多步驟的最終過濾的製作方法

2023-05-17 00:50:11 1

專利名稱：多步驟的最終過濾的製作方法
多步驟的最終過濾本文報導了包括兩個直接相連的過濾步驟的組合的用於濃縮的多肽溶液的最終過濾的方法，其中第一個過濾步驟包括使用孔徑為3. 0 μ m的過濾器的預過濾和使用孔徑為0. 8 μ m過濾器的主過濾，且第二個過濾步驟包括使用孔徑為0. 45 μ m的過濾器的預過濾和使用孔徑為0. 22 μ m的過濾器的主過濾。
背景技術：
濃度超過100g/l的蛋白質溶液在最終過濾步驟期間容易有困難，例如只具有低跨膜通量或所使用的過濾器被在配製或濃縮過程期間形成的聚集物或顆粒聚集阻塞或由於加入的賦形劑導致濃縮的溶液粘度增加。粘度高和顆粒或聚集物含量增加結合在一起經常導致所使用的0. 22 μ m最終過濾的過濾器的孔被阻塞。因此，或者在過濾步驟期間(即在一批被完全處理之前)必須替換過濾器，或者必須增加過濾器面積。還已經觀察到孔徑為0. 45 μ m的過濾器和孔徑為0. 22 μ m的過濾器的組合沒有優勢，例如作為Sartobran P 0. 45/0. 22 μ m過濾器提供時如此。可能避開上述問題的增加孔徑的過濾器被用作深度過濾器或預-過濾器，但不被用作最終過濾器。在DE 4204444中報導了從氣流除去水滴的1. 2 μ m預過濾器和之後的0. 2 μ m無菌過濾的組合。在US 4，488，961中報導了包含兩個不同孔徑的過濾器過濾器單元，其中孔徑較小的過濾器是可彎曲的，通過使過濾器的流向變彎曲以降低過濾器單元的阻力。在US 5，643，566中使用孔徑為0. 45 μ m的過濾器的預過濾和孔徑為0. 22 μ m的過濾器的無菌過濾的組合。在EP 0204 836中報導了兩階段過濾器，該過濾器使用內壁光滑的膜與在其下面的由帶有隆起的脹管器的硬質的過濾支撐物支撐的薄的、能彎曲的多孔膜構建而成。在 DE 3 818 860中報導了至少兩個具有不同的膜材料和不同的過濾器孔徑和過濾器孔幾何形狀的膜濾器單元的組合。Aldington等人(J. Chrom. B 848(2007)64-78)報導了按比例放大的單克隆抗體純化方法。在CS M7484報導了製備針對人淋巴細胞的免疫球蛋白的方法。發明概述已經發現兩個各自包含預過濾器和主過濾器且各自具有特別選擇的孔徑的過濾器的組合能用於在最後的封裝步驟期間過濾高度濃縮的免疫球蛋白溶液，而在過濾過程期間沒有孔阻塞的風險和替換過濾器的需求。本文的一個方面報導了製備免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括以下步驟a)提供蛋白質的濃度至少為100g/l的免疫球蛋白溶液，b)經第一個和第二個過濾器的組合過濾所述免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器，且第二個過濾器包含孔徑為 0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器，並由此製備免疫球蛋白溶液。本文的另一個方面報導了第一個和第二個過濾器的組合的如本文報導的過濾器組合在活性藥物成分製備之前進行的免疫球蛋白溶液的最終過濾中的應用，其中第一個過濾器包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器，且第二個過濾器包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器。本文的另一個方面報導了製備免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步驟a)提供包含編碼免疫球蛋白的核苷酸的細胞，b)培養所述細胞，c)從細胞或培養基中回收免疫球蛋白，d)使用一個或多個色譜法步驟純化所述免疫球蛋白並提供免疫球蛋白溶液，和e)經第一個和第二個過濾器的組合過濾步驟d)的免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器，且第二個過濾器包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器，並由此製備免疫球蛋白。