抗磷醯膽鹼的新抗體的製作方法
2023-04-25 04:16:41 1
抗磷醯膽鹼的新抗體的製作方法
【專利摘要】本發明涉及能夠結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的抗體或抗體片段，其中抗體或抗體片段包括重鏈可變（VH）區域和/或輕鏈可變（VL）區域，並且其中（a）VH區域包括包含1、2或3個選自下列的互補決定區（CDR）的胺基酸序列：CDR1序列，其包括與SEQID?NO：17的序列具有至少25%、50%、75%或100%序列同一性的胺基酸序列；CDR2序列，其包括與SEQ?ID?NO：18的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94%或100%序列同一性的胺基酸序列；和CDR3序列，其包括與SEQ?ID?NO：19、20、21或22的序列具有至少4%、9%、13%、18%、22%、27%、31%、36%、40%、45%、50%、54%、59%、63%、68%、72%、77%、81%、86%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和/或（b）VL區域包括包含1、2或3個選自下列的互補決定區（CDR）的胺基酸序列：CDR4序列，其包括與SEQ?ID?NO：23或24的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94%或100%序列同一性的胺基酸序列；CDR5序列，其包括與SEQ?ID?NO：25的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的胺基酸序列；CDR6序列，其包括與SEQ?ID?NO：26的序列至少具有11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%、88%或100%序列同一性的胺基酸序列。
【專利說明】抗磷醯膽鹼的新抗體
【技術領域】
[0001]本發明涉及結合磷醯膽鹼(PC)和/或PC結合物且具有驚人體內有效性質的新抗體。
【背景技術】
[0002]本說明書中所列或討論的明顯先前公開的文件並不必然被承認是本領域現有技術的一部分或常見的一般知識。
[0003]儘管存在治療心血管疾病的選擇，急性冠狀動脈症候群(ACS)仍為工業化世界死亡的頭號原因。ACS的發生是冠狀動脈管腔內血栓形成的結果，其與動脈壁內的慢性炎症相關。動脈炎症經由脂質核心的形成以及由導致斑塊形成的炎症性細胞的浸潤而起始。不穩定的斑塊(plaque)含有實質性的壞死核心和凋亡細胞，其破壞內皮且可導致斑塊破裂而暴露出底層膠原蛋白、馮威裡氏因子(von Willebrand factor, vWF)、組織因子、脂質及平滑肌，而引發血小板黏 附、活化和聚集(Libby等人1996.Macrophages and atheroscleroticplaque stability.Curr Opin Lipidol7, 330-335)。用抗血小板療法、降膽固醇藥物治療(如，他汀(statin)類)、抗凝血劑，以及通過經皮冠狀動脈介入治療(percutaneouscoronary intervent1n,PCI)以及支架(stents)植入的外科再通術(recanalizat1n)的組合可治療ACS。
[0004]已顯示抗血小板療法例如C0X-1抑制劑(如，阿斯匹林)、ADP受體拮抗劑(如，抵克立得(Ticlopedine)及氯吡格雷(clopidogrel))及糖蛋白Ilb/IIIa受體拮抗劑在許多不同的臨床試驗中降低主要不良冠狀動脈事件(major adverse caronary events, MACE)的發生率(Dupont 等人-2009-Antiplatelet therapies and the role of antiplateletresistance in acute coronary syndrome.Thromb Resl24, 6-13)。然而，一部分接受長期抗血小板療法的患者持續具有心血管事件。另外，慢性預防療法可能需要多達兩年才顯示最大有益效果，而且許多患者接下來仍具有疾病復發的高風險。心肌梗塞後有長達6-12個月的期間，在該期間患者易發生進一步的MACE，這經常歸因於由於再狹窄而導致的再閉塞(Tabas.2010.Macrophage death and defective inflammat1n resolut1n inatherosclerosis.Nat Rev Immunol 10.36-46)。
[0005]因此，明顯需要特異地針對防止進一步斑塊進展並促進斑塊消退的治療，從而能夠實質性降低在此期間的事件。
[0006]磷醯膽鹼(在某些磷脂上的極性頭基團)與心血管疾病有廣泛關聯。冠狀動脈炎症期間產生的活性氧種類造成低密度脂蛋白(LDL)氧化而產生氧化的LDL (oxLDL)。事實上，心血管疾病(CVD)，例如動脈粥樣硬化、不穩定型心絞痛或急性冠狀動脈症候群已顯不與血楽的oxLDL水平上升有關聯(Itabe和Ueda.2007.Measurement of plasmaoxidizedlow-density lipoprotein and its clinical implicat1ns.1 AtherosclerThromb 14, 1-11)。LDL為循環脂蛋白顆粒，其包含帶有PC極性頭基團的脂類和apoBlOO蛋白。[0007]在LDL氧化期間，產生了含有不存在於未經修飾的LDL上的新抗原表位的PC。巨噬細胞上的清道夫受體(例如⑶36)識別oxLDL上新暴露的PC，並且所產生的巨噬細胞吞嗷的oxLDL開始進行血管壁中促炎性泡沫細胞(proinflammatory foam cells)的形成。內皮細胞表面的受體也識別氧化的LDL，且已報導會剌激一系列的反應，包含內皮細胞功能失調、細胞凋亡及未摺疊蛋白反應(Gora等人2010.Phospholipolyzed LDL induces aninflammatory response in endothelial cells through endoplasmic reticulum stresssignaling.FASEBJ24 (9):3284_97)。經磷脂酶A2或胺反應性疾病代謝物(例如由糖化蛋白氧化而產生的醛類)修飾後，PC新抗原表位也暴露於LDL上。這些另外修飾的LDL顆粒也是CVD中的促炎性因子。
