生物活性物質的製備方法及其應用與流程

2023-05-24 10:56:26

本發明涉及健康保健及美容領域，具體涉及生物活性物質的製備方法及其應用，特別涉及蜂皇胎因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液在製備護膚品方面的應用，尤其是在潤膚霜方面的應用。

背景技術：

1949年lawrence發明轉移因子(transferfactor，tf)，1969年levin首先應用tf治療一例免疫缺陷病獲得成功。胎盤製備轉移因子，實驗研究及臨床應用具有生物活性肽、核酸、23種微量元素等。人胎盤含有特異的轉錄因子312種(23.p65)；臨床試用對白塞氏綜合症、硬皮病、銀屑病、白細胞減少症、乙型腦炎、慢性B型肝炎、C肝、復發性單純皰疹、紅斑狼瘡治癒以及配合化療治療惡性腫瘤，均有一定效果。可營養保護皮膚彈性柔軟，對皮膚有美容作用。對急慢性皮炎、皮膚色斑(老年斑)色素沉著顯著消退。

人胎盤有312種轉錄因子(tf)本品含量：以生物活性多肽計大於2mg/ml。

①胎盤tf是美容聖品，可以改善粗糙老化皮膚，淡化皮膚上的斑點，美白皮膚。胎盤tf既無抑制酪氨酸酶的作用，也沒有破壞黑色素或還原黑色素的作用。它的美白機理可以從「活化細胞」的角度來解釋：細胞被活化，新陳代謝的功能提高，色素代謝的功能增強，角質更新代謝正常，皮膚就自然白皙。

②核酸：(dnarna)本品含量：e＝7.8，a260/a280比值大於1.8以上。脫氧核糖核酸(deoxyribonucleic、dna):細胞核內的功能為：複製dna及蛋白質的合成。dna缺乏時，皮膚無適當的新生細胞補給，就易形成老化現象。臨床應用：小分子胎盤dna可以被皮膚吸收，合成新細胞的遺傳構件，使細胞處於生命力旺盛的狀態，細胞更新速度快，從而起到抗皺抗衰老作用。

③微量元素：本品胎盤轉錄因子(hp-tf)含23種微量元素(見表4)。微量元素在抗衰老中的作用是近年國際上衰老生物學研究的熱點。大量研究表明：細胞複製、抑制自由基、提高免疫功能與抗衰老密切的微量元素主要有鋅、硒、胎盤硒(se)含量0.18-0.52mg/kg、銅、錳。

④膠原蛋白(collagen)、hp-tf水解胺基酸含量(見表2)。可溶性膠原蛋白水解含15種胺基酸營養物質，易被皮膚吸收，能促進表皮細胞活力，增加營養，有效消除皮膚的細小皺紋。

蜂皇胎、蜂王漿功能：可促進蛋白質合成，加速機體的新陳代謝，增強組織細胞再生能力。蜂皇胎因子與蜂王漿因子是納米小分子生物活性物質，能滲透入皮膚組織，可以使皮膚保持嬌嫩、細膩、有光澤並富有彈性。因內分泌失調引起的各種皮膚色斑、色素沉著、妊娠斑、老年斑基本消退治癒。

蛋白質組學近十餘年迅速成長和成熟的學科。蛋白質組學綜合的觀點：即為了建立和維持一個正常運行的生物系統，蛋白質是如何行使功能和協同作用的。

提取的核酸與多肽經蛋白質可逆性實驗：可變殘基(短肽)的改變不影響蛋白質的構象與功能。本品經過變溫實驗可以使胺基酸序列(短肽)回復成一級結構。變性復性實驗證明胺基酸、核糖核酸酶回復空間結構和功能。臨床治癒自身免疫缺陷、sle、behcet、黃褐斑等疾病。

蛋白質是生物體內功能性高分子(也稱為功能性大分子)：蛋白質在生物體內的主要功能包括催化生物體內的反應(酶)、代謝調節(多肽激素，如胰島素)、機體運動(肌肉蛋白、纖毛蛋白和鞭毛蛋白)、物質運輸(血紅蛋白和膜運輸蛋白)、免疫(抗體)、遺傳控制(複製裝置—dna聚合酶和螺旋-去穩定蛋白共同構成)[6]。

