用於診斷中風的nt-原anp和nt-原bnp的製作方法

2023-04-27 03:34:56 1

用於診斷中風的nt-原anp和nt-原bnp的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作(TIA)的方法，所述受試者被懷疑已展現過短暫性缺血發作，但尚未展現中風。該方法基於來自所述受試者的樣品中NT-原ANP量的測定。而且，本發明還針對一種用於診斷受試者中的急性腦缺血事件的方法，其基於來自所述受試者的樣品中NT-原BNP和NT-原ANP量的測定。所述方法還包括計算NT-原BNP和NT-原ANP的量的比率的步驟。本發明還涵蓋適用於實施本發明方法的試劑盒和裝置。上面提到的量/比率的高數值指示了病症。優選地，所述患者在收集樣品前72小時內，更優選地24小時內已經懷疑具有TIA的症狀。然而，優選地，所述樣品在症狀結束後不早於1小時獲得。
【專利說明】用於診斷中風的NT-原ANP和NT-原BNP 發明領域
[0001] 本發明涉及一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作（TIA)的方法，所述受試 者被懷疑已展現過短暫性缺血發作（Transitory ischemic attack),但尚未展現中風 (stroke)。該方法基於來自所述受試者的樣品中NT-原ANP量的測定。而且，本發明還針對 一種用於診斷受試者中的急性腦缺血事件（acute cerebral ischemic event)的方法，其 基於來自受試者的樣品中NT-原BNP和NT-原ANP量的測定。所述方法還包括計算NT-原 BNP和NT-原ANP的量的比率的步驟。本發明還涉及用於實施TIA診斷和用於診斷急性腦 缺血事件的系統，和在實施本文所公開的方法中使用的試劑和試劑盒。本發明進一步涵蓋 適用於實施本發明方法的試劑盒和裝置。
[0002] 發明背景
[0003] 中風是繼缺血性心臟病後第二位的在高收入國家中的傷殘調整壽命年損失（lost disability-adjusted-life years)的起因和全球範圍內的死亡起因。如果早期呈現， 中風的不良後果可通過融栓改善，在後期呈現的情況中通過使用阿司匹林和抗凝的二級預 防（預防二級中風）似乎是避免疾病進展的唯一適宜方法（van der Worp B和van Gijn J. NEJM 2007:357:572. 578)。
[0004] 短暫性缺血發作（TIA)是僅短暫持續的中風症狀的發作，標準定義是低於24h，但 大多數TIA持續低於lh。TIA的起因類似於缺血性中風的起因，但由於TIA可能預報中風， 因此它們是應當分開考慮的一項重要的風險因子（參見W. E. Smith等，Cerebrovascular Diseases, Chapter 364 in Harrison, Principles of Internal Medicine,17th edition)〇
[0005] -項特定的挑戰代表為對短暫性缺血發作（TIA)的診斷，因為症狀僅持續數小 時，然後症狀消失，而結果是主治醫師不確定診斷和需要的工作。而且，症狀依賴於受影響 的區域（和伴隨的血管）。大腦中動脈（arteria cerebri media)經常受影響，相關的症 狀包括失語症、對側臂或腿的虛弱。大腦前部（cerebri anterior)的TIA可能與失語症、 apractnosia、意識錯亂（confusion)、失讀症等有關，如果腦下部的中心部分受影響，那麼 症狀可能是意向震顫（intention tremor)、共濟失調感覺遲鈍（ataxia dysesthesia)等。 髓質的損傷可以包括眩暈、復視、噁心和嘔吐。如此，許多症狀可能是非特定的。而且，由於 它們僅暫時存在而不能得到驗證。因此，TIA的診斷可能是困難的而且不能容易地與其他 疾病分開。
[0006] TIA由腦局部區域的暫時灌注不足和缺血導致，而功能障礙由產生代謝和離子擾 亂的局部水腫引起的腦的可逆性功能異常所導致。TIA的診斷是重要的，因為有過TIA的 人相比於沒有這些TIA發作的人有顯著增加的中風風險。中風的風險在TIA的2天後是 4-5 %，而在7天後是11 %。在先前的48小時內患有過TIA，TIA持續>10分鐘，有心房纖 維顫動，而且有進展性頸動脈狹窄和TIA按照漸強模式發生超過一次的患者具有最大的中 風風險。
[0007] NT-原BNP和NT-原ANP是公知的心臟標誌物。NT-原BNP屬於已知從腦釋放的 腦利鈉肽（natriuretic peptide),然而大多數BNP源於心臟。NT-原BNP和NT-原ANP都 與中風的心栓性（cardioembolic)起因相關（Rodrigues-Yanez M.等，Disease Markers 2009:26:189 - 195)。
[0008] Estrada 等.1994 (Am J Hypertens, 7:1085-1089)披露了用於診斷患者中的缺血 性中風的基於ANP檢測的方法。依照Estrada，ANP水平在中風患者中高於在正常志願者 中。
[0009] Sato等· 1995(Kurume Med J, 42:71-77)披露了用於區分高風險和低風險中風患 者且還用於區分心栓性中風和腔隙性（lacunar)中風的基於ANP檢測的方法。
[0010] MSkikallio 等· 2005 (Stroke, 36:1016-1020)披露了 NT-原 ANP 和 NT-原 BNP 的 血漿水平在（急性）中風患者中等於或高於患有急性心肌梗塞的患者，且該水平在中風患 者中相對於健康患者升高。還涵蓋腦損傷的幅度與NT-原ANP和NT-原BNP的水平平行。
[0011] Shibazaki等· 2009 (Int Med 48:259-264)披露了用於在中風患者中區分心栓性 中風和其他中風類型（包括小血管疾病、大血管疾病）的基於血漿BNP檢測的方法。
[0012] Rodrigues-Yanez 等· 2009 (Disease Markers 26:189-195)披露了用於在中風患 者中將心栓性中風與動脈粥樣硬化血栓形成（atherothrombotic)、腔隙性和其他中風類型 區分開來的基於血清NT-原BNP檢測的方法。對NT-原ANP的相應測量顯示類似的效用， 儘管可信的數據要少一些。
[0013] Naruse等（Stroke 1991:22:61 - 65)描述了一項研究，其中使大鼠中的中左側腦 動脈閉塞以誘發腦水腫。進一步灌注ANP。ANP灌注導致腦水腫的降低。該結果解釋為一 種保護效應。最近，Wiggins A.K.等.（Neuroscience 2003:118:715 - 26)報導了在擴散 性抑制（spreading depression)模型的大鼠中的ANP表達並將ANP視為一種神經保護途 徑。
[0014] 發明人在較大的TIA和中風患者的分組中測定了 NT-原ANP和NT-原BNP的量。 發現NT-原ANP是TIA的可靠標誌物。該觀察是有利的，因為TIA的診斷是困難的（尤其 是相對於中風的診斷而言）。而且，顯示TIA患者中的NT-原ANP水平在TIA後升高達相當 長的時間。這允許甚至在TIA後數天對TIA的診斷。
[0015] 需要用於診斷受試者中的短暫性缺血發作的手段和方法。因此，本發明的根本性 技術問題可視為提供用於滿足前述需要的手段和方法。
[0016] 所述技術問題由權利要求和下文中表徵的實施方案解決。
[0017] 發明概述
[0018] 用於診斷短暫件缺血發作（TIA)的方法
[0019] 本發明涉及一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作（TIA)的方法，所述受試者 被懷疑已展現出短暫性缺血發作，但尚未展現中風，所述方法包括測定來自所述受試者的 樣品中NT-原ANP的量。
[0020] 在一個優選的實施方案中，前述方法進一步包括將測定的NT-原ANP量與參照量 比較。由此，診斷短暫性缺血發作。
[0021] 如此，本發明具體地涉及一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作（TIA)的方 法，所述受試者被懷疑已展現出短暫性缺血發作，但尚未展現中風，所述方法包括以下步 驟：
[0022] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0023] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此診斷短暫性缺血發作。
[0024] 優選地，基於步驟b)中實施的比較的結果，通過實施進一步的步驟c)診斷所述受 試者是否展現過短暫性缺血發作，來診斷所述受試者是否展現過短暫性缺血發作。
[0025] 優選地，本發明的方法是離體方法。而且，它除了上文明確提及的那些外還可以包 括其他步驟。例如，另外的步驟可以涉及樣品預處理或評估由所述方法獲得的結果。所述 方法可以手動或由自動化輔助進行。優選地，步驟（a)和/或（b)可以全部或部分由自動 化輔助，例如通過適用於步驟（a)中測定或計算機執行的比較和/或基於步驟（b)中所述 比較的診斷的機器人和感應設備。更優選地是完全以自動化方式實施所述方法。在這種情 況下，在步驟b)中建立的診斷結果以適宜的輸出形式生成，從而其可用作例如醫學專業人 員建立最終臨床診斷的輔助。
[0026] 因此，本發明優選地還涉及一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作（TIA)的系 統，所述受試者被懷疑已展現出短暫性缺血發作，但尚未展現中風，所述系統包含：
[0027] a)配置為使來自所述受試者的樣品的一部分與對標誌物NT-原ANP具有特異性結 合親和力的配體體外接觸的分析單元，
[0028] b)配置為檢測來自與所述配體接觸的所述受試者樣品部分的信號的分析單元，
[0029] c) -種計算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處於可操作聯繫中，和
[0030] d) -種非短暫性機器可讀媒體（media)，其包含可由所述處理器執行的多個指 令，所述指令在執行時計算所述標誌物的量，並將所述標誌物的量與參照量比較，由此診斷 出短暫性缺血發作。
[0031] 發明詳述
[0032] 如本文中使用的，術語"受試者"指動物，優選哺乳動物，更優選是人。依照本發明 的受試者應被懷疑為展現過短暫性缺血發作。優選地，所述受試者應被懷疑為在獲得待測 試樣品前72小時內，更優選48小時內，且最優選24小時內展現過短暫性缺血發作。因此， 應依照本發明診斷測試受試者是否展現過TIA或尚未展現過TIA，優選地在獲得待測試樣 品前72小時內，更優選48小時內，且最優選24小時內。
[0033] 優選地，待測試的受試者（以及得到參照量的受試者）不具有受損的腎功能。 如何評估受試者是否展現受損的腎功能是本領域中公知的。可以通過已知的且認為合 適的任何手段來診斷腎病症。具體地，可以通過腎小球濾過率（GFR)來評估腎功能。例 如，GFR 可以通過 Cockgroft-Gault 或 MDRD 公式計算（Levey 1999, Annals of Internal Medicine, 461-470)。GFR是每單位時間從腎小球毛細血管過濾到Bowman囊中的流體體積。 臨床上經常將其用於測定腎功能。GFR最初通過將菊粉（inulin)注射到血漿中來估測（從 來都不能測定GFR，從公式如Cockgroft Gault公式或MDRD公式衍生的所有計算僅遞送估 測值而非"真實的"GFR)。由於菊粉在腎小球過濾後不被腎再吸收，因此其排洩速率直接與 水和溶質越過腎小球濾器的過濾速率成比例。然而，在臨床實踐中，將肌酸酐清除率用於測 量GFR。肌酸酐是一種在身體中合成的內源性分子，其由腎小球游離過濾（但還由腎小管 以非常小的量分泌）。肌酸酐清除率（CrCl)因此是GFR的緊密近似。GFR通常以毫升每分 鍾（mL/min)記錄。男性GFR的正常範圍為97至137mL/min，女性GFR的正常範圍為88至 128ml/min。如此，特別涵蓋不展現受損的腎功能的受試者的GFR在此範圍內。而且，所述 受試者優選具有低於0. 9mg/dl，更優選低於1. lmg/dl且最優選低於1. 3mg/dl的血液肌酸 酐水平（特別是血清肌酸酐水平）。