[0008]已顯示抗磷醯膽鹼(PC)的抗體結合氧化的LDL或經其他修飾的LDL，並在體內模型中或體外研究中阻止oxLDL的促炎性活性(Shaw等人2000.Natural antibodies withtheT15id1type may act in atherosclerosis,apoptotic clearance, and protectiveimmunity.J Clin Investl05, 1731-1740 ；Shaw 等人 2001.Human-derived ant1-oxidizedLDL autoantibody blocks uptake of oxidized LDL by macrophages and localizes toatherosclerotic les1ns in viv0.Arter1scler Thromb Vasc B1l21, 1333-1339)。
[0009]而且，臨床數據的檢查證實了低水平的天然IgM抗-PC抗體與ACS患者中MACE 增高的風險有關(Frostegard，J.2010.Low level natural antibodies againstphosphory I choline:a novel risk marker and potential mechanism in atherosclerosisand card1vascular disease.Clin Immunol 134，47-54)。
[0010]因此，需要能有效用於治療的抗-PC抗體分子，特別是適合人類治療的全人抗-PC抗體。就 申請人:所知，至 今本領域仍未提供治療上有效的人類抗-PC抗體。鑑定此類抗體受阻於下列事實:用於具有抗-PC結合活性的人類抗體的體外篩選方法對預估體內治療活性的效果欠佳。
[0011]鑑於此，本領域需要用於體內系統時提供有效且有利性質的人類抗-PC抗體分子，特別是用於人類治療時。
【發明內容】
[0012]本申請公開了包括能夠結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的新抗原結合區的新抗體及抗體片段的製備與測試。
[0013]在第一方面中，本發明提供了能夠結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的抗體或抗體片段，其中抗體或抗體片段包括重鏈可變(VH)區域和/或輕鏈可變(VL)區域，並且其中:
[0014](a)VH區域包括包含1、2或優選3個選自下列的互補決定區(⑶R)的胺基酸序列:
[0015]CDRl序列，其包括與SEQ ID NO:17的序列具有至少25%、50%、75%或100%序列同
一性的胺基酸序列；
[0016]CDR2 序列，其包括與 SEQ ID NO:18 的序列具有至少 5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94% 或 100% 序列同一性的胺基酸序列；和
[0017]CDR3 序列，其包括與 SEQ ID NO:19、20、21 或 22 的序列具有至少 4%、9%、13%、18%、22%、27%、31%、36%、40%、45%、50%、54%、59%、63%、68%、72%、77%、81%、86%、90%、95% 或 100% 序列同一性的胺基酸序列；和/或
[0018](b)VL區域包括包含1、2或優選3個選自下列的互補決定區(⑶R)的胺基酸序列:
[0019]CDR4序列，其包括與SEQ ID NO:23或24的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94% 或 100% 序列同一性的胺基酸序列；
[0020]CDR5 序列，其包括與 SEQ ID NO:25 的序列具有至少 14%、28%、42%、57%、71%、85% 或100%序列同一性的胺基酸序列；
[0021]CDR6 序列，其包括與 SEQ ID NO:26 的序列具有至少 11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%,88%或100%序列同一性的胺基酸序列。
[0022]在本發明第一方面的一個實施方式中，抗體或抗體片段包括VH區域，該VH區域包括包含如上所定義的⑶Rl序列XDR2及⑶R3序列的胺基酸序列，和/或VL區域，該VL區域包括包含如上所定義的⑶R4序列、⑶R5及⑶R6序列的胺基酸序列。
[0023]在本發明第一方面的另一個實施方式中，抗體或抗體片段包括:
[0024]VH區域，其包括包含⑶R1、⑶R2及⑶R3序列的所有三個的胺基酸序列，而⑶R1、CDR2及CDR3序列存在於選自:SEQ ID NO:1、3、5、7、9、11、13或15的胺基酸序列，或與SEQIDNO:1、3、5、7、9、11、13或15的任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列；和/或
[0025]VL區域，其包括包含⑶R4、⑶R5及⑶R6序列的所有三個的胺基酸序列，而⑶R4、CDR5及CDR6序列存在於選自:SEQ IDNO:2、4、6、8、10、12、14或16的胺基酸序列，或與SEQIDNO:2、4、6、8、10、12、14或16的任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序
列同一性的胺基酸序列。
[0026]在本發明第一方面的另一個實施方式中，抗體或抗體片段包括重鏈可變(VH)區域和/或輕鏈可變(VL)區域，其中:
[0027]VH區域包括選自SEQ IDNO: 1、3、5、7、9、11、13或15的胺基酸序列，或與SEQID NO:1、3、5、7、9、11、13或15的任一個的胺基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列；和
