裂蹄木層孔菌固體培養物及其製備方法和應用與流程
2023-04-23 06:18:46
本發明屬於應用生物技術領域，更具體地，本發明涉及一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物及其製備方法和應用。
背景技術：
野生裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體生長周期可長達20～30年，只有在原始森林中才能採集到，資源相當匱乏，價格也相當昂貴。
據文獻記載，裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體的熱水提取物對小白鼠肉瘤180的抑制率為96.7％，可用於治療各種腫瘤、肝病、心臟病、中風偏癱、胃病、胃潰瘍、食欲不振等疾病，是一種名貴的藥用真菌。
被稱為抗癌之王的桑黃，根據現代分子生物學鑑定其實與裂蹄木層孔菌是同一物種(phellinuslinteus)不同的中文名字。
儘管裂蹄木層孔菌或桑黃(phellinuslinteus)具有很強的抗腫瘤活性，但未見提及有降血壓、降血糖的功能，此外，由於裂蹄木層孔菌資源匱乏，其用於科學研究也受到局限。
常規的藥用真菌培養，一般採用木屑作培養基培養出子實體，再用子實體提取其有效成分，其分離純化程序非常繁瑣。
技術實現要素：
基於此，本發明克服了現有技術的缺陷，提供了一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物及其製備方法和應用。
為了實現上述發明目的，本發明採取了以下技術方案：
一種用於培養裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的培養基，所述培養基含有100～1000g/l的小麥胚芽以及10～100g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養基含有100～500g/l的小麥胚芽以及10～50g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養基含有300～400g/l的小麥胚芽以及20～30g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養基含有400g/l的小麥胚芽以及20g/l的黃豆粉。
在其中一些實施例中，所述培養基含有300g/l的小麥胚芽以及30g/l的黃豆粉。
本發明還提供了一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，採用上述培養基，包括以下步驟：
1)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)保藏菌種接入至滅菌的培養基中，所述固體培養基含有100～1000g/l的小麥胚芽以及10～100g/l的黃豆粉；
2)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養10～30天，即得。
在其中一些實施例中，步驟1)中所述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)分離自野生的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體中，並經dna鑑定確認。
在其中一些實施例中，步驟1)中所述滅菌條件為：蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘。
在其中一些實施例中，步驟2)中所述培養條件為：25～28℃培養30天。
本發明還提供了上述製備方法製備得到的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物。
本發明還提供了上述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物在預防和治療高血壓和高血糖方面的應用。
一種防治高血壓和高血糖的組合物，所述組合物含有上述裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物。
與現有技術相比，本發明具有以下有益效果：
1、本發明全部採用可食用的原料(麥胚芽、黃豆粉)，經裂蹄木層孔菌生物轉化成可調節人體血壓和血糖的活性物質，裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物可以根據需要無限放大，解決了關鍵原料來源的問題；
2、本發明的固體培養物可直接加工成同時具有降血壓和降血糖的功能的口服液，省略繁瑣的分離純化程序，大大簡化了生產工藝、節省了生產成本；
3、本發明的製備方法工藝簡單、成本低廉，有利於在低收入的高血壓、高血糖的人群中推廣。
具體實施方式
下面結合具體實施例進一步敘述本發明，本發明未述及之處適用於現有技術。下面給出本發明的具體實施例，但實施例僅是為了進一步詳細敘述本說明，並不限制本發明的權利要求。以下實施例中所使用的試劑或原料，如無特殊說明，均來源於市售。
本發明實施例中所使用的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)是從野生的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)子實體中分離並經dna鑑定確認的菌種，具體分離方法如下：
採集寄生在樺樹、桑樹上，外觀形態與文獻描述的裂蹄木層孔菌相似的未纖維化的子實體，表面消毒後用手術剪刀剪開成綠豆粒大小的顆粒。用小鑷子把剪碎的裂蹄木層孔菌子實體放在培養基(含400g/l的小麥胚芽以及20g/l的黃豆粉)上，28*c培養10天。
培養好的菌絲體送專業的dna公司作菌種鑑定。dna分子鑑定結果與genbank資料庫記載的phellinuslinteus相似度大於99％。
實施例1
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了50克麥胚芽和1克黃豆粉，裝於廣口玻璃瓶，紗布封口，置於蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養基中；
3)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養30天，即得。
實施例2
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了40克麥胚芽和2克黃豆粉，裝於廣口玻璃瓶，紗布封口，置於蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養基中；
3)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養30天，即得。
實施例3
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，包括以下步驟：
1)100克水中添加了30克麥胚芽和3克黃豆粉，裝於廣口玻璃瓶，紗布封口，置於蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養基中；
3)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養30天，即得。
實施例4
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了20克麥胚芽和4克黃豆粉，裝於廣口玻璃瓶，紗布封口，置於蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養基中；
3)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養30天，即得。
實施例5
本實施例的一種裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的製備方法，包括以下步驟：
1)在100克水中添加了10克麥胚芽和5克黃豆粉，裝於廣口玻璃瓶，紗布封口，置於蒸汽高壓鍋，1kg/cm2，消毒30分鐘，得到培養基；
2)將裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)斜面菌種接入至滅菌的培養基中；
3)接種後，置於恆溫培養箱，25～28℃培養30天，即得。
試驗例1實施例1～5的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的總黃酮含量測定
黃酮類化合物泛指由兩個具有酚羥基的苯環通過中央三碳原子相互連結而成的一系列化合物。據報導，很多天然的黃酮類化合物具有非常強的生理功能，如降血壓、降血糖、降血脂、降膽固醇，有血管清道夫之稱。
採用分光光度法測定裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物中總黃酮的含量。固體培養物第10天開始每隔5天取樣，樣品中的黃酮類化合物經提取純化後，用分光光度法於510nm波長下測定其吸光度，與蘆丁標準品對照，計算出每克樣品中總黃酮的含量，結果如表1所示。
表1裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物的總黃酮含量
表1結果表明，本發明實施例2所製備的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)總黃酮含量最高；並且發現麥胚芽與黃豆粉的配比直接影響固體培養物中總黃酮的含量。
試驗例2實施例2的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物對降血糖和降血壓的影響
在100克水中加入實施例2的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物40克和羅漢果10克，置於蒸汽高壓鍋中，1kg/cm2，蒸煮30分鐘，冷卻後用500目濾布過濾，濾清液分裝於20ml的玻璃瓶，壓蓋機壓蓋密封；置於蒸汽高壓鍋中，1kg/cm2，高壓消毒30分鐘，製得口服液。
尋找5年以上收縮壓180mmhg以上的高血壓志願者100名、空腹血糖10mmol/l以上高血糖志願者100名，服用上述口服液，每天1瓶(20毫升)。服用30天。
有效率判斷：收縮壓下降40mmhg、空腹血糖下降3mmol/l為有效。
結果：高血壓患者治癒有效率為83％，高血糖患者治癒有效率為95％，總有效率達到89％，說明含有本發明的裂蹄木層孔菌(phellinuslinteus)固體培養物對降血糖和降血壓都有顯著的治療作用。
以上所述實施例的各技術特徵可以進行任意的組合，為使描述簡潔，未對上述實施例中的各個技術特徵所有可能的組合都進行描述，然而，只要這些技術特徵的組合不存在矛盾，都應當認為是本說明書記載的範圍。
以上所述實施例僅表達了本發明的幾種實施方式，其描述較為具體和詳細，但並不能因此而理解為對發明專利範圍的限制。應當指出的是，對於本領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明構思的前提下，還可以做出若干變形和改進，這些都屬於本發明的保護範圍。因此，本發明專利的保護範圍應以所附權利要求為準。