[0034] 優選地，所述受試者具有針對急性腦缺血事件，特別是TIA的風險因子。術語"急 性腦缺血事件"在本文中別處描述。優選的風險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是急 性心力衰竭）、收縮和/或舒張性心功能障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風險因子 是糖尿病和肥胖。因此，所述測試受試者優選限制這些風險因子中的至少一種。具體地，涵 蓋所述測試受試者（和參照受試者，即得到參照量的受試者）患有冠狀動脈病和/或心力 衰竭。
[0035] 最優選地，所述受試者患有心力衰竭。這尤其適用於如果在本發明方法的背景中 計算NT-原ANP和NT-原BNP量的比率的情況下（見本文中別處）。術語"心力衰竭"(heart failure)是本領域中公知的。如本文中使用的，該術語優選指受損的收縮和/或舒張性心 功能，伴有心力衰竭的明顯跡象。優選地，心力衰竭在本文中指慢性心力衰竭。更優選地， 它是急性心力衰竭。術語"急性心力衰竭"優選指在最長2周內心功能的惡化，有或特別地 沒有在前的慢性心力衰竭。
[0036] 可將HF分類為多種嚴重程度。根據NYHA(紐約心臟協會）分類，心力衰竭患者被 分成屬於NYHA I、II、III和IV類。患有心力衰竭的患者已經歷其心包、心肌膜、冠狀循環 或心瓣膜的結構性和功能性變化。他將不能完全恢復其健康，而且需要治療學處理。NYHA I類患者沒有明顯的心血管疾病的症狀，但已經具有功能受損的客觀證據。NYHA II類患者 具有輕微的身體活動限制。NYHA III類患者顯示顯著的身體活動限制。NYHA IV類患者無 法沒有不適地進行任何身體活動。他們在休息時顯示心功能不全的症狀。
[0037] 這一功能分類得到更新近的 American College of Cardiology 和 American Heart Association 的分類的補充（參見 J. Am. Coll. Cardiol. 2001 ;38 ;2101-2113, 2005 年更新，參見 J.Am. Coll.Cardiol.2005;46;el-e82)。定義了 4 個階段 A、B、C 和 D。階段 A和B不是HF但視為幫助鑑定早在形成"真正的" HF之前的患者。A和B階段患者最佳定 義為那些具有形成HF的風險因子的患者。例如，患有冠狀動脈病、高血壓或糖尿病，但尚未 顯現受損的左心室（LV)功能、肥大或幾何室變形（geometric chamber distortion)的患 者將被視為階段A，而無症狀但顯示LV肥大和/或受損的LV功能的患者將稱為階段B。階 段C指具有與根本的結構性心臟病有關的HF的當前或過去的症狀的患者（許多患有HF的 患者），而階段D指患有真正的頑固性HF的患者。
[0038] 如本文中使用的，術語"心力衰竭"優選指上文提述的ACC/AHA分類的階段C和D。 在這些階段，受試者顯示典型的心力衰竭症狀。因此，患有心力衰竭的患者患有根據ACC/ AHA分類的階段C或D心力衰竭。更優選地，術語"心力衰竭"根據NYHA分類歸為NYHA III 或IV。
[0039] 還涵蓋依照本發明方法要測試的受試者（以及不展現急性冠脈綜合症（縮寫為 "ACS"）的參照受試者）。如本文中使用的，術語"ACS"優選包括STEMI(ST-升高心肌梗 塞）；NSTEMI (非ST-升高心肌梗塞）和不穩定的心絞痛。還涵蓋要測試的受試者優選不 具有ACS的病史。優選地，所述受試者不應在實施本發明方法前一周內，或更優選地一月內 (更準確地，在獲得樣品前一月內）患有過ACS。
[0040] 優選地，所述受試者也不患有心臟循環事件（特別是在獲得樣品時）。術語"心臟 循環事件"優選指心功能的突然衰退（deterioration)。這類衰退優選由心律失常、短暫的 心臟驟停或肺栓塞導致。心律失常可以兩種形式發生：緩慢心律失常（bradyarrhythmia) 和快速心律失常（tachyarrhythmia)。在緩慢心律失常中，心跳的頻率相比於健康的 受試者病理性降低，優選地，在緩慢心律失常中，心率低於60次心跳每分鐘。最頻繁的 緩慢心律失常形式是竇性心動過緩（sinus bradycardia)、竇房傳導阻滯（sinoatrial block)、竇性停搏（sinus arrest)、病態竇症候群（sick sinus syndrome)和房室傳導 阻滯（atriventricular block)。在快速心律失常中，頻率相比於健康的受試者病理性 升高，優選地，在快速心律失常中，心率高於100次心跳每分鐘。大多數快速心律失常的 病例是患有結構性心血管疾病的室上性心動過速（supraventricular tachycardia)、患 有 Wolf f-Parkinson-White 綜合症的心房顫動（atrial fibrillation)、具有 1:1 房室 傳導（atrioventricular conduction)的心房撲動（atrial flutter)和室性心動過速 (ventricular tachycardia)。肺栓塞是由血液凝塊（血栓栓塞）或氣泡（空氣栓塞）導 致的肺動脈阻塞。血液凝塊通常在骨盆靜脈或下肢靜脈中形成並遷移到肺動脈，在該處它 們被堵住。空氣栓塞優選由潛水事故或漏靜脈導管導致。肺栓塞的症狀包括胸部疼痛、呼 吸困難和咳血（咳出血）。肺循環中的壓強可能上升且可能導致右心室衰竭。心臟循環事 件也可以通過目前已知的方法測定或確認。
[0041] 術語"短暫性缺血發作"（本文中縮寫為TIA)是本領域中公知的（參見W. E. Smith 等,Cerebrovascular Diseases, chapter 364 in Harrison, Principles of Internal Medicine, 17th edition)。如本文中使用的，該術語優選指由缺血導致的神經功能障礙的 短暫性發作（印isode)，沒有急性梗塞形成，由此沒有組織死亡。如此，與中風相對，TIA不 引起由於腦細胞死亡所致的不可逆的組織損傷。TIA與中風共享相同的根本性病因學：腦 血液流動的破壞（CBF)。而且，TIA的症狀通常與中風的相同。TIA和中風的症狀是本領域 中公知的。而且，本領域中公知它們可能依賴於受缺血影響的腦部區域（亦參見下文）且 它們的嚴重性可以變化。症狀包括暫時性視覺損失（一過性黑朦（amaurosis fugax))、講 話困難（失語症）；身體一側虛弱（輕偏癱），和麻木或刺痛（感覺異常（paresthesia))， 通常在身體一側。別的症狀是言語障礙（dysphasia)、構音困難（dysarthria)、偏盲 (hemianopia)、虛弱、共濟失調和疏忽（neglect)。頭暈、缺少協調或不良平衡也是與TIA有 關的症狀。
[0042] TIA的症狀是短暫的且通常持續幾秒至幾分鐘，而且大多數症狀在60分鐘內消 失。因此，症狀僅簡短地持續，優選短於24小時，特別是短於1小時。
[0043] 依照前述方法要測試的受試者未展現中風，即受試者不應已展現過中風。優選地， 所述受試者不應在獲得要測試的樣品前72小時內，更優選地48小時內，甚至更優選地24 小時內展現過中風。最優選地，受試者不應在獲得所述測試樣品前1或2周內展現過中風。
[0044] 術語"中風"是本領域中公知的。該術語優選地涵蓋缺血性中風。術語"缺 血性中風"也是熟練技術人員充分理解的（參見例如Adams等.，Guidelines for the Early Management of Adults With Ischemic Stroke, A Guideline From the American Heart Association/American Stroke Association Stroke Council,Clinical Cardiology Council, Cardiovascular Radiology and Intervention Council, and the Atherosclerotic Peripheral Vascular Disease and Quality of Care Outcomes in Research Interdisciplinary Working Groups in Stroke. 2007 ;38:1655,通過提述將其 完整公開內容據此併入）。如本文中使用的，該術語優選地指腦缺血中風。而且，其優選指 由減少的到腦部或其部分的血液流動（導致降低的到腦細胞的氧氣投遞（供應不足））導 致的中風。在本發明方法的背景中的中風導致由腦細胞死亡所致的不可逆的組織損傷。因 此，如本文中使用的術語"中風"不包括TIA。
[0045] 中風的症狀是本領域中公知的。優選地，它們是與上文對於TIA所公開的相同的 症狀。
[0046] 缺血性中風可能由腦大動脈的動脈粥樣硬化血栓形成（atherothrombosis)或 栓塞、由凝固病症或非動脈粥樣化血管疾病、由導致降低的總體血液流動的心臟缺血所 造成。缺血性中風優選選自下組：動脈粥樣硬化血栓形成性中風、心栓性中風和腔隙性 中風。確定中風類型是本領域技術人員已知的且包括不同的成像技術如心回波描記術 (echocardiography)、心電圖和doppler超聲。優選地，所述缺血性中風是急性缺血性中 風。
[0047] TIA和中風是腦部特定或所有部分缺血和/或灌注不足的結果。症狀依賴於受影 響的區域（和伴隨的血管）。大腦中動脈（arteria cerebri media)經常受影響，相關的 症狀包括失語症、對側臂或腿的虛弱，大腦前部（cerebri anterior)的TIA可能與失語症、 apractnosia、意識錯亂、失讀症等有關，如果腦下部的中心部分受影響，那麼症狀可能是意 向震顫、共濟失調感覺遲鈍等。髓質的損傷可以包括眩暈、復視、噁心和嘔吐。
[0048] 術語"缺血性中風"優選不包括出血性中風。
[0049] 可通過公知的方法來確定受試者是否患有過中風，特別是缺血性中風。而且，中風 的症狀是本領域中公知的，且例如記載於Adams等.（在上文引文）。例如，中風症狀包括突 然的臉、臂或腿，尤其是在身體一側上的麻木或虛弱、突然的意識錯亂、講話或理解有問題、 突然在一隻或兩隻眼睛中有視力問題、和突然走路有問題、頭暈、失去平衡或協調。
[0050] 如上文陳述的，依照前述方法要測試的受試者應被懷疑展現過短暫性缺血發作。 優選地，懷疑展現過短暫性缺血發作的受試者是已顯示TIA症狀的受試者。優選地，所述受 試者在獲得測試樣品前的某段窗口期內已顯示TIA的症狀。優選地，所述受試者在獲得樣 品前72小時內，更優選地48小時內，和最優選地24小時內已顯示TIA的症狀。然而，優選 地，所述測試樣品應在不早於TIA症狀結束後1小時，特別是不早於2小時獲得。另外，涵 蓋所述測試樣品在不早於TIA症狀結束後4小時獲得。還涵蓋所述測試樣品在不早於TIA 症狀結束後6小時獲得。
[0051] 還涵蓋受試者在獲得樣品前12小時內顯示過TIA的症狀。
[0052] 通過本發明的前述方法，應診斷出TIA。如本文中使用的，術語"診斷"意為評估 依照本發明方法所指的受試者是否展現過短暫性缺血發作。具體地，應診斷所述受試者是 否在獲得要測試的樣品前的某段窗口期內展現過短暫性缺血發作。在一個優選的實施方案 中，應診斷出所述受試者在獲得樣品前72小時內是否展現過短暫性缺血發作。在一個進一 步的優選的實施方案中，應診斷所述受試者在獲得樣品前48小時內是否展現過短暫性缺 血發作。在一個甚至進一步的優選的實施方案中，應診斷所述受試者在獲得樣品前24小時 內是否展現過短暫性缺血發作。優選地，所述受試者在獲得樣品時已不再顯示TIA的症狀。
[0053] 如本領域技術人員會理解的，評估本文中所指的受試者是否展現過TIA通常不意 圖對100%的要診斷的受試者是正確的。然而，該術語要求該評估對於受試者的統計學顯 著的部分（例如分組研究中的一個組）是正確的。而如此，本發明的方法至少提供了對於 建立最終臨床診斷的輔助。使用多種公知的統計學評估工具，本領域技術人員可以不用再 費周折地確定該部分是否是統計學顯著的，所述統計學評估工具例如確定置信區間、P值確 定、Student's t 檢驗、Mann-Whitney 檢驗等。詳情見於 Dowdy 和 Wearden, Statistics for Research, John Wiley & Sons, New York 1983。優選的置信區間為至少 90%、至少 95%、 至少 97%、至少 98%或至少 99%。P 值優選為 0. 1、0. 05、0. 01、0. 005、或 0. 0001。
