皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法
2023-04-24 23:40:01 1
專利名稱：皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法
技術領域：
本發明涉及粉塵蟎抗原液，是一種專用於皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液 的製備方法。
背景技術：
肺蟎病是蟎類經呼吸道吸入人體後寄生在肺部引起的寄生蟲病。這種寄 生蟲病在世界各地均有發生。其臨床症狀為咳嗽、咳痰、胸悶氣短、哮喘、 乏力煩燥、低熱及全身不適等。由於肺蟎病是一種寄生蟲病，某些診斷方法 尚無準確性，另有某些診斷方法比較複雜，成本昂貴。故未能在各醫療機構 廣泛普遍使用，並且其症狀與肺部疾病症狀存在某些相似，因此常被誤診， 從而導致延誤最佳治療期，給患者帶來較大的痛苦。
發明內容
本發明的目的是，提供一種皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法， 它專用於採用皮膚點剌法診斷肺蟎病，以提髙診斷肺蟎病的準確率。
本發明為實現上述目的，通過以下技術方案實現皮膚點刺法診斷肺蟎 病抗原液的製備方法，包括如下步驟
① 採集麵粉廠地腳粉；
② 顯微鏡下檢分出粉塵蟎飼養在25'C—26-C、相對溼度為65—75%的環 境中；
③ 蟎密度達到每克詞養基2000時，採用分析篩將培養蟎的粉塵倒入80 目/寸和120目/寸篩中去除雜質；
④ 將步驟③中篩下的粉塵倒入平底搪瓷盤中，鋪成薄層，用乾淨的玻璃
片將其埋平，將粉塵蟎分出；
⑤ 取活粉塵蟎置入200目/寸尼龍袋中，浸入丙酮脫脂25—35分鐘，重複
3次；
⑥ 洗淨後將粉塵蟎均勻鋪於皿的表面，置入40—48。C溫箱7—9小時，得 到乾粉塵蟎；
⑦ 取乾粉塵蟎浸入9。/。氯化鈉中，置入4'C環境中22—25小時；
⑧ 取出步驟⑦的氯化鈉液體，用磁力攪拌機攪拌9一12小時，所得懸液 以2500_3200轉/分鐘離心25—35分鐘，取上清液；
(D將上清液過濾除菌，得到重量體積比為l: 8—12的粉塵蟎抗原液。 步驟⑦中所述乾粉塵蟎與9%氯化鈉的配比為每10毫升9%氯化鈉加入1 克乾粉塵蟎。
步驟⑧中所得懸液以3000轉/分鐘離心30分鐘後取上清液。 步驟(D中所述的粉塵蟎抗原液的重量體積比為h 10。 本發明所述的抗原液，專用於皮膚點刺方法診斷肺蟎病，使肺蟎病的診 斷率提高至92%以上，達到了國際先進水平。本發明所述抗原液可大幅度延 長保存時間，用於診斷肺蟎病時，對患者無痛苦、對皮膚刺激性小、特異性 高、不出現全身性反應、操作方便簡便、快速、反應明顯，可廣泛適用於各 醫療機構,為快速、準確、無痛苦的診斷肺蟎病提供了良好基礎。
具體實施方式
實施例
本發明的皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法，包括如下步驟①
採集麵粉廠地腳粉；②顯微鏡下檢分出蟎飼養在25"C—26'C、相對溼度為65 一75%的環境中；③蟎密度達到每克飼養基2000時，採用分析篩將培養蟎的 粉塵倒入80目/寸和120目/寸篩中去除雜質；④將步驟③中篩下的粉塵倒入 平底搪瓷盤中，鋪成薄層，用乾淨的玻璃片將其埋平，將粉塵蟎分出；⑤取 活粉塵蟎置入200目/寸尼龍袋中，浸入丙酮脫脂25—35分鐘，重複3次；⑥ 洗淨後將粉塵蟎均勻鋪於皿的表面，置入40—48'C溫箱7—9小時，得到乾粉 塵蟎；⑦取乾粉塵蟎浸入9。/。氯化鈉中，置入4'C環境中22—25小時；⑧取 出步驟⑦的氯化鈉液體，用磁力攪拌機攪拌9一12小時，所得懸液以2500— 3200轉/分鐘離心25—35分鐘，取上清液；(D將上清液過濾除菌，得到重量 體積比為l: 8—12的粉塵蟎抗原液。
步驟⑦中所述乾粉塵蟎與9%氯化鈉的配比為每10毫升9%氯化鈉加入1 克乾粉塵蟎。
步驟⑧中所得懸液以3000轉/分鐘離心30分鐘後取上清液為優選方案。 步驟⑨中所述的粉塵蟎抗原液的重量體積比為1: 10為最佳比。 本發明所述粉塵蟎抗原液用於皮膚點刺法診斷肺蟎病，皮膚點刺要求破 皮而不出血，皮膚點剌診斷肺蟎病的操作方法如下
