一種載VEGF抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑及其製備方法與流程
2023-05-17 20:00:56
本發明涉及一種醫藥製劑及其製備方法，特別是涉及一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑及其製備方法。
背景技術：
糖尿病視網膜病（diabeticretinopathy,dr）是糖尿病常見和嚴重的微血管併發症之一，是成人後天性致盲的主要原因。dr的特點是新生血管形成，視網膜毛細血管內皮細胞增生是新生血管形成的前提。目前治療此類疾病的方法主要有雷射光凝術、光動力療法、玻璃體切割術等，但這些治療方法都無法從根本上解決新生血管生成的問題。
近年來，隨著「血管內皮生長因子(vegf)是新生血管形成的重要啟動因子」這一理論出現並被驗證，採用抗vegf單抗藥物治療新生血管性眼病取得了令人驚喜的效果。然而該方法的主要缺陷是單抗藥物在眼內滯留時間不可控，其在玻璃體內的半衰期短（約3-5天），藥物代謝快，需每4-6周進行1次重複注射，增加了由眼內注射這一有創操作引起的併發症發生機率。
溫敏水凝膠，可以隨著溫度的變化，其體積或狀態發生劇烈的變化，比如體積發生十倍以上變化，或體系從液態轉變為固態、從固態轉變為液態等，從而在靶部位釋放出承載的藥物。
技術實現要素：
本發明的目的在於提供一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑及其製備方法，本發明使抗vegf單抗藥物緩慢釋放，且相對無創的方法，將抗vegf單抗藥物與凝膠均勻混合後製成一種在體外時呈液態，注射入眼球後迅速轉化為半固態的一種凝膠體系，使藥物通過注射的方式到達眼後端，達到局部緩慢釋放的作用。
本發明的目的是通過以下技術方案實現的：
一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑，所述植入劑用於眼部注射用溫敏水凝膠，溫敏性水凝膠的相變溫度為34℃~35℃；溫敏性水凝膠選自溫敏性nipaam水凝膠，載vegf抗體；溫敏性水凝膠溶液的質量濃度為10%~20%。
一種載vegf抗體的眼用溫敏水凝膠植入劑製備方法，所述眼用溫敏水凝膠植入劑包括vegf抗體的聚n-異丙基丙烯醯胺（nipaam）水凝膠緩釋系統的製備，包括以下過程：
1）聚n-異丙基丙烯醯胺水凝膠的合成
取單體nipaam和交聯劑n,n'-亞甲雙丙烯醯胺(質量比為99∶1)溶解在4ml去離子水中，混合均勻，通氮氣30min，加12mg引發劑過二硫酸銨，再加入20μl加聚劑四甲基乙二胺，25℃聚合6h，即得水凝膠；所得凝膠在室溫下用去離子水浸泡3d，每隔一段時間更換去離子水以除去未反應的單體等；將得到的凝膠切成均勻的圓片，在真空乾燥箱內60℃乾燥至恆重；
2）vegf單抗的聚n-異丙基丙烯醯胺水凝膠緩釋系統的製備
稱取200mgnipaam水凝膠粉末置於1.5ml平衡鹽溶液量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min後冷卻，成膠溶狀態時加入vegf單抗33mg，後放入冰水中冰浴5min，得到可注射vegf單抗水凝膠緩釋系統，即眼用溫敏水凝膠植入劑。
本發明的優點與效果是：
本發明製劑不僅可以準確地定位於病發部位，減少副作用，而且可以減少疾病給病人帶來的危害，水凝膠可以用於維持體內的血藥濃度，對症狀起到一個長時間治療的作用。
本發明溫敏性水凝膠的相變溫度為34℃~35℃。這種製劑不僅可以減少注射的次數，減少病人對藥物的依賴性，而且可減少血藥濃度的波動，使血藥濃度長時間穩定於治療濃度，使其發揮緩釋和局部起效的作用，從而提高藥物的療效，增加患者的順應性。
附圖說明
圖1為pnipaam凝膠的平衡溶脹比隨溫度的變化關係圖。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明進行詳細說明。
本發明包括，1、聚n-異丙基丙烯醯胺水凝膠的合成；2、vegf抗體的聚n-異丙基丙烯醯胺（nipaam）水凝膠緩釋系統的製備：稱取200mgnipaam水凝膠粉末置於1.5ml平衡鹽溶液（bss）量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min後冷卻，成膠溶狀態時加入vegf抗體25mg，後放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝膠狀的vegf抗體水凝膠緩釋系統。
一、vegf單抗的聚n-異丙基丙烯醯胺（nipaam）水凝膠緩釋系統的製備
1、聚n-異丙基丙烯醯胺水凝膠的合成
取單體nipaam和交聯劑bis(質量比為99∶1)溶解在4ml去離子水中，混合均勻，通n230min，加12mg引發劑aps，再加入20μl加聚劑temed，25℃聚合6h，即得水凝膠。所得凝膠在室溫下用去離子水浸泡3d，每隔一段的時間更換去離子水以除去未反應的單體等。將得到的凝膠切成均勻的圓片，在真空乾燥箱內60℃乾燥至恆重。
2、vegf單抗的聚n-異丙基丙烯醯胺（nipaam）水凝膠緩釋系統的製備
稱取200mgnipaam水凝膠粉末置於1.5ml平衡鹽溶液（bss）量筒中，快速攪拌2min，使粉末充分溶解成混合液，將混合液放入60°c水箱中水浴5min後冷卻，成膠溶狀態時加入vegf抗體33mg，後放入冰水中冰浴5min，得到可注射凝膠狀的vegf抗體的水凝膠緩釋系統。
二、平衡溶脹比的測定
準確稱取幹凝膠，置於某一特定溫度下的去離子水中使其充分溶脹，用濾紙吸去凝膠表面的水，稱重。
某一溫度下的平衡溶脹比(sr)為:sr=ws/wd。
式中:ws為凝膠中水的質量(溶脹凝膠質量－幹凝膠質量)，wd為幹凝膠質量。
平衡溶脹比隨溫度的變化關係是評價凝膠溫敏性能的重要參數。圖1為pnipaam水凝膠在去離子水中平衡溶脹比隨溫度變化的關係曲線。可見，凝膠的平衡溶脹比隨溫度的升高呈下降趨勢，表明凝膠具有明顯的熱縮溫敏特性。當溫度升高到33℃附近時，凝膠的平衡溶脹比急劇下降，表明凝膠發生了顯著的體積相變，此溫度被認為即是pnipaam凝膠的lcst。這是因為當溫度低於lcst時，凝膠中的醯胺鏈(—conh—)能與水分子形成分子間氫鍵，導致膠的鏈伸展開來而溶脹;當溫度高於lcst時，凝膠中醯胺鏈與水分子間的氫鍵及相鄰醯胺鏈之間的分子內氫鍵斷開，從而把水排出聚合物網絡。可見圖1pnipaam凝膠的平衡溶脹比隨溫度的變化關係圖。
三、vegf抗體活性的檢測
使用elisa試劑盒檢測抗體的活性。參照試劑盒中說明書的方法進行。按公式計算載入水凝膠緩釋系統後抗體活性的保存率：
抗體活性的保存率（%）=聚n-異丙基丙烯醯胺水凝膠中vegf抗體的od/同濃度vegf抗體水溶液的od×100。
結果如表1顯示，與同濃度單抗的活性相比，水凝膠的抗體活性保存率在85%以上。表明，水凝膠較好地保留了vegf抗體的活性。
表1：vegf抗體載入水凝膠植入劑後的活性保存率
。