用表型標記鑑定種子或植株的製作方法

2023-05-24 08:16:06 1

專利名稱：：用表型標記鑑定種子或植株的製作方法
技術領域：
：本發明一般地涉及一種將表型標記用於含專有性狀的商品種子或栽培作物中，無需實際上將該標記與存在或不存在的該專有性狀物理連接，來幫助鑑定收穫的穀物的方法，並進一步允許根據收穫穀物中標記的存在來收取專有性狀的費用。
背景技術：
：通過遺傳轉化或通過標記輔助的育種，將基因導入植物中，導致開發具有改進性狀的栽培種。這些改進包括這些性狀，如農藝學性能增強，最終使用性能的價值增加。本領域熟知，表型差異如葉色或種皮顏色可以從其它相似品系中區分植物或種子品系。在美國專利4,627,192(Fick)中替代種皮顏色已經整合到向日葵的基因中。然而，經技術操作已經改進的很多植物不能從表面上和未改進植物區分。缺乏容易區分的性狀使收取專有性狀費用很困難，同時也難以追蹤含性狀的收穫穀物。當前使作物種子產生表型葉色或種皮顏色的方法是勞動密集和不實用的。植物開花的習性限制此方法。手工授粉昂貴且耗時。使用遺傳雄性不育系統要求複雜的增加雌性種子的方法，從而顯著限制植物育種且必然導致要分離雄性育性的雜種。因此，存在一種需要和願望，可用簡單方法檢測植物、種子或收穫穀物中專有性狀的存在，以幫助收取專有性狀的費用。同時也期望一種方法可以有效產生大量帶表型葉色或種皮顏色的種子作物。發明簡述以正常方式產生含專有性狀的作物商品種子。用於本發明的種子可含一或多種專有性狀。在將這種專利種子銷售給種植者之前，含表型標記如大豆的黑色種皮的普通或專利種子以某個低百分比與含專有性狀的種子混合，百分比佔混合種子總重的約0.1%到10%重量，優逸約0.5%到4%。購買帶表型標記的混合種子時，種植者同意對穀物中的專有性狀付費，這由穀物中表型標記的存在和/或量來指示。本發明大量雜合(Fl)種子的生產依靠組合使用除草劑和種皮顏色。一種抗除草劑大豆的實例由Monsanto公司開發用於實施本發明，並以商品名RoundupReady銷售，然而任何抗除草劑的大豆都可使用。用於本發明的種皮顏色基因的實例是由I座位的i等位基因編碼的黑種皮基因。該基因在種皮中隱性表達，因此在種子中以母系方式表達。混合普通種子和含表型標記種子的方法改進性狀所有者和被許可者之間合同的執行，同時也改進專利和/或合同侵權的檢測。本發明也有利於終點價值獲取體系，它可以使性狀所有者更願意讓被許可人使用更新的技術.即使種植者混合含專有性狀的穀物和不含專有性狀的穀物，本發明也可實現終點價值荻取。本發明也提高性狀所有者向留種種植者收取許可費的能力。另外，在試圖通過物理分揀從一批種子中除掉它後，通過在後代中重現表型標記，本發明可以檢測專有性狀。用於本發明的植物種子混合物可含主要顏色的種子和次要顏色的種子，它們可來自大豆、油茱或小麥，如果使用大豆，次要種皮顏色可以是黑色、棕色、雜合黃色，或用分光光度計測量550到650nm波長的光反射總和來確定。次要顏色種子可通過分離間行種植純合黑色種皮大豆並經幾代增加種子來生產，也可通過在第一代後分離黑種皮種子然後僅繁殖它們來生產。其它產生次要顏色種子的方法涉及混合抗除草劑的種子和不抗除草劑的種子；種植種子；然後向植物噴灑除草劑使只有除草劑選擇的種子混合物留下來.然後分離主要顏色種子並從混合物中保留。含主要和次要顏色種皮的種子混合物可用於鑑定帶專有性狀的種子的方法，其中通過種植並培養種子混合物；從植株中收穫穀物；然後取穀物樣品鑑定表型標記的量.根據穀物中表型標記的量計算許可費。根據穀物中的標記量種植者可接受優惠或折扣。本領域技術人員知道，對於由專利種子產生穀物而生產的穀物，無論種植的種子是購買或從前次收穫中留下來，該方法都能幫助或使其性狀鑑定和費用收取成為可能。