目前基因治療的概念有了較大的擴展，凡是採用分子生物學的方法和原理，在核酸水平上開展的疾病治療方法都可稱為基因治療。帶有遺傳信息的dna片斷稱為基因。

基因治療有兩種途徑，一是exvivo法(體外法)，是將受體細胞在體外培養，轉入外源基因，經過適當的選擇系統，把重組的受體細胞回輸到患者體內，讓外源基因表達以改善患者症狀；二是invivo法(體內法)，此法不需要細胞移植，直接將外源dna注射至肌體內，使其在體內表達而發揮治療作用(吸入、口服、肌內注射、靜脈注射)。invivo法比exvivo法更簡單、直接和經濟，治療也比較確切，常用的體內基因直接轉移手段有病毒介導、脂質體介導和基因直接注射等。我們1977年發明人胎盤轉移因子(注射、口服、外用)。hp-tf內含有核酸(dna、rna)和蛋白質胺基酸(小分子多肽)的混合物，在某些情況下核酸是以其和蛋白質構成的絡合物，形式表現生物活性的。其體內法(invivo)基因治療作用；對患者基因置換(genereplacement)，基因修正(genecorrection)，基因修飾(geneaugmentation)，基因激活(geneactivation)，基因失活(geneinactivation)，免疫調節(immuneadjuetment).臨床應用用治癒多種疾病，是體內法(invivo)基因療法的應用[22]。

基因與蛋白質修飾：dna，又稱脫氧核糖核酸，也稱「遺傳微粒」，是染色體的主要化學成分。dna是一種分子，可組成遺傳指令，以引導生物發育和生命機能運作，其主要功能是長期性的信息儲存，可比喻為「藍圖」或「食譜」，其中所包含的指令，是建構細胞內其他化合物如蛋白質與rna所必需的。帶有遺傳信息的dna片段稱為基因。其他的dna序列，有些直接以自身構造發揮作用，有些則參與調控遺傳信息的表達。

早在20世紀30年代就已經確定了dna的化學構成，它由4種稱為核苷酸(nucleotide)的基本單位組成，其中鹼基有4種，分別是腺嘌呤(adenine)、鳥嘌呤(guanine)、胸腺嘧啶(thymine)和胞嘧啶(cytosine).dna分子是由許多核苷酸連接而成與另一個核苷酸的磷酸基連接在一起，形成糖-磷酸基骨架，構成了dna主鏈。

奧柯亞題為「合成的多核苷酸和胺基酸密碼v「的論文，用亞硝酸處理菸草花葉病毒的rna會導致單個鹼基氧化脫氧，這種脫氧作用會發生兩種變化，使尿嘧啶取代了胞嘧啶，即導致c-u的置換；使鳥嘌呤取代了腺嘌呤，即a-g的置換。由於核苷酸鏈上的鹼基置換，改變了它們的核苷酸序列，從而造成了這個蛋白質多肽中在某個特定位置上一個胺基酸被另一個胺基酸被置換。

核酸的特性完全是由它的鹼基序列表示的，而這個序列就是特定蛋白質胺基酸序列的密碼。也就是說核酸中的核苷酸序列規定了蛋白質中的胺基酸序列。

核酸體是蛋白質合成的細胞器，執行著蛋白質合成的功能。以完成將遺傳信息從mrna到多肽鏈的轉錄。

肽鏈則是由一個胺基酸的羰基與另一個胺基酸的氨基縮去一個水分子生成的，以這種方式結合的胺基酸鏈叫做多肽。由於肽鍵是共價的，所以相對是穩定的(cooh,nh2)。

hp-tf是蛋白質組學應用：蛋白質一級結構是其空間構象的基礎，參與功能活性部位的胺基酸殘基或處於特定構象關鍵部位的胺基酸殘基的改變即會引起功能的改變，人類有很多疾病都與蛋白質異常有關，如鐮刀形細胞貧血病(sickle-cellanemin)根本原因是由於遺傳基因突變導致血紅蛋白分子中胺基酸殘基被替換。稱為分子病(moleculardisease)。

hp-tf核酸與活性肽能治療：自身免疫病、紅斑狼瘡(被治癒患者已健康工作32年)、les病毒、乙型與C型肝炎、behcet綜合症。

胺基酸的一級結構由基因決定，胺基酸按遺傳密碼的順序通過肽鍵連接起來；胺基酸一級結構是空間結構的基礎，一級結構決定了二級、三級、四級結構。治療多種疾病有效，是基因與蛋白質(活性肽)的互補與互助，糾正人體細胞代謝，信號傳導和調控網絡的組織結構作用，使病變組織/細胞快速凋亡，恢復正常功能。

