白細胞庫的製作方法
2023-05-22 15:18:26
專利名稱：白細胞庫的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的白細胞單採形式(分離的白細胞單採)，實施分離的白細胞單採的方法和裝置，由此產生的白細胞庫(leukocyte cell bank)以及基於它們進行的各種形式的治療。
背景技術：
細胞庫細胞庫行業是一種服務行業，它將活細胞保存起來以備後用。這一行業已有數十年歷史，例如貯存牛的精子細胞以便對母牛進行人工受精。
隨著生物醫學研究和組織工程領域的技術進步，人們正在認識到，用人類幹細胞進行多種替代療法有多種可能性。這些進展導致越來越需要可以對個體的幹細胞進行分離並凍存備用(自體應用)的便利方法。例如，越來越多的人意識到了對貯存新生兒臍血幹細胞的需求，結果私有細胞庫中這類幹細胞保存物快速增多。
隨著對細胞和組織的需求不斷增加，細胞庫行業逐漸意識到實際問題。目前已知，旨在提供長期細胞來源的細胞庫很容易受隨機事件的影響，導致一部分或全部保存物失去活性，而且細胞庫越大，貯存時間越長，與這種隨機事件有關的風險就越大。保存物的完整性也至關重要保存物的製備、保存、操作和使用方式有可能對細胞庫的完整性起到關鍵的決定作用這一點，對於保存物的交叉汙染可以引起疾病的傳播或引起不當的或危險的生理後果(如，有可能是由於在自體移植時給予了異源細胞物質)的情況而言尤其重要。對較大的細胞庫而言，信息存儲、處理和保存物分類編目也是極其重要的。
這類問題使得許多國家出臺越來越多的法律法規，來管理細胞庫的生成、維持和應用目前在英國，細胞庫行業由一個綜合管理組織控制。
應急性自體移植(CAT)療法最近有文獻描述了一種療法(見WO 00/29551和WO 01/88099)，其從健康供血者取出各種組織(包括白細胞)，將它們貯存在組織或細胞庫中，將來某一天發生緊急事件需要進行自體移植時，可以用它們進行自體移植。這種療法在本文中稱為應急性自體移植(contingent autologous transplantation，CAT)療法。
對於任何具體組織或細胞類型而言，僅僅有一部分健康人群可能需要CAT療法。因此，CAT療法有效與否，關鍵取決於是否能產生全面型細胞組織庫，所述庫中包括來自該群體中大多數人的保存物。
因此有觀點認為，通過構建全面的組織庫將有利於CAT療法。但是，CAT療法本身的性質決定了它對任何這類組織庫有其獨特而嚴格的要求。特別是，CAT療法要求有大量的供血者參與(從而有大量保存物)、有相對較長的保存期、在長時間內良好維持組織的功能以及在最終治療應用中有很好的適應性。
對白細胞庫而言，這些問題尤其急迫，因為白細胞庫所能提供的細胞的絕對數量比較少，最終治療效力有可能關鍵取決於一小群細胞的功能，而由於不同的細胞以不同方式適應貯存，貯存的白細胞的活性有可能隨著時間推移發生變化。迄今為止，尚無人構建出適合CAT的白細胞庫。
通過白細胞單採分離可用於CAT療法的白細胞白細胞單採(Leukapheresis)是一種特殊形式的採血術(apheresis)，涉及從獲取的血液中選擇性分離並取出白細胞，然後將血液的剩餘部分回輸給供血者。在白細胞單採過程中，使取出的血液流經細胞分離裝置，這種裝置在體外將有核白細胞與紅細胞和血漿分離。紅細胞和血漿被回輸給供血者，這也是分離過程的一部分。該過程連續進行，不斷地有血液被取出並幾乎是同時在進行了各種提取之後返回到體內。因此，白細胞單採使得有可能將供血者的全部血液分多次取出並回輸，在不傷害此人的情況下分離出並保存大量的白細胞。該技術因而依賴於能否建立一種靜脈到靜脈的體外血液循環，並從該循環的血液中提取白細胞。
白細胞單採一般都是自動的，用連續的或間斷的流體離心或過濾技術進行，可參見「Leukapheresis and Granulocyte Transfusions」，由AmericanAssociation of Blood Banks，Washington DC(1975)出版。
實施離心式白細胞單採的裝置在US 3489145和US 3655123中有所描述，實施過濾式白細胞單採的裝置在US 3802432和US 3892236中有所描述。重力式白細胞單採(gravity leukapheresis)僅利用重力實施白細胞分離和收集，這種方法在US 4111199中有所描述。
目前可以商購的自動白細胞單採裝置有多種不同類型，包括FenwalCS-3000(Baxter Healthcare，Chicago，IL)，Cobe 2997(Cobe BCT，Lakewood，CO)，Cobe Spectra，Cobe 2991，以及Haemonetics V50(Haemonetics Corp.，Braintree，MA)。這其中任一種都可以用於本發明，但優選Cobe系統(CobeBCT，Lakewood，CO，USA)，它能從流經其分離器的全血中提取到白細胞總數的40％-50％，並且其每分鐘的流速可以達到40-60ml或更大。