[0028]VL區域包括選自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14或16的胺基酸序列，或與SEQ IDNO:2、4、6、8、10、12、14或16的任一個的胺基酸序列具有至少50%、60%、70%、80%、85%、
90%或95%序列同一性的胺基酸序列。
[0029]SEQ IDNO:1為如下實施例所示的X19-A05抗體重鏈可變(VH)區域並具有序列:
[0030]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYWMHWVRQAPGKGLEWVS YISPSGGGTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRF RSVCSNAVCRPTAYDAFDI WGQGTMVTVSS,
[0031]並包含互補決定區(OTR):
[0032] VH CDRl:GYWM (SEQ ID NO:17)；
[0033]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SECQ ID NO: 18)；
[0034]VH CDR3:VRFRSVCSNAVCRPTAYDAFDI (SEQ ID NO: 19)；
[0035]SEQ ID NO:2為X19-A05抗體的輕鏈可變(VL)區域，並具有序列:
[0036]DIVMTQSPDSLAVSLGEIRATINCKSSQSVFYQSNKKNYLAWYQQKPGQPPK LLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQYFNAPRT FGQGTKVEIK，
[0037]並包含互補決定區(OTR):[0038]VL CDR4:KSSQSVFYQSNKKNYLA(SEQ ID NO:23)；
[0039]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO:25)；
[0040]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0041]SEQ ID NO:3為如下實施例所示的M99-B05抗體的重鏈可變(VH)區域，並具有序列:
[0042]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVCSNGVCRPTAYDAFDIffGQGTAVTVSS,
[0043]並包含互補決定區(OTR):
[0044]VH CDRl:GYWM (SEQ ID NO:17)；
[0045]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0046]VH CDR3:VRFRSVCSNGVCRPTAYDAFDI (SEQ ID NO:20)，
[0047]SEQ ID NO:4為M99-B05抗體的輕鏈可變(VL)區域，且具有序列:
[0048]QDIQMTQSPDSLAVSLGERATI NCKSSQSVFYNSNKKNYLAWYQQKAGQPP KLLIHWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISNLQAEDVALYYCQQYFNAPR TFGQGTKVEIK，
[0049]並包含互補 決定區(OTR):
[0050]VL CDR4:KSSQSVFYNSNKKNYLA(SEQ I D NO:24)；
[0051]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO:25)；
[0052]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0053]SEQ ID NO:5為如下實施例所示的X19-A01抗體的重鏈可變(VH)區域，並具有序列:
[0054]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVCSNGVCRPTAYDAFDIffGQGTAVTVSS,
[0055]並包含互補決定區(OTR):
[0056]VH CDRl:GYWM (SEQ I D NO: 17)；
[0057]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0058]VH CDR3: VRFRSVCSNGVCRPTAYDAFD I (SEQ ID NO:20)，
[0059]SEQ ID NO:6為X19-A01抗體的輕鏈可變(VL)區域，且具有序列:
[0060]DI QMTQSPDSLAVSLGERAT INCKSSQSVFYNSNKKNYLAWYQQKAGQPPK LLIHWASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISNLQAEDVALYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0061]並包含互補決定區(OTR):
[0062]VL CDR4:KSSQSVFYNSNKKNYLA(SEQ ID NO:24)；
[0063]VL CDR5:WASTRES (SEQ I D NO:25)；
[0064]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0065]SEQ ID NO:7為如下實施例所示的X19-A03抗體的重鏈可變(VH)區域，並具有序列:
[0066]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVCSNAVCRPTAYDAFDIffGQGTMVTVSS,
[0067]並包含互補決定區(OTR):
[0068]VH CDRl:GYWM (SEQ ID NO:17)；[0069]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0070]VH CDR3: VRFRSVCSNAVCRPTAYDAFD I (SEQ ID NO: 19)，