本文的另一個方面報導了試劑盒，其包含第一個過濾器(包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器)和第二個過濾器(包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器)。在一個實施方案中，第一個過濾器面積最多是第二個過濾器面積的兩倍。在另一個實施方案中，第一個和第二個過濾器具有大致相同的過濾器面積。在一個實施方案中，免疫球蛋白溶液包含糖和/或胺基酸和/或表面活化劑和/或鹽。在另一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的濃度為100g/l至300g/l。在又一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的體積為3升至100升。在另一個實施方案中，過濾施加的壓力是0. 1巴至4.0巴。在一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的濃度為160g/l或更高，且過濾施加的壓力為1.45巴或更高。在另一個實施方案中壓力為1. 50巴或更高。在另一個實施方案中，免疫球蛋白溶液包含糖和表面活化劑，且免疫球蛋白溶液濃度為125mg/ml或更高，且過濾施加的壓力為0. 75巴或更低。在另一個實施方案中壓力為0. 7巴或更低。在一個實施方案中，免疫球蛋白是抗-IL13受體α抗體或抗-HER2抗體。在另一個實施方案中，純化過程使用蛋白A親合色譜步驟和至少一個選自以下的步驟陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏水作用色譜。發明詳述已經發現兩個各自包含預過濾器和主過濾器和各自具有特別選擇的孔徑的過濾器或過濾器單元的組合可以用於在最後封裝步驟期間過濾高度濃縮的和粘稠的以及配製的免疫球蛋白溶液(即包含糖和表面活化劑)。尤其是包含孔徑分別為3.0μπι和0.8μπι 的預過濾器和主過濾器的第一個過濾器和包含孔徑分別為0. 45 μ m和0. 22 μ m的預過濾器和主過濾器的第二個過濾器的組合是非常有利的。就該組合中的單個過濾器單元而言，過濾包含總計例如Ikg的抗-IL-13Ral抗體或6kg的抗-HER2抗體的高度濃縮的溶液已是可能的，而且封裝所述的量而僅有較少的材料損失已是可能的。在一個實施方案中過濾器表面積與溶液體積的比率已被確定。在一個實施方案中，免疫球蛋白溶液包括免疫球蛋白和賦形劑。在另一個實施方案中，賦形劑包含一種或更多種物質，其選自糖諸如葡萄糖、半乳糖、麥芽糖、蔗糖、海藻糖和棉子糖，胺基酸諸如精氨酸、賴氨酸、組氨酸、鳥氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、丙氨酸、穀氨酸、 天冬氨酸、甘氨酸和甲硫氨酸，鹽諸如氯化鈉、氯化鉀、檸檬酸鈉、檸檬酸鉀、磷酸鈉、磷酸鉀和表面活性劑諸如聚山梨醇酯類和聚(氧乙烯-聚氧丙烯)聚合物。本文所述的過濾在治療性抗體的製備中用作最終過濾步驟。該步驟可以在將所需的賦形劑、穩定劑和/或抗-氧化劑加入高度濃縮的抗體溶液之後進行。在一個實施方案中，以kg計的抗體的量與過濾器的總面積的比率為1000g/m2至10，000g/m2。在另一個實施方案中，所述比率為1000g/m2至6000g/m2。在又一個實施方案中，所述比率為4000g/m2至 6000g/m2。「多肽」由通過肽鍵連接胺基酸(天然的或合成的)組成。具有少於約20個胺基酸殘基的多肽可被稱為「肽」，而由兩個或更多個多肽組成的分子或包含一個超過100個胺基酸殘基的多肽的分子可被稱為「蛋白質」。多肽還可以包含非-胺基酸成分，諸如碳水化合物基團、金屬離子或羧酸酯。非-胺基酸成分可通過表達多肽的細胞添加，且可根據細胞類型而不同。在本文中根據其胺基酸骨架結構或編碼其的核酸來定義多肽。一般不對添加物例如糖基進行特別說明，但是其可以存在。