近期有人提出，用白細胞單採創建CAT療法所用的淋巴細胞庫(見WO00/29551和WO 01/88099)。但用白細胞單採產生商業化的全面型淋巴細胞庫受到供血者方便性和舒適性的限制。例如，供血者通常能夠到訪血液採集機構進行供血的時間是有限的。因此，供血者一旦到達採血機構，其真正在採血室所花的時間是一個重要因素。但是，白細胞單採一般需要2-4小時(比提供一個單位的血液所需的時間長數倍)。由此帶來供血者舒適性的問題很多人在看到真實的採血過程時感到很害怕，並且在整個過程中供血者身上至少必須插入一個針頭(通常是兩個，用於引流和回輸血液)，由此帶來潛在危險。
因此，需要一種製備白細胞庫的方法，它能避免在使用白細胞單採時所出現的問題，還能使供血者更方便(而且不適感較少)，從而有可能創建適用於CAT療法的全面型白細胞庫。
發明概述本發明是基於(至少部分基於)以下發現用常規方法從供血者採集的血樣，經過可以商購的白細胞單採裝置的處理，可以為白細胞建庫提供方便的白細胞來源無需對供血者「連線」使用這些裝置。
由這種「分離的白細胞單採」方法製備的白細胞製劑，可以直接用於在各種疾病的治療中進行自體移植，或者在對白細胞進行各種處理後再用於所述自體移植。
因此，本發明第一方面提供了分離的白細胞單採，其中白細胞單採裝置與提供血樣的個體之間沒有流體聯通和/或剩餘的血樣並未回輸至該個體。
白細胞單採裝置優選是自動白細胞單採裝置。尤其優選使用連續的或間斷的流體離心式白細胞單採裝置、或者連續的或間斷的流體過濾式白細胞單採裝置。
白細胞單採裝置可以包含(a)分離裝置(例如，離心轉子或濾器)；(b)白細胞單採管道系統(tubing set)；以及(c)一或多個泵，所述泵用於將血樣運輸通過所述管道裝置和將分離的白細胞運輸至收集容器。
所述方法優選還包括以下步驟(a)使採集到的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存(cryogenicpreservation)使之休眠)；和，可選地(b)使休眠的白細胞復甦(例如，通過解凍和/或稀釋使之復甦)。
如果使用深低溫保存，為方便起見，該深低溫保存包括冷凍至約-160℃或更低溫度，這可以用液氮來實現。如果需要長時間保存和/或更好地保留功能，可以用液氦冷凍至約-269℃或更低溫度。
廣泛多種適當的深低溫保存介質中，任何一種都可以用於本發明，優選包含適當的穿透性冷凍保護劑的介質。特別適合用作穿透性冷凍保護劑的是DMSO，它的使用濃度，比如說，可以最高達10％。
深低溫保存介質還可以包含抗凝劑(如酸性檸檬酸葡萄糖，EDTA，肝素，或它們的混合物)、核酸酶(例如DNA酶和/或RNA酶)以及生理可接受的介質(例如，磷酸鹽緩衝液)。深低溫保存介質還可以包含蛋白質性質的組合物，如血清或血清成分和/或糖(sugar)和/或多糖(polysaccharide)(它們在採用潛水式冷凍(plunge freezing)的實施方案中是特別優選的)。
在本發明深低溫保存介質中使用的特別優選的蛋白質性質的組合物包含血液白蛋白(例如，牛血清白蛋白或人血清白蛋白)。尤其方便的是，使用從供血者血樣中分離的人血清。它可以作為白細胞分離的副產物與白細胞一起分離。
本發明第二方面提供了用於從血樣中選擇性分離並取出白細胞的白細胞單採裝置的用途，所述血樣與提供該血樣的個體的血液之間沒有流體聯通(即，是本文所述的分離的血樣)。
本發明第三方面提供了製備用於自體移植的白細胞組合物的方法，包括以下步驟(a)提供來自供血者個體的分離的血樣；和(b)用白細胞單採裝置從該血樣中選擇性分離並收集白細胞。
本發明第四方面提供了製備用於恢復性自體移植(restorativeautotransplantation)的白細胞組合物的方法，包括以下步驟(a)提供來自供血者個體的分離的血樣；(b)用白細胞單採裝置從該血樣中選擇性分離並收集白細胞；(c)使收集到的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存(cryogenicpreservation)使之休眠)；和，可選地(d)使休眠的白細胞復甦(例如，通過解凍和/或稀釋使之復甦)。
本發明第五方面提供了製備用於治療性自體移植(remedialautotransplantation)的白細胞組合物的方法，包括以下步驟(a)提供來自供血者個體的分離的血樣；(b)用白細胞單採裝置從該血樣中選擇性分離並收集白細胞；(c)處理所收集到的白細胞；和，可選地(d)使經過處理的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存使之休眠)。