優選實施方案詳述此處使用的以下名詞或術語有以下含義"終點價值獲取"是指在收穫後的穀物遞送點，通常是主穀倉，來評價和收取性狀費用；"專有性狀"是指處於專利狀態的性狀，和/或由所有者作為商業秘密管理的性狀；"保留種子"指由種植者保留用於下一年再種的種子；"許可費"等價於由使用者為荻得使用專有性狀權力而付的使用費；"被許可人"是指專有性狀的購買者，他已與專有性狀所有者籤署合同，其中涉及使用性狀的條款和條件，和使用性狀權利的再數形式；"性狀所有者"是專有性狀的所有者和/或銷售者；"褐包種子"是由種植者收穫並賣給另一個種植者以供種植並收穫穀物的種子；"穀倉"是收穫穀物的主要商業遞送點；"種皮"是植物花外層覆蓋物的殘留物，同時在遺傳上等同於產生種子的植物；"遠交"指為了期望的表型標記用另一種具有不同遺傳背景的植物使一種植物受精；"遠交種子"指為了期望的表型標記用另一種具有不同遺傳背景的植物使一種植物受精而產生的種子；"自交種子"指為了期望的表型標記用另一種具有相同遺傳背景的植物使一種植物受精而產生的種子；"穀物"為商業目的銷售的收穫種子；"種植者"指負責種植、管理並收穫作物的人；"可視覺檢測的性狀"指不需二次分析就可看出來的性狀，二次分析涉及粉碎組織或抽提任何化合物；"分揀種子"是根椐觀察可視覺檢測性狀而物理區分的行為；"變種"指同源且穩定的一組植物，可通過至少一種表型特徵與所有其它組植物區分；"除草劑逸擇的種子"指作為使用除草刑的結果而被逸擇的種子；"F1種子"指產生的第一代種子；"F2種子"指再種植所有或部分Fl種子而產生的第二代種子，其中添加或不添加其它栽培種子。本發明涉及一種用專有種子或栽培植物的表型標記，以幫助(l)檢測含專有性狀的收穫穀物和(2)確定許可費的方法。在一種實施方案中，本方法包括使用大豆中的表型標記。幾年來，Nagai，Woodworth和Williams在幾個出版物中已揭示了大豆種皮遺傳學，其內容在此引作參考。大豆中，基因"R"編碼黑種皮顏色."R"對"r"完全顯性，"r"基因編碼褐色種皮。另一個座位開始稱為"C-c"但隨後稱為"T-t"，將黑色變為"不完全黑色"，褐色變為"淺黃色"。Woodworth指出該基因具有多效性。茶色短毛變種"T"有黑色或褐色種皮。灰色短毛變種"tt"有不完全黑色或淺黃色種皮。RT一黑色種皮rT-褐色種皮Rt-不完全黑色種皮rt-淺黃色種皮此外，Williams發現有一種花顏色基因"Wl-wl"也可以影響它。RtWl-不完全黑色Rtwl-淺黃色已知以下基因也影響大豆種皮顏色r"-R的等位基因(R>r">r)rmT-黑色和褐色條紋，圍繞臍部為中心的環r"t-難以分辨，但顯示出圍繞臍部為中心的，模糊的黑色和褐色條紋的環。和0-o-另一個座位其中基因型orT-產生暗紅褐色種皮另外，"i"座位至少有4個已知等位基因。i-導致上述種皮顏色ik-導致圍繞臍部的鞍形顏色模式i'-暗臍_其它顏色局限於臍部I-淺臍-顏色局限於臍部且強度減弱另一個座位，現稱為k2，已在Kurakake變種中發現，iik-鞍形模式(ii，ik，I)-自黑色本領域技術人員知道該座位顯示是更活性"i"形式的一種抑制因子。種子顏色可用Technicon近紅外反射(NIR)分光光度計測量，經校正後確定"0到650nm的總光反射(光密度)。該波長設定允許從黑色從褐色種子中分離出黃色。此外，光學掃描技術可根據顏色用於區分種子。NIR和光學掃描都可建立用於高通量分析。大多數商業栽培大豆顯示黃色種皮顏色。黑色種皮大豆種子自然出現的概率約為萬分之一。黑色種皮表型由純合編碼."R"和"T"在商業品種中存在，"i"通過在全部種皮中表達R而起作用。商業變種中，"T"抑制所有顏色表達，導致淺色臍並阻止在臍區以外表達顏色，本發明的一個實施方案中，本發明的黑種皮大豆栽培種被認為具有基因型RRiiTT,種皮是母系組織，其中它衍生自種子成長的植物的體細胞組織'本領域技術人員可以理解種皮顏色反映母系植物的基因型，而非種子自身的基因型。