用海藻製備脫鎂葉綠素甲酯一酸a和脫鎂葉綠素c的方法
2023-04-24 23:05:56
專利名稱：用海藻製備脫鎂葉綠素甲酯一酸a和脫鎂葉綠素c的方法
技術領域：
本發明涉及一種用海藻製備脫鎂葉綠素甲酯一酸A和脫鎂葉綠素C的方法。
葉綠素A(Chlorophyll A，Chla)是天然無毒的綠色食用色素，脫鎂葉綠素甲酯一酸A(Pheophorbide A，Pha)是一種新的雷射化學方法治療惡性腫瘤的高效光敏化藥劑，將Pha靜脈注射入患者體內，24小時後主要瀦留在腫瘤組織，用雷射照射腫瘤部位時，由於Pha的敏化，腫瘤組織中的氧被激發成為單態1O2，單態1O2具有很強的氧化能力，可以定向殺死腫瘤細胞達到不損傷正常細胞而治癒腫瘤的目的。葉綠素C(Chlorophyll C，Chlc)是天然無毒的黃色食用色素，脫鎂葉綠素C(Pheophytine C，Phc)不僅是黃色食用色素，而且亦是一種新的雷射化學方法治療惡性腫瘤的高效光敏化藥劑，其藥理同Pha。目前國際上採用層析技術從高等綠色植物和蕨類植物中提取Chla，然後用酸或酶脫去Chla的葉綠醇尾製得Pha。但這些植物中均含有葉綠素B(Chlb)，用CHO取代Chla噗啉環上第17位的CH3就是Chlb。由於Chla與Chlb的化學結構很相似，因此將其分離開比較困難，要得到高純度的Chla，需要大量的試劑進行層析，費時、費力、費資金、效益低。
本發明的目的是提供一種用海藻製備葉綠素A、葉綠素C、脫鎂葉綠素甲酯一酸A和脫鎂葉綠素C的方法，它能彌補現有技術的上述不足。
一種用海藻製備脫鎂葉綠素甲酯一酸A和脫鎂葉綠素C的方法，包括將原料磨漿，用有機溶劑水溶液提取，然後將葉綠素A、C分離，用酸處理，得到脫鎂綠素A溶液和脫鎂葉綠素C溶液，再用液相酸度梯度法處理脫鎂葉綠A溶液，得到脫鎂葉綠素甲酯一酸A，其特徵是所述的原料為海藻，提取後用油水分離的方法將葉綠素c分出。
本發明由於選取的原料不含葉綠素B而含有chlc，而且Chla是酯溶性的，Chlc是水溶性的，因此很容易將Chla、Chlc分離，能夠得到高純度的Pha、Phc。本方法簡便、節省試劑，經濟效益是常規法的十倍以上。
下面通過實施例進一步說明本發明。
圖1是本方法得到的Pha的電子光譜圖。
圖2是本方法得到的Phc的電子光譜圖。
實施例1稱取摘洗乾淨的海帶1kg剪短磨碎後加入2L濃度為80％的丙酮水溶液，浸泡12小時過濾，收取濾液。濾渣可以反覆提取2次。取500ml濾液注人分液漏鬥中，再加入500ml正辛烷搖勻。30分鐘後分層，下層黃色的是Chlc，Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素均被萃取進上層正辛烷溶液中。如此反覆萃取2次，分別回收Chlc溶液和萃取液。蒸餾乾燥Chlc溶液得固體粉末。Chlc溶液和Chlc固體粉均可作為食用色素使用。往Chlc溶液中滴入數滴1摩爾濃度的鹽酸，溶液變深黃色，說明Chlc反應成脫鎂葉綠素C，進行濃度和電解質調節後可做為注射針劑進行臨床使用。採用聚乙烯粉作為吸附劑並將其填充進層析柱中。然後慢慢滴入萃取液，待到達柱高的一半時就，停止滴入，改用60％的丙酮水溶液繼續慢慢滴入，注意觀察柱內已明顯分為藍、黃、淺黃色帶，繼續慢慢滴入洗脫液，分別接取藍色、黃色、淺黃色溶液。藍色是Chla、黃色是類胡蘿蔔素、淺黃色是葉黃素。類胡蘿蔔素不僅可以作為實用色素而且是很好的營養品。