本發明第六方面提供了製備白細胞庫的方法，包括以下步驟(a)提供來自供血者個體的分離的血樣；(b)用白細胞單採裝置從該血樣中選擇性分離並收集白細胞；和(c)使收集到的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存使之休眠)，並且將這些步驟重複應用於來自不同供血者個體的一系列血樣，從而製備多份休眠(例如深低溫保存)的白細胞組合物，所述方法還包括以下步驟(d)將休眠的白細胞以可以復甦的方式保存，以備日後自體移植。
本發明第七方面提供了用於從個體收集分離的血樣的系統(例如，封閉系統)，所述系統包含樣品容器和白細胞單採管道系統。
因此，本發明提供了用於從個體收集分離的血樣的系統(例如，封閉系統或功能性封閉系統)，所述系統包含(a)採樣裝置(例如，包含針頭)，以用於從所述個體收集血樣；(b)樣品容器，其與所述採樣裝置之間有流體聯通；(c)白細胞單採管道系統，其與所述樣品容器之間有流體聯通；其中所述管道系統是盲端，不包含用於將經過分級分離的樣品的任何一部分重新引回所述個體中的裝置。
本發明第八方面提供了用於從來自個體的分離的血樣中選擇性分離並取出白細胞的裝置，所述裝置包含帶有本發明收集系統的白細胞單採裝置。
本發明還涉及可以通過本發明的方法獲得(或已經獲得)的白細胞組合物和白細胞庫。
本發明還涉及本發明所述方法、系統、裝置、組合物和細胞庫的各種治療用途。相應地，本發明涉及本發明所述白細胞組合物在治療中的用途，例如在自體移植(例如恢復性或治療性自體移植)中的用途。
發明詳述
I.定義以下術語在本文中使用時，除了這些術語在本領域可能具有的任何更寬(或更窄)含義以外，除非有特別說明，都意圖表示以下含義術語「白細胞單採」是本文使用的本領域術語，用於定義一種方法，其涉及從獲自供血者的血液中選擇性分離和取出白細胞、再將剩餘的血液回輸給所述供血者。
術語「白細胞單採裝置」是本領域術語，用於定義任何能進行白細胞單採的裝置，不管這種裝置採用什麼方式來分離和取出白細胞。
術語「分離的白細胞單採」用在本文中，是指對分離的血樣實施白細胞單採的一種新形式。
類似地，術語「分離的採血術」用在本文中，是指對分離的血樣實施採血術的一種新形式。
術語「分離的血樣」用在本文中，是指與提供該血樣的供血者的血液之間沒有流體聯通的血樣。因此，對分離的血樣進行分離的白細胞單採的過程中，白細胞單採裝置與提供該血樣的個體之間沒有流體聯通和/或剩餘血樣未被回輸到該個體體內。
術語「自體移植」用在本文中，是指同基因移植或自我移植，其中術語「自體」用於表示，移植是向提供細胞物質(例如白細胞)的相同生物(即相同個體)進行的移植。「移植」是指任何涉及將細胞物質(例如白細胞)引入生物中的過程，因此該術語包括本領域已知的任何形式的移植。
術語「休眠」用在本文中，是指任何暫停活動的狀態或靜止狀態，達到這種狀態的方法是本領域已知的，下文中有描述。任何已知的方法，包括深低溫保存，都可以使用。因此，白細胞可以維持在靜息狀態、無活性狀態或非增殖狀態。
術語「健康」在本文中與供血者個體一起使用，表示該個體不具有白細胞缺陷(按照本文的定義)。因此，術語「健康」在本文包括非疾病狀態的供血者個體，且該供血者個體處在未患有任何疾病或失調、或未表現出所述疾病或失調的任何症狀(即，為無症狀或亞臨床表現)的狀態。尤其是，術語「健康」在本文中包括，未患有隨後想要通過自體移植方法進行治療的疾病、或未表現出所述疾病的症狀的供血者個體。
II.血樣本發明可以應用於任何形式的血樣，只要(a)該血樣是按照上述定義的分離的血樣，且(b)該血樣包含供血者個體的至少一部分白細胞。
可以在將血樣應用於本發明的方法之前，在體外(ex vivo)對其進行各種處理。例如，通常在使用前將血樣冷藏(chill)。其它處理可以包括添加保存劑和/或抗凝劑。
也可以在採血前或採血期間，將各種製劑施用於供血者個體，從而在採血前處理血樣。
可以在體外和/或在體內應用的處理的實例詳見下文中題為「白細胞處理」的章節。
一般優選從供血者個體採集至少450-500ml血，這相當於在英國輸血服務中(UK blood transfusion service)一個供血者所提供的一個單位的血量。如有可能，在一段時間內(例如，2-3周內，優選2-3個月內或6個月內或一年內，2年內或3年內或更長時間內)多次採血(例如，多個450-500ml)。可以將這些血樣中的一或多個分為或混合為多個白細胞庫保存物。僅在英國，每年從供血者採集到超過3百萬單位的血，從中取出一個單位的血用於同種異體移植是很平常的。
取出的血很快會被補充(replaced)，因此可以在一年內多次從一個供血者體中採集一單位的血，必要時，採集2-12個單位，且對被採血的個體無害。
III.選擇供血者個體一般考慮恢復性自體移植是一種有可能最終適用於任何個體的療法。因此，本發明可以有效用於製備包括儘可能多的不同個體的完整的白細胞庫，以便在有需要時可以對任何指定個體進行恢復性自體移植。