因此，可以產生具有完全黃色種皮的種子，它對黑色種皮基因ii是純合的，並且將僅僅作為自花授粉或由另一種純合ii植物授粉的結果而提高黑色種皮種子.本發明另一個描述性實施方案中，植物是油菜。商業油菜穀物通常有黑色種皮。已知有黃色種皮類型，並已與歐洲油菜的油和蛋白含量增加相聯繫。VanDeynze和Pauls發現油菜種皮顏色的遺傳，其內容引作參考。油菜中黃色種皮性狀的遺傳顯示受隱性核基因(a，b和c)的影響。A座位顯性等位基因的存在足以表現出黑色種皮顏色。B或C座位顯性等位基因的存在足以表現出褐色種皮顏色。以下組合產生黑色種皮A—B—C一9A-bbC-A-B-ccA-bbcc以下組合產生褐色種皮aaB-ccaaB"C-aabbC-.產生黃色油菜種子的基因組合是aabbcc。要產生含黑色種皮大豆，也稱為"bsc"，的商業栽培種子，bsc大豆種子可以至少下列方式混入商業種子。本發明一個實施方案中，可在田間產生混合.Bsc大豆植物對I座位的"i"等位基因純合，可種植於同一塊大田分開的行中，因為含專有性狀的作物準備增加供商業種子銷售。對黃色種皮行進行處理以促進遠交。在優選實施方案中，這種處理包括加比正常使用更高濃度的除草劑。這可引起雄性育性降低，引起高遠交率。本領域技術人員知道，傳代數必然依賴於遠交率和種子混合物中bsc的要求百分率。本發明混合方法的另一個示例性實施方案包括機械混合。bsc大豆植物將與黃色種皮植物雜交。經幾代自我授粉後bsc後代將被保留。已知量的該種子將加入黃色種皮變種中。自我授粉需要的傳代數依賴於需要商品化的含性狀種子的總量以及混合種子中需要的bsc百分率。本發明混合方法的優選示例性實施方案是結合大田混合和機械混合方法。Bsc種子將混入商品種子中，如按上述機械混合方法，商業銷售前最後一季種子增加中bsc種子將和商業栽培種一起生長。田間混合導致產生並維持更高水平的bsc基因雜合的單個植林。這正是期望中的事，儘管有選擇壓力，將幫助保存標記表型的存在。機械混合方法有更低的商品生產成本。本領域技術人員知道組合方法優化兩種系統的優點。本發明另一實施方案中，賣給種植者時一定比例的bsc種子實際上是黃色的.第一年收穫時將產生黑色種子，因而阻止種子購買和種植之間的田間種子分揀。該實施方案的另一種方法是將另一個顯性種皮顏色基因導入黑色種皮品系中.在優選實施方案中，該種皮顏色僅在缺乏黑色表型時表達，這時黑色基因狀態是純合的。褐色種皮可用作第二個種皮顏色。根據褐色種皮顏色的存在，來自Fl雜種的F2種子可迅速且低成本地用近紅外分光光度計進行顏色分揀.從這些雜種中再進一步傳代(F3代)將使種子增加.這無需再行分揀即可做到，或繼續從純合黃色品系中分揀。F3代將用作bsc來源，確保可靠的bsc種子水平以及足夠比例的雜合子以阻止田間種子分揀。本發明另一個實施方案中可使用上述用另一種皮顏色基因的相同方法，其中因為存在另一個種皮顏色基因，使選擇來自雜合F1個體的F2種子的行為不可能進行，但可以通過用另有描述的NIR儀器檢測母本植物中攜帶Ii基因型的雜合個體來實現。本發明另一實施方案中，上述檢測雜合個體用於機械混合的同樣方法可通過結合改變植物表型的基因來實現，如改變葉子形狀，這樣可以選擇後代中的雜合F1植物。這種方法涉及將可選擇的顯性表型導入黑色種皮供體品系。本發明另一實施方案中，上述檢測雜合個體用於機械混合的同樣方法可通過混合抗除草劑的黑色種子品系和不抗除草劑的黃色種子品系來實現。經兩步操作可在下一代選擇F1植物。首先用顏色分揀器(其中包括純合黃色和雜合黃色)從黑色種子中揀出黃色種子。第二，在接下來的一代，對黃色種子的植物噴灑除草劑。只有F1雜合植物能存活。收穫這些植物的種子並在進一步的兩代中增加種子。