往Chla溶液中滴入數滴1摩爾濃度的鹽酸，溶液變深棕色，說明Chla反應成脫鎂葉綠素A。然後採用液相酸度梯度法製備pha，即將脫鎂葉綠素A溶液置於分液漏鬥中並加入10ml去離子水後慢慢滴入濃硫酸，Chla脫掉醇尾成為棕黑色的Pha，進入下層的水溶液中。往分離出的Pha溶液中加入去離子水，使PH值達到4為止，再加入硅藻土，充分攪拌均後過濾，再用去離子水淋洗，洗脫過剩的酸至PH中性為止。將吸附了Pha的硅藻土浸入90％的丙酮水溶液洗脫出Pha。餾出Pha溶液中的提取劑，得到Pha水溶液，進行濃度和電解質調節後可做為注射針劑進行臨床使用。將Pha水溶液蒸乾後，可得黑色固體Pha便於保存。以上各個蒸餾過程中均可回收提取劑，不僅能減少成本而且可避免環境汙染。Pha及其溶液均需避光保存。
實施例2稱取摘洗乾淨的裙帶菜1kg剪短磨碎後加入2L濃度為80％的乙醚水溶液，浸泡12小時過濾，收取濾液，濾渣反覆提取2次。取500ml濾液注入分液漏鬥中，再加入500ml苯搖勻。30分鐘後分層，下層黃色的是Chlc，Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素均被萃取進，上層苯溶液中。如此反覆萃取2次，分別回收Chlc溶液和萃取液。
脫鎂葉綠素C的製備和Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素的分離及Pha的製備同實施例1。
往分離出的Pha溶液中加入去離子水使PH值達到4為止，再加入化石粉充分攪拌均後過濾，再用去離子水淋洗，洗脫過剩的酸至PH中性為止。將吸附了Pha的化石粉浸入90％的乙醚水溶液洗脫出Pha。蒸餾出Pha溶液中的提取劑，得到Pha水溶液，進行濃度和電解質調節後，可做為注射針劑進行臨床使用。將Pha水溶液蒸乾後可得黑色固體。
實施例3稱取摘洗乾淨的鹿角菜1kg，磨碎後加入2L濃度為98％的乙醇，浸泡24小時後過濾，收取濾液，濾渣反覆提取2次。取500ml濾液注入分液漏鬥中，再加入500ml石油醚搖勻。30分鐘後分層，下層黃色的是Chlc，Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素均被萃取進入上層石油醚溶液中。如此反覆萃取2次，分別回收Chlc溶液和萃取液。
脫鎂葉綠素C的製備和Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素的分離及Pha的製備同實施例1。
往分離出的Pha溶液中加入去離子水，使PH值達到5。把脫脂棉填充層析柱中，將Pha溶液滴入柱中待溶液到達柱高的一半停止滴入，改用去離子水淋洗，洗脫過剩的酸至PH中性為止。將吸附了Pha的脫脂棉浸入90％的乙醚溶液洗脫出Pha。蒸餾出Pha溶液中的提取劑，得到Pha水溶液，進行濃度和電解質調節後可做為注射針劑進行臨床使用。將Pha水溶液蒸乾後可得黑色固體Pha。
實施例4用一定網目的網撈取硅藻，用清水漂洗乾淨，稱取1kg，磨碎後加入2L濃度為90％的正辛烷，浸泡12小時後過濾，收取濾液，濾渣反覆提取2次。取500ml濾液注入分液漏鬥中，加入500ml去離子水搖勻。30分鐘後分層，下層黃色的是Chlc，Chla、類胡蘿蔔素、葉黃素均被萃取進，上層溶液中。分離出Chlc溶液，再如此反覆淋洗多次至洗脫液無黃色為止，分別回收Chlc溶液和萃取液。
往分離出的Pha溶液中加入去離子水是使PH值達到5。採用超濾膜進行過慮，因硫酸的分子半徑小而Pha的分子半徑大，可以將其開來。其它同實施例1。
實施例5以硅藻為原料，有機提取劑用石油醚，其它同實施例4。
實施例6以雙鞭甲藻為原料，有機提取劑用80％的丙酮，其它同實施例4。
附圖中實線為激發光譜，虛線為螢光光譜。由激發光譜可以看到用本發明的方法得到的Pha，在418nm、669nm有兩個特徵峰，這與生化標準品是一致的，說明採用本方法得到的Pha純度很高。
下面對本發明的一些細節作出說明。