[0054] 術語"樣品"指體液樣品、分離細胞樣品或來自組織或器官的樣品。體液樣品可通 過公知的技術獲得，且優選包括血液、血漿、血清或尿液樣品，更優選地，血液、血漿、尿液或 血清樣品，最優選地，血液、血漿或血清。組織或器官樣品可通過例如活組織檢查從任意組 織或器官獲得。分離的細胞可通過分離技術如離心或細胞分選從體液或組織或器官獲得。 優選地，細胞、組織或器官樣品獲自那些表達或產生本文中所指的肽的細胞、組織或器官。 優選地，所述樣品在短暫性缺血發作的症狀開始後不超過72小時獲得。更優選地，所述樣 品在短暫性缺血發作的症狀開始後不超過48小時，且最優選地不超過24小時獲得。優選 地，所述受試者在獲得所述樣品時不再顯示TIA的症狀。
[0055] 標誌物NT-原ANP (N端原心房利鈉（natriuretic)肽）是本領域中公知的（參見 例如Bonow, 1996, Circulation 93:1946-1950,其通過提述完整據此併入）。NT-原ANP屬 於利鈉肽組。NT-原ANP通過從前體分子前-原ANP肽的蛋白水解切割生成，從而得到活 性激素 ANP (心房利鈉肽）和相應的N端片段NT-原ANP。ANP在心房肌細胞中合成。在釋 放時，激素原被分裂成等摩爾量的高度生物學活性的原ANP (胺基酸99至126)和NT-原 ANP(胺基酸1至98)。該活性激素涉及身體水、鈉、鉀和脂肪組織的內穩態控制。它由肌 細胞在心臟的上部室中應答高血壓而釋放。如本文中使用的，NT-原ANP優選指人NT-原 ANP。術語"NT-原ANP"優選還涵蓋前述人NT-原ANP多肽的變體。這類變體具有與前述 NT-原ANP多肽相同的基本的生物學和免疫學特性。具體地，如果它們通過本文中所述的相 同的測定法例如通過使用特異性識別所述NT-原ANP多肽的多克隆或單克隆抗體的ELISA 測定法是可檢測的，那麼它們共享相同的基本的生物學和免疫學特性。具體的NT-原ANP 和NT-原BNP的變體的例子及其測量方法是已知的（Ala-Kopsala, Μ·，Magga, J.，Peuhkuri nen, K.等·（2004):Molecular heterogeneity has a major impact on the measurement of circulating N-terminal fragments of A-type and B-type natriuretic peptides. Clinical Chemistry, vol. 50 (9)，1576-1588)。而且，應理解如依照本發明所指的變體應具 有由於至少一個胺基酸取代、缺失和/或添加而不同的胺基酸序列，其中所述變體的氨基 酸序列優選仍然與特定的NT-原ANP多肽的胺基酸序列分別至少50%、60%、70%、80%、 85%、90%、92%、95%、97%、98%、或99%相同，優選在人階'-原八即的整個長度內（特別 是在整個長度內）。兩個胺基酸序列之間的同一性程度可通過本領域公知的和本文中別 處描述的算法來測定。上文所指的變體可以是等位變體或任何其他物種特異性的同源物、 paralog (側系同源物）、或直系同源物。而且，本文所指的變體包括特定NT-原ANP多肽 或前述變體類型的片段或亞基，只要這些片段具有如上文所述的基本的免疫學和生物學特 性。這類片段可以是例如NT-原ANP多肽的降解產物。還包括由於翻譯後修飾如磷酸化或 十四燒基化（myristylation)而不同的變體。
[0056] 測定本說明書中所指的肽或多肽的量涉及測量量或濃度，優選半定量或定量地。 測量可以直接或間接完成。直接測量涉及基於從所述肽或多肽本身獲得且其強度直接與樣 品中存在的肽分子數相關的信號來測量所述肽或多肽的量或濃度。這類信號-有時在本文 中稱為強度信號-可例如通過測量所述肽或多肽的特定物理或化學特性的強度值來獲得。 間接測量包括測量從次要組分（即不是肽或多肽本身的組分）或生物學讀出系統例如可測 量的細胞應答、配體、標記或酶反應產物獲得的信號。
[0057] 依照本發明，測定肽或多肽的量可通過所有已知用於測定樣品中肽的量的手段來 實現。所述手段包括可以以多種夾心、競爭或其他測定形式利用經標記分子的免疫測定和 方法。這類測定法優選地基於檢測劑如特異性識別要測定的肽或多肽的抗體。檢測劑應能 夠直接或間接地生成指示所述肽或多肽的存在或不存在的信號。而且，優選地，信號強度可 與樣品中存在的多肽量直接或間接相關（例如成反比）。別的適宜的方法包括測量特異於 所述肽或多肽的物理或化學特性，如其準確的分子質量或NMR譜。所述方法包括，優選地， 生物傳感器、偶聯於免疫測定法的光學裝置、生物晶片、分析裝置如質譜儀、NMR分析儀、或 層析裝置。另外，方法包括基於ELISA的微板方法、全自動或機器人免疫測定法（例如可在 Elecsys? 分析儀上獲得）、CBA (酶促 ￡obalt ginding Jssay，例如可在 Roche-Hitachi? 分 析儀上獲得）、和膠乳凝集測定法（例如可在Roche-Hitachi?分析儀上獲得）。
[0058] 優選地，測定肽或多肽的量包括以下步驟：(a)使能引發細胞應答的細胞與肽或 多肽接觸達適宜的一段時間，所述細胞應答的強度指示所述肽或多肽的量，（b)測量所述細 胞應答。對於測量細胞應答，優選地將所述樣品或經加工樣品添加到細胞培養物並測量內 部或外部細胞應答。所述細胞應答可以包括報導基因的可測量的表達或物質例如肽、多肽 或小分子的分泌。所述表達或物質應生成與所述肽或多肽的量相關的強度信號。
[0059] 還優選地，測定肽或多肽的量包括測量可從樣品中的所述肽或多肽獲得的特定強 度信號的步驟。如上文描述的，這類信號可以是在特異於所述肽或多肽的質譜或NMR譜中 觀察到的特異於所述肽或多肽的m/z變量處觀察到的信號強度。
[0060] 測定肽或多肽的量優選地可以包括以下步驟：（a)使所述肽與特定配體接觸，（b) (任選地）除去未結合的配體，（c)測量結合的配體的量。
[0061] 依照一個優選的實施方案，所述接觸、除去和測量的步驟可以由本文中公開的系 統的分析單元實施。依照一些實施方案，所述步驟可以由所述系統的單個分析單元或彼此 處於可操作聯繫的超過一個分析單元實施。例如，依照一個特定的實施方案，本文中公開的 所述系統可以包含用於實施所述接觸和除去步驟的第一分析單元和通過運輸單元（例如 機器人臂）可操作地連接於所述第一分析單元的第二分析單元，其實施所述測量步驟。
[0062] 結合的配體，特別是配體或配體/肽複合物，將生成強度信號。依照本發明的結合 包括共價和非共價結合。依照本發明的配體可以是任何化合物，例如肽、多肽、核酸或小分 子，其結合本文中描述的肽或多肽。優選的配體包括抗體、核酸、肽或多肽（如所述肽或多 肽的受體或結合伴侶及其包含針對該肽的結合域的片段）、和適體（例如核酸或肽適體）。 製備這類配體的方法是本領域中公知的。例如，對適宜的抗體或適體的鑑定和生產亦由商 業供應商提供。本領域技術人員熟悉開發具有更高的親和力或特異性的這類配體的衍生物 的方法。例如，可將隨機突變引入核酸、肽或多肽中。然後，可依照本領域中已知的篩選規 程例如噬菌體展示來測試這些衍生物的結合。如本文中所指的抗體包括多克隆和單克隆抗 體兩者，以及它們的片段如能結合抗原或半抗原的Fv、Fab和F (ab) 2片段。本發明還包括單 鏈抗體和人源化雜合抗體，其中將展現期望的抗原特異性的非人供體抗體的胺基酸序列與 人接受抗體的序列組合。所述供體序列通常將含有至少該供體的抗原結合胺基酸殘基，但 也可包含供體抗體的其他結構和/或功能相關的胺基酸殘基。這類雜合體可通過本領域中 公知的幾種方法來製備。優選地，所述配體或試劑特異性結合所述肽或多肽。依照本發明 的特異性結合意指所述配體或試劑不應實質性結合（與其"交叉反應"）要分析的樣品中存 在的另一種肽、多肽或物質。優選地，特異性結合的肽或多肽應以比任何其他相關肽或多肽 高至少3倍，更優選至少高10倍，甚至更優選至少高50倍的親和力結合。非特異性結合可 以是可容忍的，如果其仍然能區分並明確測量的話，例如根據其在Western印跡上的大小， 或其在樣品中的相對更高的豐度。配體的結合可通過本領域已知的任意方法來測量。優選 地，所述方法是半定量或定量的。下文記載了用於測定多肽或肽的別的適宜的技術。
[0063] 首先，配體的結合可通過，例如NMR或表面等離振子共振直接測量。根據優選的具 體實施方案，配體結合的測量通過本文公開的系統的分析單元執行。此後，測量的結合量可 通過本文公開的系統的計算設備進行計算。第二，如果所述配體還充當感興趣的肽或多肽 的酶促活性底物，還可測量酶促反應產物（例如通過測量例如在Western印跡上經切割的 底物的量測量蛋白酶的量）。或者，配體本身可能顯示酶促特性，可使"配體/肽或多肽"復 合物或所述肽或多肽結合的配體分別與合適的底物接觸，通過生成強度信號而允許檢測。 對於酶促反應產物的測量，優選底物的量是飽和的。所述底物也可以在反應之前用可檢測 的標記物標記。優選地，樣品與底物接觸達適宜的時間段。適宜的時間段指產生可檢測量 的，優選可測量量的產物所必需的時間。可測量出現給定（例如可檢測的）量的產物所必需 的時間，而不必測量產物的量。第三，所述配體可與允許所述配體被檢測和測量的標記物共 價或非共價偶聯。標記可通過直接或間接的方法進行。直接標記包括將標記物直接（共價 或非共價地）偶聯到配體上。間接標記牽涉將第二配體與所述第一配體（共價或非共價地） 結合。第二配體應特異地結合第一配體。所述第二配體可以與合適的標記物偶聯和/或作 為結合於第二配體的第三配體的靶物（受體）。第二，第三或甚至更高級別的配體的作用通 常是用來增強信號。合適的第二配體或更高級別的配體可以包括抗體，第二抗體，以及公知 的鏈黴親合素蛋白 -生物素系統（Vector Laboratories, Inc.)。所述配體或底物也可以用 本領域已知的一個或多個標籤"加上標籤"。此種標籤可從而作為更高級別配體的靶物。合 適的標籤包括生物素，洋地黃毒苷，His-Tag，穀胱甘肽S轉移酶，FLAG，GFP，myc-標籤，甲型 流感病毒血凝素（HA)，麥芽糖結合蛋白，等等。對於肽或多肽，所述標籤優選位於N端和/ 或C端。適合的標記物是任何可通過適當的檢測方法檢測的標記物。通常的標記物包括金 顆粒、乳膠珠、9，1〇-二氫化[!丫陡酯（3(31^(^1108七61')、魯米諾（111111；[1101)、釕、酶活性的標記 物、放射性標記物、磁性標記物（例如"磁性珠子"，包括順磁性或超順磁性標記物），以及熒 光標記物。酶活性標記物包括，例如辣根過氧化物酶、鹼性磷酸酶、β -半乳糖苷酶、螢光素 酶及其衍生物。用於檢測的合適的底物包括二氨基聯苯胺（DAB)、3, 3' -5, 5' -四甲基聯苯 胺、NBT-BCIP (氯化4-硝基四氮唑藍和5-溴-4-氯-3-吲哚-磷酸，現成的儲液在Roche Diagnostics 有售）、CDP-Star?(Amersham Biosciences) ,ECF?(Amersham Biosciences) 0 合適的酶-底物組合可產生著色的反應產物、螢光或化學發光，其可以根據本領域已知的 方法進行測量（例如使用光敏膠片或合適的照相系統）。對於酶促反應的測量，類似地應 用上述標準。通常的螢光標記物包括螢光蛋白（如GFP及其衍生物）、Cy3、Cy5、德克薩斯 紅、螢光素和Alexa染料（例如Alexa 568)。更多的螢光標記物可購自例如Molecular Pr0bes(0 regon)。還涵蓋用量子點作為螢光標記物。典型的放射性標記物包括35S，125I， 32P， 33P等等。放射性標記物可以通過任意已知的適當方法檢測，例如光敏膠片或磷光顯影儀 (phosphor imager)。本發明的適當測量方法還包括沉澱法（尤其是免疫沉澱法）、電化學 發光法（電促化學發光，electro-generated chemiluminescence)、RIA(放射免疫分析）、 ELISA(酶聯免疫吸附分析）、夾層酶免疫試驗（sandwich enzyme immune tests)、電化學發 光夾層免疫分析（ECLIA)、解離-增強的鑭系元素突光免疫分析（dissociation-enhanced lanthanide fluoro immuno assay,DELFIA)、閃爍親近測定法（scintillation proximity assay，SPA)、比濁法、濁度法、乳膠-增強的比濁法或濁度法，或者固相免疫試驗。本領域已 知的其它方法（如凝膠電泳、2D凝膠電泳、SDS-聚丙烯醯胺凝膠電泳（SDS-PAGE)、Western 印跡法和質譜法）可單獨使用，或與標記或者上述其它檢測方法組合使用。
