食源性致病菌定量檢測試劑盒的製作方法
2023-05-25 00:11:01 1
食源性致病菌定量檢測試劑盒的製作方法
【專利摘要】本實用新型涉及一種食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是：包括盒體、盒蓋和若干個發酵增菌容器，所述盒體內均勻排列發酵增菌容器，所述發酵增菌容器內設有集氣窗，所述集氣窗前端與發酵增菌容器內前壁固接，集氣窗末端與發酵增菌容器內底部固接，所述集氣窗橫向截面形狀呈開口矩形，其縱向截面形狀呈直角三角形，所述集氣窗與發酵增菌容器固接後，在發酵增菌容器的底部呈坡度的氣泡收集空間。有益效果：通過致病菌定量檢測的數目可以定量評價檢測目標的汙染程度是否達到安全限量標準，為食品安全致病菌檢測提供了可靠的數據。可廣泛應用於食品、自來水、純淨水、飲料、製藥、保健品、化妝品、疾病預防控制、出入境檢疫局等十餘個行業。
【專利說明】 食源性致病菌定量檢測試劑盒
【技術領域】
[0001]本實用新型屬於食品檢測，尤其涉及一種直接應用於食品、飲用水的食源性致病菌定量檢測試劑盒。
【背景技術】
[0002]2012年食源性致病菌檢測手冊中對部分致病菌由原有的定性檢測方法重新修訂為定量檢測方法。即，對食品中大腸艾希氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、創傷弧菌、阪崎腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌等致病菌、採用九管定量檢測，即九管發酵法(MPN)檢測方法。其培養基載體為液體培養基，檢測程序多達六個步驟:試劑配製、分裝、消毒、檢測、洗滌、烘烤。該方法檢測成本高、檢測周期長，檢驗方法及操作程序繁雜。專利申請號:201010550133.8公開了一種對食品中的沙門氏菌、金黃色葡萄球菌和志賀氏菌進行同時快速檢測的多重螢光定量PCR方法，其特徵是由以下步驟構成:(I)應用一定配比的含7.5%氯化鈉肉湯和GN的混合培養基對含有上述致病菌的食品進行快速同時增菌，並使用離心柱式細菌基因組DNA提取試劑盒提取培養液中的細菌基因組總DNA ; (2)應用根據沙門氏菌的複製原點C基因、金黃色葡萄球菌的Nuc基因、志賀氏菌的IpaH基因設計的擴增引物和Taqman探針對上述細菌基因組總DNA進行多重螢光定量PCR同時檢測，並使用自行設計的重組DNA片段作為陽性內參監控反應體系，根據分別代表三種致病菌的螢光信號在一定循環數內是否出現顯著擴增判定食品中是否存在上述致病菌。該方法手段複雜、檢測周期很長。專利申請號:201010556679.4公開了一種快速檢測嬰幼兒配方奶粉中阪崎腸桿菌的PCR方法，其特徵是包括以下幾個步驟:(I)阪崎腸桿菌的培養；(2)製備阪崎腸桿菌基因組DNA ； (3)構建阪崎腸桿菌重組質粒,作為標準品繪製標準曲線進行定量；(4)構建ompA內標重組質粒，與目的基因在同一反應體系內同時擴增，監測反應體系，排除假陰性；(5)建立分子信標螢光定量技術檢測嬰兒配方奶粉中阪崎腸桿菌的方法，優化反應條件；(6)對3種從嬰兒配方奶粉中高效提取阪崎腸桿菌的方法進行比較；(7)確定分子信標螢光定量方法的靈敏度；(8)人工汙染樣品，確定檢測限；(9)實際檢測，確定該方法的特異性、靈敏度、符合率。該方法只針對阪崎腸桿菌的檢測，只能定性分析，不能滿足食源性致病菌檢測手冊中有關「定量檢測」的規定。食品檢測部門亟待開發一種可以一目了然觀察檢測目標細菌的生長繁殖過程，對檢測目標緻病菌檢測的數目可以定量評價的檢測裝置和方法。
實用新型內容
[0003]本實用新型的目的在於克服上述技術的不足，而提供一種食源性致病菌定量檢測試劑盒，採用定量檢測方法，通過培養基包被技術，將食源性致病菌相對應的培養基包被在無色透明的試劑盒載體上，檢測目標緻病菌檢測的數目可以定量評價，為食品安全提供了檢測目標的汙染程度是否達到安全限量標準。