a、 在前臂曲面消毒皮膚，滴加100微升本發明所述粉塵蟎抗原液；
b、 將點刺針從包內取出一支，注意應取刺針的尾部處，慎放針尖汙染；
c、 將針尖垂直點刺在粉塵蟎抗原液滴的中央，接觸皮膚；
d、 使針尖刺入皮膚，達到破皮不出血要求；
e、 約一秒鐘將針提起，即可棄去，2—3分鐘後將抗原液滴擦掉，15—20 分鐘後，觀察皮膚反應結果；f、為了避免假陽性，必須同時作一個陽性對照和一個陰性對照，即在進
行上述步驟c點刺的同時，在其上方5釐米處用生理鹽水作陰性對照點刺， 在其下方5釐米處用組胺作陽性對照點刺，以便與產生的變應原反應的強度 進行比對，每刺點用一針，三者結果同時記錄；
變應原反應的強度應與組胺反應(+ )進行對比其標準如下
反應與陰性對照相同 一
反應大於陰性對照，小於組胺對照l/2者 1+
反應為組胺的1/2者 2+
反應與組胺相同 3+
反應大於組胺的2倍者 4+
g、反應表現為風團和紅暈，可用直尺量其大小。取風團或紅暈的最長徑 及與其垂直的橫徑兩者和的平均，稱為平均直徑[D二 (a+b) /2。 一般紅暈 大小僅作為陽性參考，風團平均直徑可作為診斷肺蟎病的依據。判定結果如 下
平均直徑小於3微米判為陰性(一)。 平均直徑大於3微米判為陽性(l+)。 平均直徑大於5微米判為陽性(2+)。 平均直徑大於10微米判為陽性(3+)。 平均直徑大於15微米判為陽性(4+)。
權利要求
1、皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法，其特徵在於包括如下步驟①採集麵粉廠地腳粉；②顯微鏡下檢分出粉塵蟎飼養在25℃-26℃、相對溼度為65-75％的環境中；③蟎密度達到每克飼養基2000時，採用分析篩將培養蟎的粉塵倒入80目/寸和120目/寸篩中去除雜質；④將步驟③中篩下的粉塵倒入平底搪瓷盤中，鋪成薄層，用乾淨的玻璃片將其埋平，將粉塵蟎分出；⑤取活粉塵蟎置入200目/寸尼龍袋中，浸入丙酮脫脂25-35分鐘，重複3次；⑥洗淨後將粉塵蟎均勻鋪於皿的表面，置入40-48℃溫箱7-9小時，得到乾粉塵蟎；⑦取乾粉塵蟎浸入9％氯化鈉中，置入4℃環境中22-25小時；⑧取出步驟⑦的氯化鈉液體，用磁力攪拌機攪拌9-12小時，所得懸液以2500-3200轉/分鐘離心25-35分鐘，取上清液；⑨將上清液過濾除菌，得到重量體積比為1∶8-12的粉塵蟎抗原液。
2、 根據權利要求l所述的皮膚點剌法診斷肺蟎病抗原液的製備方法，其 特徵在於步驟@中所述乾粉塵蟎與9%氯化鈉的配比為每10毫升9%氯化 鈉加入1克乾粉塵蟎。
3、 根據權利要求1或2所述的皮膚點剌法診斷肺蟎病抗原液的製備方法， 其特徵在於步驟⑧中所得懸液以3000轉/分鐘離心30分鐘後取上清液。
4、 根據權利要求1所述的皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法，其特徵在於步驟⑨中所述的粉塵蟎抗原液的重量體積比為1: 10。
全文摘要
本發明公開了一種皮膚點刺法診斷肺蟎病抗原液的製備方法，包括如下步驟①採集麵粉廠地腳粉；②顯微鏡下檢分出蟎飼養；③蟎密度達到每克飼養基2000時，倒入篩中去除雜質；④將步驟③中篩下的粉塵倒入平底搪瓷盤中將粉塵蟎分出；⑤取活粉塵蟎置入尼龍袋中，浸入丙酮脫脂；⑥洗淨後將粉塵蟎均勻鋪於皿的表面，置入溫箱得到乾粉塵蟎；⑦取乾粉塵蟎浸入9％氯化鈉中，置入4℃環境中；⑧取出步驟⑦的氯化鈉液體，攪拌所得懸液，離心取上清液；⑨將上清液過濾除菌，得到粉塵蟎抗原液。本發明所述抗原液可大幅度延長保存時間，用於診斷肺蟎病時，對患者無痛苦、對皮膚刺激性小，可廣泛適用於各醫療機構，為診斷肺蟎病提供了良好基礎。
文檔編號A61K49/00GK101337077SQ20081013952
公開日2009年1月7日 申請日期2008年8月20日 優先權日2008年8月20日
發明者公茂慶, 新 劉, 文桂香, 王海防, 甄天民, 鵬 程, 趙玉強, 鄧緒禮 申請人:山東省寄生蟲病防治研究所