一種用於檢測犬副流感病毒試劑盒的製作方法

2023-04-25 03:52:26

本發明涉及病毒檢測技術領域，特別涉及一種用於檢測犬副流感病毒試劑盒。

背景技術：

犬副流感是由犬副流感病毒(canineparainfluenzavirus，cpiv，下文稱之為cpiv)引起犬的一種傳染性疾病。該病流行廣泛，病毒侵害犬呼吸系統，引起呼吸系統炎症，臨床表現為發熱、咳漱、流涕，常和細菌、支原體及其他病毒混合感染，使犬病情加重。犬副流感是目前養犬業，尤其是寵物犬的主要傳染病之一。

cpiv是腮腺炎病毒屬，副黏病毒科成員，病毒基因組為單鏈，不分節段，負鏈rna病毒，長約15kb，包含編碼8個結構蛋白(np、p、v、m、sh、hn、f、l)的7段基因。其中，核衣殼蛋白(np)為病毒核衣殼的主要組成成分，含量最高，與病毒rna結合，高度保守，與病毒粒子的組裝、複製和刺激機體產生免疫應答等密切相關。np蛋白在病毒感染初期即可誘導機體產生強烈的抗體反應並產生高滴度的特異性抗體。

隨著國民生活水平的提高，寵物犬飼養量逐年上升，因此對犬和犬主人的健康保駕護航，加強犬副流感的檢測及防治非常重要。迄今，國際上用於犬副流感檢測的方法可以分為抗原檢測和抗體檢測兩大類。對抗原的檢測主要包括病毒的分離鑑定，rt-pcr，膠體金試紙條等。而針對抗體的檢測方法有免疫螢光法，中和實驗和血凝抑制試驗等，atp螢光檢測儀器是通過微弱螢光通過光電傳感器轉換為電信號，通過模數轉換，結合單片機完成數據讀取分析，從而得出檢測結果，然而現有的atp螢光檢測儀器在檢測過程中，為加強信號傳輸，通常會設置放大電路，然而放大電路會產生偏置電流，引起誤差電壓，從而影響光電傳感器的檢測信號，降低了檢測精確度，同時其整體的遮光效果較差，也易影響檢測數據。

技術實現要素：

本發明用於解決上述不足，提供了一種用於檢測犬副流感病毒試劑盒，降低了檢測誤差，提高了檢測特異性。

本發明所解決的技術問題可以採用以下技術方案來實現：

一種用於檢測犬副流感病毒試劑盒，包括遮光檢測盒、all-readypcrbeads全預混凍乾粉、陽性對照組、陰性對照組、光電檢測器，所述遮光檢測盒與所述光電檢測器配合安裝，所述光電檢測器內設有一光電檢測模塊，所述all-readypcrbeads全預混凍乾粉包括犬副流感病毒rna螢光定量pcr檢測所需的反轉錄酶、核酸擴增酶、反應buffer及特異性引物和探針；所述陰性對照組採用無犬副流感病毒rna的酶水，陽性對照組為體外轉錄犬副流感病毒rna，所述光電檢測模塊包括一光電二極體，所述光電二極體陽極端連接一誤差校對電路，所述光電二極體陰極端連接一運算反饋電路，所述誤差校對電路另一端連接第一放大電路，所述光電二極體輸出端處連接設有第二放大電路，所述光電二極體通過測量槽與所述遮光檢測盒配合安裝，所述遮光檢測盒內設有一檢測腔，所述檢測腔呈上下垂直貫通結構，所述檢測腔頂端設有置樣槽，底端設有對接槽，所述對接槽與所述測量槽對應配合。

所述誤差校對電路由校對電容、校對電阻及校對pin二極體相互並聯連接構成，所述運算反饋電路由反饋電容、反饋電阻及反饋pin二極體相互並聯連接構成，所述校對電容和反饋電容型號相同，所述校對電阻和所述反饋電阻型號相同，所述校對pin二極體和所述反饋pin二極體型號相同。