[0004]本實用新型為實現上述目的，採用以下技術方案:一種食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是:包括盒體、盒蓋和若干個發酵增菌容器，所述盒體內均勻排列發酵增菌容器，所述發酵增菌容器內設有集氣窗，所述集氣窗前端與發酵增菌容器內前壁固接，集氣窗末端與發酵增菌容器內底部固接，所述集氣窗橫向截面形狀呈開口矩形，其縱向截面形狀呈直角三角形，所述集氣窗與發酵增菌容器固接後，在發酵增菌容器的底部呈坡度的氣泡收集空間。
[0005]所述盒體、盒蓋和發酵增菌容器均為無色透明體，採用能夠降解的材料製成。
[0006]所述發酵增菌容器數量為十個，發酵增菌容器在盒體中前後排列各五個。
[0007]所述發酵增菌容器觀測面的側壁上設有試驗標識刻線。
[0008]有益效果:與現有技術相比，本實用新型提供了一種省去了實驗前的大量準備工作，方便、快捷、準確的定量測試食源性致病菌的裝置。由原來的定性檢測逐步改為定量檢測，通過上述致病菌定量檢測的數目的多少可以定量評價以上檢測目標的汙染程度是否達到安全限量標準，為食品安全致病菌檢測提供了可靠的數據。本試劑盒通過培養基包被技術，將培養基包被在無色透明的試劑盒載體上，本試劑盒提高了試驗準確性和標準化程度，簡化了操作程序，縮短檢驗時間，減輕了工作強度，減少了試驗耗材，提高了工作效率。本試劑盒為一次性無菌用品，可降解再生，避免汙染。可廣泛應用於食品行業、自來水公司、純淨水行業、飲料行業、製藥行業、保健品行業、化妝品行業、疾病預防控制系統、出入境檢疫局、技術監督部門、環境保護行業、工商管理部門等十餘個行業。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0009]圖1是本實用新型的結構示意圖；
[0010]圖2是圖1中集氣窗的縱向截面剖視圖。
[0011]圖中:1、盒體，2、盒蓋，3、發酵增菌容器，4、集氣窗，5、試驗標識刻線。
【具體實施方式】
[0012]下面結合較佳實施例詳細說明本實用新型的【具體實施方式】。
[0013]實施例
[0014]詳見附圖，一種食源性致病菌定量檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2和若干個發酵增菌容器3，所述盒體內均勻排列發酵增菌容器，本實施例的發酵增菌容器數量為十個，發酵增菌容器在盒體中前後對應排列各五個，第1-9個發酵增菌容器為試驗檢測容器，第10個發酵增菌容器為試驗檢測對照容器。所述發酵增菌容器內設有集氣窗4，所述集氣窗前端與發酵增菌容器內前壁固接，集氣窗末端與發酵增菌容器內底部固接，所述集氣窗橫向截面形狀呈開口矩形，其縱向截面形狀呈直角三角形，所述集氣窗與發酵增菌容器固接後，在發酵增菌容器的底部呈坡度的氣泡收集空間，例如:大腸埃希氏、阪崎腸桿菌主要的生化反應是產酸產氣，而產氣是判定這兩個致病菌的是與否的重要指標之一，通過固定的集氣窗直接觀察其大腸埃希氏、阪崎腸桿菌產氣情況，對其致病菌的判定起到了重要作用。所述發酵增菌容器觀測面的側壁上設有試驗標識刻線5，每個發酵增菌容器的試驗標識刻線是符合試驗要求的9mL、10mL的試驗標線。
[0015]本實用新型的優選方案是:所述盒體、盒蓋和發酵增菌容器均為無色透明體，採用能夠降解的材料製成，為一次性無菌用品，可降解再生，避免汙染。
[0016]使用方法:[0017]本試劑盒可以實現2012年食源性致病菌檢測手冊中規定的定量檢測方法。試劑盒培養基的包被:與2012年食源性致病菌檢測手冊中所規定的，大腸艾希氏菌、金黃色葡萄球菌、副溶血性弧菌、創傷弧菌、阪崎腸桿菌、單核細胞增生李斯特菌、沙門氏菌定量檢測中所應用的培養基相同。事先將濃縮月桂基硫酸鹽胰蛋白腖培養基、亞硒酸鹽胱氨酸增菌液、10%氯化鈉胰蛋白腖肉湯培養基、3%鹼性蛋白腖水、李氏增菌肉湯(LBI )、改良月桂基硫酸鹽胰蛋白腖肉湯-萬古黴素培養基包被在試劑盒中，隨時取用。通過培養基包被技術，將上述致病菌相對應的培養基包被放在無色透明的試劑盒載體內。
