一種蟾皮提取物乾粉吸入劑及其製備方法、應用的製作方法
2023-05-24 11:58:16 1
專利名稱：一種蟾皮提取物乾粉吸入劑及其製備方法、應用的製作方法
技術領域：
本發明涉及乾粉吸入劑，具體的說是蟾皮提取物製成的乾粉吸入劑、所述乾粉吸入劑的製備方法和在製備治療肺部腫瘤藥物中的應用。
背景技術：
華蟾素為蟾餘科(Bufonidae)動物中華大蟾餘Bufobufo gargarizans Cantor的乾燥皮經提取純化製得的提取物，具有解毒、消腫、止痛之功效，用於治療中、晚期腫瘤、慢性B型肝炎等症，其生理活性物質主要是蟾蜍毒素類(bufotoxins)及其水解產物蟾毒配基類(bufageins)、蟾毒色胺類(bufoteinines)等。目前華蟾素注射劑、口服液、片劑 已應用於臨床，對肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的療效。尤其華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經加工製成的水溶性製劑，治療原發性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和16%，且對化療和放療具有協同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應較少，但仍存在靜脈滴注會出現局部靜脈反應，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長期刺激致靜脈非特異性炎症；皮膚反應，主要表現為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現早搏、竇性心動過緩、竇性心動過速、房室傳導阻滯等心血管系統反應，產生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產生的心臟毒性反應。此外，針劑需要在醫院內使用，病人順應性差。而華蟾素口服製劑需經過肝臟的首過效應，起效慢，製劑生物利用度較低。肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細胞組成，使得藥物分子極易進入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應小等諸多優點。肺吸入給藥中乾粉吸入劑(drypowderinhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產生的氣流使藥物粉末霧化，進而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應用方便、吸收迅速、無肝臟首過、速釋和靶向定位的特點，是一種新型的給藥系統。肺癌的發病率在全世界範圍內正在迅速上升，已經成為癌症死因的第一位。當前的抗腫瘤藥物大多數都是注射給藥，這種全身給藥方式不利於藥物蓄積於腫瘤部位，導致藥物的療效降低，不良反應增多。採用定位給藥將抗腫瘤藥物運送到人體的腫瘤病患部位，使藥物在病患部位的濃度提高，對降低藥物的毒副作用、提高藥物的治療效果具有重大的臨床應用價值。採用經肺給藥方式的吸入劑可將蟾皮提取物直接傳遞肺癌的病灶，有利於提高蟾皮提取物對肺癌的療效並降低其對正常組織的毒副作用。目前具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物乾粉吸入劑的研究未見報導。
發明內容
發明目的本發明的一個目的是提供蟾皮提取物的肺部乾粉吸入製劑及其製備方法。本發明的另一個目的是提供本發明所述乾粉吸入劑在製備治療肺部腫瘤藥物中的應用。針對上述發明目的，本發明提供以下技術方案
一種蟾皮提取物乾粉吸入劑，其特徵在於它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料組成，蟾皮提取物(按照乾燥後所得固體物質量)與所述的輔料的質量比為1:0-1:110。
所述的一種蟾皮提取物乾粉吸入劑，是由蟾皮提取物加入輔料製成的粉末，粉末團聚形成可再分散顆粒；或者是蟾皮提取物負載在輔料顆粒表面形成顆粒；上述兩種顆粒的粒徑以D5tl計在O. 5-1000微米之間。所述的蟾皮提取物，為蟾蜍科動物中華大蟾蜍或黑眶蟾蜍等的皮經提取純化製得的提取物。蟾皮提取物的製備方法為
取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次O. 1-48小時，合併水提液，濃縮至相對密度為I. 01-1. 50 (60-100°C )，加乙醇(65%-100%，W/W)沉澱，使乙醇含量達到50% (W/W)以上，靜置或離心或過濾處理，取上清液回收乙醇，得到蟾皮提取物或者濃縮、乾燥後得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次O. 1-48小時，合併水提液，濃縮至相對密度為1.01-1.50(60-100°C)，加乙醇(65%-100%，W/W)沉澱，使乙醇含量達到50% (W/W)以上，靜置或離心或過濾處理，取上清液回收乙醇至無醇味，加乙醇(65%-100%，W/W)沉澱，使乙醇含量達到60% (W/W)以上，靜置或離心或過濾處理，取上清液回收乙醇至無醇味，得到蟾皮提取物或者濃縮、乾燥後得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量水，回流或者煎煮或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次O. 1-48小時，合併水提液，經分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、乾燥後得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1%_100%，W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次O. 1-48小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，加0-100倍水，靜置或離心或過濾處理，得到蟾皮提取物或者濃縮、乾燥後得到蟾皮提取物。