1、本發明選取海帶、裙帶菜、鹿角菜、硅藻等褐藻、硅藻或雙鞭甲藻等為原料，新採集的材料要摘除藻根，洗去泥沙等汙物，然後用清水衝洗乾淨，空淨水分。中、大型藻體要剪短磨碎；單細胞藻類選用適當網目的篩子過篩後用清水衝洗；幹品要水發後用清水衝洗。
2、色素的提取。將磨碎的原料浸泡到提取劑濃度在10-80％的水溶液中，12-24小時後過濾，分別收取濾液和濾渣。提取劑使用甲醇、乙醇、丙酮、乙醚、正辛烷、苯等醇、酮、醚、芳烴、烷烴等溶劑中的一種或多種，濾渣再反覆提取數次後丟棄。
3、Chlc的提取分離。將濾液裝入分液漏鬥，並加入去離子水使提取劑的濃度降低到2-10％，再加入萃取劑進行萃取，酯溶性色素進入上層，下面的水層溶有Chlc。對下層水溶液進行反覆萃取後，可得純的Chlc溶液。通過減壓蒸餾Chlc溶液，可得黃色的Chlc固體粉末。Chlc溶液和Chlc固體粉末均可作為食用色素使用。
4、脫鎂葉綠素C的製備。往Chlc溶液中滴入數滴1摩爾濃度的鹽酸，溶液變深黃色，說明Chlc反應生成脫鎂葉綠素C，進行濃度和電解質調節後可做為注射針劑進行臨床使用。
5、分離出葉綠素C後還要將Chla與類胡蘿蔔素、葉黃素的分離。將上述含有酯溶性色素的萃取液採用層析進行分離，首先將吸附劑裝入層析柱，然後慢慢滴入萃取液，待到達柱高的一半時，就停止滴入萃取液，改用洗脫劑的重量佔40-80％(其餘為水)的洗脫液繼續慢慢滴入，注意觀察柱內已明顯分為藍、黃、淺黃色帶，繼續慢慢滴入洗脫液，分別收取藍色、黃色、淺黃色溶液。藍色是Chla、黃色是類胡蘿蔔素、淺黃色是葉黃素。類胡蘿蔔素不僅可以作為實用色素而且是很好的營養品。吸附劑採用蔗糖、有機樹脂、化石粉、硅藻土、脫脂棉、纖維素等。洗脫劑採用醇、酮、醚及其混合溶劑。
6、Pha的製備。往Chla溶液中滴入數滴1摩爾濃度的鹽酸，溶液變深棕色，說明Chla反應生成脫鎂葉綠素A。將脫鎂葉綠素A溶液置於分液漏鬥中並加入10ml去離子水後慢慢滴入濃硫酸，Chla脫掉醇尾成為棕黑色的Pha，進入下層的水溶液中。往分離出的Pha溶液中加入去離子水使PH值達到4為止，再加入吸附劑充分攪拌均後過濾，再用去離子水淋洗，洗脫過剩的酸至PH中性為止。將吸附了Pha的吸附劑浸入70-99％的提取液洗脫出Pha。蒸餾出Pha溶液中的提取劑，得到Pha水溶液，進行濃度和電解質調節後可做為注射針劑進行臨床使用。將Pha水溶液蒸乾後可得黑色固體Pha便於保存。Pha及其溶液均需避光保存。以上各個蒸餾過程中均可回收提取劑，不僅能減少成本而且可避免環境汙染。
權利要求
1.一種用海藻製備葉綠素A、葉綠素C、脫鎂葉綠素甲酯一酸A和脫鎂葉綠素C的方法，包括將原料磨漿，用有機溶劑水溶液提取，然後將葉綠素A、C分離，用酸處理，得到脫鎂綠素A溶液和脫鎂葉綠素C溶液，再用液相酸度梯度法處理脫鎂葉綠A溶液，得到脫鎂葉綠素甲酯一酸A，其特徵是所述的原料為海藻，提取後用油水分離的方法將葉綠素C分出。
2.如權利要求1所述的的方法，其特徵是分離出葉綠素C後還要將葉綠素A與類胡蘿蔔素、葉黃素的分離。
3.如權利要求1所述的方法，其特徵是所述的海藻為褐藻、硅藻、雙鞭甲藻。
全文摘要
一種用海藻製備脫鎂葉綠素甲酯一酸A和脫鎂葉綠素C的方法，包括。將原料磨漿，用有機溶劑水溶液提取，然後將葉綠素A、C分離，用酸處理，得到脫鎂綠素A溶液和脫鎂葉綠素C溶液，再用液相酸度梯度法處理脫鎂葉綠A溶液，得到脫鎂葉綠素甲酯一酸A，其特徵是所述的原料為海藻，提取後用油水分離的方法將葉綠素C分出。本發明 能夠得到高純度的Pha、Phc，方法簡便、節省試劑，經濟效益是常規法的十倍以上。
文檔編號C07D487/00GK1428342SQ0114281
公開日2003年7月9日 申請日期2001年12月22日 優先權日2001年12月22日
發明者孟繼武, 鄭榮兒, 孟廣昱 申請人:青島海洋大學