[0018]大腸埃希氏菌的定量檢測
[0019]試劑盒使用說明書
[0020]I適用範圍:適用於食源性致病菌大腸埃希氏菌定量(MPN)方法的檢測。
[0021]2方法原理:依據《2012年食源性致病菌監測工作手冊》中的定量檢驗方法，採用包被技術，將月桂基硫酸鹽胰蛋白腖(LST)肉湯培養基包被在試劑盒底部，隨時取用，省去了實驗前的大量準備工作，方便、快捷。
[0022]3試劑盒的組成:試劑盒由5個發酵增菌容器前後對應並排共10個發酵增菌容器組成，第1-9發酵增菌容器為試驗盒，第10發酵增菌容器為試驗對照盒。用前加入無菌蒸餾水或無菌生理鹽水至盒的標線處即為IOmL月桂基硫酸鹽胰蛋白腖培養基。
[0023]4操作步驟
[0024]4.1樣品製備:以無菌操作稱取檢樣25g(mL)，加入225mL磷酸鹽緩衝液或無菌生理鹽水中製備成1:10的均勻樣品稀釋液。
[0025]4.2增菌培養:
[0026]4.2.1試劑盒的準備:打開盒蓋，試劑盒1-10發酵增菌容器中加入無菌鹽水9~IOmL即可，備用；
[0027]4.2.2加樣:選擇上述樣品勻液三個連續的適宜稀釋度，接種到含有月桂基硫酸鹽胰蛋白腖培養基的發酵增菌容器中(1-3，4-6，7-9。)，每個稀釋度接種3盒，每盒接種lmL。第10發酵增菌容器不加樣液為陰性對照，於36°C ± 1°C培養48h±2h ;
[0028]4.3分離培養:對所有渾濁生長，集氣窗有氣泡產生的試劑盒增菌液，用接種環移取I環，接種EC肉湯培養基中，培養24h，檢查試劑盒中的集氣窗是否有氣泡產生，如未有產氣則繼續培養至48h±2h ;記錄在24h和48h內產氣的EC肉湯管數。如所有EC肉湯管均未產氣，即可報告大腸埃希氏菌MPN結果；如有產氣者，則進行EMB平板分離培養。
[0029]4.4鑑定:挑取EMB平板典型菌落做確正實驗；
[0030]4.5結果:根據證實為大腸埃希氏菌陽性的試管管數，查MPN檢索表，報告每g(mL)樣品中大腸埃希氏菌MPN值；
[0031]5注意事項
[0032]5.1加入樣品後不需搖勻，平拿平放；
[0033]5.2加樣時可用一次性無菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標刻度處；
[0034]5.3在培養箱中取試劑盒時應平託出來，不要傾斜以免液體外逸造成汙染；
[0035]5.4試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用
[0036]6保存條件和有效期:
[0037]避光於保存於乾燥處，最佳溫度為2?8°C，有效期18個；[0038]備註:如果樣品汙染嚴重，實驗時直接將1:10樣品勻液加入試劑盒中，不需實驗前加入無菌蒸餾水或無菌生理鹽水即可，
[0039]備註:如果樣品汙染嚴重，每孔直接接種1:10樣品的稀釋液10mL，稀釋後的10_2接種10mL，稀釋後的10_3接種10mL，每個稀釋度接種3盒，(1-3，4-6，7-9。)省去了製備雙料培養基及單料培養基試管的繁瑣的工作。
[0040]阪岐腸桿菌的定量檢測
[0041]試劑盒使用說明書
[0042]I適用範圍:適用於食源性致病菌阪岐腸桿菌定量(MPN方法)的檢測。
[0043]2方法原理:依據《2012年食源性致病菌監測工作手冊》中的定量檢驗方法，採用包被技術將改良月桂基硫酸鹽胰蛋白腖肉湯-萬古黴素培養基包被在試劑盒底部，隨時取用，省去了實驗前的大量準備工作，方便、快捷。