[0071]SEQ ID NO:8為X19-A03抗體的輕鏈可變(VL)區域，且具有序列:
[0072]DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYQSNKKNYLAWYQQKPGQPPK LLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT I SSLQAEDVAVYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0073]並包含互補決定區(OTR):
[0074]VL CDR4:KSSQSVFYQSNKKNYLA(SEQ ID NO:23)；
[0075]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO:25)；
[0076]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0077]SEQ ID NO:9為如下實施例所示的X19-A07抗體的重鏈可變(vH)區域，並具有序列:
[0078]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVCSNGVCRPTAYDAFDIffGQGTMVTVSS,
[0079]並包含互補決定區(OTR):
[0080]VH CDRl:GYWM ( SEQ ID NO:17)；
[0081 ]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0082]VH CDR3: VRFRSVCSNGVCRPTAYDAFD I (SEQ ID NO:20)，
[0083]SEQ ID NO:10為X19-A07抗體的輕鏈可變(vL)區域且具有序列:
[0084]DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYNSNKKNYLAWYQQKPGQPPK LLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT I SSLQAEDVAVYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0085]並包含互補決定區(OTR):
[0086]VL CDR4:KSSQSVFYNSNKKNYLA(SEQ ID NO:24)；
[0087]VL CDR5:WASTRES (SEQ I D NO:25)；
[0088]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0089]SEQ ID NO:11為如下實施例所示的X19-A09抗體的重鏈可變(vH)區域，並具有序列:
[0090]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTFSGYWMHWVRQAPGKGLEWVS YI SPSGGGTHYADSVKGRFTISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRF RSVCSNGVCRPTAYDAFDIffGQGTMVTVSS,
[0091]並包含互補決定區(OTR):
[0092]VH CDRl:GYWM (SEQ ID NO:17)；
[0093]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0094]VH CDR3: VRFRSVCSNGVCRPTAYDAFD I (SEQ ID NO:20)，
[0095]SEQ ID NO:12為X19-A09抗體的輕鏈可變(vL)區域且具有序列:
[0096]DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYNSNKKNYLAWYQQKPGQPPK LLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT I SSLQAEDVAVYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0097]並包含互補決定區(OTR):
[0098]VL CDR4:KSSQSVFYNSNKKNYLA(SEQ ID NO:24)；
[0099]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO:25)；
[0100]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，[0101]SEQ ID NO:13為如下實施例所示的X19-A11抗體的重鏈可變(vH)區域，並具有序列:
[0102]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVSSNGVSRPTAYDAFDIffGQGTAVTVSS,
[0103]並包含互補決定區(OTR):
[0104]VH CDR1:GYWM (SEQ ID NO:17)；
[0105]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0106]VH CDR3:VRFRSVSSNGVSRPTAYDAFDI (SEQ ID NO:21)，
[0107]SEQ ID NO:14為X19-A11抗體的輕鏈可變(vL)區域且具有序列:
[0108]DIQMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYNSNKKNYLAWYQQKAGQPPK LLIHVffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT I SNLQAEDVALYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0109]並包含互補決定區(OTR):