基於上述原因，考慮將本發明儘可能廣泛地應用，以便可以建立起完整的白細胞庫。但由於每一份保存物的質量取決於(至少在一定程度上取決於)該供血者個體在獻血當時的健康狀態，故優選用於本發明方法中的血樣是從健康供血者個體採集的。
還有其它因素也影響對供血者的選擇例如，用於本發明方法中的血樣最好是在供血者個體尚年幼時採集較有利，優選在青春期(adolescence)或成年早期(early adulthood)。對人而言，優選在約12-30歲採血(優選多次採血)，優選15-25歲。尤其優選在16或17歲以上時採血，例如，16-30歲，17-30歲，或18-30歲，或可以是18-35或40歲。因此，優選在宿主生物成熟，或接近成熟期(maturity)，但未明顯進入老化(ageing)或衰老(senescence)過程之前獲得其細胞。尤其是，優選宿主生物的免疫系統成熟或發育完全時較為有利。
但是，本發明也包括在上述年齡段以外的時間獲得細胞，可以在剛出生後(post-natal)的任何時間獲得細胞，例如從少年時期(juvenile)的宿主生物獲得細胞，例如從兒童期的中晚期(mid-to late childhood)、或甚至從嬰兒(infant)獲得細胞，或從老年(older)的個體獲得細胞。
從剛出生後或老年的宿主取樣允許收集多份樣品，從而增加了積存足夠數量的細胞的機會。另外，從少年宿主或老年宿主取樣可以越過道德要求(ethical requirements)，如需要告知並經同意才能取樣的要求。
優選從青春期或成年宿主生物取樣，因為所獲取的細胞，尤其是從血液獲取的細胞，將包含較大比例的有價值的成熟T細胞，它們能識別異常細胞群體，如癌細胞或被病毒感染的細胞。故而，當使用血樣時，從具有成熟免疫系統的個體(即並非胎兒(foetal)或新生兒(neonatal))獲取的血樣較有利。
因此，本發明涉及從供血者個體收集的血樣在將來可能發生或意外發生或僅僅是偶然發生的事件中的用途，所述血樣是在供血者個體不存在可能罹患疾病的直接預示、暗示、或懷疑的時候獲取的，所述將來事件不是已經預見到或已經懷疑或已經預示的疾病。因此，本發明一些實施方案中，所述供血者個體不對任何具體疾病易感，或者是沒有患任何具體疾病的危險，例如不具有任何可預示隨後疾病的症狀或表現。類似地，宿主生物優選未遭受任何可能引起預知疾病的損傷。
事實上，對於一些應用而言(例如，為了隨後進行恢復性自體移植而製備白細胞庫)，優選本發明用到的血樣是在供血者個體罹患任何疾病或出現相關症狀之前從該個體獲取的，更優選是在宿主生物處於總體上良好的健康水平、並優選沒有任何形式的免疫受損(immunocompromise)時獲取的。在這些實施方案中，在供血者個體沒有事先出現疾病症狀、或存在疾病、或已經被診斷為罹患疾病、而該疾病又是隨後將要接受治療的疾病時，也就是說在該宿主生物處在健康狀態、而且不是「病後恢復」狀態(例如，不處在從將要被治療的白細胞缺陷部分地或完全地恢復的狀態)時，從該個體獲取血樣特別有利。
易感的(Predisposed)供血者個體治療手段不斷進步，對疾病過程的理解也越來越深入，這有助於我們調整治療方向，從而減輕疾病和痛苦。這樣的理解由於分子生物學領域的技術進步而被大大推進。我們現在能在分子水平上跟蹤疾病的發病機理，並且認識到，個體的基因構造在他們對某些疾病的易感性方面起重要作用。例如，我們已知，一些個體由於他們的基因組成的關係，很容易發生某些疾病。
對一些個體而言易感的疾病多數是白細胞缺陷，該術語在本文中表示需要施用自體白細胞的情況。這類情況因此包括個體已經罹患與白細胞功能失調有關的疾病、感染或生理失調，或者已經罹患需要增強或刺激內源白細胞活性的疾病、感染或生理失調。白細胞缺陷的具體實例可以參見下文中「實例說明(Exemplary indications)」章節。
目前通過基因檢測，可以鑑定那些易感於白細胞缺陷(例如癌症、免疫功能失調或感染等各種形式中的任一種)的個體。
此外，我們對於機體免疫系統的認知，以及尤其是對於免疫系統識別並殺傷被病毒感染的細胞和腫瘤細胞的認知，在不斷進步。我們現在已知，為了激發細胞介導的免疫，不良細胞(offending cell)(例如被病毒感染的細胞或腫瘤細胞)必須同時呈遞HLA I類限制性腫瘤表位或病毒表位以及GM-CSF和/或TNF-α等危險信號，以便使免疫系統的抗原呈遞細胞(APC)將B7和IL-12等協同刺激信號與抗原一起呈遞給與之相互作用的細胞毒T-淋巴細胞(CTL)群。這種同時呈遞導致產生活化細胞克隆和記憶細胞克隆(綜述可參見Nature Medicine Vaccine Supplement 4(1998)525)。在缺乏這些額外的信號的情況下，識別不良細胞的HLA-I類抗原-限制性T-細胞經過加工後被破環或脫敏(機體的一種可能用於避免發生諸如自身免疫病等生理失調的過程)。這類耐受的誘導是由於不識別(ignorance)、無反應性(anergy)或生理性缺失(physical deletion)(Cold Spring Harbour Symp Quant Biol 2(1989)807；Nature 342(1989)564；Cell 65(1991)305；Nature Med 4(1998)525)。