此外，當黃色種子的不抗除草劑的植物開花時，通過使用低水平除草劑可以增加遠交。在另一實施方案中，抗除草劑和黑色種皮的種子與不抗除草劑的黃色種皮的種子隨機混合併大規模種植於大田中。抗除草劑種子對黑色種子的優選比例範圍是10/90到90/10，但任何混合水平都可使用。其它優選比例是30/70，50/50或70/30。本發明大規模種子生產的優選實施方案是指至少一公項種子，但使用大田面積可以是任意大小，根據F1種子生產的需要量。高種植率是有益的，因為這可以更有效地利用空間，以及植物間更高水平的遠交.一行內大豆植物互相遠交的比例大約1%。如果遠文水平更低，可通過增加第一次遠交田塊的大小來補償。田間經批量收穫並再種植，可^f吏用比笫一次更高的種植，優選種植率是第一次種植率的兩倍。起源於從黃色傳統大豆植物經黑色種皮的抗除草劑植物花粉授精選擇的植物，和從黑色種皮的抗除草劑植物經黃色傳統植物花粉授精選擇的植物的1%遠交植物將產生種皮分別是黑色和黃色的F1種子。與所有自交種子一起重新種植。向田間噴灑除草劑檢驗存在於親本材料中的除草劑抗性。噴灑將消除所有自交的黃色傳統種子。收穫剩下的種子。因為種皮顏色是隱性和母系遺傳，來自Fl植物的所有F2種子將都是黃色，而產生該F2種子的Fl植物都是抗除草劑的.通過使用顏色分揀器，如Technicon近紅外(NIR)分光光度計校正檢驗550到650nm的總光反射(光密度)，F2種子將與自交的黑色抗除草劑種子分離。保留黃色種子.為增加生產種子的量，在存在進一步除草劑抗性選擇的條件下，經進一步傳代或最多經5代，可以増加黃色F卩種子，然後與含專有性狀的種子混合作為分離的表型標記。不需進一步增加，黃色F2種子也可直接用作種子混合物。用不抗除草劑的黑色種子品系和抗除草劑的黃色種子品系的混合物進行操作，這種策略同樣有效。可從使用或收集種子的不同實體計算和收取許可費。在本發明費用計算方法的一個實施方案中，在遞送含專有性狀的穀物時，種植者同意支付部分或全部許可費以獲得專有技術使用權。種植者同意只將含專有性狀的穀物遞送給指定穀倉，該穀倉已同意收取專有性狀的費用。種植者同意不以防止或阻礙標記表型檢測的方式分揀穀物.許可條款可以適用於來自許可種子及其所有後代穀物而生產的所有穀物.在支付費用時可給予種植者優惠，這可以由性狀所有者補償，以接受折扣或其它激勵使其隨後再購買種子或化學品。本發明許可費收取方法的另一實施方案中，穀倉同意收取含專有性狀穀物的許可費並移交該費用的一部分給性狀所有者.穀倉也同意允許性狀所有者的代表進入其設施以檢查性狀費的收集和/或審查穀物存貨中是否存在含專有性狀的穀物.另一實施方案中，穀倉可將所有客戶帳戶信息保存在計算機上，專用軟體將幫助保管記錄和費用估算。通過網絡連接或網際網路該信息可傳到所有者的計算機上，用於記錄保管、種植者或穀倉的帳單和會計目的.本領域技術人員熟知種子取樣和測試方法，如常用參考文獻中指出，InternationalrulesforSeedTesting1999，由國際種子測試組織提供，其所有內容在此引作參考.本發明實施方案中，視覺種子取樣可用作定性測量標準。種植者有0.25%水平閾值作為檢測底線。如果種植者給穀倉的特定穀物遞送中超過該閾值，他或她要根據遞送穀物量支付許可費。如果超過閾值，而種植者拒絕bsc的陽性結果，將進行更特異性測試以檢測穀物是否含專有性狀。在另一實施方案中，閾值可用於定量計算bsc的存在量.根據遞送給穀倉的bsc量，閾值範圍如0.25%到0.5%及0.5%到0.75X可用於確定專有性狀費。就以上內容，本領域技術人員知道上述方法的實用性。進一步，本領域技術人員清楚本發明的方法可用於大豆以外的作物如油菜.以推薦給大豆相同的方式，黃色油菜種子與攜帶專有性狀的黑色種子油茱品系的混合物可使性狀費收取和在遞送點追蹤專有性狀成為可能。