[0110]VL CDR4:KSSQSVFYNSNKKNYLA (SEQ ID NO:24)；
[0111]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO: 25)；
[0112]VL CDR6:QQYFNAPRT (SEQ ID NO:26)，
[0113]SEQ ID NO:15為如下實施例所示的X19-C01抗體的重鏈可變(VH)區域，並具有序列:
[0114]EVQLLESGGGLVQPGGSLRLSCAASGFTSGYWMHWVRQAPGKGLEWVSYI SPSGGGTHYADSVKGRFT ISRDNSKNTLYLQMNSLRAEDTAVYYCARVRFR SVSSNAVSRPTAYDAFDIffGQGTMVTVSS,
[0115]並包含互補決定區(OTR):
[0116]VH CDRl:GYWM (SEQ ID NO: 17)；
[0117]VH CDR2:YISPSGGGTHYADSVKG (SEQ ID NO: 18)；
[0118]VH CDR3:VRFRSVSSNAVSRPTAYDAFDI (SEQ ID NO:22)，
[0119]SEQ ID NO:16為X19-C01抗體的輕鏈可變(VL)區域且具有序列:
[0120]DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSQSVFYQSNKKNYLAWYQQKPGQPPK LLIYffASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLT I SSLQAEDVAVYYCQQYFNAPRT FGQGTKVE IK，
[0121]並包含互補決定區(OTR):
[0122]VL CDR4:KSSQSVFYQSNKKNYLA(SEQ ID NO:23)；
[0123]VL CDR5:WASTRES (SEQ ID NO:25)；
[0124]VL CDR6: QQYFNAPRT (SEQ I D NO: 26).[0125]以上定義的SEO ID NO的總結顯示如下:
[0126]
【權利要求】
1.一種能夠結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的抗體或抗體片段，其中抗體或抗體片段包括重鏈可變(VH)區域和/或輕鏈可變(VL)區域，且其中: (a)VH區域包括胺基酸序列，該胺基酸序列包含1、2或3個選自下列的互補決定區(CDR): CDRl序列，其包括與SEQ ID NO:17的序列具有至少25%、50%、75%或100%序列同一性的胺基酸序列； CDR2 序列，其包括與 SEQ ID NO:18 的序列具有至少 5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 CDR3序列，其包括與SEQ ID NO:19、20、21或22的序列具有至少4%、9%、13%、18%、22%、27%、31%、36%、40%、45%、50%、54%、59%、63%、68%、72%、77%、81%、86%、90%、95% 或 100% 序列同一性的胺基酸序列；和/或 (b)VL區域包括胺基酸序列，該胺基酸序列包含1、2或3個選自下列的互補決定區(CDR): CDR4序列，其包括與SEQ ID NO:23或24的序列具有至少5%、11%、17%、23%、29%、35%、47%、52%、58%、64%、70%、76%、82%、94% 或 100% 序列同一性的胺基酸序列； CDR5序列，其包括與SEQ ID NO:25的序列具有至少14%、28%、42%、57%、71%、85%或100%序列同一性的胺基酸序列 ； CDR6 序列，其包括與 SEQ ID NO:26 的序列具有至少 11%、22%、33%、44%、55%、66%、77%、88%或100%序列同一性的胺基酸序列。
2.如權利要求1所述的抗體或抗體片段，其中VH區域包括包含如權利要求1所定義的⑶Rl序列、⑶R2及⑶R3序列的胺基酸序列，和/或VL區域包括包含如權利要求1所定義的⑶R4序列、⑶R5及⑶R6序列的胺基酸序列。
3.如權利要求1或2所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括包含⑶R1XDR2及⑶R3序列的胺基酸序列，其中⑶R1XDR2及⑶R3序列存在於選自SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11、13或15的胺基酸序列中或與SEQID NO:1、3、5、7、9、11、13或15任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列中；和/或 VL區域包括包含⑶R4、⑶R5及⑶R6序列的胺基酸序列，其中⑶R4、⑶R5及⑶R6序列存在於選自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14或16的胺基酸序列中或與SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14或16任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列中。
4.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括選自SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11、13或15的胺基酸序列或與SEQ IDNO:1、3、5、7、9、11、13或15任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括選自SEQ ID NO:2、4、6、8、10、12、14或16的胺基酸序列或與SEQID NO:2、4、6、8、10、12、14或16任一個的胺基酸序列具有至少80%、85%、90%或95%序列同一性的胺基酸序列。