術語「免疫球蛋白」是指由一種或多種基本上由免疫球蛋白基因編碼的多肽組成的蛋白質。已鑑定的免疫球蛋白基因包括不同的恆定區基因以及極多的免疫球蛋白可變區基因。免疫球蛋白可以多種形式存在，包括例如，Fv、Fab和F(Eib)2以及單鏈(scFv)或雙抗體。術語「完整免疫球蛋白」是指包含兩條被稱為免疫球蛋白輕鏈多肽(輕鏈)和兩條被稱為免疫球蛋白重鏈多肽(重鏈)的免疫球蛋白。完整免疫球蛋白的各個免疫球蛋白重鏈和輕鏈多肽包含可變域(可變區)(一般為多肽鏈的氨基末端部分)，其包含能夠與抗原相互作用的結合區。完整的免疫球蛋白的各個免疫球蛋白重鏈和輕鏈還包含恆定區(通常為羧基末端部分)。重鏈的恆定區介導抗體結合至i)具有Fc γ受體(FcyR)的細胞，諸如吞噬細胞，或ii)具有新生Fc受體(Fcfoi)(又稱為Brambell受體)的細胞。其還介導抗體與一些因子(包括經典補體系統的因子諸如成分(Clq))結合。免疫球蛋白輕鏈和重鏈的可變域包含不同的片段，即4個框架區(FR)和3個高變區(CDR)。術語「免疫球蛋白碎片」是指包含至少一個以下結構域的多肽重鏈的可變域、重鏈的C0I域、鉸鏈區、Ch2域、Ch3域、Ch4域、輕鏈的可變域和/或輕鏈的Q域。還包含其衍生物和變體。例如，可存在其中一個或多個胺基酸或胺基酸區域缺失的可變域。術語「免疫球蛋白綴合物」指包含經肽鍵與其他多肽綴合的免疫球蛋白重鏈或輕鏈的至少一個結構域的多肽。所述其他多肽為非免疫球蛋白肽，例如激素、或生長受體、或抗融合肽、或補體因子等。術語「過濾器」是指微孔過濾器或或大孔過濾器。過濾器包括濾過膜，濾過膜自身由聚合材料構成，所述聚合材料例如聚乙烯、聚丙烯、乙烯醋酸乙烯酯共聚物、聚四氟乙烯、聚碳酸酯、聚氯乙烯、聚醯胺類(尼龍，例如Zetapore , N66Po si dyne )、聚酯類、醋酸纖維素、再生纖維素、纖維素複合材料、聚碸類、聚醚碸類、聚芳碸類、聚苯碸類(polyphenylsulphones)、聚丙烯腈、聚偏二氟乙烯、非織造的和織造的織物(例如
Tyvek )、纖維材料，或者由無機材料組成，諸如zeolithe、SiO2, A1203、TiO2或羥基磷灰
石。在一個實施方案中，第一個和第二個過濾器的過濾膜由醋酸纖維素製成。對於重組產生的免疫球蛋白的純化，通常採用不同的柱色譜步驟的組合。一般， 通常在蛋白A親和色譜之後再進行一個或兩個分離步驟。該最後的純化步驟稱為「最終精製(polishing st印)」，用於去除痕量雜質和汙染物如聚集的免疫球蛋白、殘留HCP(宿主細胞蛋白質)、DNA(宿主細胞核酸)、病毒或內毒素。對於該最終精製，通常使用流通模式(flow-through mode)下的陰離子交換材料。己經充分確立了不同的方法並廣泛地用於蛋白質回收和純化，例如用微生物蛋白質的親和色譜(例如，蛋白A或蛋白G親和色譜)、離子交換色譜(例如，陽離子交換 (羧甲基樹脂)、陰離子交換(氨基乙基樹脂)和混合模式的交換)、親硫吸附(例如，用 β巰基基乙醇和其他SH配體)、疏水相互作用或芳族吸附色譜(aromatic adsorption chromatography)(例如，用苯基瓊脂糖凝膠、親氮雜芳基樹脂(aza-arenophilic resin) 或間氨基苯硼酸)、金屬螯合親和色譜(例如，用Ni (II)-和Cu(II)-親和材料)、尺寸排阻色譜和電泳方法(例如凝膠電泳、毛細管電泳)(Vijayalakshmi，Μ. A.，Appl. Biochem. Biotech. 75(1998)93-102)。本文所述的第一個方面是製備免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括-提供蛋白質的濃度至少為100g/l的免疫球蛋白溶液，-經第一個和第二個過濾器單元的組合過濾所述免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器單元包含孔徑分別為3. 0 μ m和0. 8 μ m的預過濾器和主過濾器，且第二個過濾器單元包含孔徑分別為0. 45 μ m和0. 22 μ m的預過濾器和主過濾器，其是通過將所述溶液施加至所述過濾器組合併施加壓力而進行的，由此製備免疫球蛋白溶液。