目前已清楚，腫瘤細胞並不自動地同時呈遞危險信號和/或協同刺激信號。故而，腫瘤的大量繁殖(spawning)可能導致根除那些提供細胞介導的抗腫瘤免疫力的T細胞克隆。因此，表現出癌症、白血病/淋巴瘤或肉瘤等的病人，可能已經通過這個機理失去了他們先天的消滅腫瘤的能力。
但是，如果在病人發生擴散性疾病之前將所需的T淋巴細胞或其樣品取出，那麼在發病時可以將相關的T細胞群返回給該病人，在經過必須的T細胞協同刺激後，來緩解疾病。協同刺激可以在將細胞返回給病人的同時進行，也可以在通過對病人實施其它治療而將細胞返回給病人之後進行，或者除了該病人天然產生的刺激以外不再有其它刺激。細胞的活化/刺激也可以是在回輸給病人之前在體外誘導。
本發明因此特別適用在易感於白細胞缺陷生長的病例中。它因此代表了一種從健康供血者個體取出白細胞，以便在該個體後來有需要時，通過自體(自基因)移植方法移植給該個體的一種方法(means)。儘管該易感個體有可能因為從來沒有出現需要用這種方法進行治療的疾病而從來沒有接受這些細胞，本發明也可以用於提供一種保險形式，為該個體防範白細胞缺乏症的高風險提供保障。
類似地，沒有診斷出易感性的個體也可以選擇，在他們出國旅行之前，抽取樣品，放入本發明的白細胞庫，以備後用。這類應用可以包括境外感染的治療。
除此之外，眾所周知，老化過程使個體更易患疾病。這種易感性的根本原因似乎在於老化過程中的T細胞和B細胞的數目/活性顯著降低，致使免疫功能喪失(Mech Ageing Dev 91(1996)219；Science 273(1996)70；Mech Ageing Dev 96(1997)1)。疾病易感性尤其可見於老年病人在醫院內接受諸如外科手術時，在這裡，他們很容易發生機會感染，導致嚴重或者甚至是致命的後果。在這類個體較年輕的時候取血樣，按照本發明的方法處理，放入白細胞庫中，就可以在上述情況中提供恢復性自體移植的機會。
這種方法可以更廣泛地用於在手術後增強病人的免疫系統，從而減少機會感染引起術後併發症的可能性。因此，本發明可以作為預防性治療，例如，用於當老年病人更易感於疾病之時。
IV.白細胞本發明涉及用分離的白細胞單採術從血樣中分離並收集白細胞。可以理解，在白細胞單採過程中並不需要把血樣中所有的白細胞都分離和/或取出來。在很多情況下，僅僅取出和/或分離出血樣中白細胞總數的一部分就足以。本領域技術人員很容易確定需要取出的白細胞的合適量，它基於所分離出的白細胞的用途、樣品量、供血者狀態、白細胞的特徵以及所採用的具體白細胞單採裝置等因素而有不同。
本發明方法中收集到的白細胞在一定程度上是從原始血樣中分離得到的。術語「分離的」在本文中用於表示，所分離的白細胞處在不同於它們在人體內環境的一種物理環境，該術語並不表示任何具體的純度。事實上，純度絕對值並非關鍵，本領域技術人員很容易基於白細胞的用途來確定合適的純度。
本發明方法中對白細胞的分離和收集也並不必然表示，優先分離和收集任何具體類型的白細胞。本發明的白細胞包括任何白細胞，諸如粒細胞，淋巴細胞和單核細胞等。
粒細胞包括髓細胞(myelocyte)，嗜鹼性粒細胞，嗜酸性粒細胞和中性粒細胞。淋巴細胞包括B淋巴細胞，T淋巴細胞和自然殺傷細胞。單核細胞包括單核巨噬細胞和其它巨噬細胞。
但在一些實施方案中，所分離並收集的白細胞優選包含一種或多種特定類型的白細胞。優選的細胞類型是淋巴細胞，尤其是T-淋巴細胞(T-細胞)。特別要優選成熟的T-淋巴細胞。
由於每升人血液中成熟T細胞總數為1-2.5×109，因此100ml血樣中通常包含1-2.5×108成熟T細胞，一般這就足以提供能代表整個成熟人T細胞群體中產生有益效果所需的量。但是，根據用白細胞單採裝置所分離並收集到的白細胞總數的級分，以及所採用的任何復甦技術的效力，優選使用至少100ml，115ml，200ml或300ml血樣，更優選超過400或500ml的血樣，以便在個體發生疾病時，能獲得足夠數量的成熟T細胞，在返回該個體後產生有益的治療效果。
本領域已知有多種標準技術可以從包含混合淋巴細胞群的樣品中選出具體的淋巴細胞亞群。這類亞群的實例包括，CD3+，CD8+，CD4+和CD16/56+(自然殺傷)T細胞以及CD19+B細胞。例如，這類T細胞亞群中任何一群或任何混合或任何組合都可以用於本發明的方法、用途和組合物中，它們可以通過多種已知方法很容易地獲得，所述方法如FACS(螢光活化細胞分選(Fluorescence Activated Cell Sorting))和血細胞計數系統(haemocytometrysystems)。
