一種利用生物疫苗浸種技術防治水稻條紋葉枯病的方法
2023-04-23 09:07:46 3
專利名稱：：一種利用生物疫苗浸種技術防治水稻條紋葉枯病的方法
技術領域：
：本發明涉及水稻病害防治領域，具體涉及水稻條紋葉枯病的防治方法。
背景技術：
：水稻條紋葉枯病是由灰飛蝨等害蟲傳播條紋病毒(RSV)引起的一種病毒病。自上世紀末，該病毒病在江蘇以及周邊地區重新抬頭，最近幾年已成為江蘇地區水稻生產上最重要的病害，給江蘇省的水稻生產和農民的經濟利益造成了災難性影響。這幾年因灰飛蝨引起的條紋葉枯病一項，就給江蘇地區的經濟每年造成近100億元的損失。由於水稻品種和栽培制度的多樣化、以及條紋病毒毒源的不斷累積，水稻條紋葉枯病的發生態勢還將會持續嚴重。在生產上，為了防治這種病毒病，在沒有好的病毒鈍化劑的背景下，不得不採取"治蟲防病、切斷毒源"的策略。為此，在大麥田、小麥田、秧池田以及本田，不得不大量和重複使用吡蟲啉、銳勁特等化學農藥防治灰飛蝨。雖然在水稻一個生育期要用多次乃至10多次殺蟲劑，仍然不能解決病毒病流行的問題。因為只要殘存10%或20%的灰飛蝨帶毒個體，它們仍能在短時間內傳毒並導致稻株嚴重發病。不但如此，化學農藥的大量使用還造成了灰飛蝨抗藥性的上升、稻田生態系統的嚴重破壞和農民們生產成本的不斷加大。由於對條紋葉枯病付出了沉重的代價和成本，農民們現在對這個病害已是深惡痛絕，防治效果不好後又怨聲載道。因此，研製和開發防病與控病效果極佳的新型生物農藥，對於控制條紋葉枯病的發生流行有重要的現實意義和深遠的歷史意義。國內外研究表明，引起水稻條紋葉枯病的條紋病毒(Ricestripevirus，RSV)是纖細病毒屬(Tenuivirus)的代表成員。日本對其分離物進行了全序列測定，基因組全長為17145bp，由4種單鏈RNA組成，除RNA1採用負鏈編碼外，RNA2RNA4皆採用雙義(Am-bisense)的編碼策略。至目前止，條紋病毒的基因組結構和序列已很明確，相關功能基因的功能也基本明確。在此基礎上，梁國華等已研製並生產出防治條紋病毒的幹擾病毒基因表達載體(中國專利申請200610038267.5)，作為生物疫苗。然而，由基因幹擾技術(RNAi)研製的生物疫苗目前只能以注射、飼餵、基因槍、轉基因等方式進入目標生物體內，這對於防治一些動物的病毒病會有較好效果，而對於生產上防治水稻條紋葉枯病帶來了不可操作性。
發明內容為了解決生物疫苗在生產上大規模運用的技術難題，本發明提供了一種新的方法，即通過"生物疫苗"浸種技術防治水稻條紋葉枯病。本發明所採用的技術方案是一種利用生物疫苗浸種防治水稻條紋葉枯病的方法，是在水稻浸種時以"生物疫苗"加滲透性強的製劑代替水，以浸種的方式讓"生物疫苗"自動滲透入稻穀，並在稻苗體內表達。水稻播種前需要浸種催芽，本發明利用這一基本的農事操作，在水稻浸種時將生物疫苗加一些滲透性強的製劑以浸種的方式，讓其自動滲透入稻穀，並在稻苗體內表達，從而有效地阻斷了水稻植株體內條紋病毒的增殖。本發明中所說的生物疫苗是專門用於防治條紋病毒RSV的疫苗。在上述方法中所說的滲透劑，一般是常規的。但我們運用系統學方法，研究了各種滲透劑的滲透作用，從中篩選出滲透性好、對水稻無副作用且價格低廉的幾種滲透劑，如月桂氮酮、高滲、有機矽等；滲透劑的添加量是在100體積單位生物疫苗中添加0.01到1.0體積單位的滲透劑。本發明具有以下有益效果A.所選用的幾種滲透劑滲透性強，對水稻生長無影響。與不添加滲透劑的"生物疫苗"相比，添加了滲透劑的"生物疫苗"在稻株體內能檢測到疫苗的存在;B.生物疫苗添加一定濃度的滲透劑後，對水稻發芽、出苗無影響。與對照相比，只要滲透劑添加濃度控制得當，不會對水稻種子的發芽與出苗產生不良影響；C.控制條紋病毒的增殖效果顯著。室內盆栽試驗和大田試驗以及通過系統檢測，表明以"生物疫苗"浸種技術防治水稻條紋葉枯病效果顯著。首先，通過系統檢測，生物疫苗在稻株體內能維持40天以上；其次，將帶毒率達20%的灰飛蝨接入經生物疫苗浸種處理過的稻株上，或者以田間大面積發生的灰飛蝨遷入經生物疫苗浸種處理過的大田稻苗上，均能檢測到條紋病毒的存在;第三，在出苗後15天左右，開始系統調査稻株發病情況，至出苗後83天結束。