在一個實施方案中，蛋白質濃度為100g/l至300g/l。在另一個實施方案中，蛋白質濃度為100g/l至200g/l。在另一個實施方案中，蛋白質濃度為120g/l至165g/l。在另一個實施方案中，免疫球蛋白溶液的體積為3升至100升。該溶液體積相當於總質量300g 至50，000g的免疫球蛋白。在一個實施方案中，所述體積為3.1升至80升。蛋白質的濃度為120g/l至165g/l時，該溶液體積相當於總質量370g至13，200g的免疫球蛋白。在一個實施方案中，免疫球蛋白是抗-IL13受體α抗體。在另一個實施方案中，免疫球蛋白是抗-HER2抗體。本文的另一個方面報導了製備免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步驟-培養包含編碼免疫球蛋白的核苷酸的細胞，
-從細胞或培養基中回收免疫球蛋白，-使用一個或多個色譜法步驟純化所述免疫球蛋白，並提供純化的免疫球蛋白溶液，禾口-經如本文報導的過濾器的組合(即第一個和第二個過濾器單元的組合)過濾純化的免疫球蛋白溶液，其中第一個過濾器單元包含孔徑為3. Ομπι的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器，且第二個過濾器單元包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為 0. 22 μ m的主過濾器，其是通過將所述溶液施加至所述過濾器組合併施加壓力而進行的。在一個實施方案中，所述細胞是原核細胞或真核細胞。在細胞是原核細胞的一個實施方案中，所述細胞選自大腸桿菌(E.coli)細胞或芽孢桿菌屬(bacillus)細胞。在細胞是真核細胞的一個實施方案中，所述細胞選自哺乳動物的細胞，在一個特定的實施方案中所述細胞選自CHO細胞、BHK細胞、HEK細胞、per.C6 細胞和雜交瘤細胞。在一個實施方案中，所述細胞是選自CH0-K1和CHO DG44的哺乳動物的細胞。在一個實施方案中，培養是在20°C至40°C的溫度進行，且持續時間為4至觀天。在一個實施方案中，純化過程使用蛋白A親合色譜步驟和至少一個選自以下的步驟陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏水作用色譜。
已經發現包含孔徑分別為3. 0 μ m和0. 8 μ m的預過濾器和主過濾器的第一個過濾器單元和包含孔徑分別為0. 45 μ m和0. 22 μ m的預過濾器和主過濾器的第二個過濾器單元的組合對處理(過濾)高度濃縮的免疫球蛋白溶液有利，其使得可以過濾完整批次的濃縮的免疫球蛋白溶液而不需要替換過濾器。還已經發現在過濾器組合中，有利於的是各過濾器單元以及過濾器組合中所使用的兩個過濾器中的每一個具有大致相等的過濾器面積，即在最小過濾器面積的兩倍之內。還已經發現，視溶液中包括免疫球蛋白在內的各組分而不同的壓力和濃度範圍有助於有利的方法。如果所述溶液是濃度為160g/l或更高濃度(即165g/l或170g/l)的濃縮的免疫球蛋白溶液，沒有向其中加入過糖或表面活性劑，則在一個實施方案中在1.45巴或更高的施加的壓力下進行該方法的操作，在另一個實施方案中在1. 5巴或更高的施加的壓力下進行該方法的操作。如果溶液是濃度為125g/l或更高濃度(即130g/l或135g/l)的濃縮的免疫球蛋白溶液，向其中已至少加入了糖和表面活化劑，則在一個實施方案中在0. 75巴或更低的施加的壓力下進行該方法的操作，在另一個實施方案中在0.7巴或更低的施加的壓力下進行該方法的操作。本文的另一個方面報導了試劑盒，其包含第一個過濾器單元(包含孔徑分別為 3. 0 μ m和0. 8 μ m的預過濾器和主過濾器)和第二個過濾器單元(包含孔徑分別為0. 45 μ m 和0. 22 μ m的預過濾器和主過濾器)。本文的另一個方面報導了包含第一個過濾器單元(包含孔徑分別為3. 0 μ m和0. 8 μ m的預過濾器和主過濾器)和第二個過濾器單元(包含孔徑分別為0. 45 μ m和0. 22 μ m的預過濾器和主過濾器)的過濾器在過濾蛋白質的濃度至少為 100g/l的濃縮的免疫球蛋白溶液中的應用。提供了以下實施例和附圖
