防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌及生物農藥的製備方法
2023-04-23 04:32:21 2
專利名稱：防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌及生物農藥的製備方法
技術領域：
本發明屬於生物農藥技術領域，具體涉及防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌及其生物農藥的製備方法。
背景技術：
化學農藥的長期使用已經造成了嚴重的後果農產品和土壤中的農藥殘留量越來越高，使農產品質量嚴重下降；有益生物的密度下降，自然群落遭到了嚴重破壞；病原菌和害蟲的抗藥性普遍提高，導致化學農藥的超量使用，提高了農產品的生產成本，並加劇了對環境的破壞，形成了惡性循環。隨著人們環保意識的增強，生物農藥因其不汙染環境、對人和動植物安全、選擇性強、病原菌和害蟲難以產生耐藥性等諸多優點受到各國的高度重視， 是今後農藥發展的主要方向。目前，在我國的農藥施用中，生物農藥僅佔1%的比例，且價格低、品種少。植物病害是威脅農作物生產的自然災害之一，生產上超過80%的植物病害是由真菌侵染引起的，這種病害嚴重發生時，可造成農作物大幅度減產和品質的嚴重下降，甚至引起人畜中毒，嚴重影響國民經濟和人民的生活。因此，在考慮環境和食品安全的背景下尋求新一代抗真菌植物病害的生物農藥顯得十分必要和緊迫。枯萎病是瓜類、棉花上一種常見的重要病害。枯萎病的病原菌為半知菌尖孢鐮刀菌(Fusarium oxysporum. f. sp)，該病菌寄主範圍極廣，一般導致作物根部變褐腐爛，莖基部縊縮縱裂，可引西瓜、番茄、棉花等多種作物發生毀滅性的病害，給農作物生產造成重大損失。該病菌主要以菌絲、厚垣孢子或菌核存在於土壤中，可存活6 10年，並可通過種子、 肥料、土壤、澆水傳播，難治難防，被稱為「瓜類癌症」、「棉花癌症」等。在農作物枯萎病的防治方面，由於病原菌的頑固性、多樣性和變異性，目前尚缺乏有效的化學藥劑和有效的抗病品種，成為瓜類等作物生產上急需解決的關鍵問題。各國學者希望在「以菌治菌」的生物防治上尋找突破口，利用生物農藥防治枯萎病，並為此進行著積極的實驗研究。
發明內容
本發明的目的是提供一種能夠在植物根際定值，並且對多種病原菌具有拮抗作用的生防菌短短芽孢桿菌。本發明的另一目的是提供一種防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌生物農藥的製備方法。防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌菌株的16S rDNA基因序列如下 CTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGCAACCTGCCTCTCAGACTGGGATAACATAGGGAAACTTATGC
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權利要求
1.防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌，其特徵在於所述短短芽孢桿菌菌株的16S rDNA基因序列如下CTAGCGGCGGACGGGTGAGTAACACGTAGGCAACCTGCCTCTCAGACTGGGATAACATAGGGAAACTTATGC TAATACCGGATAGGTTTTTGGATCGCATGATCCGAAAAGAAAAGATGGCTTCGGCTATCACTGGGAGATGGGCCTGC GGCGCATTAGCTAGTTGGTGGGGTAACGGCCTACCAAGGCGACGATGCGTAGCCGACCTGAGAGGGTGACCGGCCAC ACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTAGGGAATTTTCCACAATGGACGAAAGTCTGATG GAGCAACGCCGCGTGAACGATGAAGGTCTTCGGATTGTAAAGTTCTGTTGTTAGGGACGAATAAGTACCGTTCGAAT AGGGCGGTACCTTGACGGTACCTGACGAGAAAGCCACGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGTGG CAAGCGTTGTCCGGATTTATTGGGCGTAAAGCGCGCGCAGGCGGCTATGTAAGTCTGGTGTTAAAGCCCGGGGCTCA ACTCCGGTTCGCATCGGAAACTGTGTAGCTTGAGTGCAGAAGAGGAAAGCGGTATTCCACGTGTAGCGGTGAAATGC GTAGAGATGTGGAGGAACACCAGTGGCGAAGGCGGCTTTCTGGTCTGTAACTGACGCTGAGGCGCGAAAGCGTGGGG AGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGATGAGTGCTAGGTGTTGGGGGTTTCAATACCCTCA GTGCCGCAGCTAACGCAATAAGCACTCCGCCTGGGGAGTACGCTCGCAAGAGTGAAACTCAAAGGAATTGACGGGGG CCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGAAGCAACGCGAAGAACCTTACCAGGTCTTGACATCCCGCTGAC CGCTCTGGAGACAGAGCTTCCCTTCGGGGCAGCGGTGACAGGTGGTGCATGGTTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGAT GTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTATCTTTAGTTGCCAGCATTCAGTTGGGCACTCTAGAGAGACTGC CGTCGACAAGACGGAGGAAGGCGGGGATGACGTCAAATCATCATGCCCCTTATGACCTGGGCTACACACGTGCTACA ATGGTTGGTACAACGGGATGCTACCTCGCGAGAGGACGCCAATCTCTTAAAACCAATCTCAGTTCGGATTGTAGGCT GCAACTCGCCTACATGAAGTCGGAATCGCTAGTAATCGCGGATCAGCATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTG TACACACCGCCCGTCACACCACGGGAGTTTGCAACACCCGAAGTCGGTGAGGTAACCGCAAGG,測序結果為1367bp ；在GeneBank的登錄號為HQ58M18。
2.防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌生物農藥的製備方法，其特徵在於包括以下操作步驟(1)將短短芽孢桿菌接種於每瓶裝50ml牛肉膏蛋白腖(NA)培養液的250ml三角瓶中，29°C振蕩培養Mh，搖床轉速170. OOr/min，製得種子液；牛肉膏蛋白腖(NA)培養基配方為蛋白腖1. 0%、氯化鈉0. 5%、牛肉膏0. 5%，初始pH值為 7. 2-7. 4，121°C 滅菌 20min ；(2)在5升自動發酵罐中，發酵培養基裝罐75%，按10%的接種量接種種子液，通氣3NL/ min,於下培養36h，放罐，發酵液經鏡檢計數後，調節濃度為IO8-IOiciceIVml,無菌分裝，得到的短短芽孢桿菌發酵液即為含短短芽孢桿菌的生物農藥；所述發酵培養基配方為葡萄糖1. 00%、蛋白腖2. 23%、磷酸氫二鉀0. 01%、七水硫酸鎂 0. 05%，初始pH值為7. 50，實罐滅菌。
全文摘要
本發明涉及防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌及其用途。短短芽孢桿菌的基因測序結果為1367bp，在基因庫(GeneBank)上的登錄號HQ585418；保藏於中國微生物菌種保藏管理委員會專利微生物中心，保藏編號為CGMCCNO.4361。防治植物真菌病害的短短芽孢桿菌生物農藥的製備方法包括以下操作步驟一是種子液的製備，二是發酵製備短短芽孢桿菌生物農藥。田間實驗證明短短芽孢桿菌能明顯降低瓜枯萎病的發病率，因此，本發明的菌株可以有效地應用於瓜枯萎病的防治，並可以用於製備一種安全、高效的生物農藥。
文檔編號C12N15/31GK102154155SQ201010607988
公開日2011年8月17日 申請日期2010年12月28日 優先權日2010年12月28日
發明者張洪斌, 胡雪芹, 芮廣虎, 蘇曉飛 申請人:合肥工業大學