以相似方式，小麥的藍色糊粉和/或紫色種皮也可使用。用本發明的方法，表型標記也可用於玉米和棉花。使用表型標記屬於植物遺傳學領域，本發明的實用性對本領域技術人員應該很清楚.以下實施例用於舉例說明本發明的優選實施方案.本領域技術人員應該知道，隨後實施例中公開的技術代表發明人發現的技術，它在本發明實施中功能良好，因而可以認為它們組成了優選實施模式。然而，本領域技術人員應知道，根據本說明書，可對此處公開的具體實施方案進行很多改變，而仍然獲得相似的結果但不偏離本發明的範圍和精神。實施例相關的一般信息以下名詞用於描述以下實施例"RoundupUltra"是常用草甘膦除草劑的商品名"0C"指遠交實施例1以下實施例講述了一個用於鑑定是否可以增強大豆遠交的方法。在處理組2-7中分別使用了不同份量的Roundup.13表1tableseeoriginaldocumentpage14處理組1至5在不同行中含黑色和黃色種子的作物。處理組6至8在同一行中含黑色和黃色種子的作物。觀察以上數據，本領域技術人員應該知道，上迷使用高劑量除草劑的方法能降低雄性育性，從而提高遠交。實施例2以下實施例提供抗Roundup②棉花作物雄性育性降低的證據。向植物頂端噴灑四次RoundupUltra,時間分別是播種後31、45、58和73天。有三塊田的植物，每塊接受如下不同比例的RoundupUltra:0、16、和24盎司/英畝。每周估算雄性不育2-3次，持續7周。10天中每塊田每天手工授粉10朵花。每個植林給育性評分l到5，其中3-5的得分認為可育，小於3認為不育.表2給出本研究結果。tableseeoriginaldocumentpage15觀察以上數據，本領域技術人員應該知道，對雙子葉植物使用高劑量除草劑如何降低雄性育性，並從而導致高遠交率。實施例3下表3給出田間種子混合模型的結果，顯示在不同傳代數的所有者商品種子收穫物中和使用特定代商品種子的種植者收穫物中bsc大豆種子的百分率.一行bsc種子種植於兩行黃色種子之間，這表示黃色種子對bsc種子的比例是約2:1，所用遠交率為5%。只收穫黃色行種子用以生產商品作物。表3tableseeoriginaldocumentpage16上述模型的公式在下表4和5中的對應行和列中tableseeoriginaldocumentpage17tableseeoriginaldocumentpage18表5tableseeoriginaldocumentpage19tableseeoriginaldocumentpage20根據以上內容，本領域技術人員可以知遺，可通過幾次傳代估計種植者田中黑色種子的量。也可注意到需要多少代來產生商品作物種子，其中通過遠交而產生實際含黑色種子。實施例4下表6和7表示機械混合種子模型的結果，顯示在不同傳代數的所有者商品種子收穫物中bsc大豆種子的百分率。模型的該實施例基於產生足夠種子以使種植者收穫3%的bsc。模型預測，為獲得種子混合物使之可以產生種植者的期望bsc收穫物，與特定代的商品作物混合所需的黑色種子量。模型也顯示，產生的黑色種子單位數如何根據黑色種子是否從混合物中分揀而變化。表8和9表示表6和7傳代的模型.tableseeoriginaldocumentpage22tableseeoriginaldocumentpage23tableseeoriginaldocumentpage24imageseeoriginaldocumentpage25tableseeoriginaldocumentpage26tableseeoriginaldocumentpage27tableseeoriginaldocumentpage28tableseeoriginaldocumentpage29tableseeoriginaldocumentpage30tableseeoriginaldocumentpage31tableseeoriginaldocumentpage32tableseeoriginaldocumentpage33實施例5在下面的實施例中，根據種植者遞送到穀倉的穀物計算許可費。