技術實現要素：

技術問題：針對現有技術的不足，本發明所要解決的第一個技術問題是提供生物活性物質的製備方法，該生物活性物質為蜂皇胎轉錄因子、胎盤轉錄因子或蜂王漿轉錄因子中的一種。

本發明要解決的第二個技術問題是提供了蜂皇胎轉錄因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液在護膚品方面的應用。

本發明要解決的第三個技術問題是提供一種潤膚霜。

本發明要解決的第四個技術問題是提供一種潤膚霜的製備方法。

蜂皇胎因子、蜂王漿因子、胎盤轉錄因子複方組合，是美容聖品。

本發明的潤膚霜由核酸、多肽轉錄因子等多種複合物組成，進入人體，替換修飾病變基因細胞符合蛋白質組學理論與實踐相結合的應用。

技術方案：為了解決上述技術問題，本發明提供了生物活性物質的製備方法，包括以下步驟：

1)預處理：收集檢測hiv、hbv、hcv、梅毒為陰性的蜂皇胎、胎盤或蜂王漿去雜物，置-18℃以下冷藏；

2)將步驟1)預處理後的蜂皇胎、胎盤加入生理鹽水稀釋，蜂王漿用95％乙醇稀釋，然後分別用高速勻漿或膠體磨成勻漿置-18℃以下冷凍24～48小時；

3)將步驟2)得到的三種勻漿分別提取凍溶後，用溫控1～4℃3000轉/分，離心15分鐘，留上清液置於-18℃以下24～48小時冷凍、取冷凍液置4-10℃融化得到溶解液，取溶解液細濾，採用中空纖維分子量3000納濾膜超濾得到的濾液即分別為蜂皇胎轉錄因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液。

其中，上述步驟2)中的生理鹽水的質量濃度為0.9％。

本發明內容還包括上述的製備方法製備得到的蜂皇胎轉錄因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液在護膚品方面的應用。

一種潤膚霜，其含有製備得到的蜂皇胎轉錄因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液。

其中，上述潤膚霜包括以下組分：

水相：甘油、氫氧化鉀、氫氧化鈉、尼泊金甲脂、去離子水；

油相：硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、1618醇、尼泊金丙脂、鵝油；

添加劑：ve、蜂皇胎轉錄因子提取液、胎盤轉錄因子提取液、蜂王漿轉錄因子提取液、王漿精、尼泊金乙脂、香精。

單硬脂酸甘油酯：是補助乳化劑有潤膚作用，膏體細膩、潤滑、穩定；冰凍後水分不易離析。

1618醇：助乳化劑具有潤膚、粘稠、促進(ab為w/o)皮膚水合作用。賦予皮膚柔軟和平滑(a25為o/w)的感覺，可避免膏霜在長時間放置和儲存過程中出現變稀、變粗現象。

甘油、鵝油保溼潤膚作用；

koh：硬脂酸與鹼類發生中和作用生成硬脂酸皂。為乳化劑。

胎盤tf、王漿精、蜂皇胎tf等：修復皮膚組織『補充水分營養』防紫外線『抗氧化作用』。

其中，上述潤膚霜按重量百分比包括以下組分：硬脂酸8～10％、單硬脂酸甘油酯0.5～1％、1618醇3～7％、尼泊金丙脂0.1～0.3％、鵝油1～5％、甘油5-12％、氫氧化鉀0.1-0.6％、氫氧化鈉0.1-0.6％、尼泊金甲脂0.1-0.6％、餘量為去離子水；添加劑按油相加水相乳化後總量的百分比加入ve0.1％、蜂王漿轉錄因子提取液5-15％、蜂皇胎轉錄因子提取液5～15％、胎盤轉錄因子提取液5～15％、王漿精5％、尼泊金乙脂0.1％、香精0.5％。

