一種藥物組合物及應用的製作方法
2023-05-03 22:42:06 2
專利名稱：一種藥物組合物及應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及一種以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物及其在製備治療腫瘤的藥物中的應用。
背景技術：
黃芪(Astragalus membranaceus)為豆科植物膜莢黃芪的乾燥根。黃芪多糖(Astragaluspolysaccharide，APs)是黃芪的主要活性成分之一。黃芪多糖具有清除自由基，提高機體免疫力、改善血流變等作用。
人參是主要成份為人參皂苷(ginsenosides)，研究表明人參皂苷能明顯促進肝細胞核RNA合成，提高機體免疫功能，抑制腫瘤生長、抗缺氧等作用。
本發明人通過大量的實驗研究，發明了一種以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的組合物，並提出了其在製備治療和輔助治療腫瘤的藥物中的應用；該藥物組合物在用於製備治療和輔助治療腫瘤時具有協同作用。
發明內容
本發明提供了一種人參皂苷和黃芪多糖組成的藥物組合物，其中人參皂苷和黃芪多糖的比例為1∶9～9∶1，優選為1∶4～4∶1；組合物中人參皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量計)和黃芪多糖的含量之和大於等於50％而小於100％，優選為大於等於80％小於100％。
本發明提供了上述藥物組合物在製備治療腫瘤的藥物中的應用；具體地提供了其在抑制腫瘤生長的藥物中的應用；在增強抗癌藥物療效的藥物中的應用；在降低抗癌藥物毒性的藥物中的應用；在預防或治療放、化療引起的白細胞降低的藥物中的應用；在增強癌症患者機體免疫力的藥物中的應用。
本發明提供的藥物組合物可以根據製劑需要，加入相應輔料，以注射劑、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、懸浮液、溶液、糖漿、口嚼劑形式存在，優選為凍乾粉針。本發明提供的各種劑型均可以採用藥學常規方法製備而成。
本發明提供的藥物組合物可以按下述幾種方法製備1、從黃芪、人參中分別提取黃芪多糖、人參皂苷；人參皂苷按文獻吳正中，周國明，謝玉瓊.正交試驗法提取人參皂苷工藝的研究.中國藥房，2002.01所述方法分離提取，得率為5.3％。黃芪多糖按文獻李紅民，黃仁泉，王亞洲.提高黃芪多糖提取收率的工藝研究.西北大學學報，2000.06所述方法分離提取，得率為11.7％；而後按比例組成組合物，該組合物中黃芪多糖、人參皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量計)的實際含量之和不低於混合物總量的50％。
2、從市場購買人參皂苷和黃芪多糖，混合得到組合物，該組合物中黃芪多糖和人參皂苷(以Re、Rg1、Rb1含量計)的實際含量之和不低於混合物總含量的50％。
本發明人進行了下列試驗來證實以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物在製備治療和輔助治療腫瘤的藥物中的應用，組合物中人參皂苷和黃芪多糖在治療或輔助治療腫瘤時具有協同作用。
具體實施例方式製備例1人參皂苷和黃芪多糖的製備人參皂苷按文獻吳正中，周國明，謝玉瓊.正交試驗法提取人參皂苷工藝的研究.中國藥房，2002.01所述方法分離提取，得率為5.3％，純度為81％。黃芪多糖按文獻李紅民，黃仁泉，王亞洲.提高黃芪多糖提取收率的工藝研究.西北大學學報，2000.06所述方法分離提取，得率為11.7％，純度為85％。
製備例2製備以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的凍乾粉針在潔淨條件下，取人參皂苷40g、黃芪多糖80g，溶於1000ml注射用水，加入100g低分子右旋糖苷，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，按凍乾粉針工藝凍幹，製成1000支含人參皂苷40mg、黃芪多糖80mg的凍乾粉針。
製備實施例3製備不同比例的凍乾粉針按製備實施例2所述方法，製備得到人參皂苷與黃芪多糖以任一比例組合的凍乾粉針。
試驗例1不同配比藥物組合物的抑制腫瘤生長作用1材料藥物組合物按製備例3方法製備環磷醯胺，上海華聯製藥有限公司生產，批號000205；DMEM培養基，GIBCO公司；胰蛋白酶、MTT、ConA、IL-2，SIGMA公司生產；大鼠抗小鼠CD3、CD4、CD8單抗，FITC兔抗大鼠單抗，購自武漢生物製品研究所。
昆明種小鼠，5~8周齡，體重18~22g，山東省天然藥物工程技術研究中心實驗動物中心提供。雌雄兼用，每批實驗採用同一性別。C57BL/6純系小鼠，5~8周齡，體重18~22g，中國醫學科學院實驗動物繁育場提供。
細胞株小鼠肝癌H22、小鼠宮頸癌U14、小鼠黑色素瘤B16、小鼠Lewis肺癌，購自中國醫學科學院北京藥物研究所。
2方法H22肝癌和U14宮頸癌接種取於昆明鼠腹腔內接種傳代七天的上述荷瘤小鼠，消毒腹部皮膚後，抽取腹水，加入三倍體積的注射用生理鹽水稀釋，消毒昆明鼠腋下皮膚，每隻小鼠於腋下注射瘤細胞懸液0.2ml。
B16黑色素瘤和Lewis肺癌接種取已接種10天的Lewis肺癌、生長狀態良好的小鼠，脫頸處死，用酒精消毒皮膚後，剝取腫瘤組織，加入五倍重量的生理鹽水後用組織勻漿器研磨成勻漿，100目滅菌不鏽鋼網過濾。消毒每隻小鼠左側腋皮膚，接種瘤液0.2ml。
