骨康藥物的質量控制方法

2023-04-27 15:18:26

骨康藥物的質量控制方法
【專利摘要】本發明公開了骨康藥物的質量控制方法，該方法主要是增加了酢漿草中的刺槐素-6-C-β-D-葡萄糖苷的含量測定和指紋圖譜檢測方法。該方法是採用高效液相色譜法進行測定，操作簡便，重現性好，能有效控制產品質量。
【專利說明】骨康藥物的質量控制方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及骨康藥物的質量控制方法，屬於藥品的【技術領域】。
【背景技術】
[0002]骨康膠囊為中成藥地方標準上升國家標準部分(骨傷科分冊)中收載的品種，其質量標準是在2002年進行提升的，主要採用薄層色譜法對芭蕉根藥材和三七藥材進行定性鑑別，採用高效液相色譜法對補骨脂中的補骨脂素和異補骨脂素進行定量測定。為了進一步有效的控制產品質量，我們研究開發了一種對酢漿草藥材進行含量測定的方法。酢漿草是骨康膠囊中的主要藥味，具有清熱利溼，涼血消腫，解毒散瘀的功效，用於跌扑損傷。一直以來都只能做到定性鑑別，不能做到定量測定，為了能進一步有效的控制產品質量，我們對酢漿草藥材有效成份進行了研究，開發了一種用於控制酢漿草的含量測定方法。除此之外，我們還對骨康膠囊成品進行了指紋圖譜方法的研究，並最終制定了指紋圖譜檢測方法。