[0064] 所述肽或多肽的量也可以，優選地依照下述步驟確定：(a)使包含所述肽或多肽 的樣品與含上述肽或多肽的配體的固體支持物接觸，（b)測量與所述支持物結合的肽或多 肽的量。優選選自由核酸，肽，多肽，抗體和適體組成的組的配體，優選地以固定化的形式 存在於固體支持物上。製備固體載體的材料是本領域公知的，除其它已知材料外，包括可 商購的柱材料，聚苯乙烯珠，乳膠珠，磁性珠，膠體金屬顆粒，玻璃和/或矽晶片或表面，硝 酸纖維素條，膜，片，Duracyte，反應盤的孔和壁，塑料管，等等。所述的配體或試劑可以與 很多不同的載體結合。公知的載體的實例包括玻璃、聚苯乙烯、聚氯乙烯、聚丙烯、聚乙烯、 聚碳酸酯、葡聚糖、尼龍、直鏈澱粉、天然或經修飾的纖維素、聚丙烯醯胺、瓊脂糖和磁鐵礦。 依照本發明的目的所述載體的性質可以是可溶性的或不溶性的。固定（fixing)/固定化 (immobi 1 izing)所述載體適當方法是本領域所公知的，包括但不限於離子的、疏水的、共價 的相互作用等等。還可以考慮使用"懸浮陣列"作為根據本發明的陣列（Nolan 2002, Trends Biotechnol. 20(1) :9-12)。在此種懸浮陣列中，所述的載體，例如微珠或微球以懸浮狀態存 在。所述的陣列由不同的微珠或微球組成，所述的微珠或微球可能是經標記的，載有不同的 配體。製備此種陣列的方法，例如基於固相化學或對光不穩定的保護基團，是本領域公知的 (US 5, 744, 305)。
[0065] 如本文中使用的，術語"量"包括所述多肽或肽的絕對量，所述多肽或肽的相對量 或濃度，以及與之相關或者從其衍生的任何值或參數。這類值或參數包括來自通過直接測 量從所述肽所獲得的全部特定物理或化學特性的強度信號值，例如質譜或NMR譜中的強度 值。此外，還包括本說明書其它部分所描述的、通過間接測量所獲得的全部值或參數，例如 在所述肽的應答中由生物讀出系統確定的應答水平，或者從特異性結合配體獲得的強度信 號。應理解，與前述的量或參數相關的值也可以通過所有的標準化數學運算獲得。根據本 發明的優選實施方案，所述"量"的確定通過所述公開的系統執行，其中基於由所述系統的 一個或多個分析單元執行的接觸和測量步驟，計算設備測定所述"量"。
[0066] 優選地，如本文中所指的多肽，如此NT-原ANP和NT-原BNP的量以實施例部分所 描述的測定法測定。例如，可通過檢測前-原ANP肽的胺基酸1至98來測定NT-原ANP的 量。
[0067] 如本文中使用的，術語"比較"涵蓋將要分析的樣品所包含的所述肽或多肽的量與 本說明書中別處指定的適宜參照源的量進行比較。應理解如本文中使用的比較指相應的參 數或值的比較，例如將絕對量與絕對參照量比較，而將濃度與參照濃度或從測試樣品獲得 的強度信號與參照樣品的同一類型的強度信號比較。本發明方法的步驟（b)中所指的比較 可以手動或計算機輔助（例如通過（例如本文公開的系統的）計算裝置）進行。對於計算 機輔助的比較，可通過電腦程式將測定量的值與存儲於資料庫中的對應於適宜參照的值 比較。所述電腦程式可以進一步評估比較的結果，即自動化地提供適宜輸出形式的期望 評估，即診斷結果。所述診斷結果優選地可以充當用於例如醫學專業人員建立最終臨床診 斷的輔助。
[0068] 基於測定的和參照量的比較，應當可以評估測試受試者是否展現過TIA。例如，t匕 較的結果可以以原始數據給出（絕對或相對量），而在一些情況中以詞、短語、符號、或數值 的形式的指示物給出，其可以指示具體的診斷。因此，要選擇參照量從而比較的量中的不同 或身份允許鑑定出那些屬於已展現過或未展現過TIA的受試者組的測試受試者。該方法允 許排除（除去）或鑑定（劃入）已展現過或未展現過TIA的受試者。如本文中使用的，量 中的差異即升高或降低是統計學顯著的差異。可通過本文中別處所述的統計學技術來確定 差異是否是統計學顯著的。類似地，量中的身份涵蓋相等的量和那些量中的不統計學顯著 且對於測量參數在標準偏差內的差異。
[0069] 如本文中使用的，術語"參照量"指允許將受試者分成⑴已展現過TIA的受試者 組或（ii)未展現過TIA的受試者組的量。所述劃入和/或排除診斷可由本文中公開的系 統的計算裝置基於計算的"量"對參照或閾值的比較提供。例如，系統的計算裝置可以提供 以詞、符號、或數值的形式的指示物，其指示劃入或排除診斷之一。適用於個體受試者的參 照量可以根據多種生理學參數如年齡、性別或亞群，以及用於測定本文中所指的多肽或肽 的手段而變化。適宜的參照量可從要與測試樣品一起（即同時或隨後）分析的參照樣品測 定。
[0070] 從原理上講，可通過應用標準的統計學方法基於給定生物標誌物的平均值或均值 對如上文指出的受試者分組計算參照量。具體地，測試如目標為診斷一種事件與否的方法 的準確度由其接受者操作屬性（receiver-operating characteristics) (R0C)最佳描述 (尤其參見Zweig 1993, Clin. Chem. 39:561-577)。R0C圖是從在觀察的數據的整個範圍內 連續變化決策閾值所得到的所有敏感性對特異性對的圖。診斷方法的臨床表現取決於其準 確度，即其正確將受試者分為特定預後或診斷的能力。R0C圖通過繪出適用於進行區分的完 整閾值範圍的敏感性對1-特異性來指示兩個分布之間的重疊。Y軸上是敏感性或真-陽性 分數，其定義為真-陽性測試結果的數目對真-陽性數目與假-陰性測試結果數目的乘積 的比率。這亦稱為在存在疾病或狀況情況下的陽性。它僅從受影響的亞組計算。X軸上是 假-陽性分數或1-特異性，其被定義為假-陽性結果的數目對真-陰性數目與假-陽性結 果數目的乘積的比率。它是特異性的指標且完全從未受影響的亞組計算。由於真陽性和假 陽性分數是完全分開計算的，通過使用來自兩個不同亞組的測試結果，R0C圖獨立於分組中 事件的流行性。R0C圖上的每個點代表對應於具體決策閾值的敏感性/-特異性對。具有完 美區分的測試（兩個結果分布中沒有重疊）具有穿過左上角的R0C圖，其中真陽性分數是 1.0、或100% (完美敏感性），而假陽性分數是0(完美特異性）。沒有區分力的測試的理論 圖（兩個組有相同的分布結果）是從左下角到右上角的45°對角線。大多數圖落入這兩種 極端之間。如果ROC圖完全在45°對角線之下，那麼這可以通過將"陽性"的標準從"大於" 逆轉為"小於"或反之來修正。定性地，圖離左上角越近，測試的總體準確性越高。根據期 望的置信區間，可從R0C曲線衍生出允許以適宜的敏感性和特異性平衡分別診斷或預測給 定事件的閾值。因此，要用於本發明前述方法的參照，即允許在展現過TIA或未展現過TIA 的受試者之間區分的閾值，優選可通過為如上文描述的所述分組建立R0C並從其衍生出閾 值量來生成。根據對診斷方法的期望的敏感性和特異性，R0C圖允許衍生適宜的閾值。應 理解對於排除TIA(即除去）期望最佳敏感性，而對於要評估為展現過TIA(即劃入）的受 試者則希望有最佳特異性。而且，優選將在本發明方法的步驟a)中測定的量與超過一個參 照量比較，例如用於劃入TIA的參照量和用於排除TIA的參照量。
[0071] 優選地，所述參照量源自來自已知展現過TIA(特別是在如本文中別處指定的窗 口期內）的受試者（或受試者組）的樣品，和/或來自已知未展現過TIA(特別是在如本文 中別處指定的窗口期內）的受試者（或受試者組）的樣品。
[0072] 已知未展現過TIA的受試者優選為健康的受試者。還優選地，已知未展現過TIA 的受試者未展現過中風，特別是在如上文所提述的窗口期內。
[0073] 還優選所述參照受試者（即已知展現過TIA的受試者或已知未展現過TIA的受試 者）具有急性腦缺血事件，特別是TIA的風險因子。優選的急性腦缺血事件特別是TIA的 風險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是心力衰竭）、收縮性和/或舒張性心功能障礙、 瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風險因子是糖尿病和肥胖。因此，所述參照受試者優選 地顯示這些風險因子中的至少一種。優選地，所述參照受試者患有冠狀動脈病。甚至更優 選地，所述參照受試者患有心力衰竭。最優選地，所述參照受試者以及測試受試者患有心力 衰竭。還優選地，所述參照受試者以及測試受試者患有心力衰竭。這尤其適用於如果測定 NT-原ANP和NT-原BNP的量且如果在本發明方法的背景中（見本文中別處）計算NT-原 ANP對NT-原BNP的量的比率。
[0074] 如果僅測定NT-原ANP的量，那麼還優選參照受試者或測試受試者都不患有心力 衰竭或冠狀動脈病。
[0075] 以下適用作診斷算法。
[0076] 優選地，參照量是：
[0077] a.源自已知展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品，其中來自測試受試者的 樣品中NT-原ANP的量基本等於所述參照量或大於所述參照量指示所述受試者已展現過短 暫性缺血發作，和/或
[0078] b.源自來自已知未展現過TIA的受試者的樣品，其中來自測試受試者的樣品中 NT-原ANP的量基本等於所述參照量或低於所述參照量指示所述受試者未展現過短暫性缺 血發作。
[0079] 源自已知展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的優選參照量是約54500pg/ ml至約150000pg/ml，且更優選地，約54500至約137800pg/ml。甚至更優選地，源自已知展 現過TIA的受試者（或受試者組）的參照量是約137500、或94800,或最優選地，54500pg/ ml〇
[0080] 源自已知未展現過TIA的受試者（或受試者組）的優選的參照量是約1000pg/ml 至約33600pg/ml，更優選地，是約1000至約12570pg/ml。甚至更優選地，源自已知未展現 過TIA的受試者（或受試者組）的參照量是約33600、或15000,或最優選地12570pg/ml。 還優選所述參照量是4662pg/ml。
[0081] 另外，所述參照量可以限定閾值量，具體為計算的參照量，由此測試受試者的樣品 中大於相應閾值的NT-原ANP量應指示TIA，而測試受試者的樣品中低於計算的參照量的 NT-原ANP量應指示受試者未展現過TIA。特別優選的閾值量作為計算的參照量，優選為約 54500pg/ml，或更優選地為 45000pg/ml。
[0082] 如本文中使用的，術語"約"意指從所提述的特定值+/-20%、+/-10%、+/_5%、 +/_2 或 +/_1 。
[0083] 在本發明方法的一個優選的實施方案中，應劃入TIA。在該情況中，參照量源自已 知展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品）。
[0084] 因此，本發明涵蓋一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現過中風的受 試者中劃入短暫性缺血發作（TIA)的方法，所述方法包括以下步驟：
[0085] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0086] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此劃入短暫性缺血發作，
[0087] 其中所述參照量源自來自已知展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣 品），其中來自測試受試者的樣品中NT-原ANP的量基本等於或大於所述參照量指示所述受 試者已展現過短暫性缺血發作。
[0088] 在本發明方法的一個優選的實施方案中，應劃入TIA。在該情況中，參照量源自已 知未展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品）。
[0089] 因此，本發明涵蓋一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現過中風的受 試者中排除短暫性缺血發作（TIA)的方法，所述方法包括以下步驟：
[0090] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，和
[0091] b.將如此測定的NT-原ANP量與參照量比較，由此排除短暫性缺血發作，
[0092] 其中所述參照量源自來自已知展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣 品），其中來自測試受試者的樣品中NT-原ANP的量基本等於或低於所述參照量指示所述受 試者未展現過短暫性缺血發作。
