一種高純度米爾貝黴素的製備方法
2023-05-09 07:16:26
一種高純度米爾貝黴素的製備方法
【專利摘要】本發明公開了一種高純度米爾貝黴素的製備方法。將米爾貝黴素粗品用大孔吸附樹脂富集並分離出米爾貝黴素A3和A4，濃縮、乾燥；然後將米爾貝黴素A3和A4乾粉用甲醇或乙腈溶解，用半製備液相色譜製備得高純度米爾貝黴素A3和A4。該製備方法簡單，無副產物和雜質殘留，產品分離純化穩定且成品純度高(可達99.99％)。
【專利說明】一種高純度米爾貝黴素的製備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬於化學領域，具體涉及一種大環內酯類抗生素米爾貝黴素標準品的製備方法。
【背景技術】
[0002]米爾貝黴素(milbemycin)是大環內酯類抗體內外寄生蟲藥物，主要有A3、A4同系物，常用做犬的驅蟲藥。米爾貝黴素對控制和預防大部分常見寄生蟲疾病都有很好的效果。通常用來預防惡絲蟲病，控制線蟲、鉤蟲引發的犬、貓疾病及犬的鞭蟲病。由於米爾貝黴素受外國專利保護，我國使用的米爾貝黴素主要來自於國外進口，昂貴的價格使米爾貝黴素的使用受到了巨大的限制。在生產技術和應用上我國都遠遠低於外國水平，並且目前文獻中還未出現有關米爾貝黴素的製備方法。自行研發米爾貝黴素的製備方法將打破這種壟斷現象，能大大加快我國自主生產米爾貝黴素的腳步，因此如何製備出高純度的米爾貝黴素成品，一直受到人們的重視。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在於解決我國對於米爾貝黴素純品製備技術空洞的缺陷，提供一種大環內酯類抗生素米爾貝黴素的製備方法，其製備工藝簡單，收率高，相比其他手段，成本有明顯的降低，產品分離純化結果穩定且成品純度高。
[0004]為實現上述技術目的，本發明採取的技術方案是:
[0005]一種高純度米爾貝黴素的製備方法，包括如下步驟:
[0006]I)將含量多50% (質量百分比含量)米爾貝黴素粗品用大孔吸附樹脂富集並分離出米爾貝黴素A3和A4，濃縮、乾燥得到乾粉；
[0007]2)將米爾貝黴素A3和A4乾粉用甲醇或乙腈溶解，然後用半製備液相色譜製備得高純度米爾貝黴素A3和A4。
[0008]上述步驟I)富集用的樹脂例如HP20、HPD100, HPD300吸附樹脂。通常，樹脂裝柱的徑高比1: (5-8)。
[0009]在本發明的一些具體實施例中，步驟I)將米爾貝黴素粗品用60%乙醇或甲醇溶解後上柱，然後以50%-62% (V/V)的乙醇溶液或者55%-65% (V/V)的甲醇溶液為流動相進行解吸，將米爾貝黴素A3和A4的解吸液合併、濃縮，用酯類有機溶劑(例如乙酸乙酯、乙酸丁酯)萃取，再濃縮得到米爾貝黴素A3和A4的乾粉。
[0010]上述步驟2)所用甲醇是純度達99.%的分析級甲醇，所用乙腈為純度達99.%分析級乙腈；利用甲醇或乙腈將步驟I)得到的乾粉溶解為濃度為30mg/mL?67mg/mL的溶液，然後進行半製備液相色譜。
[0011]在本發明的一些具體實施例中，步驟2)的半製備液相色譜以乙腈:水:甲醇=70:28:2(體積比)的溶液為流動相，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集米爾貝黴A3和A4。
[0012]在本發明的具體實施例中，上述步驟2)所用的半製備液相色譜儀為安捷倫1200，半製備柱為LP-C8 (上海月旭科技有限公司)，半製備柱為25.01*250mm，粒徑為5_8 μ m。
[0013]製備得到的米爾貝黴素A3和A4樣品通過高效液相色譜(HPLC)進行純度檢測，純度均達到98% -100%，製備收率彡95%。
[0014]本發明提供了一種大環內酯類抗生素米爾貝黴素的製備方法，大大提高了米爾貝黴素製備純度，米爾貝黴素A3和A4產物純度高(可達99.%)，而且製備工藝簡單，收率高，相比其他手段，成本有明顯的降低，不易產生副產物，實現了我國對米爾貝黴素高純度純品分離的突破。
【具體實施方式】
[0015]以下通過【具體實施方式】對本發明作進一步說明，但這並非是對本發明的限制，本領域技術人員根據本發明的基本思想，可以做出各種修改或改進，但是只要不脫離本發明的基本思想，均在本發明的範圍之內。
[0016]實施例1
[0017]取IL HP20樹脂裝柱(徑高比=1:6)，取米爾貝黴素粗品12g(含量為56% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用50%的乙醇解吸樹脂柱，檢測。將分離出的米爾貝黴素A3、A4合併，濃縮後水層為500mL，加500mL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮、乾物質重8.09g(含量為82% )。
[0018]取2g富集後的米爾貝黴素A3和A4用30mL的甲醇溶解。將溶解液進半製備液相色譜儀，所用的半製備液相色譜儀為安捷倫1200，半製備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μ m。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇=70:28:2 (體積比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質量1.92g，收率為 96%。
[0019]採用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ 1，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為100%。