或者，取蟾皮I份，加2-100倍量的一定濃度的乙醇(1%_100%，W/W)，回流或者超聲或者微波或者浸提或者滲漉提取1-10次，每次O. 1-48小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，加0-100倍水，經分子量500-5000的超濾膜超濾，得到蟾皮提取物或者濃縮、乾燥後得到蟾皮提取物。所述的輔料選用糖、醇、胺基酸、磷脂、表面活性物質、環糊精、高分子物質、硬脂酸鎂、硬脂酸、硬酯富馬酸鈉、微粉矽膠、滑石粉中的一種或幾種混合物。所述的糖，可選用半乳糖、乳糖、葡萄糖、果糖、蔗糖、海藻糖、棉子糖中的一種或幾種混合物；所述的醇，可選用甘露醇、木糖醇、麥芽糖醇、山梨醇中的一種或幾種混合物；所述的胺基酸，可選用甘氨酸、門冬氨酸、丙氨酸、色氨酸、異亮氨酸、蘇氨酸、穀氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、胱氨酸、賴氨酸、脯氨酸、精氨酸中的一種或幾種；所述的磷脂，可選用大豆磷月旨、卵磷脂、磷脂醯膽鹼、磷脂醯乙醇胺、合成磷脂中的一種或幾種；所述的表面活性物質，可選用肺源性表面活性物質如二棕櫚醯磷脂醯膽鹼、二月桂醯磷脂醯膽鹼、膽固醇中的一種或幾種混合物；所述的高分子物質，可選用符合安全要求的高分子，優選可生物降解的高分子物質例如白蛋白、澱粉、聚乳酸、聚乳酸-羥基乙酸、聚乙二醇、泊洛沙姆、透明質酸、透明質酸鈉、海藻酸鈉中的一種或幾種混合物。優選的方式為所述輔料為吸入用乳糖顆粒平均粒徑在45-220微米與微粉化乳糖平均粒徑在1-10微米的混合物，其中乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為1000:1-1:1。最優選的方式為乳糖顆粒與微粉化乳糖的質量比為100:1-7:1。一種製備蟾皮提取物乾粉吸入劑的方法，其製備步驟如下
將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，粉末與輔料混合均勻製成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧乾燥製成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，粉末與處方中剩餘輔料混合均勻製成吸入用粉末，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內。一種製備蟾皮提取物乾粉吸入劑的方法，其製備步驟如下
將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，粉末與輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；或者將蟾皮提取物與輔料混合均勻，通過粉碎 或噴霧乾燥製成粉末，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；或者將蟾皮提取物和處方中部分輔料混合均勻，通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，粉末與處方中剩餘輔料混合均勻，團聚形成可再分散顆粒，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內；或者將蟾皮提取物通過粉碎或噴霧乾燥製成粉末，粉末負載在輔料顆粒表面形成顆粒，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內。一種蟾皮提取物乾粉吸入劑在製備肺部腫瘤藥物中的應用。有益效果
I、肺具有極大的表面積，肺泡壁是由單層細胞組成，使得藥物分子極易進入血液，因此肺吸入給藥具有起效快、不良反應小等諸多優點。肺吸入給藥中乾粉吸入劑(drypowderinhalers, DPIs)不使用拋射劑和溶劑，靠患者自主呼吸產生的氣流使藥物粉末霧化，進而使藥物粉末傳遞到肺部，具有應用方便、吸收迅速、無肝臟首過、速釋和靶向定位的特點，是一種新型的給藥系統。目前有關於乾粉吸入劑多用於治療呼吸道和肺部的感染，但未見在肺部腫瘤的治療。同時，具有抗肺部腫瘤作用的蟾皮提取物乾粉吸入劑的研究也未見報導。目前蟾皮提取物注射劑、口服液、片劑已應用於臨床，對肝癌、肺癌、胃癌等具有較好的效果。尤其是華蟾素注射液，是從中華大蟾蜍皮經加工製成的水溶性製劑，治療原發性肝癌和中晚期肺癌分別獲得44%和56%的綜合有效率，瘤體縮小率分別為10%和16%，且對化療和放療具有協同作用。華蟾素注射液臨床雖然不良反應較少，但仍存在靜脈滴注會出現局部靜脈反應，引起滴注靜脈收縮痙攣而致疼痛，長期刺激致靜脈非特異性炎症；皮膚反應，主要表現為蕁麻疹和皮膚水皰樣損害；其次，少部分患者出現早搏、竇性心動過緩、竇性心動過速、房室傳導阻滯等心血管系統反應，產生的可能原因是華蟾素中少量的蟾毒配基所產生的心臟毒性反應。此外針劑需要在醫院內使用，病人順應性差。而蟾皮提取物口服製劑需經過肝臟的首過效應，起效慢，製劑生物利用度較低。使用蟾皮提取物的乾粉吸入劑主要是針對肺部腫瘤，直接作用於患部，同時不存在肝臟的首過效應，起效快，並且沒有上述的不良反應，對新藥開發具有極大的前景。2、由於蟾皮提取物是混合物，其中含有吲哚鹼類物質、華蟾酥毒基，脂蟾毒配基等，在實際操作中發現，加入一定配比的特定輔料能夠克服提取物粉碎到一定粒徑時而產生的靜電作用、內聚力等引起的團聚，減小吸溼性。申請人經過大量實驗獲知，特別是輔料選用乳糖顆粒與微粉化乳糖的混合物或者採用粉末團聚技術可以做成吸入性能優良的乾粉吸入劑。