【發明內容】

[0003]芭蕉根藥材是骨康膠囊的君藥，但在多次研究、篩選後，發現無指標性成分用於含量測定。酢漿草作為骨康膠囊中的主要藥味，具有清熱利溼，涼血消腫，解毒散瘀的功效，用於跌扑損傷。故選擇酢漿草中的指標性成分作為骨康膠囊的另一指標性成分測定。通過對酢漿草藥材有效成份的研究發現，酢漿草中的有效成份為刺槐素-6-C- β -D-葡萄糖苷，故選擇了刺槐素-e-c-β -D-葡萄糖苷作為骨康膠囊中另一含量測定指標性成分。
[0004]
一、酢漿草中刺槐素-e-c-β -D-葡萄糖苷含量測定方法研究:
1、樣品與試劑
樣品:骨康膠囊(批號:20100622、20100624、20100701)
對照品:刺槐素-6-D-葡萄糖苷批號:20101107-2純度:98%
試劑:甲醇、磷酸為分析純；甲醇為色譜純 儀器:島津AUW-220D型十萬分之一電子天平 梅特勒AB104-N型萬分之一電子天平 Waters 2695-2996高效液相色譜儀
2、液相條件
儀器=Waters 2695-2996高效液相色譜儀
色譜柱:Diamonsil 二代 C18 柱(250mmX4.6mm, 5 um)
流動相:乙腈-0.1%磷酸溶液(19:81)
流速:1.0ml/min 柱溫:室溫
3、溶液製備
3.1供試品溶液製備取本品內容物1.0g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得；
3.2對照品溶液製備
取刺槐素-6-C-13-D-葡萄糖苷對照品10.48mg，置IOOml量瓶中，用甲醇溶解並稀釋至刻度，搖勻，即得濃度為0.1048mg/ml的對照品貯備液；再精密量取對照品貯備液2ml置100ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得；
3.3陰性樣品溶液製備
取缺酢漿草藥材的陰性樣品，同供試品製備方法製得陰性樣品溶液；
3.4檢測波長的選擇
在對酢漿草藥材建立刺槐素-6-C-i3-D-葡萄糖苷含量測定時，對其紫外吸收進行了掃描，得出刺槐素-6-C- β-D-葡萄糖苷在330nm處有最大吸收，故選擇330nm為其含量測定的波長。見圖1 ;
3.5系統適應性研究
取刺槐素-6-C-i3-D-葡萄糖苷對照品溶液、供試品溶液、陰性樣品溶液按上述液相條件進行測定，結果見圖2、圖3、圖4 ;
結論:骨康膠囊樣品色譜圖在此條件下能達到很好的分離，陰性樣品對測定無幹擾；
3.6不同提取方式考察
稱取骨康膠囊內容物0.5g，六份，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別加入甲醇25ml，稱重，考察回流30分鐘、超聲30分鐘、冷浸I小時後超聲處理30分鐘三種提取方式，放冷，補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得。按上述色相條件進樣，分析，結果見表I ;
表I 成品不同提取方式考察結果
【權利要求】
1.骨康藥物的質量控制方法，骨康藥物由芭蕉根、酢漿草、續斷、三七、補骨脂組成，其質量控制方法為: 【鑑別】(I)取本品內容物5g，加甲醇30ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液濃縮至1ml，作為供試品溶液；另取芭蕉根對照藥材lg，同法製成對照藥材溶液；照薄層色譜法實驗，吸取上述兩種溶液各5 μ 1，分別點於同一矽膠G薄層板上，以石油醚(6(T90°C)-乙酸乙酯(20:1)為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液，在105 °C加熱至斑點顯色清晰，分別置日光和紫外燈(365nm)下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點或螢光斑點； (2)取本品內容物5g，加甲醇40ml，加熱回流I小時，濾過，濾液蒸乾，殘渣加水15ml使溶解，用三氯甲烷20ml振搖提取，棄去三氯甲烷液，水溶液用水飽和的正丁醇振搖提取2次(20ml、15ml)，合併正丁醇液，加氨試液洗滌2次(30ml、15ml)，棄去氨試液，正丁醇液蒸乾，殘渣加甲醇Iml使溶解,作為供試品溶液；另取三七對照藥材Ig,加甲醇20ml，同法製成對照藥材溶液；再取三七皂苷RU人參皂苷Rgl對照品，加甲醇製成每Iml各含2mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2~5μ 1，分別點於同一矽膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15: 40: 22: 10)10°C以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾乾，噴以10%硫酸乙醇溶液,在105°C加熱至斑點顯色清晰；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點； 【檢查】應符合膠囊劑項下的各項規定； 【含量測定】補骨脂照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以甲醇-水(42: 58)為流動相；檢測波長為245nm ;柱溫40°C ;理論板數按補骨脂素峰計算應不低於4500，補骨脂素峰和異補骨脂素峰的分離度應大於1.5 ； 對照品溶液的製備取補骨脂素和異補骨脂素對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含補骨脂素0.25mg、異補骨脂素0.2mg的混合溶液，即得； 供試品溶液的製備取裝量差異項下的本品內容物，混勻，取約0.5g，精密稱定，置25ml量瓶中，精密加入甲醇10ml，稱定重量，超聲處理20分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，用微孔濾膜濾過，取濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5 μ L，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每粒含補骨脂以補骨脂素(C11H6O3)和異補骨脂素(C11H6O3)的總量計，不得少於0.6 Img ； 其特徵在於所述含量測定項目中還含有酢漿草中刺槐素-e-c-β -D-葡萄糖苷的含量測定，其測定方法如下: 【含量測定】酢漿草照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；乙腈-`0.1%磷酸水溶液(15~25: 85-75)為流動相；檢測波長為330nm ;理論板數按刺槐素`6_Οβ -D-葡萄糖苷計算應不低於3000 ； 對照品溶液的製備精密稱取刺槐素-e-c-β -D-葡萄糖苷對照品適量，加甲醇製成每Iml含2yg的溶液，即得； 供試品溶液的製備取骨康藥物裝量差異項下的內容物，混勻，取1.0g,精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，稱定重量，超聲處理20-60分鐘，放冷，再稱定重量，加甲醇補足減失的重量，搖勻，濾過，取續濾液，即得； 測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5-20 μ 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
2.根據權利要求1所述的質量控制方法，其特徵在於骨康藥物每粒含刺槐素-6-C- β -D-匍萄糖昔(C22H22Oltl)計不得少於0.02mg。
3.骨康藥物的質量控制方法，其特徵在於增加了指紋圖譜的檢查方法，其檢測方法為: 【指紋圖譜】照高效液相色譜法測定； 色譜條件與系統適用性試驗以十八烷基矽烷鍵合矽膠為填充劑；以乙腈為流動相A，以0.1%磷酸溶液為流動相B進行梯度洗脫，其洗脫方法為:0-10分鐘使用10%流動相A和90%流動相B，10-30分鐘流動相A由10%漸變到30%，流動 相B由90%漸變到70%，30-60分鐘流動相A由30%漸變到50%，流動相B由70%漸變到50%，60-100分鐘流動相A由50%漸變到70%，流動相B由50%漸變到30% ;流速為1.0ml/min ;檢測波長為330nm ； 理論塔板數以刺槐素-6_C_i3 -D-匍萄糖昔計不得少於5000 ； 參照物溶液的製備取刺槐素-e-c-β -D-葡萄糖苷對照品適量，精密稱定，加甲醇製成每Iml含刺槐素-6-C- β -D-葡萄糖苷0.05mg的溶液，即得； 供試品溶液製備取骨康藥物內容物1.0g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，加入甲醇25ml，稱重，超聲處理30分鐘，放冷，用甲醇補足減失的重量，濾過，取續濾液，即得； 測定法精密吸取參照物溶液和供試品溶液各IOy 1，注入液相色譜儀，測定，即得。
4.根據權利要求3所述的質量控制方法，其特徵在於所述的指紋圖譜:按中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統，供試品指紋圖譜與對照指紋圖譜經相似度計算，相似度不得低於0.90。
5.如權利要求1一4中任意一項所述的質量控制方法，其特徵在於該方法還適用於片劑、顆粒劑、滴丸劑、注射劑、煎膏劑、糖漿劑、合劑、酒劑、丸劑、散劑。
【文檔編號】G01N30/02GK103454374SQ201310382486
【公開日】2013年12月18日 申請日期:2013年8月29日 優先權日:2013年8月29日
【發明者】賀亞都, 賀赫赫, 賀樂夫, 李芙蓉 申請人:貴州維康藥業有限公司