本發明還發現了更廣泛的應用，並且除了白細胞單採術以外，也可以採用任何其它形式的分離式採血術。因此，本發明涉及用於製備幹細胞組合物(並因此產生幹細胞庫)的分離式採血方法。本發明因此還可以應用於幹細胞或始祖細胞(progenitor cell)，包括多能幹細胞和已經進入具體分化途徑的幹細胞或始祖細胞。
V.白細胞處理可以對白細胞進行各種處理。這類處理導致，例如擴增(expansion)一部分或所有代表性細胞亞群，提高白細胞在休眠階段的長期活力，增強它們的治療潛力，彌補部分或所有白細胞的缺乏或缺陷(例如，象在治療性自體移植治療模式中那樣)和/或使它們在隨後用於自體移植時更為安全。
所述處理可以在白細胞休眠之前或之後(以及進行自體移植之前或之後)進行。此外，可以在取樣之後進行處理(即體外進行)，在使細胞休眠之前或復甦之後都可以處理。例如，對白細胞的處理可以是，在自體移植過程中，將一種另外的組合物與白細胞組合物依次(sequentially)或同時施用。對白細胞的處理可以在即將開始自體移植前進行。
或者(或另外)，可以在取血之前，通過施用生長因子或細胞因子等，對仍然在體內的白細胞進行處理(見下文)。
移植前處理的實例包括各種遺傳修飾，如摻入陰性選擇標記(例如，參見W096/14401，其引入本文作為參考)。這類處理使得有可能進行移植後的白細胞清除(ablation)或滴定劑量反應曲線。其它遺傳幹預可以包括，調節或修飾一或多個基因的表達(例如，增加或減少基因表達)，使一或多個基因失活，基因置換和/或使一或多個異源基因表達)。其它遺傳修飾包括，定向引導(targeting)具體的T-細胞(見W096/15238，其引入本文作為參考)，以及用抗體修飾T-細胞受體所有組成部分(receptor repertoire)/表達，從而產生T-細胞嵌合體。
本發明的其它處理包括，將白細胞暴露於一或多種刺激分子，例如抗原(如癌症抗原或病毒抗原)、抗體、T細胞識別表位、肽、血液因子、激素、生長因子或細胞因子或其組合。
例如，白細胞可以在體外(或於取血之前在體內)用以下物質進行處理抗原(例如，前列腺特異性抗原1或前列腺特異性抗原2、her-2/new、MAGE-1、p53、Ha-ras和c-myc等癌症抗原，或病毒抗原)、抗體、T細胞識別表位、肽、血液因子、激素、生長因子或細胞因子或其組合。刺激分子可以是合成的分子、重組分子，或者可以是從人體或動物體純化或分離的分子。這方面特別有用的刺激分子選自IFN-alpha，IFN-beta，IFN-gamma，II-1a，II-1b，II-2，II-3，II-4，II-5，II-6，II-7，II-8，II-9，II-10，II-11，II-12，II-13，II-14，II-15，GM-CSF，M-CSF，G-CSF，LT或上述兩種或更多種的組合。這樣的處理可以改變白細胞的生長和/或活性和/或分化狀態，和/或可以用於區分或選擇性分離或富集所需的白細胞類型或清除不想要的細胞。
最近有一些進展使得可以獲得用於隨後自體移植的細胞。例如，對造血調節因子的研究導致分離出一系列能影響淋巴細胞增殖和分化的因子。這些因子包括，細胞因子(如白細胞介素系列IL-1到IL-18，白三烯，腫瘤特異性抗原如前列腺特異性抗原1或前列腺特異性抗原2、her-2/new、MAGE-1、p53、Ha-ras和c-myc)，生長因子如TNF、TGF、FGF、EGF、GM-CSF、G-CSF，及其它。這其中有多種因子目前可以購買到臨床使用的商品，有一些已經顯示能大大增加外周血淋巴細胞，尤其是未成熟的T淋巴細胞的數量。將它們在取血前施用於供血者個體，可以控制質量和/或數量(指白細胞亞型的存在數量和特性而言)，並且有可能無需骨髓取樣，直接從供血者個體外周血收穫大量的所需細胞，如未成熟的T淋巴細胞。
移植前的其它處理包括培養白細胞(或其亞群)。例如，可以培養白細胞使得細胞數增加。例如，可以用本領域已知的方法使細胞傳代。這類培養可以在白細胞休眠之前和/或之後進行。
因此，在白細胞包括T細胞的情況下，可以在移植前對T細胞進行協同刺激和/或在自體移植之前使T細胞暴露於腫瘤抗原(任選與協同刺激因子一起)。
VI.白細胞裝置目前市面上可以購買到多種不同類型的白細胞單採裝置。這類裝置通常至少包含三個單獨的組件(1)分離裝置(例如包含膜或離心轉子，它們提供力量使白細胞與血液中其它各種成分分開；(2)一或多個泵，用於將血樣運輸到上述分離裝置，用於取出分離的白細胞以及用於維持灌輸(transfusion)和再灌輸(retransfusion)所必須的力量，和(3)管道系統(通常是一次性的)，它將血液及其各種級分以特定的幾何位置保持在分離裝置內，它限定出固定的血液流通通道(常常是從供血者，通過白細胞單採裝置又回到該供血者的一個迴路)以及用於收集分離的白細胞和/或其它血液級分或流體的容器(一般是袋子)。