具體實施例方式下面結合實例對本發明作進一步詳細說明，但本發明的範圍並不受這些實例的任何限制。實施例I
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加10倍量水，煎煮2次，每次I. 5小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 1-1. 2 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達60%，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至稠膏，60°C乾燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物採用氣流粉碎至D5tl在5微米以下，與粒徑在 45-70微米的乳糖按質量比1:10進行混合，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例2
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加12倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2-1. 3 (850C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達70%，靜置24小時,取上清液回收乙醇至無醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，噴霧乾燥，得到蟾皮提取物粉末，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、粒徑在45-80微米的乳糖、粒徑在20_50微米的亮氨酸按質量比10:100:1的比例進行混合，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例3
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加30倍量水，微波輔助提取3次，每次I小時，合併提取液，經分子量1000的超濾膜超濾，超濾液噴霧乾燥得到蟾皮提取物粉末，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例4
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加12倍量60%(W/W)的乙醇，回流提取2次，每次2小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，低溫冷藏48小時，濾過，加入O. 3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過，噴霧乾燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、乳糖、甘露醇、甘氨酸、二月桂醯磷脂醯膽鹼、卵磷脂、硬脂酸鎂按質量比1:5:5:2:0. 5:0.5:0. I的比例進行混合，氣流粉碎至粉末D5q在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例5
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加20倍量的無水乙醇，回流提取2次，每次I小時，合併提取液，回收乙醇，經分子量3000的超濾膜超濾，超濾液真空濃縮至比重為I. 20(45°C )，浸膏50°C真空乾燥，得到蟾皮提取物。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物、乳糖、膽固醇按1:8:1的比例進行混合，氣流粉碎至粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例6
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加15倍量的60% (W/W)乙醇，回流提取3次，每次I小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液加2倍量水沉，靜置24小時，高速離心，取上清液得到蟾皮提取物。2、吸入劑的製備分別將上述蟾皮提取物中所含固形物質量5倍、I倍、2倍的乳糖、聚乙二醇6000、白蛋白加入蟾皮提取物中，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下，將藥物粉末包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例7