在性狀費中，公頃bsc水平設定為2%.總穀物量是1000公噸。遞送到穀倉的bsc比例是0.8%.標準大豆的當前商品價格是$100/公叱.對含專有性狀的穀物，按對商品價的2.5%溢價估算性狀費。因而，許可費可按以下方式計算首先，穀倉根據穀物中bsc的存在確定穀物貨品中是否含專有性狀。然後穀倉進行以下計算確定性狀費含專有性狀的穀物比例=0.8%/2.0%=0.4含專有性狀的穀物量=1000公噸x0.4=400公A性狀費=(含性狀穀物)x(商品價)x(性狀費溢價％)=(400公喊)x($100/公叱)x(2-5%)=$1，000根據以上內容，本領域技術人員可以知道，種植者只根據專有穀物的含量支付專有性狀費.實施例6用機械混合產生一定水平雜合bsc種子以阻止種植者種子分揀的一種方法如下第一步在顯著面積，如10英畝或更多的田裡，以植物在行內成簇生長的高種植密度，種植一定量混合種子，混合種子是相同成熟度的純合黃色和純合黑色種子。第二步收穫所有混合種植產生的種子.其中收穫的黃色種子中0.5到1%對"I"基因(Ii)是雜合的並因此顯黃色，但有稍多的黑色或灰色，特別是在臍部和/或其周圍。第三步收穫種子重新種植，並根據顯性性狀的存在選擇Fl植物(葉形，或另一種除草劑抗性)。第四步收穫雜合黃色種子，再傳代以使之增加。第五步作為以上步驟的結果增加和分揀的種子混入含專有性狀的品種種子。根據以上內容，本領域技術人員可以知道，對種植者來說，要成功進行第五步中混合種子的分揀非常困難。34實施例7用機械混合以產生一定水平雜合bsc種子，以阻止種子分揀的方法如下第一步在顯著面積，如10莢畝或更多的田裡，以植物在行內成簇生長的高種植密度，種植一定量混合種子，混合種子是相同或相近成熟度的純合黃色和純合黑色種子。笫二步收穫所有混合種植產生的種子.其中收穫的黃色種子中0.5到1%對"I"基因(Ii)是雜合的，但由於種皮顏色的母性控制，黃色種子品系的所有種子都是黃色的，黑色種子品系的所有種子都是黑色的。笫三步所有收穫種子重新種植.第四步通過使用顯性植物表型(葉形，或另一種除草劑抗性)或通過因為母系植物的雜合性而使種子收穫物表現輕微著色，來鑑定雜合黃色種子。再次種植這些F2種子，並傳代以使之增加。第五步作為以上步驟的結果增加和分揀的種子與bsc種子混合，這只是簡單增加，品種黃色種子含專有性狀.替代方法第一次初步分揀後，不需從增加中分揀出純合黃色種子。判斷混合水平以補償該種子的存在.這不影響銷售給種植者或其收穫的黑色或雜合種子的量.根據以上內容，本領域技術人員可以知道，對種植者來說，要成功進行笫五步中混合種子的分揀非常困難。實施例8產生雜種大豆種子的大規模方法如下第一步抗除草劑的黑色種皮種子與不抗除草劑的黃色種皮種子以50/50混合，並隨機種植於足夠大的田中，使之產生至少l公項的Fl種子。有大約1%的遠交。笫二步一起收穫大田，以兩倍種植率將種子再種植於大田中。產生的遠交種子與自交種子一起再種植。笫三步向大田噴灑除草劑，除草劑抗性存在於親本材料中。這將消除所有自交的黃色常規種子.第四步收穫佘下的種子，使用顏色分揀裝置從自的黑色抗除草劑種子中分離F2種子。保留黃色種子.第五步增加第四步來的黃色種子(F2種子)，然後用於和含專有性狀的種子混合，作為分離的表型標記。根據以上內容，本領域技術人員可以知道，對種植者來說，要成功進行第五步中混合種子的分揀非常困難。實施例9下表10和11表示實施例8中所述的產生雜種大豆種子的大規模方法的模型。表10包含結果，表ll表示相應的公式。