[0093] 在本發明的一個進一步的優選實施方案中，前述方法進一步包括以下步驟：測定 來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，並計算NT-原ANP的量和NT-原BNP的量的比 率。兩種標誌物的測定是有利的，因為兩種標誌物的量的比率允許特別可靠的診斷出患有 心力衰竭的受試者中的TIA(見實施例）。
[0094] 因此，本發明具體地針對一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現過中 風的受試者中診斷短暫性缺血發作（TIA)的方法，包括：
[0095] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0096] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和
[0097] c.計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
[0098] 優選地，上文a)和b)中測定的量是在同一樣品中測定的。然而，還涵蓋在不同的 樣品中測定量。
[0099] 在一個優選的實施方案中，所述方法還包括將如此計算的比率與參照比率比較， 由此診斷出所述受試者中的TIA。
[0100] 如此，本發明還涉及一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現過中風的 受試者中診斷短暫性缺血發作（TIA)的方法，包括：
[0101] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0102] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，
[0103] c.計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率，和
[0104] d.比較計算的比率與參照比率，由此診斷出所述受試者中的TIA。
[0105] 標誌物NT-原BNP (N端原腦利鈉肽）是本領域中公知的。NT-原BNP是優選包含 對應於人腦利鈉肽（BNP)分子N端部分的長度為76個胺基酸的多肽。現有技術中已詳細 描述了人BNP和NT-原BNP的結構，例如WO 02/089657，W0 02/083913或Bonow(在上述引 文中）。優選地，如本文中使用的人NT-原BNP是如EP 0 648 228 B1中披露的人NT-原 BNP。這些現有技術文件通過提述將其中披露的特定NT-原BNP序列及其變體納入本文。依 照本發明所指的NT-原BNP還涵蓋上文論述的人NT-原BNP的所述特定序列的等位和其他 變體。具體地，涵蓋在胺基酸水平上與人NT-原BNP，優選在整個長度上至少60 %等同，更優 選至少70 %、至少80 %、至少90 %、至少95 %、至少98 %或至少99 %等同的變體多肽。從 原理上講，可通過本領域公知的算法來確定兩個胺基酸序列之間的同一性程度。優選地，同 一性程度要通過在比較窗口內比較兩個最佳比對的序列測定，其中比較窗口中的胺基酸序 列的片段可以包含如相比於參照序列（不包含添加或缺失）的添加或缺失（例如缺口或懸 突）以用於最佳比對。百分比通過計算兩個序列中存在相同胺基酸殘基所在的位置的數目 以得到匹配位置的數目，將匹配的位置數目除以比較窗口中的總位置數目，並將結果乘以 100以得到序列同一'I"生的百分數。用於比較的序列最佳比對可通過Smith 1981，Add. APL. Math. 2:482的局部同源性算法，通過Needleman 1970, J. Mol. Biol. 48:443的同源性比對 算法，通過Pearson 1988, Proc. Natl. Acad Sci. (USA) 85:2444的尋找相似性方法，通過這 些算法的計算機化執行（GAP, BESTFIT, BLAST, PASTA 和 TFASTA，於 Wisconsin Genetics Software Package, Genetics Computer Group (GCG), 575 Science Dr.，Madison, WI),或通 過視覺觀察來進行。在已鑑定兩個序列用於比較時，優選採用GAP和BESTFIT來測定其最 佳比對，由此測定同一性程度。優選地，對於缺口權重使用5. 00的預設值，而對於缺口權重 長度（gap weight length)使用0.30的預設值。基本類似且亦涵蓋的是蛋白水解性降解 產物，其仍由診斷手段或由針對相應全長肽的配體識別。還涵蓋相比於人NT-原BNP氨基 酸序列具有胺基酸缺失、取代和/或添加的變體多肽，只要所述多肽具有NT-原BNP特性。 如本文中所指的NT-原BNP特性是免疫學和/或生物學特性。優選地，所述NT-原BNP變 體具有與NT-原BNP的那些可比的免疫學特性（即表位組成）。如此，所述變體應可由前述 手段或用於測定利尿肽量的配體識別。生物學和/或免疫學NT-原BNP特性可由以下中記 載的測定法檢測：Karl 等·（Karl 1999, Scand J Clin Invest 59:177-181)，Yeo 等·（Yeo 2003, Clinica Chimica Acta 338:107-115)。變體還包括翻譯後修飾的肽，如糖基化或 十四烷基化肽。還有，依照本發明的變體還是在樣品收集後經修飾的肽或多肽，例如通過對 肽共價或非共價附接標記物，特別是放射性或螢光標記物。
[0106] 如本文中使用的，術語"計算"指評估在受試者樣品中測定的NT-原ANP和NT-原 BNP量的比率。依照本發明，可以測定NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率，或NT-原BNP 量對NT-原ANP量的比率。優選地，測定NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率。
[0107] 上文中公開了優選的參照受試者。優選地，所述參照比率源自已知展現過TIA的 受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），和/或已知未展現過TIA的受試者的樣品（或來 自受試者組的樣品）（亦見上文的解釋）。
[0108] 如果計算的比率（和參照比率）是NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率的話，以 下適用作診斷算法：
[0109] 優選地，參照比率為
[0110] a.源自已知展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自測 試受試者的樣品中的比率基本等於或大於參照比率指示所述受試者展現過短暫性缺血發 作，和/或
[0111] b.源自已知未展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自 測試受試者的樣品中的比率基本等於或低於參照比率指示所述受試者未展現過短暫性缺 血發作。
[0112] 如果計算的比率（和參照比率）是NT-原BNP量對NT-原ANP量的比率的話，以 下適用作診斷算法。
[0113] 優選地，參照比率為
[0114] a.源自已知展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自測 試受試者的樣品中的比率基本等於或低於參照比率指示所述受試者展現過短暫性缺血發 作，和/或
[0115] b.源自已知未展現過TIA的受試者的樣品（或來自受試者組的樣品），其中來自 測試受試者的樣品中的比率基本等於或大於參照比率指示所述受試者未展現過短暫性缺 血發作。
[0116] 另外，參照比率可以限定閾值比率，特別是計算的參照比率，由此測試受試者樣品 中NT-原ANP對NT-原BNP量的比率大於相應閾值應指示TIA，而測試受試者樣品中NT-原 ANP對NT-原BNP量的比率低於相應閾值指示受試者未展現過TIA (如果測定NT-原ANP對 NT-原BNP量的比率）。
[0117] 源自已知未展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原 BNP量的參照比率是約10至約125,且更優選地，約20至約100、或約20至約90。甚至更 優選地，源自已知未展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參照比率是約125,或最 優選地約80。
[0118] 優選地，如果參照比率源自具有TIA的風險因子的受試者（如本文中別處描述的， 特別是來自患有心力衰竭的受試者），源自已知未展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣 品的NT-原ANP量對NT-原BNP量的參照比率是約10至約40,更優選地，約20至約40、或 約20至約30。甚至更優選地，源自已知未展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參 照比率是約40,或最優選地約30。
[0119] 源自已知展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原 BNP量的參照比率是約150至約300,且更優選地，約150至約250、或約200至約250。甚 至更優選地，源自已知展現過TIA的受試者（或受試者組）的樣品的參照比率是約250,或 最優選地約200。
[0120] 在本發明的一個優選的實施方案中，所述方法還包括推薦適宜療法的步驟，如果 已診斷出TIA的話。
[0121] 如本文中使用的，術語"推薦/建議"意指建立可應用於受試者的療法的建議。然 而，應理解應用何種適宜的療法不由該術語包含。要推薦的療法依賴於由本發明的方法提 供的診斷結果。上文提述的推薦步驟優選地還可以是自動化的。優選地，從本發明方法的 步驟b)獲得的診斷或輔助，即所述方法的診斷結果，將用於搜索包含針對個體可能診斷結 果的治療手段推薦的資料庫。在已診斷TIA的情況中推薦的適宜的療法是本領域中公知 的，且優選地，涵蓋目標是減少進一步的腦缺血事件風險，特別是中風和/或TIA的風險的 那些治療方案。這些治療包括藥物的施用、幹預以及生活方式變化。所述治療可能依賴於 TIA的起因。優選的治療方案包括抗凝療法、抗血小板療法、攝取阿司匹林和/或肝素、支架 (stenting)(參見Chimowitz等· NEJM 2011:993-1003)，和動脈內膜切除術，特別是頸動脈 動脈內膜切除術。優選的生活方式變化是戒菸和/或戒酒，和減輕體重（特別是降低的卡 路裡攝取和/或增加的身體鍛鍊）。
[0122] 在本發明的一個方面，涵蓋一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現過 中風的受試者中建立診斷短暫性缺血發作（TIA)的輔助的方法，所述方法包括：
[0123] a)測定標誌物NT-原ANP的量，其通過（i)使樣品與特異性結合所述標誌物的 檢測劑接觸達一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標誌物的複合物， (i i)測量形成的複合物的量，其中所述形成的複合物的量與樣品中存在的標誌物的量成比 例，和（iii)將形成的複合物的量轉化成標誌物的量，其反映樣品中存在的標誌物的量；
[0124] b)將所述量與參照比較；並
[0125] c)基於步驟b)中進行的比較的結果，建立用於診斷短暫性缺血發作（TIA)的輔 助。
[0126] 在本發明的另一個方面，涵蓋一種用於在懷疑展現過短暫性缺血發作，但未展現 過中風的受試者中診斷短暫性缺血發作（TIA)的系統，包含：
[0127] a)分析單元，其配置為使所述樣品與特異性結合標誌物NT-原ANP的檢測劑接觸 達一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標誌物的複合物，
[0128] b)分析單元，其配置為測量形成的複合物的量，其中所述形成的複合物的量與樣 品中存在的標誌物的量成比例，
[0129] c)計算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處於可操作聯繫中，和
[0130] d) -種非短暫性機器可讀媒體，其包含可由所述處理器執行的多個指令，所述指 令在執行時將形成的複合物的量轉化成標誌物的量，該量反映樣品中存在的標誌物的量， 並建立用於在與所述參照的所述比較的結果上診斷短暫性缺血發作（TIA)的輔助。