所述第一放大電路和所述第二放大電路均採用ad8605放大器。

所述遮光檢測盒頂端設有一遮光蓋，所述遮光蓋用於封蓋所述置樣槽。

還包括一樣品架，所述樣品架上設有若干試管孔。

本發明通過與現有技術相比具有如下有益效果：本發明通過優化設計，結合遮光檢測盒並優化光電檢測模塊，降低了檢測誤差，提高了檢測特異性。

本發明的特點可參閱本案圖式及以下較好實施方式的詳細說明而獲得清楚地了解。

附圖說明

圖1為本發明的整體結構示意圖；

圖2為本發明的光電檢測模塊電路結構示意圖；

圖3為本發明的誤差校對電路結構示意圖；

圖4為本發明的運算反饋電路結構示意圖；

圖5為本發明的第一放大電路結構示意圖；

圖6為本發明的第二放大電路結構示意圖；

圖7為本發明的遮光蓋與置樣槽安裝結構示意圖；

圖8為本發明的對接槽與測量槽安裝剖視結構示意圖。

具體實施方式

為了使本發明實現的技術手段、創作特徵、達成目的與功效易於明白了解，下面結合具體圖示，進一步闡述本發明。

如圖1至圖8所示，本發明提供的一種用於檢測犬副流感病毒試劑盒，包括遮光檢測盒1、all-readypcrbeads全預混凍乾粉、陽性對照組、陰性對照組、光電檢測器3，遮光檢測盒1與光電檢測器3配合安裝，所述all-readypcrbeads全預混凍乾粉包括犬副流感病毒rna螢光定量pcr檢測所需的反轉錄酶、核酸擴增酶、反應buffer及特異性引物和探針，加入提取的樣品rna並補足20ul體積的水後即可直接進行螢光定量pcr檢測；所述陰性對照組採用無犬副流感病毒rna的酶水，陽性對照組為體外轉錄犬副流感病毒rna，光電檢測器3內設有一光電檢測模塊，光電檢測模塊包括一光電二極體，光電二極體優選採用矽光電二極體，光電二極體陽極端連接一誤差校對電路，光電二極體陰極端連接一運算反饋電路，誤差校對電路另一端連接第一放大電路，光電二極體輸出端處連接設有第二放大電路，輸出端用於連接單片機，電信號通過在輸出端完成模數轉換後傳輸至單片機內，單片機通過內部運算處理完成數據讀取，結合設置誤差校對電路可以降低第一放大電路和第二放大電路內偏置電流產生的誤差，當經流放大器反相輸入端的電流為i1時，同相輸入端的電流為i2，則通過誤差校對電路和運算反饋電路，可以得出由偏置電流引起的誤差電壓為i1*反饋電阻r4阻值-i2*校對電阻r3阻值，其可以大大降低誤差值，從而增加檢測精確度，光電二極體通過測量槽31與遮光檢測盒1配合安裝，測量槽31位於光電檢測器3上，遮光檢測盒1內設有一檢測腔13，檢測腔13呈上下垂直貫通結構，檢測腔13頂端設有置樣槽12，方便試樣放置，底端設有對接槽14，對接槽14與測量槽31對應配合，對接槽14與測量槽31採用錯位對接結構，增加遮光效果。

本發明誤差校對電路由校對電容c3、校對電阻r3及校對pin二極體pin1相互並聯連接構成，運算反饋電路由反饋電容c4、反饋電阻r4及反饋pin二極體pin2相互並聯連接構成，校對電容c3和反饋電容c4型號相同，校對電阻r3和反饋電阻r4型號相同，校對電阻r3和反饋電阻r4優選採用陶瓷電阻或薄膜電阻，校對pin二極體pin1和反饋pin二極體pin2型號相同。

本發明第一放大電路和第二放大電路均採用ad8605放大器。

本發明遮光檢測盒1頂端設有一遮光蓋11，遮光蓋11用於封蓋置樣槽12。

本發明還包括一樣品架2，樣品架2上設有若干試管孔21，方便試樣放置。

本具體實施使用時，在高效反轉錄酶的作用下，以rna為模板，以引物為起點合成與rna模板互補的cdna鏈。在taq酶的作用下，經高溫變性、中文退火及延伸的循環，使特異dna片段的拷貝數放大，經螢光素標記的探針與擴增的dna雜交，利用taq聚合酶的5′-3′外切活性，使螢光探針的報告基因與淬滅基因團分離，發出特異性螢光信號，利用優化後的螢光檢測裝置進行特異性螢光信號的檢測，根據樣品的cq值的大小及擴增曲線的形成情況判定結果，結合遮光檢測盒並優化光電檢測模塊，降低了檢測誤差，提高了檢測特異性。

由技術常識可知，本發明可以通過其它的不脫離其精神實質或必要特徵的實施方案來實現。因此，上述公開的實施方案，就各方面而言，都只是舉例說明，並不是僅有的。所有在本發明範圍內或在等同於本發明的範圍內的改變均被本發明包含。