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加10倍量的10% (W/W)乙醇，回流提取2次，每次I小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧乾燥，得到蟾皮提取物，粉末D5tl在5微米以下。 2、吸入劑的製備將蟾皮提取物藥物粉末、粒徑在10-90微米的甘露醇、微粉化矽膠按質量比10:89:1的比例進行混合，混合均勻後包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例8
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加10倍量的50% (W/W)乙醇，回流提取2次，每次I小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧乾燥，得到蟾皮提取物粉末。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物藥物粉末、甘露醇、亮氨酸按質量比10:100:3的比例進行混合，混合後加水適量，噴霧乾燥得到D5tl為4. 8微米的粉末，用有聚合物內襯的旋轉混合機混合，製成疏鬆的團聚物，團聚物的D5tl為390微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例9
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加10倍量的40% (W/W)乙醇，回流提取3次，每次
O.5小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、甘露醇、亮氨酸按質量比10:80:2的比例進行混合，用有聚合物內襯的旋轉混合機混合，製成疏鬆的團聚物，團聚物的D5tl為120微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例10
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2-1. 3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達70%，靜置24小時,取上清液回收乙醇至無醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=5. I微米)按質量比5:90:5的比例進行混合,混合均勻後包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以製劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到32. 6%，室溫條件下放置18個月後，製劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯著變化。實施例11
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2-1. 3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達70%，靜置24小時,取上清液回收乙醇至無醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=4. 9微米)按質量比3:95:1的比例進行混合,混合均勻後包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。 3、吸入劑肺部沉積率考察
按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以製劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到30. 2%，室溫條件下放置18個月後，製劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯著變化。實施例12
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加20倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2-1. 3(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達70%，靜置24小時,取上清液回收乙醇至無醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、德國美劑樂InhaLac 70乳糖、微粉化乳糖(D50=5. 5微米)按質量比3:77:11的比例進行混合,混合均勻後包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。3、吸入劑肺部沉積率考察
按照中華人民共和國2010年版藥典規定方法考察，以製劑中蟾蜍噻嚀含量計，其肺部沉積率達到29. 8%，室溫條件下放置18個月後，製劑中蟾蜍噻嚀的肺部沉積率沒有顯著變化。實施例13