接瘤後第二天，動物隨機分為如下9組並靜脈注射給藥空白對照組給予等容量生理鹽水；陽性藥對照給予環磷醯胺20mg/kg；組合物A組給予人參皂苷10mg/kg+黃芪多糖0mg/kg；組合物B組給予人參皂苷9mg/kg+黃芪多糖1mg/kg；組合物C組給予人參皂苷8mg/kg+黃芪多糖2mg/kg；組合物D組給予人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；組合物E組給予人參皂苷2mg/kg+黃芪多糖8mg/kg；組合物F組給予人參皂苷1mg/kg+黃芪多糖9mg/kg；組合物G組給予人參皂苷0mg/kg+黃芪多糖10mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，剝取瘤組織稱重。計算抑瘤率。
數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表1所示以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的不同配比的藥物組合物可明顯抑制腫瘤生長(P＜0.05或P＜0.01)。
劑量相等的條件下(10mg/kg)，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物抑瘤作用優於單用同劑量人參皂苷或黃芪多糖(P＜0.05)，提示組合物中人參皂苷和黃芪多糖具有協同作用。
表1 不同配比藥物組合物對腫瘤生長的抑制作用(x±SD，n＝15)
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與組合物A組比較#P＜0.05；與組合物G組比較△p＜0.05試驗例2不同配比藥物組合物的增強抗癌藥物療效作用1材料 同試驗例12方法用小鼠H22肝癌和Lewis肺癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下9組並靜脈注射給藥空白對照組給予等量生理鹽水；環磷醯胺組給予環磷醯胺5mg/kg；環磷醯胺+組合物A組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷10mg/kg+黃芪多糖0mg/kg；環磷醯胺+組合物B組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷9mg/kg+黃芪多糖1mg/kg；環磷醯胺+組合物C組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷8mg/kg+黃芪多糖2mg/kg；環磷醯胺+組合物D組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；環磷醯胺+組合物E組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷2mg/kg+黃芪多糖8mg/kg；環磷醯胺+組合物F組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷1mg/kg+黃芪多糖9mg/kg；環磷醯胺+組合物G組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷0mg/kg+黃芪多糖10mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表2所示環磷醯胺5mg/kg為治療小鼠H22肝癌及Lewis肺癌的無效劑量，僅有抑制腫瘤生長的趨勢；以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物與其聯用可明顯提高其抑瘤率，表明以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物可以增強抗癌藥物療效。
劑量相等的條件下(10mg/kg)，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物抑瘤作用優於單用同劑量人參皂苷或黃芪多糖(P＜0.05)，提示組合物中人參皂苷和黃芪多糖具有協同作用。
表2 環磷醯胺與組合物聯合應用對小鼠H22肝癌、Lewis肺癌生長的抑制作用
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與環磷醯胺組比較△P＜0.05；與組合物A組比較AP＜0.05；與組合物G組比較GP＜0.05試驗例3不同配比藥物組合物的降低抗癌藥物毒性作用1材料 同試驗例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下9組並靜脈注射給藥空白對照組給予等量生理鹽水；環磷醯胺組給予環磷醯胺10mg/kg；環磷醯胺+組合物A組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷10mg/kg+黃芪多糖0mg/kg；環磷醯胺+組合物B組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷9mg/kg+黃芪多糖1mg/kg；環磷醯胺+組合物C組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷8mg/kg+黃芪多糖2mg/kg；環磷醯胺+組合物D組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；環磷醯胺+組合物E組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷2mg/kg+黃芪多糖8mg/kg；環磷醯胺+組合物F組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷1mg/kg+黃芪多糖9mg/kg；環磷醯胺+組合物G組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷0mg/kg+黃芪多糖10mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，取胸腺稱重計算胸腺指數，用血象分析儀計數外周血白細胞。