[0020]實施例2:
[0021]取1.8L HP100樹脂(上海華震樹脂有限公司)裝柱(徑高比=1:8)，取米爾貝黴素粗品26.39g(含量為51.20% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用60%的二氯甲烷解吸樹脂柱，梯度抽取檢測。將分離出的米爾貝黴素A3、A4合併，濃縮後水層為810mL，加SlOmL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮，乾物質重14.5g(含量為93.21% )。
[0022]取2g富集後的米爾貝黴素A3和A4用30mL的乙腈溶解。將溶解液進半製備液相色譜儀，所用的半製備液相色譜儀為安捷倫1200，半製備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μ m。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇=70:28:2 (體積比)，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質量為1.8g，收率為90%。
[0023]採用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ I，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為99.8%。
[0024]實施例3
[0025]取2L HP300大孔吸附樹脂裝柱(徑高比=1:7)，取米爾貝黴素粗品14.94g(含量為53.21% )，用60%乙醇溶解至3000mL上柱。用55%的乙醇解吸樹脂柱，梯度抽取檢測。將分離出的米爾貝黴素A3、A4合併，濃縮後水層為450mL，加450mL乙酸乙酯進行萃取，取乙酸乙酯層，濃縮，乾物質重8.91g(含量為89.23% ) ο
[0026]取2g富集後的米爾貝黴素A3和A4用30mL的乙腈溶解。將溶解液進半製備液相色譜儀，所用的半製備液相色譜儀為安捷倫1200，半製備柱為LP-C8(上海月旭科技有限公司)，25.01*250mm，粒徑為5-8 μm。每針進樣4mL，流動相為乙腈:水:甲醇= 70:28:2，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集A3和A4，總質量為1.96g，收率為 98%。
[0027]採用島津液相色譜儀LC2010對收集樣品進行HPLC檢測，進樣體積為20 μ I，流動相為乙腈:水:三乙胺:冰醋酸= 3000:1000:4:4(體積比)，紫外檢測波長240nm，柱壓力為8.2Mpa，樣品檢測純度為100%。
【權利要求】
1.一種高純度米爾貝黴素的製備方法，包括如下步驟: 1)將含量多50%的米爾貝黴素粗品用大孔吸附樹脂富集並分離出米爾貝黴素A3和A4，濃縮、乾燥得乾粉； 2)將步驟I)得到的米爾貝黴素A3和A4乾粉用甲醇或乙腈溶解，用半製備液相色譜製備得高純度米爾貝黴素A3和A4。
2.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟I)富集用的樹脂選自下列型號的樹脂之一:HP20、HPD100 和 HPD300。
3.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟I)所用樹脂柱的徑高比為I: (5 ?8) ο
4.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟I)具體是:將米爾貝黴素粗品用60%乙醇或60%甲醇溶解後上柱，然後以50% -62%的乙醇溶液或者55% -65%的甲醇溶液為流動相進行解吸，將米爾貝黴素A3和A4的解吸液合併、濃縮，用酯類有機溶劑萃取，再濃縮、得到米爾貝黴素A3和A4的乾粉。
5.如權利要求4所述的製備方法，其特徵在於，所述酯類有機溶劑是乙酸乙酯或乙酸丁酯。
6.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟2)用甲醇或乙腈將乾粉溶解為濃度30mg/mL?67mg/mL的溶液進行半製備液相色譜。
7.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟2)所用甲醇是純度達99%的分析級甲醇，所用乙腈為純度達99.%分析級乙腈。
8.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟2)的半製備液相色譜以體積比乙腈:水:甲醇=70:28:2的溶液為流動相，流速15mL/min?20mL/min，紫外檢測波長為244nm，分別收集米爾貝黴A3和A4。
9.如權利要求1所述的製備方法，其特徵在於，步驟2)採用的半製備液相色譜儀為安捷倫1200，半製備柱為LP-C8色譜柱。
10.如權利要求9所述的製備方法，其特徵在於，步驟2)半製備柱為25.01*250mm，粒徑為 5-8 μπι。
【文檔編號】C07D493/22GK104497003SQ201410696342
【公開日】2015年4月8日 申請日期:2014年11月27日 優先權日:2014年11月27日
【發明者】周筠翔, 趙燕, 謝雲, 張洪蘭, 詹付鳳, 葉靜 申請人:北大醫藥重慶大新藥業股份有限公司, 北大方正集團有限公司, 北大醫療產業集團有限公司