[0131] 在一個方面，適宜的檢測劑可以是特異性結合要通過本發明方法研究的受試者樣 品中的標誌物的抗體。在一個方面，另一種可應用的檢測劑可以是特異性結合樣品中標誌 物的適體（aptamere)。在再一個方面，在測量檢測劑與標誌物之間形成的複合物的量之前， 從複合物除去樣品。因此，在一個方面，所述檢測試劑可以固定化於固體支持物上。在另一 方面，可通過施用清洗溶液使樣品與在固體支持物上形成的複合物分離。所形成的複合物 與存在於樣品中的標誌物的量是成比例的。應理解待應用的檢測試劑的特異性和/或靈敏 度限定了樣品中包含的可被特異性結合的至少一種標誌物的比例程度。在本文中別處還可 見關於如何實施測定的更詳細的描述。所形成的複合物的量將被換算為標誌物的量，其反 映實際存在於樣品中至少一種標誌物的量。該量一方面可能基本上就是存在於樣品中的 量，或者在另一方面也可能是由於所形成的複合物與原始樣品中的量的關系所呈現出的為 其特定比例的量。
[0132] 在前述方法的又一方面，步驟a)可通過分析單元實施，在一方面，所述的分析單 元如本文中別處所定義的。
[0133] 在本發明方法的一個方面，將步驟a)中測定的量與參照比較。在一個方面，所述 參照是如本文中別處定義的參照。在再一個方面，所述參照考慮到測量的複合物量和原始 樣品中存在的量之間的比例關係。如此，在本發明方法的一個方面中應用的參照是人為參 照，其被用於反映使用的檢測劑的限制。在另一個方面，在實施比較時還可以考慮所述關 系，例如通過在實際比較測定量與參照的值之前對於測定量納入標準化和/或校正計算步 驟。對於測定量的標準化和/或校正計算步驟再次採用比較步驟，從而適當地反映已使用 的檢測劑的限制。在一個方面，自動化實施所述比較，例如通過計算機系統等的輔助。
[0134] 基於在步驟b)中，通過如本文別處所述的、將受試者劃歸為展現過TIA或未展現 過TIA的受試者組所進行的比較，建立診斷TIA的輔助。如本文別處已討論過的，在所研究 的病例中，對於待研究的受試者的劃分不一定是100%正確的。而且，研究的受試者所歸入 的受試者組是人為的組，這是因為這些組是基於統計學意義上的考慮建立的，即某種預先 選擇的可能性程度，本發明的方法將基於其運行。在本發明的一個方面，所述用於診斷TIA 的輔助是自動建立的，例如，由如本文所描述和公開的計算設備等輔助。
[0135] 在本發明的方法的一個方面中，所述方法還包括根據如本文別處詳細列舉的在步 驟c)中建立的結果建議和/或管理受試者，和/或調整疾病監控的密集性的步驟。
[0136] 在前述方法的一個方面，通過本文中別處所述的一個或多個分析單元來實施步驟 b)和/或c)。
[0137] 上文給出的解釋和定義如作適當變動也適用於以下。
[0138] 用於診斷急件腦缺血事件的方法
[0139] 發明人還顯示NT-原ANP量和NT-原BNP量的比率是用於診斷受試者中的急性腦 缺血事件的有價值的指示物。
[0140] 因此，本發明進一步涉及一種用於診斷懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中的 急性腦缺血事件的方法，包括：
[0141] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0142] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和
[0143] c.計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
[0144] 在一個優選的實施方案中，前述方法還包括將如此計算的比率與參照比率比較， 由此診斷急性腦缺血事件。
[0145] 因此，本發明具體地涉及一種用於診斷懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中的 急性腦缺血事件的方法，包括：
[0146] a.測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量，
[0147] b.測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，
[0148] c.計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率，和
[0149] d.將如此計算的比率與參照比率比較，由此診斷急性腦缺血事件。
[0150] 本領域技術人員充分理解術語"急性腦缺血事件"。該術語具體地涉及一種急性狀 況，其中到腦（或腦的部分）的血液流動不足以達到腦的代謝需求。優選地，有兩種類型的 急性腦缺血事件：1.與事件有關的缺血可能受限於腦的特定區域（局灶性缺血）；或2.與 事件有關的缺血可能涵蓋腦組織的廣泛區域（系統性缺血）。所述事件應是急性的，由此應 突然出現。優選地，所述急性腦缺血事件選自中風和短暫性缺血發作。術語"中風"和"短 暫性缺血發作"在本文中別處定義。
[0151] 如本文中使用的，已在本文別處描述的術語"受試者"指動物，優選哺乳動物，更優 選是人。依照本發明的受試者應被懷疑為展現過急性腦缺血事件。優選地，所述受試者應 被懷疑為在獲得待測試樣品前72小時內，更優選48小時內，且最優選24小時內展現過急 性腦缺血事件。因此，應依照本發明診斷所述測試受試者是否展現過急性腦缺血事件或尚 未展現過急性腦缺血事件，優選地在獲得待測試樣品前72小時內，更優選48小時內，且最 優選24小時內。
[0152] 優選地，測試受試者（和參照受試者）具有急性腦缺血事件的風險因子。優選的 風險因子包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是急性心力衰竭）、收縮性和/或舒張性心功能 障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風險因子是糖尿病和肥胖。因此，測試受試者優選 地顯示這些風險因子中的至少一種。具體地，測試受試者（和參照受試者，即得到參照量的 受試者）患有冠狀動脈病和/或心力衰竭。最優選地，所述受試者患有心力衰竭。優選地， 這同樣適用於參照受試者。
[0153] 如上文陳述的，依照前述方法要測試的受試者應被懷疑患有急性腦缺血事件，如 此在如本文中別處所述的特定窗口期內展現過急性腦缺血事件。優選地，懷疑展現過急性 腦缺血事件的受試者是已顯示急性腦缺血事件症狀的受試者。優選地，所述受試者是在獲 得測試樣品前的特定窗口期內已顯示急性腦缺血事件症狀的受試者。優選地，所述受試者 是在獲得樣品前72小時內，更優選地48小時內，和最優選地24小時內已顯示急性腦缺血 事件的症狀。然而，優選地，所述測試樣品應在不早於急性腦缺血事件症狀開始後1小時， 特別是不早於2小時獲得。
[0154] 通過本發明的前述方法，應診斷出急性腦缺血事件。如本文中使用的，術語"診斷" 意為評估依照本發明方法所指的受試者是否展現過急性腦缺血事件。具體地，應診斷所述 受試者是否在獲得要測試的樣品前的某段窗口期內展現過急性腦缺血事件。在一個優選的 實施方案中，應診斷出所述受試者在獲得待測試樣品前72小時內是否展現過急性腦缺血 事件。在一個進一步的優選的實施方案中，應診斷所述受試者在獲得待測試樣品前48小時 內是否展現過急性腦缺血事件。在一個甚至進一步的優選的實施方案中，應診斷所述受試 者在獲得待測試樣品前24小時內是否展現過急性腦缺血事件。優選地，所述受試者在獲得 樣品時已不再顯示急性腦缺血事件的症狀。
[0155] 優選地，所述樣品在不超過急性腦缺血事件症狀開始後72小時獲得。更優選地， 所述樣品在不超過急性腦缺血事件症狀開始後48小時，最優選不超過24小時獲得。優選 地，所述受試者在獲得樣品時已不再顯示急性腦缺血事件的症狀。
[0156] 優選地，所述參照比率源自已知展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品（或來自 受試者組的樣品），和/或已知未展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品（或來自受試者組 的樣品）。
[0157] 優選地，參照受試者（即已知展現過急性腦缺血事件的受試者或已知未展現過急 性腦缺血事件的受試者）具有急性腦缺血事件的風險因子。急性腦缺血事件的優選的風險 因子在上文中公開且包括冠狀動脈病、心力衰竭（特別是心力衰竭）、收縮性和/或舒張性 心功能障礙、瓣膜性心臟病和動脈高血壓。別的風險因子是糖尿病和肥胖。因此，參照受試 者優選地顯示這些風險因子中的至少一種。優選地，參照受試者患有冠狀動脈病。更優選 地，參照受試者患有心力衰竭。最優選地，測試受試者以及參照受試者患有心力衰竭。還優 選地，測試受試者以及參照受試者患有冠狀動脈病。
[0158] 如果計算的比率（和參照比率）是NT-原ANP量對NT-原BNP量的比率的話，以 下適用作診斷算法：
[0159] 優選地，參照比率源自已知展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品，其中來自測 試受試者的樣品中的NT-原ANP對NT-原BNP比率基本等於或大於參照比率指示所述受試 者展現過急性腦缺血事件，和/或
[0160] 參照比率源自已知未展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品，其中來自測試受試 者的樣品中的NT-原ANP對NT-原BNP比率基本等於或低於參照比率指示所述受試者未展 現過急性腦缺血事件。
[0161] 源自已知未展現過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP 量對NT-原BNP量的優選參照比率是約10至約100,且更優選地，約20至約90、或約20至 約80。甚至更優選地，源自已知未展現過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品 的參照比率是約100,或最優選地約80。
[0162] 優選地，如果參照比率源自具有急性腦缺血事件的風險因子的受試者（特別是 來自患有心力衰竭或冠狀動脈病的受試者），源自已知未展現過急性腦缺血事件的受試者 (或受試者組）的樣品的NT-原ANP量對NT-原BNP量的優選的參照比率是約10至約40， 更優選地，約20至約40、或約20至約30。甚至更優選地，源自已知未展現過急性腦缺血事 件的受試者（或受試者組）的樣品的參照是約40,或最優選地約30。
[0163] 源自已知展現過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品的NT-原ANP量 對NT-原BNP量的優選參照比率是約100至約250,且更優選地，約100至約200、或約100 至約150。甚至更優選地，源自已知展現過急性腦缺血事件的受試者（或受試者組）的樣品 的參照是約100,或最優選地約150。TIA的優選的參照量在本文中別處公開。
[0164] 在本發明的一個方面，涵蓋一種用於在懷疑患有過急性腦缺血事件的受試者中建 立診斷急性腦缺血事件的輔助的方法，所述方法包括：
[0165] a)測定標誌物NT-原ANP和NT-原BNP的量，其通過⑴使樣品與特異性結合所 述標誌物的檢測劑接觸達一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標誌物 的複合物，（ii)測量形成的複合物的量，其中所述形成的複合物的量與樣品中存在的標誌 物的量成比例，和（iii)將形成的複合物的量轉化成標誌物的量，其反映樣品中存在的標 志物的量；
[0166] b)計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率；
[0167] c)將所述比率與參照比較；並
[0168] d)基於步驟c)中進行的比較的結果，建立用於診斷急性腦缺血事件的輔助。
[0169] 在本發明的另一個方面，涵蓋一種用於在懷疑患有急性腦缺血事件的受試者中診 斷急性腦缺血事件的系統，包含：
[0170] a)分析單元，其配置為使所述樣品與特異性結合標誌物NT-原ANP的檢測劑接觸 達一段時間，該時間足以允許形成所述檢測劑和來自樣品的標誌物的複合物，
[0171] b)分析單元，其配置為測量形成的複合物的量，其中所述形成的複合物的量與樣 品中存在的標誌物的量成比例，
[0172] c)計算裝置，其具有處理器且與所述分析單元處於可操作聯繫中，和
[0173] d) -種非短暫性機器可讀媒體，其包含可由所述處理器執行的多個指令，所述指 令在執行時將形成的複合物的量轉化成標誌物的量，該量反映樣品中存在的標誌物的量， 並基於與所述參照的所述比較的結果，建立用於診斷急性腦缺血事件的輔助。