油相：硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、1618醇、尼泊金丙脂、鵝油；

水相：甘油、氫氧化鉀、氫氧化鈉、尼泊金甲脂、去離子水；

添加劑：ve、蜂王漿提取液、蜂皇胎因子提取液、胎盤轉移因子提取液、尼泊金乙脂、王漿精、香精。

本發明內容還包括上述的潤膚霜的製備方法，包括以下步驟：

1)將水相、油相分別水浴加溫，水相75-95℃、油相70-85℃，溶解後留置20分鐘；

2)油相過濾後，攪拌加入水相中，攪拌同一方向混勻，中速乳化；

3)乳化後65℃加入添加劑攪勻成膏；

4)靜置陳化24小時，分裝。

有益效果：相對於現有技術，本發明具有以下優點：

1)本發明的轉錄因子潤膚霜是基因治療：潤膚霜是從胚胎幹細胞(es)提取核酸(dnarna)活性多肽、多種活性物質；可以治癒皮膚病：紅斑狼瘡les、青春痤瘡、日光性皮炎、過敏性皮炎、黃褐斑、老年斑消退效果顯著。具有活化細胞新陳代謝功能，提高再生速率，使病變細胞快速調亡，新生皮膚自然白皙。

2)本發明的轉錄因子具有生物活性物質：胎盤和胎兒來自同一個受精卵，遺傳物質相同(30.p62)。人胎盤含312種轉錄因子。對人體治療疾病優點：取材方便、製品安全、應用(外用、口服、注射)有效。

3)本發明的潤膚霜美白、抗衰、除皺成分功能介紹：蜂皇胎、蜂王漿、人胎盤提取的轉錄因子無過敏，是3000以下小分子納米技術。皮膚可吸收、深入表皮、真皮、皮下組織。理化指標、生物活性、滅病毒、細菌(採用：wilfriedfranke(德國)大批量生產人血dle滅毒方法的改進)產品安全、有效。

具體實施方式

實施例1

1、材料與方法

1.1材料：蜂皇胎、蜂王漿購於金湖縣老施蜂場。胎盤購於金湖縣醫院、揚州醫院。其他試劑均為常規試劑。

1.2主要儀器：紫外分光光度計、高速低溫離心機、濾器(中空纖維)、生化自動分析儀、淨化工作室、淨化工作檯、膠體磨、顯微鏡、冰櫃、冰箱、真空乾燥箱、恆溫水浴箱，批量投產品則另加設備。大批量生產增加淨化設備：空氣淨化室、去離子水設備、生產機械設備。

1.3蜂皇胎因子提取方法：

①預處理：

②處理合格蜂皇胎加入0.9％取蜂皇胎加0.9％生理鹽水，1.5:1(3kg蜂皇胎幼蟲加2kg0.9％氯化鈉冷藏溶液)混勻、高速勻漿。置-18℃以下冷凍24小時。

③離心：用溫控1℃3000轉/分，離心15分鐘，留上清液置於-18℃以下24小時冷凍；

④取冷凍液置5℃冷櫃融化得到溶解液，取溶解液細濾(100目)；

⑤鈉濾：採用中空纖維分子量3000納濾膜，超濾得到的濾液即為蜂皇胎轉錄因子。

1.4胎盤轉錄因子提取方法：

①預處理：②取合格胎盤加0.9氯化鈉溶液，1:1(5kg胎盤加5kg冷藏5℃0.9％氯化鈉)高速勻漿，置-18℃以下冷凍48小時。

③凍融離心，用溫控離心機1℃3000r/min離心15min。

④取上清液，置-18℃以下48小時冷凍。

⑤凍融：取冷凍液置10℃融化。

⑥離心：取溶解液溫控4℃3000轉/分離心15分鐘。

⑦納濾：採用中空纖維分子量3000納濾膜，超濾得到的即為胎盤轉錄因子。

1.5蜂王漿轉錄因子提取方法：

①預處理：

②處理合格的鮮王漿凍融加95％乙醇1:1(10kg蜂王漿加-18℃冷凍95％乙醇10kg)膠體磨勻漿，置-18℃冰櫃冷凍24小時。

③離心：提取凍溶後取王漿液溫控1℃3000轉/分15分鐘，留上清液置於-18℃以下36小時冷凍。

⑤凍融：取冷凍液置4℃冰櫃12小時，細濾，留濾液。

⑥納濾：用中空纖維分子量3000濾膜，超濾得到蜂王漿轉錄因子。

1.6質控：

1)、外觀：上述蜂皇胎因子、蜂王漿轉錄因子、胎盤轉錄因子的溶液為澄清白色或微黃色液體。

2)、蛋白質：用20％磺基水楊酸，不得出現輕微混濁或沉澱。

3)、ph值：電位法測澱ph應為6.5-7.5

4)、hbsag、hcv、hiv標準試劑盒小於2ng/ml(經濃縮10倍)，成品經60℃10小時滅菌檢測結果應為陰性。

5)、紫外吸收值lod值測定。紫外吸收最大值在250-260nm之間紫外吸收光e＝7.8.a260/a280nm大於或等於1.8，多肽含量大於2mg/每單位ml，核糖含量80ug/ml。