表10ABCDE12投入3田地大小(公項)104播種率(種子/公項)300000遠交率(％)l46增長率(x)40了混合率(％)2%89種子Kg單位混合單位10產生的Fl種子12000001807.236011產生的F2種子3600000054002161080012產生的F3種子12000000018000720036000036表11tableseeoriginaldocumentpage37注1粒種子的重量是0.00015kg.l單位-25kg實施例10以下產生雜種大豆種子的大規模方法使用上述實施例9中的模第一步雜種生產試驗田大小IO公項種植率300，000種子/公項Roundup②噴灑無總收穫300,000x5x40=360單位第二步選擇雜種後代(種植F1並收穫F2種子)大小120公頃種植率300，000種子/公項Roundup②噴灑早收穫所有剩餘物7，272單位第三步選擇F2種子並再次應用黑色RR種子選擇為黃色/M的種子=144單位第四步混合產品的最終生產(種植F2植物)大小240公項種植率100，000種子/公項Roundup②噴灑早總收穫4,320單位第五步機械混合與商品種子以2%比例混合笫4步的產品。當農場主種植由第5步產生的混合物時，所得收穫物將含約0.63%的黑色種子。參考文獻以下參考文獻，就其提供方法實例或其它細節以補充此處給出的內容的程度，特別在此引作參考.Nagai，I.1921.Agentico-physiologicalstudyontheformationofanthocyaninandbrownpigmentsinplants.TokyoUniv.Coll.ofAgr.J.8:1-92WoodworthC.M.,1921.Inheritanceofcotyledon,seedcoat,hilum，andpubescencecolorsinsoy-beans.Genetics6:487—553.WilliamsL.F.1952.Theinheritanceofcertainblackandbrownpigmentsinthesoy-bean.Genetics37:208—215.NagaiI.andS.Saite.1923.LinkedFactorsinSoybeans.38Jap.J.Bot.1:-12卜136.WilliamsL,F.1958.Alterationofdominanceandapparentchangeindirectionofgeneactionbyamutationatanotherlocusaffectingthepigmentationoftheseedcoatofthesoybean(Abs.)TenthInt.Cong.Genet.Pro"2:315-316.WilliamsL.F.1945.Off—coloredseedsintheLincolnsoybean.SoybeanDigest5(11)51—61.InternationalRulesforSeedTesting1999(SeedScienceandTechnology,Vol.27，Supplement,1999)InternationalSeedTestingOrganizationVanDeynzeA.andPauls,Peter.1994,"TheinheritanceofseedcolorandvernalizationrequirementinBrassicanapususingdoubledhaploidpopulations,"Euphytica74:77—83.39權利要求1.