[0174] 在一個方面，適宜的檢測劑可以是特異性結合要通過本發明方法研究的受試者樣 品中的標誌物的抗體，如本文中別處陳述的。
[0175] 在前述方法的又一個方面，可通過分析單元來實施步驟a)，所述分析單元在一個 方面是如本文中別處定義的分析單元。
[0176] 在本發明方法的一個方面，將步驟b)中計算的比率與參照比率比較。在一個方 面，所述參照比率是如本文中別處定義的參照比率。如此，在本發明方法的一個方面中應用 的參照可以是人為參照，其被用於反映使用的檢測劑的限制。在另一個方面，在實施比較時 還可以考慮所述關係，例如通過在實際比較測定量與參照的值之前對於測定量或比率納入 標準化和/或校正計算步驟。在一個方面，自動化實施所述比較，例如通過計算機系統等的 輔助。
[0177] 基於在步驟c)中所進行的比較，通過如本文別處所述的、將受試者劃歸為患有急 性腦事件或未患有急性腦事件的受試者組，建立診斷急性腦缺血事件的輔助。如本文別處 已經討論過的，在所研究的病例中，對於所研究的受試者的劃分不一定是100%研究例正確 的。而且，研究的受試者所歸入的受試者組是人為的組，這是因為這些組是基於統計學考慮 建立的，即特定的預先選擇的可能性程度，本發明的方法將基於其運行。在本發明的一個方 面中，用於診斷急性腦事件的輔助是自動建立的，例如，由如本文所描述和公開的計算設備 等輔助。
[0178] 在本發明的方法的一個方面中，所述方法還包括根據如本文別處詳細列舉的在步 驟c)中建立的結果推薦和/或管理受試者，和/或調整疾病監控的密集性的步驟。
[0179] 在前述方法的一個方面，通過本文中別處所述的一個或多個分析單元來實施步驟 b)和/或c)。
[0180] 此外，本發明涉及NT-原ANP多肽和/或特異性結合其的檢測劑在懷疑展現過短 暫性缺血發作（TIA)的受試者的樣品中用於診斷短暫性缺血發作的用途。
[0181] 另外，本發明涉及NT-原ANP多肽和NT-原BNP多肽在懷疑展現過短暫性缺血發 作（TIA)的受試者的樣品中用於診斷短暫性缺血發作的用途。
[0182] 還有，本發明涉及特異性結合NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結合NT-原BNP 多肽的檢測劑在懷疑展現過短暫性缺血發作（TIA)的受試者的樣品中用於診斷短暫性缺 血發作的用途。
[0183] 而且，本發明涉及NT-原ANP多肽和NT-原BNP多肽在懷疑患有急性腦缺血事件 的受試者的樣品中用於診斷急性腦缺血事件的用途。
[0184] 另外，本發明涉及特異性結合NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結合NT-原BNP 多肽的檢測劑在懷疑患有急性腦缺血事件的受試者的樣品中用於診斷急性腦缺血事件的 用途。
[0185] 如本文中使用的，術語"檢測劑"指能特異性識別和結合本文中所述的生物標誌物 (NT-原ANP或NT-原BNP)(在存在於樣品中時）的試劑。而且，所述試劑應允許直接或間 接檢測由所述試劑和生物標誌物形成的複合物。直接檢測可通過將可檢測標記納入所述試 劑來實現。間接標記可通過特異性結合包含生物標誌物和檢測劑的複合物的一種別的試劑 來實現，其中所述別的試劑能生成可檢測信號。可用作檢測劑的適宜的化合物是本領域中 公知的。優選地，所述檢測劑是特異性結合生物標誌物的抗體或適體。如本文中所指的抗 體包括多克隆和單克隆抗體以及它們的能結合抗原或半抗原的片段如Fv、Fab和F(ab) 2片 段。還涵蓋單鏈抗體和人源化雜合抗體，其中將展現期望的抗原特異性的非人供體抗體的 胺基酸序列與人接受抗體的序列組合。
[0186] 本發明還涉及一種用於診斷短暫性缺血發作的裝置，所述裝置包含：
[0187] a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP 多肽的量；和
[0188] b) -種包含數據處理器的評估單元，所述數據處理器配備有用於將通過所述分析 單元測定的量與資料庫中存儲的參照量進行比較從而建立NT-原ANP診斷的算法，其中所 述參照量源自用於診斷TIA的方法的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述 算法是如在所述方法的背景中陳述的算法。
[0189] 依照本發明的一個別的方面，提供適用於實施本發明方法的裝置，包含：
[0190] a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP 多肽的量；和
[0191] b) -種用於將測定的量與參照量進行比較的分析單元，由此診斷出所述受試者是 否展現過TIA，所述單元包含具有參照量值的資料庫和實施該比較的計算機執行的算法。
[0192] 本發明還涉及一種用於診斷短暫性缺血發作的裝置，所述裝置包含：
[0193] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0194] b) -種包含數據處理器的評估單元，所述數據處理器用於計算由分析單元測定的 NT-原ANP和NT-原BNP量的比率，所述數據處理器配備有用於將所述比率與資料庫中存儲 的參照比率進行比較以建立TIA診斷的算法，其中所述參照比率源自用於診斷TIA的方法 的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的背景中所述 的算法。
[0195] 本發明還涉及一種用於診斷急性腦缺血事件的裝置，所述裝置包含：
[0196] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0197] b) -種包含數據處理器的評估單元，所述數據處理器用於計算由分析單元測定的 NT-原ANP和NT-原BNP量的比率，所述數據處理器配備有用於將所述比率與資料庫中存儲 的參照比率進行比較以建立TIA診斷的算法，其中所述參照比率源自用於診斷急性腦缺血 事件的方法的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的 背景中陳述的算法。
[0198] 還涵蓋一種用於診斷急性腦缺血事件的裝置，所述裝置包含：
[0199] a) -種分析單元，包含允許測定所述NT-原ANP多肽的量的、針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和允許測定所述NT-原BNP多肽的量的、針對NT-原BNP多肽的檢測劑；和
[0200] b) -種包含數據處理器的分析單元，所述數據處理器用於計算NT-原ANP和 NT-原BNP量的比率，所述數據處理器配備有用於將所述比率與資料庫中存儲的參照比率 進行比較以建立事件診斷的算法，其中所述參照比率源自用於診斷急性腦缺血事件的方法 的背景中的如本文中別處描述的受試者的樣品，且所述算法是如在所述方法的背景中陳述 的算法。
[0201] 如本文中使用的，術語"裝置"指一種包含可操作地彼此連接以允許依照本發明方 法的診斷的前述單元的系統。本文中別處公開了可用於分析單元的優選的檢測劑。所述分 析單元優選地包含在固體支持物上處於固定化形式的所述檢測劑，檢測劑將與包含要測定 其量的生物標誌物的樣品接觸。而且，分析單元還可包含測定特異性結合生物標誌物的檢 測劑量的檢測器。測定的量可傳輸至評估單元。所述評估單元包含數據處理元件如計算機， 具有用於實施測定量和適宜參照之間比較的執行算法。適宜的參照可以源自要用於生成如 本文中別處描述的參照量的受試者樣品。診斷結果可以以參數診斷性原始數據給出，優選 地作為絕對或相對量。應理解這些數據可能需要臨床醫師的解譯。然而，還涵蓋專家系統 裝置，其中輸出包含經加工的診斷性原始數據，其解譯不需要專門的臨床醫師。優選地，本 發明的裝置可用於以自動化方式實施本發明的前述方法。
[0202] 本公開的一個優選的實施方案包括一種用於診斷如別處公開的TIA或急性腦事 件的系統。所述系統的實例包括用於檢測化學或生物反應結果或者監控化學或生物反應 進程的，臨床化學分析儀，凝聚化學分析儀（coagulation chemistry analyzers),免疫化 學分析儀，尿分析儀，核酸分析儀。更具體而言，本申請的示例性系統包括Roche Elecsys? Systems 和Cobas? e Immunoassay 分析儀，Abbott Architect?和 Axsym?分析儀，Siemens Centaur? 和 Immulite? 分析儀，以及 Beckman Coulter UniCel? 和 AcessT? 分析儀，等等。
[0203] 所述系統的實施方案可包括一個或以上的用於實踐本申請的主題的分析單元。本 申請中所公開的系統的分析單元可通過已知的任何有線連接，藍牙，LANS，或無線信號與本 申請所公開的計算設備可操作地通訊。此外，根據本申請，分析單元可以包括較大設備中 用於診斷目的的樣品檢測，例如定性和/或定量評估之一或兩者的獨立的裝置或元件。例 如，分析單元可以執行或輔助樣品和/或試劑的移液、劑量施用（dosing)、混合。分析單元 可包括用來夾持試劑以進行測定的試劑夾持單元。試劑的安排可以是，例如在盛有單獨的 試劑或一組試劑的容器或盒（cassettes)裡，置於儲藏室或輸送器中合適的託座或位置之 中。檢測試劑還可以固定在與樣品相接觸的固體支持物上。分析單元還可以包括對於特定 的分析最優化的處理和/或檢測組件。
[0204] 根據一些實施方案，分析單元可配置為對樣品中的分析物，例如標誌物，進行光學 檢測。用於光學檢測的分析單元的示例包括配置為將電磁能轉化成電信號的設備，其包 括單一的和多元件或陣列光學探測器。根據本公開，光學探測器能監控光電磁信號並提 供代表置於光路中的樣品內分析物的存在和/或濃度的電輸出信號，或與相對於基線信 號的應答信號。所述設備還可以包括，例如光電二極體，包括雪崩光電二極體（avalanche photodiodes)，光電電晶體，光電導檢測器，線性傳感器陣列，CCD檢測器，CMOS檢測器，包 括CMOS陣列檢測器，光電倍增管，以及光電倍增管陣列。根據某些實施方案，光學檢測器， 例如光電二極體或光電倍增管可包括附加的信號調節或處理電器元件。例如光學檢測器可 包括至少一個預放大器，電子過濾器，或集成電路。合適的預放大器包括，例如集成、跨阻 抗，和電流增益（電流反射鏡）預放大器。
[0205] 此外，本申請的一個或以上的分析單元可包含用於發射光的光源。例如，分析單 兀的光源可以由至少一個光發射兀件（例如，發光二極體，電力發射源如白熾燈，電致發光 燈，氣體放電燈，高強度放電燈，雷射）組成，用於測量待測樣品中分析物的濃度，或使得能 夠能量轉換（例如，通過螢光共振能量轉移或催化酶）。
[0206] 此外，所述系統的分析單元可包括一個或以上的溫育單元（例如用於將樣品或試 劑保持在特定的溫度或溫度範圍）。在一些實施方案中，分析單元可包括用於使樣品處於重 復的溫度循環中並監測樣品中擴增產物量的變化的熱循環儀，包括實時熱循環儀。
[0207] 本文中公開的系統的分析單元還可包括或可操作地連接於反應容器或小杯 (cuvette)輸送單元。輸送單元的示例包括液體加工單元，例如移液單元，用來將樣品和/ 或試劑遞送到反應容器。所述移液單元可包含可重複使用的耐洗針，例如鋼針，或者一次性 的移液頭。所述的分析單元還可包括一個或以上的混合單元，例如用于振蕩含液體的小杯 的振蕩器，或用來混合小杯或試劑容器中的液體的攪拌槳。
[0208] 根據上文描述，依照本公開的一些實施方案，本文中公開和描述的方法的一些步 驟的部分可通過計算裝置實施。計算裝置可以是例如一般目的計算機或手提式計算裝 置。應理解可一起使用多重計算裝置，如網絡或轉移數據的其他方法來實施本文中公開方 法的一個或多個步驟。例示性的計算裝置包括桌面計算機、可攜式計算機、個人數據助手 ("PDA"）如BLACKBERRY牌裝置、手機裝置（cellular device)、平板電腦、伺服器等。一般 而言，計算裝置包含能執行多個指令（如軟體程序）的處理器。
[0209] 優選地，計算裝置能訪問存儲器。存儲器是計算機可讀媒體且可以包含單個存儲 裝置或多個存儲裝置，例如局部位於計算裝置的或可跨網絡為計算裝置可訪問。計算機可 讀媒體可以是任何可由計算裝置可訪問的介質，而且包括穩定和不穩定介質。另外，計算機 可讀媒體可以是可移除和不可移除介質之一或兩者。舉例而言且無限制地，計算機可讀媒 體可以包含計算機存儲介質。例示性的計算機存儲介質包括但不限於，RAM、ROM、EEPR0M、 快閃記憶體或任何其他存儲技術，CD-ROM、Digital Versatile Disk(DVD)或其他光碟存儲器、磁 帶盒、磁帶、磁碟存儲器，或任何其他可用於存儲多個指令的媒體，所述指令能由計算裝置 訪問並由計算機裝置的處理器執行。