數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表3所示環磷醯胺10mg/kg在治療小鼠H22肝癌及Lewis肺癌時表現出明顯的毒性，降低胸腺指數、外周血白細胞數；以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物與其聯用可明顯降低環磷醯胺導致的毒副作用，升高胸腺指數和外周血白細胞數。
劑量相等的條件下(10mg/kg)，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物減毒作用優於單用同劑量人參皂苷或黃芪多糖(P＜0.05)，提示組合物中人參皂苷和黃芪多糖具有協同作用。
表3 組合物在環磷醯胺治療小鼠H22肝癌中的減毒作用
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與環磷醯胺組比較△P＜0.05；與組合物A組比較AP＜0.05；與組合物G組比較GP＜0.05
試驗例4不同配比藥物組合物的在60Co治療小鼠Lewis肺癌中的減毒作用1材料同試驗例1。
2方法動物置於塑料盒內進行全身照射劑量率0.287Gy/min，靶皮距50cm，總劑量4Gy，溶劑對照組1給予假照射。用小鼠Lewis肺癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下9組並靜脈注射給藥空白對照組給予等量生理鹽水；60Co組；60Co+組合物A組60Co+人參皂苷10mg/kg+黃芪多糖0mg/kg；60Co+組合物B組給予60Co+人參皂苷9mg/kg+黃芪多糖1mg/kg；60Co+組合物C組給予60Co+人參皂苷8mg/kg+黃芪多糖2mg/kg；60Co+組合物D組給予60Co+人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；60Co+組合物E組給予60Co+人參皂苷2mg/kg+黃芪多糖8mg/kg；60Co+組合物F組給予60Co+人參皂苷1mg/kg+黃芪多糖9mg/kg；60Co+組合物G組給予60Co+人參皂苷0mg/kg+黃芪多糖10mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，取胸腺稱重計算胸腺指數，用血象分析儀計數外周血白細胞。
數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表4所示60Co照射在治療小鼠Lewis肺癌時表現出明顯的毒性，降低胸腺指數、外周血白細胞數；以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物與其聯用可明顯降低60Co照射導致的毒副作用，升高胸腺指數和外周血白細胞數。
劑量相等的條件下(10mg/kg)，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物減毒作用優於單用同劑量人參皂苷或黃芪多糖(P＜0.05)，提示組合物中人參皂苷和黃芪多糖具有協同作用。表4 組合物在60Co治療小鼠H22肝癌中的減毒作用
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與60Co組比較△P＜0.05；與組合物A組比較AP＜0.05；與組合物G組比較GP＜0.05
試驗例5不同配比藥物組合物對荷瘤小鼠免疫功能的影響1材料同試驗例1。
2方法按前述方法用小鼠Lewis肺癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下9組並靜脈注射給藥空白對照組給予等容量生理鹽水；組合物A組給予人參皂苷10mg/kg+黃芪多糖0mg/kg；組合物B組給予人參皂苷9mg/kg+黃芪多糖1mg/kg；組合物C組給予人參皂苷8mg/kg+黃芪多糖2mg/kg；組合物D組給予人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；組合物E組給予人參皂苷2mg/kg+黃芪多糖8mg/kg；組合物F組給予人參皂苷1mg/kg+黃芪多糖9mg/kg；組合物G組給予人參皂苷0mg/kg+黃芪多糖10mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後，按文獻楊鐵虹，盧保華，賈敏，梅其炳.當歸多糖對小鼠免疫功能的影響.中國藥理學通報.2003.04所述方法測定脾細胞刺激指數(SI)、NK細胞活性、IL-2含量。
3結果結果如表5所示，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的組合物可以提高荷瘤小鼠脾細胞刺激指數、NK細胞活性、IL-2含量。提示，本發明組合物具有明顯增強免疫作用，有助於提高荷瘤小鼠自身的免疫能力。
劑量相等的條件下(10mg/kg)，以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物增強免疫作用優於單用同劑量人參皂苷或黃芪多糖(P＜0.05)，提示組合物中人參皂苷和黃芪多糖具有協同作用。