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加10倍量水，煎煮2次，每次I小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 3-1. 4(85°C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達60%，靜置48小時,取上清液回收乙醇至無醇味,濃縮液加乙醇使含醇量達80%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，噴霧乾燥，粉末D5tl在5微米以下。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物粉末、亮氨酸按1:5的比例進行混合，混合後顆粒的D5tl為292微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例14
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加6倍量水，煎煮5次，每次I小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 05 (700C )，冷卻至40°C，加乙醇沉澱，使含醇量達65%，靜置48小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達70%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，減壓濃縮，真空乾燥得到蟾皮提取物。
2、吸入劑的製備將蟾皮提取物與亮氨酸按I: I的比例進行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與9倍量的甘露醇混合，混合後顆粒的D5tl為328微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例15
I、蟾皮提取物的製備取幹蟾皮洗淨，加30倍量水，煎煮I小時，提取液濃縮至相對密度為I. 30 (60°C )，冷卻至20°C，加乙醇沉澱，使含醇量達70%，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達90%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，減壓濃縮，真空乾燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物與泊洛沙姆按質量比10: I的比例進行混合，氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與8倍量的乳糖顆粒、I倍量的硬脂酸鎂混合，混合後顆粒的D5tl為653微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例16
I、蟾皮提取物的製備取蟾皮洗淨，加10倍量水，煎煮I小時，提取液濃縮至相對密度為I. 20 (500C )，冷卻至室溫，加乙醇沉澱，使含醇量達50%，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達70%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，減壓濃縮，真空乾燥得到蟾皮提取物。2、吸入劑的製備將蟾皮提取物氣流粉碎，粉末D5tl在5微米以下，將該粉末再與20倍量的乳糖顆粒混合，混合後顆粒的D5tl為286微米，包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
實施例17
按照實施例1-16獲得吸入劑，進行藥效學實驗，其中對比藥物為華蟾素注射液(市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法製備
蟾皮注射液A
取幹蟾皮洗淨，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2(850C )，冷卻至20°C，加乙醇沉澱，使含醇量達60%，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，加水至每毫升相當於原生藥5g，調節pH至6. 5,0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B
取幹蟾皮洗淨，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時，濾過，加入O. 3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過，加水至每毫升相當於原生藥5g，調節pH至7，O. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實驗
苯並芘經皮穿刺肺內注射的方法建立大鼠肺腫瘤動物模型，取建模大鼠200隻，隨機分為20組，每組10隻。每天I次，用藥7天。給藥方式第1-16組為實施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量為15g生藥/kg ;第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量15g生藥/kg ;第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量15g生藥/kg ;第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量15g生藥/kg ;第20組為生理鹽水對照組，腹腔注射10mL/kg。停藥次日處死大鼠，解剖大鼠肺臟，觀察肺臟病變情況。