[0044]3試劑盒的組成:試劑盒由5個發酵增菌容器前後對應並排共10個發酵增菌容器組成，第1-9發酵增菌容器為試驗盒，第10發酵增菌容器為試驗對照盒。用前加入無菌蒸餾水或無菌生理鹽水至盒的標線處即為IOmL改良月桂基硫酸鹽胰蛋白腖肉湯-萬古黴素
培養基。
[0045]4操作步驟
[0046]4.1樣品製備:方法見《2012年食源性致病菌監測工作手冊》中的阪岐腸桿菌定量檢驗(7.1)。
[0047]4.2增菌培養:
[0048]4.2.1試劑盒的準備:打開盒蓋，試劑盒1-10發酵增菌容器中加入無菌鹽水9~IOmL即可，備用。
[0049]4.2.2加樣:用滅菌吸管分別吸取18小時培養後的三份不同重量前增菌,各ImL,(每份不同重量樣品各取3個ImL)分別加入含有IOmL改良月桂基硫酸鹽胰蛋白腖肉湯-萬古黴素的試劑盒的發酵增菌容器中(1-3，4-6，7-9。)。第10發酵增菌容器不加樣液為陰性對照，置44°C ±0.5°C恆溫箱內，培養24h ；
[0050]4.3分離培養:對所有顯示渾濁並產生大量氣體的試劑盒增菌液,用接種環接種於阪岐顯色培養基平板上劃線分離。置36°C培養24h±2h ；
[0051]4.4鑑定:挑取可疑菌落(藍綠色)，劃線接種胰蛋白腖大豆瓊脂平板(TSA)，250C ±1°C培養24-48h，挑取黃色菌落用全自動微生物鑑定系統VITEK-2進行生化鑑定；
[0052]4.5結果:根據證實為阪岐腸桿菌的陽性管數查MPN檢索表；
[0053]5注意事項
[0054]5.1加入樣品後不需搖勻，平拿平放；
[0055]5.2加樣時可用一次性無菌塑料吸管，將樣品稀釋液加至試劑盒所標刻度處；
[0056]5.3在培養箱中取試劑盒時應平託出來，不要傾斜以免液體外逸造成汙染。
[0057]5.4試劑盒為一次性無菌包裝用品，供一次性即開即用
[0058]6保存條件和有效期:
[0059]避光於保存於乾燥處，最佳溫度為2?8°C，有效期18個。
[0060]備註:如果樣品汙染嚴重，每孔直接接種1:10樣品的稀釋液10mL，稀釋後的10_2接種10mL，稀釋後的10_3接種10mL，每個稀釋度接種3盒，(1-3，4-6，7-9。)省去了製備雙料培養基及單料培養基試管的繁瑣的工作。
[0061]食源性致病菌定量檢測項目，包含了七種致病菌定量檢測，相對有七種定量致病菌檢測試劑盒。
[0062]以上所述，僅是本實用新型的較佳實施例而已，並非對本實用新型的結構作任何形式上的限制。凡是依據本實用新型的技術實質對以上實施例所作的任何簡單修改、等同變化與修飾，均仍屬於本實用新型的技術方案的範圍內。
【權利要求】
1.一種食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是:包括盒體、盒蓋和若干個發酵增菌容器，所述盒體內均勻排列發酵增菌容器，所述發酵增菌容器內設有集氣窗，所述集氣窗前端與發酵增菌容器內前壁固接，集氣窗末端與發酵增菌容器內底部固接，所述集氣窗橫向截面形狀呈開口矩形，其縱向截面形狀呈直角三角形，所述集氣窗與發酵增菌容器固接後，在發酵增菌容器的底部呈坡度的氣泡收集空間。
2.根據權利要求1所述的食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是:所述盒體、盒蓋和發酵增菌容器均為無色透明體，採用能夠降解的材料製成。
3.根據權利要求1或2所述的食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是:所述發酵增菌容器數量為十個，發酵增菌容器在盒體中前後排列各五個。
4.根據權利要求3所述的食源性致病菌定量檢測試劑盒，其特徵是:所述發酵增菌容器觀測面的側壁上設有試驗標識刻線。
【文檔編號】C12M1/34GK203668405SQ201320894143
【公開日】2014年6月25日 申請日期:2013年12月30日 優先權日:2013年12月30日
【發明者】劉軍 申請人:劉軍