廣泛多種市售白細胞單採裝置中的任一種都可以用於本發明中。白細胞單採裝置的具體操作方式取決於多種因素，包括分離裝置(例如，離心機，濾器等)的特點、所需的白細胞樣品類型、需要處理的血樣體積、供血者個體的特徵和狀態、白細胞組合物的最終用途、以及在進行本發明的處理之前施加於血樣的任何處理的特性。因此，本領域技術人員能很容易地確定合適的操作參數。
但是優選地，選擇對操作者介入和/或培訓的需要最少的白細胞單採裝置。對多種市售白細胞單採系統而言，操作者進行準備和操作所需的時間和/或專業技能各不相同。例如，減少操作者裝卸管道系統所需的時間、以及降低這些操作的複雜程度，可以提高生產力和/或減少操作者失誤的可能性。而且，減少系統對操作者的依賴程度，則可以減少操作失誤和/或減少對這些系統的操作者所期望的/必需的資格。
性能-相關因素也是有關聯的，可以用白細胞單採系統的「收集效力」來評判。一個系統的「收集效力」當然可以用多種方式來衡量，諸如用所收集到的白細胞部分相對於樣品中自細胞總數的大小來衡量。性能也可以基於白細胞單採方法對各種類型血液成分的影響來評價。例如，一般希望減少採血法對至少白細胞的負面影響。可能還希望減弱血小板活化作用，以避免處理過程中樣品質量的下降。
特別優選的是Cobe系統(Cobe BCT，Lakewood，CO，USA)。
VII.本發明中用到的收集系統本發明用到的從個體收集分離的血樣的系統可以包含樣品容器(用於收集和容納血樣)以及白細胞單採管道系統。
術語「白細胞單採管道系統」在本文中用於定義在先章節中描述的管道系統。這種管道系統可以包含血液處理容器，在該容器中，白細胞受到分離裝置中的分離力(separation forces)的作用。
在與包含離心型分離裝置的白細胞單採裝置(見在先章節)一起使用的管道系統中，血液處理容器可以包含離心環(centrifuge loop)，當裝備在分離裝置的離心轉子中時，該離心環限定了使血液受到離心分離力作用的容器空間。
本發明使用的系統可以是封閉系統，功能性封閉系統，或開放系統。
本文中術語「封閉系統」，當應用於白細胞單採管道系統時，是指一種無菌且通過無菌屏障與外界環境隔離的管道系統，在其內部所有組件都充分集成(integral)、相互連接(attached)和/或在生產地點裝配好的(assembled atthe manufacturing site)。
本文中術語「功能性封閉系統」，當應用於白細胞單採管道系統時，是指一種在裝置生產地點裝配好的管道系統，它利用無菌屏障濾器(如0.22微米濾器)由最終用戶將其與無菌連接裝置進行連接。
本文中術語「開放系統」，當應用於白細胞單採管道系統時，是指僅有一部分在裝置生產地點裝配、然後由最終用戶按照自己需要完成裝配的管道系統。
優選地，所述系統還包含一或多個(例如3個)白細胞收集容器。優選3個或更多個收集容器，以便有足夠的樣品以供取捨並且也有利於用一式雙份/一式三份的樣品創建細胞庫。這允許更靈活的自體移植方案。
所述系統還可以方便地包含能容納獲取白細胞後剩餘的血液的容器。這剩餘的血液可能在其它治療方案中有用，例如在異源(allogenous)方案中有用。所述系統還可以包含針頭或插管(cannula)，用於將血樣從個體導入樣品容器。
各種容器都可以方便地採用柔性(flexible)透明袋形式。部分(或全部)管道也可以方便地採用柔性透明材料(例如，塑料)。
VIII.休眠的誘導任何合適的手段都可以用於誘導休眠。
根據一種優選的深低溫保存方法，細胞優選在-160℃以下凍存。一種特別優選的休眠手段是，將細胞凍存到氦(He)的沸點，即約-269℃或更低。
根據Freshney的觀點(Freshney′s Tissue Culture of Animal Cells(Cultureof Animal CellsA Manual of Basic Technique，Wiley Liss，1994))，可以將細胞懸浮在合適的培養基(例如，包含最高濃度達10％的DMSO)中，以受控制的速率冷卻(例如，每分鐘1℃，直到-70℃，然後放入液/氣N2)。這種方便的法可以適用於將細胞冷卻在He/N2混合體或He中。其它實現和/或維持細胞休眠的方法包括冷卻到4℃。
IX.復甦休眠之後，在用於移植之前將細胞復甦。同樣地，這可以通過本領域已知的任何方便的方式，以及任何使細胞復甦或復活的方法來實現。
方便地講，這可以通過，例如，將細胞解凍和/或稀釋來實現。復甦技術是本領域已知的。細胞解凍可以如下操作將容納細胞的容器在37℃水浴中溫和振蕩，然後用諸如培養基或血清將DMSO稀釋到1％更低濃度。
細胞可以立刻植入或經過在培養基中恢復的階段後植入。復甦過程是為重新建立使細胞在諸如預防或治癒性治療中的用途來設計的。
X.細胞建庫本發明的白細胞組合物可以建庫，從而產生白細胞庫。優選地，所述組合物在使白細胞休眠(如上述)後建庫。
任何合適的細胞建庫系統都可以採用，只要其中的保存物可以復甦用於自體移植。這意味著使用一些標記形式，但這並不必須是用每份保存物的物理附加物(physical appendage)的形式。