6)、層析分析用葡聚糖g25(sephaclex)可見明顯2個高峰。260nm/280nm有最大吸收值。

7)原子吸收光譜測定產品金屬元素，微量元素。

胎盤轉錄因子微量元素分析結果：

取hp-tf(人胎盤轉錄因子)hs-tf(人脾轉錄因子)ss-tf(豬脾轉錄因子)作微量元素分析結果：

表1hp-tf、hs-tf和ss-tf微量元素分析

註：1.儀器。美國j-aⅰ100，真空型63道等離子發射光譜儀；

2.濃度單位ppm。1ppm＝1ug/ml；

3.na超長(tf用0.9％nacl溶解)。

8)、生物學性質：無菌試驗，按生物製品規程檢測應無菌生長熱原試驗：家兔試驗，豚鼠皮下注射法，無化膿、無壞死動物健在。

9)生物活性變性與復性實驗：

①蛋白質結構復性，一、二級結構：

胺基酸以肽鍵相互連接構成的線性序列稱為蛋白質的一級結構。

蛋白質的變性機理：蛋白質變性的本質就是蛋白質分子次鍵的破壞引起二級、三級、四級結構的變化，失去原有的生物活性，往往減弱或喪失等性質的改變在溫和條件下，蛋白質的空間構象只是鬆弛而不是混亂，氫鍵斷裂，鹼基間的堆積力遭到破壞。當變性因素解除後蛋白質可恢復到天然構象，這種變性稱可逆變性。

本試驗用胎盤轉錄因子多肽，經變溫後，轉錄因子小分子肽段恢復原狀一級結構，具有生物活性。

②胎盤轉錄因子變性與復性實驗步驟：

a、取成品胎盤轉錄因子(hp-tf)10ml毫升/支，(白色玻璃安瓶，透明液，含多肽12mg/支)取4支。

b、置水浴箱加溫20-37℃，輕輕搖動10-30分鐘內出現肉眼可見明顯絮狀。

c、吸取溶液0.05-0.1毫升置載玻片上，用低倍和高倍鏡觀察。

d、可見明顯小分子多肽復性一級結構長鏈，形態、大小均勻，數量10-20條(低倍視野)高倍鏡可見鏈狀排列一級結構。無其它形態及雜物。

e、胎盤轉錄因子(hp-tf)解鏈：另取同一批hp-tf成品10支(每支10毫升含多肽12毫克)，置25-37℃水浴箱，輕輕搖動10-30分鐘內出現肉眼可見絮狀(即一級結構形成)，繼續置水浴箱25-37℃,10-30分鐘，從絮狀出現，又恢復成透明液體(溫度與核糖體連接多肽)證明hp-tf具有生物活性。

③蛋白質結構復性一級二級結構優點：

本發明優點：

a、可在顯微鏡下觀察肽鏈真實一級結構恢復。

b、本發明可供批量檢測抽檢，取材方便。

c、工藝操作簡單不需另加試劑。

d、結果快速、真實可靠的生物活性檢測方法之一。

④用e玫瑰花試驗激活率，高於對照30％；e-rfc試驗，(e玫瑰花試驗)是指胎盤淋巴細胞連結綿羊紅細胞，原始百分率。淋巴細胞連結綿羊紅細胞，增加胎盤轉錄因子，是激活後增加百分率，激活率高於原始對照組30％(表1二批樣品結果)。

生物活性試驗—淋巴細胞e受體的激活法。肝素抗凝的臍帶血液，加淋巴細胞分離液，吸出淋巴細胞層，用hank液洗滌2次後，再用hank液配成5×103的淋巴細胞懸液。取0.1ml淋巴細胞懸液加0.2mlhptf，混勻置37℃水浴衝30分鐘，使之激活，然後加1％綿羊紅細胞0.2ml，按e-rfc試驗法，觀察計數200個淋巴細胞得活性t淋巴細胞數，結果如表2說明hp-tf具有生物活性。

淋巴細胞e受體激活法(表2)