產生作物種子的方法，所述作物種子的種皮顏色有純合的和雜合的，該方法包括混合抗除草劑的次要種皮顏色的種子和不抗除草劑的主要種皮顏色的種子，以形成第一種種子混合物；在田間種植所述第一種種子混合物；一起收穫大田以產生第二種種子混合物；種植第二種種子混合物；向田間噴灑除草劑，除草劑抗性在抗除草劑種子中存在；收穫剩下的種子，產生經除草劑選擇的種子混合物；在除草劑選擇的種子混合物中，通過使用顏色分揀裝置將主要種皮顏色的種子與其它種子分離；和保留經分離的主要顏色種子，其種皮顏色有純合和雜合的。2.權利要求l的方法，其中作物是大豆、油菜或小麥。3.權利要求l的方法，其中作物是大豆。4.權利要求3的方法，其中主要種皮顏色是黃色。5.權利要求1的方法，其中通過用近紅外分光光度計測量550到650nm波長的總光反射或通過光學掃描技術可鑑定次要種皮顏色。6.權利要求3的方法，其中次要種皮顏色是純合黑色。7.權利要求6的方法，其中純合黑色種子的基因型是RRiiTT。8.權利要求1的方法，其中笫一種種子混合物中次要種皮顏色的種子和主要種皮顏色的種子之間的比率約為10/90到90/10。9.權利要求1的方法，其中笫一種種子混合物中次要種皮顏色的種子和主要種皮顏色的種子之間的比率約為50/50。10.權利要求l的方法，其中將第一種種子混合物種植於至少一公頃大小的田間。11.權利要求l的方法，其中將第二種種子混合物以高於第一種種子混合物的種植率種植。12.權利要求1的方法，其中將第二種種子混合物以第一種種子混合物種植率的兩倍種植。13.權利要求l的方法，其中再種植經分離的主要種皮顏色的種子一次，以產生更多代的種皮顏色純合和雜合的種子。14.權利要求l的方法，其中再種植經分離的主要種皮顏色的種子最多五次，以產生更多代種皮顏色純合和雜合的種子。15.權利要求6的方法，其中，次要種皮顏色的種子包含ii基因型。16.權利要求3的方法，其中，經分離的主要種皮顏色的種子包括ii或Ii基因型。17.權利要求l的方法，其中，不抗除草劑的主要顏色種皮的種子包含感興趣的性狀。18.權利要求17的方法，其中，所述感興趣的性狀是經遺傳修飾的性狀。19.權利要求l的方法，其中，次要種皮顏色的種子因包含經遺傳修飾的性狀而具有除草劑抗性。20.權利要求19的方法，其中，經遺傳修飾的性狀是草甘膦抗性。21.權利要求20的方法，其中，所述的除草劑是草甘膦。22.權利要求17的方法，其中0.1%到約10%重量的經分離的主要種皮顏色的種子與所述含感興趣的性狀的一般種子混合。23.權利要求22的方法，其中0.1%到約10%重量的經分離的主要種皮顏色的種子與所述的一般種子混合，以防止分揀出種皮顏色純合和雜合的種子。24.產生含專有性狀的雜種商品大豆作物種子的方法，該方法包括1)在相同的田地以分離的間行種植純合的黑色種皮大豆植物，作為含專有性狀的作物；2)收穫穀物；和3)至少再傳一代，再種植穀物並收穫穀物。25.權利要求24的方法，其中黑色種皮種子用於建立種子的機械混合，所述方法包括1)從收穫的穀物中分離黑色種皮種子；2)通過至少一代自花授粉擴增黑色種皮種子；和3)混合已知量黑色種皮種子和黃色種皮品種的種子。26.權利要求25的方法，其中進一步含有，在商業銷售前增加種子的最後一季中，種植含已知量黑色種皮種子和商品作物種子的混合物。全文摘要用種子或植株中的表型標記來定量檢測收穫物中的專有性狀，允許定量計算性狀的量，並幫助計算和收取性狀費用。種子的表型標記可以是種皮顏色，對於種皮顏色的表型差異，所述種子可以是純合也可以是雜合的。帶有種子顏色表型差異的商業栽培種子可以生長成包括幾種不同的種子顏色。可根據帶專有性狀的所有穀物估計性狀費用，而不管該穀物是由購買的種子生產，還是由前次收穫物保存的種子而來。文檔編號A01H1/04GK101653095SQ200910161190公開日2010年2月24日申請日期2002年2月8日優先權日2001年2月9日發明者G·A·彭納,S·A·布勒迪,T·W·康納,V·C·康西比多申請人:孟山都技術有限公司