(1)將蓮子心用質量百分濃度50% 80%乙醇加熱回流提取，每次所用溶劑為生藥質量的6 12倍，提取1 3次，經過濾得到蓮子心提取液，減壓濃縮至生藥質量的3 5倍；(2)將步驟(1)所得到的提取液經澄清劑吸附澄清處理，除雜過濾，即為除雜液；(3)將步驟( 所得的除雜液經大孔弱酸型陽離子交換樹脂，先用純化水洗脫雜質，後用質量百分濃度50% -95%乙醇作為洗脫劑分離總黃酮，洗脫液濃縮乾燥後即得總黃酮組分富集物；(4)再用含NaCl的質量百分濃度50%-95%乙醇作為生物鹼洗脫劑分離總生物鹼，洗脫液濃縮至幹，熱乙醇少量多次洗滌，除去NaCl，合併洗滌液，冷藏，過濾，回收乙醇乾燥即得總生物鹼組分富集物。
2.根據權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，其特徵在於， 在所述的步驟O)中，澄清劑為殼聚糖及ZTC1+1II型天然澄清劑。
3.根據權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，其特徵在於， 在所述的步驟(3)中，所用乙醇的質量百分濃度為70%。
4.根據權利要求1所述的分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，其特徵在於， 在所述的步驟(4)中，所述的生物鹼洗脫劑為NaCl含量為0. 01 0. 04g/mL70%乙醇溶液。
5.根據權利要求1或4所述的分離和富集蓮子心總生物鹼和總黃酮的方法，其特徵在於，在所述的步驟C3)和中，所述的洗脫劑用量分別為5 10倍柱體積。
全文摘要
本發明涉及從蓮子心中分離純化有效部位的技術，具體公開了一種分離和富集蓮子心總黃酮和生物鹼的方法，是將蓮心生物鹼和黃酮類物質集中到同一分離單元進行分離，再用不同洗脫劑對其分別洗脫和富集。具體步驟為以蓮子心為原料，用乙醇/水提取，並用澄清劑進行除雜處理。將除雜液通過大孔弱酸型陽離子交換樹脂富集分離，用乙醇/水洗脫得到總黃酮，洗脫液濃縮至幹，經乾燥即得蓮子心總黃酮；再用含NaCl的乙醇/水洗脫得到總生物鹼，洗脫液濃縮至幹，除鹽，經乾燥即得蓮子心總生物鹼。本發明所述的方法具有簡便易行，成本低廉和環境友好等特點，蓮子心總黃酮和總生物鹼得率高，大大節約了蓮子心資源，提高了蓮子心的藥用利用率。
文檔編號A61P9/06GK102228515SQ20111017085
公開日2011年11月2日 申請日期2011年6月23日 優先權日2011年6月23日
發明者劉韶, 尹桃, 李新中, 雷鵬 申請人:中南大學