以助於理解本發明，本發明的真正範圍如所附權利要求所述。應理解能夠對所述方法進行修改而不脫離本發明的主旨。附1 使用抗體濃度為22aiig/ml的抗-HER2抗體溶液和2. 0巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖2 使用補充有約200mM海藻糖和約0. 05% (w/v)吐溫20的抗體濃度為125mg/ ml的抗-HER2抗體溶液和2. 0巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑 1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖3 使用抗體濃度為162mg/ml的抗-HER2抗體溶液和1. 8巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖4 使用補充有約200mM海藻糖和約0. 2% (w/v)泊洛沙姆的抗體濃度為141mg/ ml的抗-IL13Ra抗體溶液和1. 6巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑 1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖5 使用抗體濃度為162mg/ml的抗-HER2抗體溶液和1. 1巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。
圖6 使用補充有海藻糖和泊洛沙姆的抗體濃度為141mg/ml的抗_IL13Ra抗體溶液和0. 8巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖7 使用補充有海藻糖和吐溫20的抗體濃度為125mg/ml的抗-HER2抗體溶液和0. 8巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。圖8 使用補充有海藻糖和吐溫20的抗體濃度為125mg/ml的抗-HER2抗體溶液和0. 3巴的施加的壓力獲得的滲透流的時程(菱形=包含孔徑1. 2 μ m的過濾器的組合；正方形=包含孔徑3. 0 μ m的過濾器的組合)。實施例1材料和方法抗體示例性的抗體是針對IL13受體α 1蛋白質的免疫球蛋白(抗_IL13Ra 1抗體)， 例如在WO 2006/072564的SEQ ID NO 01至12中所報導(引入本文作為參考)。另一個示例性的免疫球蛋白是在WO 92/022653、WO 99/057134、W097/04801、US 5，677，171和US 5，821，337 (引入本文作為參考)中所報導的抗-HER2抗體。過濾器本文尤其使用 7 Sartobran P 0. 45 μ m+0. 2 μ m 濾筒禾口 Sartoclean CA3. 0 μ m+0. 8 μ m濾筒作為示範。這兩種濾筒可得自Sartorius AG, ( G6ttillgeil,德國)。分析方法尺寸排阻色譜樹脂TSK 3000 (Tosohaas)柱300x7. 8mm流速0.5ml/分鐘緩衝液 包含250mM氯化鉀的200mM磷酸鉀，調節至 pH 7. 0波長280nmDNA-闊值一系統參見例如 Merrick，H.，禾口 Hawlitschek，G.，Biotech Forum Europe 9(1992)398-403蛋白A ELISA 將微量滴定板的孔塗覆源自雛雞的多克隆抗-蛋白A-IgG。結合後，通過使用樣品緩衝液洗滌將沒有反應的抗體除去。為結合蛋白A，將確定體積的樣品加入所述孔中。樣品中存在的蛋白A經雛雞抗體被結合併留在板的孔中。孵育後除去樣品溶液，並將孔洗滌。然後為檢測，加入雛雞來源的多克隆抗-蛋白A-IgG-生物素綴合物和鏈黴菌抗生物素蛋白過氧化物酶綴合物。經過另一個洗滌步驟後，加入底物溶液加入，形成有色的反應產物。顏色的強度與樣品的蛋白A含量成比例。