實驗結果吸入劑給藥各組的大鼠的肺部出現腫塊或結節病變的發生率最低為10. 5%，最高為30. 3% ;華蟾素注射液組(市售)為60. 5%，蟾皮注射液A組為50. 1%，蟾皮注射液B組為60. 8%，生理鹽水組為100%，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組在肺部病變發生率上有顯著性差異(P〈0. 05)。實施例18
按照實施例1-16獲得吸入劑，進行藥效學實驗，其中對比藥物為華蟾素注射液(市售)、蟾皮注射液A和B，蟾皮注射液A和B按照以下方法製備
蟾皮注射液A
取幹蟾皮洗淨，加15倍量水，煎煮2次，每次2小時，合併濾液，濃縮至相對密度為I. 2(850C )，冷卻至20°C，加乙醇沉澱，使含醇量達60%，靜置24小時，取上清液回收乙醇至無醇味，濃縮液加乙醇使含醇量達85%，靜置48小時，濾過，回收乙醇至無醇味，加水至每毫升相 當於原生藥5g，調節pH至6. 5,0. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。蟾皮注射液B
取幹蟾皮洗淨，加20倍量60%乙醇，回流提取2次，每次2小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，加入3倍量水，低溫冷藏48小時，濾過，加入O. 3%的活性炭(W/V)，煮沸30分鐘，濾過，加水至每毫升相當於原生藥5g，調節pH至7，O. 45微米濾膜過濾，灌封，熱壓滅菌即得。藥效實驗
I、家兔VX2原位肺癌模型的建立
O荷瘤種兔的製作常規復甦VX2腫瘤冰凍細胞懸液，製成106/mL的活細胞懸液，取ImL接種於I只兔右後腿外側肌肉內，3周後於接種部位可捫及一直徑約30cm的腫塊，即製成荷瘤種兔。2)組織塊懸液的製備無菌條件下切取荷瘤種兔腿外側肌肉內的腫瘤，取呈魚肉樣生長旺盛的腫瘤組織，剪成泥狀。RPMI 1640培養液衝洗下過30目篩，去除單個細胞和過小的組織塊，篩上部分在RPMI 1640培養液衝洗下過20目篩，去除過大的組織塊。取篩下部分，離心沉澱後，取沉澱物2mL，加RPMI 1640培養液配製成組織塊懸液20mL。3)肺內接種所有家兔右胸壁脫毛,肌內注射速眠新合劑O. 8mL/kg麻醉後固定，常規消毒，取無菌三通接頭，分別接12號注射針頭、吸有兔自身血凝塊的ImL注射器及吸有VX2腫瘤組織塊懸液或細胞懸液ImL的注射器。在X線透視下，將12號針頭刺入兔右肺下葉內，回吸無血後,注入O. 4mL組織塊懸液或細胞懸液，然後注入O. 2mL兔自身血凝塊，拔出針頭，接種完畢。4)移植瘤生長情況的觀測全部家兔自接種後第3天起，每日對胸部進行層寬、層厚均為5mm的CT掃描，觀察腫瘤生長、胸腔內轉移情況。5)家兔VX2原位肺癌模型建立結果家兔全部有肺內腫瘤生長，接種成功率
100% O2、藥效實驗
取成功建模家兔200隻，隨機分為20組，每組10隻。每天I次，用藥12天。給藥方式第1-16組為實施例1-16的吸入劑吸入給藥，給藥劑量15g生藥/kg ;第17組腹腔注射華蟾素注射液(市售)，給藥劑量15g生藥/kg ;第18組腹腔注射蟾皮注射液A，給藥劑量15g生藥/kg ;第19組腹腔注射蟾皮注射液B，給藥劑量15g生藥/kg ;第20組為生理鹽水對照組，腹腔注射10mL/kg。停藥次日處死家兔，解剖家兔肺臟，剝離腫瘤組織，稱重。
實驗結果吸入劑給藥各組的家兔的抑瘤率最小為58. 7%，最高為64. 3% ;華蟾素注射液組(市售)為56. 3%，蟾皮注射液A組為45. 1%，蟾皮注射液B組為48. 9%，生理鹽水對腫瘤幾乎無抑制作用，吸入劑給藥各組與華蟾素注射液組(市售)、蟾皮注射液A組、蟾皮注射液B組、生理鹽水組的抑瘤率有顯著性差異(P〈0. 05)。
權利要求
1. 一種蟾皮提取物乾粉吸入劑，其特徵在於它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料 組成； 所述蟾皮提取物的製備為取蟾皮洗淨，加10倍量的10%乙醇，回流提取2次，每次I小時，合併提取液，回收乙醇至無醇味，濃縮液高速離心，取上清液得到蟾皮提取物，噴霧乾燥，得到蟾皮提取物，粉末D5tl在5微米以下； 所述吸入劑的製備為將蟾皮提取物藥物粉末、粒徑在10-90微米的甘露醇、微粉化矽膠按質量比10:89:1的比例進行混合，混合均勻後包裝入膠囊或泡罩或乾粉吸入器內，獲得吸入劑。
全文摘要
本發明涉及乾粉吸入劑，具體的說是一種蟾皮提取物製成的乾粉吸入劑、所述乾粉吸入劑的製備方法和在製備治療肺部腫瘤藥物中的應用。一種蟾皮提取物乾粉吸入劑，其特徵在於它是由蟾皮提取物與醫學上可接受的輔料組成，蟾皮提取物與所述的輔料的質量比為1:0-1:110。將一種蟾皮提取物製成乾粉吸入劑，可直接作用於肺部病患，降低毒副反應的發生，提高藥物的生物利用度，既可克服口服製劑起效慢，具有肝臟首過效應，及全身性毒副作用，製劑生物利用度較低等缺點；同時也可解決針劑的使用不便，病人順應性差等問題。
文檔編號A61P35/00GK102961408SQ20121055789
公開日2013年3月13日 申請日期2011年6月2日 優先權日2011年6月2日
發明者陳彥, 張振海, 賈曉斌, 王晉豔, 賀俊傑 申請人:江蘇省中醫藥研究院