[0210] 依照本公開的實施方案，軟體可以包含指令，其在由計算裝置的處理器執行時，可 以實施本文公開方法的一個或多個步驟。一些指令可改編為產生控制其他機器運行的信 號，如此可以經由那些控制信號運行以轉化離計算機遠距離的材料。這些描述和示例是由 數據處理領域技術人員使用的手段，例如以最有效地將其工作物傳達給本領域其他技術人 員。
[0211] 所述多個指令還可以包含一種算法，其一般理解為產生期望結果的自身一致的步 驟序列。這些步驟是需要物理操作物理量的那些步驟。通常儘管非必要地，這些量採用能 被存儲、轉移、轉化、組合、比較和另外操作的電或磁脈衝或信號的形式。主要出於普遍使用 的原因，將這些信號指為值、字符、展示數據、數字等作為其中實體化或表示這類信號的物 理項或顯示的提述在多次證明是方便的。然而，應當記住，所有這些和相似的術語應與適宜 的物理量有關且本文中僅用作應用於這些量的方便的標記。依照本公開的一些實施方案， 將用於實施本文中所公開的一種或多種標誌物的測定量和適宜參照之間的比較的算法實 體化，而且通過執行指令來進行。結果可以參數診斷性原始數據或絕對或相對量輸出。依 照本文所公開系統的多個實施方案，"診斷"可以由本文中公開的系統的計算裝置基於計算 的"量"對參照或閾值的比較來提供。例如，系統的計算裝置可以以詞、符號或數值的形式 提供指示物，其指示具體的診斷。
[0212] 所述計算裝置還可以訪問輸出裝置。例示性的輸出裝置包含例如傳真機、顯示器、 印表機和文檔。依照本公開的一些實施方案，計算裝置可以實施本文公開方法的一個或多 個步驟，且其後提供經由輸出裝置輸出，其涉及方法的結果、指示、比率或其他因子。
[0213] 本發明還涵蓋一種用於診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對 NT-原ANP多肽的檢測劑，以及優選地，反映從已知展現過TIA的受試者和/或已知未展現 過TIA的受試者衍生的參照量的標準。
[0214] 本發明還涵蓋一種用於診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對 NT-原ANP多肽的檢測劑和針對NT-原BNP多肽的檢測劑，以及優選地，反映從已知展現過 TIA的受試者和/或已知未展現過TIA的受試者衍生的參照比率的標準。
[0215] 本發明還涵蓋一種用於診斷受試者中的急性腦缺血事件的試劑盒，所述試劑盒至 少包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑和針對NT-原BNP多肽的檢測劑，以及優選地，反映從 已知展現過急性腦缺血事件的受試者或已知未展現過急性腦缺血事件的受試者衍生的參 照比率的標準。
[0216] 如本文中使用的，術語"試劑盒"指上述組分的集合，優選地，其單獨地或在單一的 容器內提供。所述的容器內還包括實施本發明的方法的操作指南。這些操作指南可以是 使用手冊的形式，也可以通過電腦程式代碼提供，當在計算機或數據處理設備上運行所 述電腦程式代碼時，其能夠執行本發明的方法中的比較，並相應地建立診斷。所述的計 算機程序代碼可以是在數據存儲介質或設備上，例如光學存儲介質（例如光碟），或者直接 在計算機或數據處理設備上提供。而且，所述試劑盒優選地可包含反映如本文中別處詳細 描述和陳述的參照量的標準。所述檢測劑優選地固定化於載體上，且優選為測試條（test stripe)〇
[0217] 本說明書中引用的全部參考文獻通過參考其所公開的全部內容以及本說明書中 特別引用的公開內容的形式併入本申請。
[0218] 下述的實施例僅用來解釋本發明。它們不以任何形式限制本發明的範圍。 實施例
[0219] 實施例1 :NT-原BNP和NT-原ANP的測定
[0220] 使用 Roche 的電化學發光 ELISA 夾層測試 Elecsys 原 BNP II STAT (Short Turn Around Time)測定來測定NT-原BNP。該測試採用識別位於原BNP (1-108) N端部分（1-76) 中的表位的兩種單克隆抗體。
[0221] 使用來自 Biomedica Medizinprodukte GmbH(Vienna, Austria)的NT-原 ANP測定 來測定NT-原ANP (前-原ANP肽的胺基酸1至98)。目錄號為BI-20892。檢測限為0. 05 nmol/1。該測定利用多克隆綿羊抗原ANP抗體。
[0222] 在下列受試者組的血清樣品中測試生物標誌物的水平。
[0223] ?健康受試者（η = 149)
[0224] ?患有穩定冠狀動脈病CAD的患者（即其中經常形成中風的患者，η = 235)，
[0225] ?患有心臟代償失調的患者（η = 64)，
[0226] ?患有 ΤΙΑ 的患者（η = 79)。
[0227] ?患有小中風和大中風的患者（分別的η = 61和108)
[0228] CAD患者:將患有慢性動脈病的總計235位患者納入本研究中，均值年齡64歲， 141位男性和94位女性。在所有患者中，通過血管造影術驗證冠狀動脈病。血管直徑中 50%降低被用於1、2或3級血管病的分類。心臟功能通過心回波描記術和NT-原ΒΝΡ的測 定評估。
[0229] 心力衰竭:另一組的64位患者患有代償失調性心力衰竭（24位女性和40位男性， 均值年齡69歲）。他們的特徵為在先前2周內增加的呼吸短促，所有患者均可依照NYHA分 類歸為NYHA III或IV。
[0230] 健康控制:將149位臨床健康的人受試者納入研究作為對照，52位男性和97位女 性（均值年齡41歲，範圍為19至56歲）。這些受試者沒有心臟病，如通過醫學病史和心電 圖評估的，沒有糖尿病和這些疾病的風險因子。而且，他們有正常的腎功能，如通過正常肌 酸酐值和惡性病症評估的。
[0231] 中風/TIA患者:將患有TIA或缺血性中風的總計255位患者（均值年齡70歲） 納入本研究中。在23位患者中存在短暫性缺血發作，在61位患者中診斷出小中風，而在 108位患者中發現大中風。除了上文描述的以外，還實施頸動脈和經顱超聲（caotoid and transcranial ultrasound)以及心電描記術和心回波描記術，並依照TOAST標準將患者分 類。在患有中風和TIA的患者中，在呈現時獲得的樣品和在呈現後6和24小時獲得的樣品 中測量生物標誌物NT-原ANP和NT-原BNP。症狀開始和允入（admission)之間的中值間 期為4. 2小時（25th百分比：2. 5, 75th百分比：8小時）。
[0232] 實施例2 :結果
[0233] 獲得以下結果（顯示為中值水平，以及25th和75th百分比） ：
[0234]
【權利要求】
1. 一種用於診斷受試者中的短暫性缺血發作（TIA)的方法，所述受試者被懷疑展現過 短暫性缺血發作，但尚未展現中風，所述方法包括測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP 的量。
2. 權利要求1的方法，進一步包含將測定的NT-原ANP的量與參照量比較，由此診斷所 述受試者是否展現過短暫性缺血發作。
3. 權利要求1和2的方法，其中懷疑展現過TIA的所述受試者是已顯示TIA症狀的受 試者。
4. 權利要求1至3中任一項的方法，其中懷疑展現過短暫性缺血發作的所述受試者在 獲得所述樣品前72小時內已顯示TIA的症狀，特別是其中所述受試者在獲得所述樣品前24 小時內已顯示TIA的症狀。
5. 權利要求4的方法，其中在獲得所述樣品前72小時內診斷出所述受試者是否展現過 TIA，特別是其中在獲得所述樣品前24小時內診斷出所述受試者是否展現過TIA。
6. 權利要求1至5中任一項的方法，其中所述受試者在獲得所述樣品時不再顯示TIA 的症狀。
7. 權利要求1至6中任一項的方法，其中在不早於TIA症狀結束後一小時從所述受試 者獲得所述樣品。
8. 權利要求2至7中任一項的方法，其中： a. 所述參照量源自來自已知展現過TIA的受試者的樣品，且其中來自測試受試者的樣 品中NT-原ANP的量基本等於所述參照量或大於所述參照量指示所述受試者已展現過短暫 性缺血發作，和/或 b. 其中所述參照量源自來自已知未展現過TIA的受試者的樣品，且其中來自測試受試 者的樣品中NT-原ANP的量基本等於所述參照量或低於所述參照量指示所述受試者未展現 過短暫性缺血發作。
9. 權利要求2至7中任一項的方法，其中所述參照量是計算的參照量，且其中來自測試 受試者的樣品中NT-原ANP的量大於所述計算的參照量指示所述受試者已展現過短暫性缺 血發作，且其中來自測試受試者的所述樣品中NT-原ANP的量低於所述計算的參照量指示 所述受試者未展現過短暫性缺血發作。
10. 權利要求1至9的方法，其中所述受試者不患有心力衰竭和/或冠狀動脈病。
11. 一種用於診斷受試者中的急性腦缺血事件的方法，所述受試者被懷疑患有急性腦 缺血事件，所述方法包括： a. 測定來自所述受試者的樣品中NT-原ANP的量， b. 測定來自所述受試者的樣品中NT-原BNP的量，和 c. 計算NT-原ANP和NT-原BNP的量的比率。
12. 權利要求11的方法，進一步包括將由此計算的比率與參照比率比較，從而診斷出 所述急性腦缺血事件。
13. 權利要求11和12的方法，其中所述受試者患有心力衰竭和/或冠狀動脈病。
14. 權利要求11至13中任一項的方法，其中所述急性腦缺血事件選自中風和短暫性缺 血發作。
15. 權利要求11至14中任一項的方法，其中計算NT-原ANP對NT-原BNP的比率，而 且 a. 其中所述參照比率源自來自已知展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品，且其中來 自測試受試者的樣品中NT-原ANP對NT-原BNP的比率基本等於所述參照比率或大於所述 參照比率指示所述受試者已展現過急性腦缺血事件，和/或 b. 其中所述參照比率源自來自已知未展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品，且其中 來自測試受試者的樣品中NT-原ANP對NT-原BNP的比率基本等於所述參照比率或低於所 述參照比率指示所述受試者未展現過急性腦缺血事件。
16. 權利要求11至15中任一項的方法，其中懷疑展現過急性腦事件的所述受試者是已 顯示急性腦事件症狀的受試者。
17. 權利要求11至16中任一項的方法，其中懷疑展現過急性腦事件的所述受試者在獲 得所述樣品前24小時內已顯示急性腦事件的症狀。
18. 權利要求11至17中任一項的方法，其中懷疑展現過急性腦事件的所述受試者在獲 得所述樣品前24小時內已顯示急性腦事件的症狀。
19. 權利要求11至17中任一項的方法，其中在不早於所述急性腦事件症狀的發作後1 小時獲得所述樣品。 20. NT-原ANP多肽和/或特異性結合其的檢測劑在懷疑展現過短暫性缺血發作（TIA) 的受試者的樣品中用於診斷短暫性缺血發作（TIA)的用途。 21. i) NT-原ANP和NT-原BNP多肽，或 ii)特異性結合所述NT-原ANP多肽的檢測劑和特異性結合所述NT-原BNP多肽的檢 測劑，在懷疑展現過急性腦缺血事件的受試者的樣品中用於診斷急性腦缺血事件的用途。
22. 權利要求1至19中任一項的方法，或權利要求20或21的用途，其中所述樣品是血 液、血清或血漿樣品。
23. 權利要求1至19中任一項的方法，或權利要求20或21的用途，其中所述受試者是 人。
24. -種用於診斷短暫性缺血發作的裝置，所述裝置包含： a) -種分析單元，包含針對NT-原ANP多肽的檢測劑，其允許測定所述NT-原ANP多肽 的量；和 b) -種包含數據處理器的評估單元，所述數據處理器配備有用於將通過所述分析單元 測定的量與資料庫中存儲的參照量進行比較從而建立NT-原ANP診斷的算法，其中所述參 照量源自如權利要求15中限定的受試者的樣品，且所述算法是如權利要求4中限定的算 法。
25. -種用於診斷受試者中的TIA的試劑盒，所述試劑盒至少包含針對NT-原ANP多肽 的檢測劑，和優選地，反映如源自已知展現過TIA的受試者和/或已知未展現過TIA的受試 者的參照量的標準。
【文檔編號】G01N33/68GK104094121SQ201280068882
【公開日】2014年10月8日 申請日期:2012年11月29日 優先權日:2011年12月1日
【發明者】G.赫斯, A.霍希, D.祖內克 申請人:霍夫曼-拉羅奇有限公司