表2hp-tf(胎盤轉錄因子)對t細胞e受體的激活率

10)實驗室及開始批量生產，可測游離胺基酸及肽譜分析，游離鹼基的分析。hp-tf的胺基酸含量測定：

hp-tf加鹽酸水解後上機0.4mg蛋白/毫升經hitdch835-50胺基酸自動分析儀檢測，結果見(表3)。每單位hp-tf含水解胺基酸總量為2.1946mg較文獻報導略高。胺基酸含量，檢測進樣1毫升含1.0973mg/1ml，送檢樣品含量2毫升。臨床用量一次一個單位，2毫升＝2.194mg/2ml(0.4mg檢測儀器乾燥操作方法)

表3hp-tf水解胺基酸含量

8)本發明的人胎盤因子、蜂皇胎轉錄因子、蜂王漿轉錄因子的多肽含量檢測結果；

表4

實施例2

基本同實施例1一樣，所不同的在於，胎盤轉錄因子提取方法步驟2採用的膠體磨勻漿；蜂王漿轉錄因子提取方法中步驟2)採用的是處高速勻漿步驟；

本發明的人胎盤因子、蜂皇胎轉錄因子、蜂王漿轉錄因子的多肽含量檢測結果；

表5

實施例3

基本同實施例1一樣，所不同的在於，蜂皇胎轉錄因子和蜂王漿轉錄因子的提取方法步驟3)中的離心溫控為4℃3000轉/分，

本發明的人胎盤因子、蜂皇胎轉錄因子、蜂王漿轉錄因子的多肽含量檢測結果；

表6

影響轉錄因子含量因素：

a、原材料質量：細胞含量大，濃度高，含水量大濃度低。

b、高速勻漿，凍融，離心，操作過程：保證細胞破碎好，得率高。凍融時間，溫度控制要求準確。

c、操作室溫2-20℃以下，以防止產品生物活性喪失。

d、超濾：濾膜質量，保養，清洗，操作，電壓，流速調節，流速過快濃度偏低。

實施例4潤膚霜製備工藝

原料組成：硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、1618醇、甘油、koh、tf蜂皇胎因子、胎盤肽轉移因子(核酸、多肽)、王漿精、防腐劑、去離子水、香精、ve、鵝油。

配方：

添加劑按油相加水相乳化後總量的百分比加入:

潤膚霜的製備方法：

1)將水相、油相分別水浴加溫，水相95℃、油相85℃，溶解後留置20分鐘；

2)油相過濾後，攪拌加入水相中，攪拌同一方向混勻，中速乳化；

3)乳化後65℃加入添加劑攪勻成膏；

4)靜置陳化24小時，分裝。

實施例5

與實施例4基本一樣，所不同的是，硬脂酸8％、單硬脂酸甘油酯0.5％、1618醇7％、尼泊金丙脂0.3％、鵝油1％、甘油5％、氫氧化鉀0.1％、氫氧化鈉0.6％、尼泊金甲脂0.1％、餘量為去離子水；添加劑按油相加水相乳化後總量的百分比加入ve0.1％、蜂王漿提取液15％、蜂皇胎因子提取液15％、胎盤轉移因子提取液15％、王漿精5％、尼泊金乙脂0.1％、香精0.5％。本實施例中的製備過程中，水相、油相分別水浴加溫時，水相75℃、油相70℃。

實施例6

與實施例4基本一樣，所不同的是，硬脂酸9％、單硬脂酸甘油酯0.8％、1618醇3％、尼泊金丙脂0.1％、鵝油5％、甘油12％、氫氧化鉀0.6％、氫氧化鈉0.1％、尼泊金甲脂0.6％、餘量為去離子水；添加劑按油相加水相乳化後總量的百分比加入ve0.1％、蜂王漿提取液10％、蜂皇胎因子提取液10％、胎盤轉移因子提取液10％、王漿精5％、尼泊金乙脂0.1％、香精0.5％。本實施例中的製備過程中，水相、油相分別水浴加溫時，水相85℃、油相80℃。

實施例7潤膚霜應用安全有效無毒副作用

臨床應用：實施例4～6的潤膚霜經臨床5000多人應用，每日2-3次，人體皮膚驗證，其效果良好。療效觀察治癒及有效率：青春痤瘡75％、日光性皮炎67％、過敏性皮炎87％、蝴蝶斑58％、黃褐斑52％、小皺紋消退62％、老年斑消退50％、粉刺雀斑消退75％、皮膚黑色素消退50％、皮麟粗糙65％。