一段確定的時間後停止反應，並測定吸光度。宿主細胞蛋白質(HCP)ELISA 將微量滴定板的孔壁塗覆血清白蛋白和鏈黴抗生物素的混合物。將源自山羊的針對HCP的多克隆抗體結合於微量滴定板的孔壁。經過洗滌步驟後，使用不同濃度的HCP校準系列和樣品溶液對微量滴定板的不同的孔進行孵育。孵育後通過使用緩衝溶液洗滌除去未結合樣品物質。為進行檢測，使用抗體過氧化物酶綴合物對各孔進行孵育，以測定結合的宿主細胞蛋白質。使用ABTS孵育並在405nm檢測來檢測所固定的過氧化物酶活性。實施例2使用0. 45 μ m和0. 22 μ m孔徑的單個過濾器來過濾抗-HER2抗體在該實施例中顯示高度濃縮的免疫球蛋白溶液不能在不阻塞過濾器的孔的情況下使用孔徑0.45 μ m(預過濾器)和0.22μπι(主過濾器)的單個無菌過濾器進行過濾，其中負載為每平方米過濾器面積超過2，460g蛋白質。在該實施例中使用了孔徑為0. 45 μ m和0. 22 μ m和總過濾器面積為0. 2平方米的單個過濾器。表1 在單個過濾器過濾中使用的溶液。
權利要求
1.製備免疫球蛋白溶液的方法，所述方法包括a)提供濃度至少為100g/l的免疫球蛋白溶液，b)將所述免疫球蛋白溶液施加至第一個和第二個過濾器單元的組合，其中第一個過濾器單元包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器，且第二個過濾器包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器，壓力為0. 1至4. 0巴，並由此製備免疫球蛋白溶液。
2.製備免疫球蛋白的方法，所述方法包括以下步驟a)培養包含編碼免疫球蛋白的核苷酸的細胞，b)從細胞或培養基中回收免疫球蛋白，c)使用一個或多個色譜法步驟純化所述免疫球蛋白，並提供免疫球蛋白溶液，d)向該溶液中任選地加入糖、胺基酸和/或洗滌劑，e)使用選自滲濾或切向流過濾的方法任選地將所述免疫球蛋白溶液濃縮至100g/l或更高的濃度，和f)將之前步驟的免疫球蛋白溶液施加至第一個和第二個過濾器單元的組合，其中第一個過濾器單元包含孔徑為3. 0 μ m的預過濾器和孔徑為0. 8 μ m的主過濾器且第二個過濾器單元包含孔徑為0. 45 μ m的預過濾器和孔徑為0. 22 μ m的主過濾器，壓力為0. 1至4. 0巴， 並由此製備免疫球蛋白。
3.依據前述權利要求中任意一項的方法，其特徵為第一個和第二個過濾器單元中的過濾器具有大致相等的過濾器面積。
4.依據前述權利要求中任意一項的方法，其特徵為所述免疫球蛋白溶液的濃度為 100g/l 至 300g/l。
5.依據前述權利要求中任意一項的方法，其特徵為所述免疫球蛋白溶液的體積為3升至100升。
6.依據前述權利要求中任意一項的方法，其特徵為所述免疫球蛋白是抗-IL13受體α 抗體或抗-HER2抗體。
7.依據權利要求2至6中任意一項的方法，其特徵為所述純化過程使用蛋白A親合色譜步驟和至少一個選自以下的步驟陽離子交換色譜、陰離子交換色譜和疏水作用色譜。
8.依據前述權利要求中任意一項的方法，其特徵為所述免疫球蛋白溶液的濃度為 160g/l或更高，且所述施加至過濾器的組合是通過施加1. 45巴或更高的壓力進行的。
9.依據權利要求1至7中任意一項的方法，其特徵為所述免疫球蛋白溶液包含糖和表面活化劑，且所述免疫球蛋白溶液的濃度為125mg/ml或更高，且所述施加至過濾器的組合是通過施加0. 75巴或更低的壓力進行的。
10.試劑盒，其包含孔徑為3.0 μ m至0. 8 μ m的第一個過濾器和孔徑為0. 45 μ m至 0. 22 μ m的第二個過濾器。
全文摘要
本文報導了包括兩個直接相連的過濾步驟的組合的用於濃縮的多肽溶液的最終過濾的方法，所述方法使用孔徑為3.0μm和0.8μm的第一個過濾器和孔徑為0.45μm和0.22的第二個過濾器。
文檔編號C07K16/06GK102574913SQ201080044481
公開日2012年7月11日 申請日期2010年9月29日 優先權日2009年10月1日
發明者K·施萬德納, R·法爾肯施泰因 申請人:弗·哈夫曼-拉羅切有限公司