5.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段，其中:VH區域包括與SEQ ID NO:1具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:2具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
6.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:3具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:4具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
7.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:5具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:6具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
8.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:7具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:8具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
9.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:9具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:10具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
10.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO: 11具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:12具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
11.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:13具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:14具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
12.如權利要求1至4任一項所述的抗體或抗體片段，其中: VH區域包括與SEQ ID NO:15具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列；和 VL區域包括與SEQ ID NO:16具有至少80%、85%、90%、95%或100%序列同一性的胺基酸序列。
13.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段， 其中VH區域、VL區域或優選地VH及VL兩個區域包括與所述SEQ ID NO或各個所述SEQID NO的一種或多種(例如全部)具有100%序列同一性的胺基酸序列。
14.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段， 其中VH區域、VL區域或VH及VL兩個區域包括與所述SEQ ID NO或各個所述SEQID NO的一種或多種(例如全部)具有少於100%但至少80%、85%、90%、95%序列同一性的胺基酸序列。
15.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段， 其中VH區域、VL區域或VH及VL兩個區域包括與所述SEQ ID NO或各個所述SEQID NO的一種或多種(例如全部)具有少於100%但至少80%、85%、90%、95%序列同一性的胺基酸序列，並且其中 抗體或抗體片段結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的能力等於(即，至少80%、85%、90%或95%)或大於相應抗體或抗體片段的能力，其中相應抗體或抗體片段的VH區域及VL區域每一個均包括包含與所述SEQ ID NO或所述SEQ ID NO每一個具有100%序列同一性的胺基酸序列的抗原結合序列。
16.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段，其中VH區域和VL區域以線性多肽序列存在。
17.如上述權利要求 任一項所述的抗體或抗體片段，其中VH區域和VL區域每一個均以獨立的多肽序列存在，並優選其中獨立的多肽序列直接或間接結合在一起(例如通過介於獨立的多肽序列間的一個或多個二硫鍵)。
18.如權利要求1至15或17任一項所述的抗體，其中抗體為單克隆抗體。
19.如權利要求1至15任一項所述的抗體片段，其中抗體片段為單鏈抗體、Fv,scFv、Fab、F (ab』)2、Fab』、Fd、dAb、CDR*scFv-Fc片段、納米抗體及雙特異抗體，或任何穩定的此類片段，例如利用聚乙二醇化穩定的此類片段。
20.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段，其為人類抗體或人源化抗體或抗體片段，例如人類單克隆抗體或人源化單克隆抗體。
21.如上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段，其能夠結合磷醯膽鹼結合物。
22.如權利要求21所述的抗體或抗體片段，其中磷醯膽鹼結合物為任選地經由間隔物連接至載體的磷醯膽鹼部分，且優選地，抗體或抗體片段特異性地結合磷醯膽鹼結合物中的磷醯膽鹼部分。