表5 不同配比藥物組合物對荷瘤小鼠免疫功能的影響(x±SD，n＝15)
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與組合物A組比較AP＜0.05；與組合物G組比較GP＜0.05
試驗例6不同劑量藥物組合物的增強抗癌藥物療效作用1材料 同試驗例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下5組並靜脈注射給藥空白對照組給予等量生理鹽水；環磷醯胺組給予環磷醯胺5mg/kg；環磷醯胺+組合物A組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷2.5mg/kg+黃芪多糖2.5mg/kg；環磷醯胺+組合物B組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；環磷醯胺+組合物C組給予環磷醯胺5mg/kg+人參皂苷50mg/kg+黃芪多糖50mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表6所示環磷醯胺5mg/kg為治療小鼠H22肝癌的無效劑量，僅有抑制腫瘤生長的趨勢；不同劑量的藥物組合物(5mg/kg～100mg/kg)與其聯用可明顯提高其抑瘤率，表明以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物可以增強抗癌藥物療效。
表6 環磷醯胺與組合物聯合應用對小鼠H22肝癌生長的抑制作用
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與環磷醯胺組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。
試驗例7不同劑量藥物組合物的降低抗癌藥物毒性作用1材料 同試驗例12方法用小鼠H22肝癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下5組並靜脈注射給藥空白對照組給予等量生理鹽水；環磷醯胺組給予環磷醯胺10mg/kg；環磷醯胺+組合物A組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷2.5mg/kg+黃芪多糖2.5mg/kg；環磷醯胺+組合物B組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；環磷醯胺+組合物C組給予環磷醯胺10mg/kg+人參皂苷50mg/kg+黃芪多糖50mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後24h處死小鼠，剝取瘤組織稱重，計算抑瘤率。數據用x±SD表示，以組間T-test檢驗進行統計學處理。
3結果結果如表7所示環磷醯胺10mg/kg在治療小鼠H22肝癌時表現出明顯的毒性，降低胸腺指數、外周血白細胞數；不同劑量的藥物組合物(5mg/kg～100mg/kg)與其聯用可明顯降低環磷醯胺導致的毒副作用，升高胸腺指數和WBC。
表7 組合物在環磷醯胺治療小鼠H22肝癌中的減毒作用
與空白對照組比較*P＜0.05，**P＜0.01。與環磷醯胺組比較△P＜0.05，△△P＜0.01。
試驗例8不同劑量藥物組合物對荷瘤小鼠免疫功能的影響1材料同試驗例1。
2方法按前述方法用小鼠Lewis肺癌建立小鼠體內移植性腫瘤模型，接瘤後第二天，動物隨機分為如下4組並靜脈注射給藥空白對照組給予等容量生理鹽水；組合物A組給予人參皂苷2.5mg/kg+黃芪多糖2.5mg/kg；組合物B組給予人參皂苷5mg/kg+黃芪多糖5mg/kg；組合物C組給予人參皂苷50mg/kg+黃芪多糖50mg/kg；每組15隻，連續給藥10天，末次給藥後，按前述方法測定脾細胞刺激指數(SI)、NK細胞活性、IL-2含量。
3結果結果如表8所示，不同劑量的藥物組合物(5mg/kg～100mg/kg)可以提高荷瘤小鼠脾細胞刺激指數、NK細胞活性、IL-2含量。提示，本發明組合物具有明顯增強免疫作用，有助於提高荷瘤小鼠自身的免疫能力。
表8 不同配比藥物組合物對荷瘤小鼠免疫功能的影響(x±SD，n＝15)
與空白對照組比較*P＜0.05，**uP＜0.01。
權利要求
1.一種藥物組合物，由人參皂苷和黃芪多糖組成，其重量比為1∶9～9∶1；其中100％＞人參皂苷和黃芪多糖之和≥50％。
2.根據權利要求1所述的藥物組合物，其優選重量比為1∶4～4∶1。
3.權利要求1或2所述的藥物組合物在製備治療腫瘤的藥物中的應用。
4.權利要求1或2所述的藥物組合物在抑制腫瘤生長的藥物中的應用。
5.權利要求1或2所述的藥物組合物在增強抗癌藥物療效的藥物中的應用。
6.權利要求1或2所述的藥物組合物在降低抗癌藥物毒性的藥物中的應用。
7.權利要求1或2所述的藥物組合物在預防或治療放、化療引起的白細胞降低的藥物中的應用。
8.權利要求1或2所述的藥物組合物在增強癌症患者機體免疫力的藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種以人參皂苷和黃芪多糖為主要活性成分的藥物組合物，及其在製備治療或預防腫瘤的藥物中的應用。
文檔編號A61P35/00GK1868485SQ200510043609
公開日2006年11月29日 申請日期2005年5月24日 優先權日2005年5月24日
發明者田京偉, 張太平, 王超雲, 蔣王林 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司