結果表明，經生物疫苗浸種處理過的水稻，條紋葉枯病病穴(枝)率比對照減少65%以上，比不添加滲透劑的減少40%以上，顯示出防治條紋葉枯病的較好效果。具體實施例方式本發明中所使用的術語，除非有另外說明，一般具有本領域普通技術人員通常理解的含義。下面結合具體的實施例，並參照數據進一步詳細地描述本發明。在以下的實施例中，未詳細描述的各種過程和方法是本領域中公知的常規方法。所用試劑的來源、商品名以及有必要列出其組成成分者，均在首次出現時標明，其後所用相同試劑如無特歹朱說明，均以首次標明的內容相同。下述實施例中所說的生物疫苗是己公開的水稻條紋葉枯病幹擾病毒基因表達載體，可參照中國專利申請200610038267.5製備。在下述實施例中，A指滲透劑月桂氮酮，B指滲透劑高滲，C指滲透劑有機矽。實施例1-在水稻浸種時以生物疫苗添加不同劑量的滲透劑代替水，研究幾種滲透劑不同濃度對水稻發芽與出苗的影響(江蘇揚州)，結果如表K2所示。表l200粒稻穀發芽率與出苗率試驗(稻種先經漂洗滌除癟粒，3.10-18)處理tableseeoriginaldocumentpage6表2高濃度滲透劑處理結果(100粒，3.10-18)(兩個對照200粒，其它均100粒)tableseeoriginaldocumentpage7試驗結果表明，在生物疫苗中添加滲透劑濃度在0.01%-0.1%(體積)之間，對水稻的發芽與出苗影響不大，但達到0.3%及以上時，對水稻的發芽與出苗就有一定影響。實施例2:水稻浸種出苗後"生物疫苗"在稻株體內殘留測定(江蘇揚州)桶栽以生物疫苗浸種處理的稻苗，於出苗後15天、35天以PCR技術檢測稻株體內是否仍帶有"生物疫苗"。結果表明15天後對照疫苗(0/9)、對照水(0/9)、Cl(6/9)、C0.5(0/9)、C0.1(0/9)、Bl(1/9)、B0.5(0/9)、B0.1(6/9)、Al(7/9)、A0.5(3/9)、A0.1(1/9)(注1/9示測了9株稻苗，有l株中帶疫苗)35天後:Cl(7/10)、C0.5(3/10)、C0.1(7/10)、Bl(2/10)、B0.5(5/10)、B0.1(7/10)、Al(6/10)、A0.5(4/10)、A0.1(7/10)(注1/10表示測了IO株稻苗，有l株中帶疫苗，Cl表示添加了千分之l(體積)的c滲透劑，餘類推)實施伊j3:生物疫苗浸種技術防治條紋葉枯病的效果測定(江蘇揚州)以水泥池為試驗場所，播種不同處理的稻穀，出苗後系統檢查稻株發病情況。以下是苗後83天的檢査結果tableseeoriginaldocumentpage8上表說明，以清水為對照，經過生物疫苗浸種處理後對條紋葉枯病的校正防效在55.6%-100.0%之間，顯示出浸種處理的較好防效。(注處理A0.5表示在"生物疫苗"中添加千分之0.5(體積)的A滲透劑，餘類推；"疫苗"處理是指沒有添加任何滲透劑，僅是"生物疫苗")權利要求1、一種利用生物疫苗浸種防治水稻條紋葉枯病的方法，其特徵在於是在水稻浸種時以生物疫苗加滲透劑代替水，以浸種的方式讓生物疫苗滲透入稻穀，並在稻苗體內表達。2、根據權利要求1所說的防治水稻條紋葉枯病的方法，其特徵在於，其中所說的滲透劑是月桂氮酮、高滲或有機矽。3、根據權利要求2所說的防治水稻條紋葉枯病的方法，其特徵在於，其中所說的滲透劑的添加量為在100體積單位生物疫苗中添加0.01到1.0體積單位的滲透劑。全文摘要本發明涉及水稻病害防治領域，具體涉及水稻條紋葉枯病的防治方法。所說的防治方法是在水稻浸種時以生物疫苗加滲透劑代替水，以浸種的方式讓生物疫苗滲透入稻穀，並在稻苗體內表達。經生物疫苗浸種處理過的水稻，條紋葉枯病病穴(枝)率比對照減少65％以上，比不添加滲透劑的減少40％以上，顯示出防治條紋葉枯病的較好效果。文檔編號A01C1/08GK101317506SQ200810022400公開日2008年12月10日申請日期2008年7月11日優先權日2008年7月11日發明者勇周,楊益眾,梁國華,爽王申請人:揚州大學