23.一種藥物組合物，其包括上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段以及藥學上可接受的載體或賦形劑或基本上由上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段以及藥學上可接受的載體或賦形劑組成，任選地，其中存在於組合物中的僅有的抗體或抗體片段為上述權利要求任一項所述的抗體或抗體片段。
24.如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段，或如權利要求23所述的藥物組合物，其用於醫藥中。
25.如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段，或如權利要求23所述的藥物組合物，其用於防止、預防和/或治療哺乳動物包括人的動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬化相關疾病或缺血性心血管疾病。
26.如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段，或如權利要求23所述的藥物組合物，其用於預防、防止和/或治療阿爾茨海默病。
27.如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段，或如權利要求23所述的藥物組合物，其用於免疫或預防，或防止或治療哺乳動物包括人的代謝疾病。
28.一種防止、預防和/或治療哺乳動物包括人的動脈粥樣硬化、動脈粥樣硬化相關疾病或缺血性心血管疾病的方法，該方法包括對哺乳動物施用如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段或如權利要求23所述的藥物組合物的步驟。
29.一種免疫及預防、防止和/或治療受試者的阿爾茨海默病的方法，該方法包括對受試者施用如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段或如權利要求23所述的藥物組合物的步驟。
30.一種免疫、預防或治療哺乳動物包括人的代謝疾病的方法，該方法包括對哺乳動物施用如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段或如權利要求23所述的藥物組合物的步驟。
31.如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段，或如權利要求23所述的藥物組合物，如權利要求27所述的用途或如權利要求30所述的方法，其中代謝疾病選自下列的症狀:代謝症候群、胰島素抗藥性、葡糖耐受不良、高血糖症、I型糖尿病、II型糖尿病、高脂血症、高甘油三脂血症、高膽固醇血症、血脂異常及多囊性卵巢症候群(PCOS)。
32.—種編碼權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段的核酸序列。
33.一種包括權利要求32所述的核酸序列的載體或質粒。
34.一種包括權利要求32所述的核酸序列和/或權利要求33所述的載體或質粒的宿主細胞。
35.如權利要求34所述的宿主細胞，其中細胞為原核細胞，例如大腸桿菌(Escherichiacoli)細胞，或真核細胞，例如動物、植物或真菌細胞。
36.如權利要求34或35所述的宿主細胞，其表達如權利要求32所述的核酸序列，並藉此生產如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段。
37.一種生產如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段的方法，其包括培養如權利要求36所述的宿主細胞，並從宿主細胞回收如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段。
38.一種製備如權利要求1至22任一項所述的抗體或抗體片段的變體的方法，該變體保留結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的能力，該方法包括: (i)提供編碼親代抗體或抗體片段的如權利要求32所述的核酸； (ii)引入一個或多個核苷酸突變至核酸序列的胺基酸編碼區，任選地引入至編碼VH和/或VL區域的區域內，使得突變的核酸編碼與親代抗體或抗體片段相比具有不同胺基酸序列的變體抗體或抗體片段； (iii)表達由突變的核酸序列編碼的變體抗體或抗體片段；和 (iv)比較變體抗體或抗體片段與親代抗體或抗體片段結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的能力。
39.如權利要求38所述的方法，其中評估變體抗體或抗體片段結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的能力的步驟進一步包括選擇那些與親代相比具有實質上相等或增強的結合磷醯膽鹼和/或磷醯膽鹼結合物的能力的變體。
40.如權利要求38或39所述的方法，其進一步包括回收包括編碼變體抗體或抗體片段的突變的核酸序列的核酸分子；及任選地用包括回收的核酸分子的組合物轉化宿主細胞；及進一步任選地從宿主細胞表達變體抗體或抗體片段；並進一步任選地從宿主細胞回收因此表達的變體抗體或抗體片段。
41.如權利要求40所述的方法，其包括從宿主細胞回收因此表達的變體抗體或抗體片段的步驟，並進一步包括將所回收的變體抗體或抗體片段配製成藥學上可接受的組合物的步驟。
42.由權利要 求38至40所述的方法獲得的或可獲得的變體抗體或抗體片段，或由權利要求41所述的方法獲得的或可獲得的藥學上可接受的組合物，其用於醫藥中和/或依照權利要求25、26和/或27的用途中，或用於權利要求29、30和/或31所述的方法中。
【文檔編號】A61P9/10GK104039832SQ201280049552
【公開日】2014年9月10日 申請日期:2012年8月8日 優先權日:2011年8月9日
【發明者】K·彼得松, O·坎貝爾, 丹·塞克斯頓, 安德魯·E·尼克森 申請人:阿瑟拉生物技術公司, 戴埃克斯有限公司