因此，本發明的白細胞庫可以包含多組細胞貯存單元以便貯存白細胞組合物。通常，這樣的細胞貯存是通過深低溫保存法來進行的，但也可以採用其它保存技術。本發明的細胞庫還可以包括數字信息單元，用於存儲與供血者個體的身份(identity)、所在地(location)和醫療史有關的數字信息，和/或與一份具體的保存物有關的情況(例如，從供血者個體採集血樣的日期，對該保存物中所含白細胞進行任何處理的處理條件和細節)。
數字信息單元優選包含至少一個數字計算機，它具有足夠的數字存儲能力，可以存儲可能的與每一份保存物有關的大量信息。
本發明的白細胞庫優選還包含數字數據檢索(digital data retrieval)裝置(arrangement)，它與數字信息單元相接(interfaced with)，可以檢索存儲在數字信息單元中的指定信息。這種數據檢索裝置可以整合在數字計算機中。還可以提供通過電話或網際網路進行的數字信息遠程訪問，並且可以在全球範圍內快速且方便地訪問這些信息。
XI.醫學應用本發明可適用在所有希望施用(經處理或未經處理的)自體白細胞的治療和預防形式中(即，預期有治療前景)。
為了本發明的目的，在這些適用情況中，認為出現了白細胞缺陷。
因此，可以理解，本發明醫療應用中的白細胞缺陷(leukocyte deficiency)涵蓋多種疾病(disease)、症候群(syndrome)、失調(disorder)、生理失調(condition)和感染。例如，可以理解，當個體罹患與白細胞功能失調有關的疾病、症候群、失調、生理失調或感染時，以及當個體罹患內源白細胞成分表面看似乎正常、但正常的內源白細胞活性希望/需要改變、增大、或獲得刺激的那些疾病、症候群、失調、生理失調或感染時，可以發生如上述特別廣義的白細胞缺陷。具體地說，本文所述白細胞缺陷可以視為T細胞和/或B細胞非特異性損失的結果，或者視為具體的T細胞克隆群和/或B細胞克隆群損失或缺陷的結果。
為方便起見，這些疾病、症候群、失調、生理失調或感染在本文中統稱白細胞缺陷。
適用本發明的治療可以分為兩大類。一類是利用本發明的方法從健康個體供血者的血樣創建白細胞組合物(即形成白細胞庫的一部分)。在這種應用中，本發明被用於創建源自個體供血者的健康白細胞組織的細胞來源，只要該個體在以後發生白細胞缺陷時，可以將細胞返回該供血者個體。
在這種療法(本文稱恢復性自體移植)中，本發明利用了以下事實多種白細胞缺陷的發生是一系列暫時性事件(它們彼此有或沒有因果關係)的一部分，故而在發生白細胞缺陷之前的一個時間點創建白細胞庫，就構成了後來可以進行恢復性治療的一個治療源。
第二大類是利用本發明的方法從罹患白細胞缺陷的個體供血者的血樣創建白細胞組合物。然後在體外對白細胞組合物進行處理，將處理過的組合物再移植到該個體體內。對白細胞組合物進行的處理使這些白細胞組合物返回供血者體內後，可以緩解或消除白細胞缺陷。該方法的一個變換方法涉及在採血步驟之前在體內處理個體的白細胞，這些方法可以涉及在採血步驟之後在體外的進一步處理。
在這些治療(本文中稱治療性自體移植)中，本發明利用了以下事實多種白細胞缺陷可以通過對個體白細胞總群體中一小部分進行處理而克服。這類處理將在下文中詳述，包括基因修改，細胞擴增(cellular expansion)，選擇性消除具體細胞類型和用具體分子(如細胞因子)進行刺激。
上述恢復性自體移植的概念可以應用於所有個體，不管是否健康，也不管有沒有可被疑為白細胞缺陷指標的因素(例如年齡、醫療史、遺傳背景和生活方式)。但是，它確實允許鑑別一類特別適於應用本發明方法的具體群體，詳見第III節(題為「選擇供血者個體」)。而且，由於如上述定義並可以用本發明恢復性或治療性自體移植進行治療的白細胞缺陷包括廣泛多種已知疾病，因此，它們將在下面的第XII節(題為「實例說明」)中更詳細描述。
XII.實例說明(Exemplary indications)如前文中所述，本發明的治療性應用和預防性應用涉及廣泛多種疾病、症候群、失調、生理失調和感染。
感染本發明可以用於治療各種感染。在這種情況中，內源性白細胞活性可以是正常的(或具有正常反應)，但是仍希望改變、增大或刺激它。在其它情況(如HIV感染)中，內源性白細胞活性因感染直接導致功能失調。
可以根據本發明進行治療或預防的感染包括，細菌性感染，真菌性感染或病毒性感染，或者由任何其它生物，例如原生動物，線蟲、昆蟲或其它寄生蟲引起的感染。
優選的應用是治療由HIV感染導致的AIDS。在這種情況中，可以在個體健康或未受感染的時候收集其CD4+細胞並貯存，當該個體出現HIV感染或者當AIDS發病或CD4+細胞計數降低時，將貯存的細胞移植到該個體中。這種方法對於那些生活方式使之面臨HIV感染風險的個體具有吸引力。
癌症、白血病和肉瘤本發明還可以用於治療和預防各種惡性病(malignancies)通常是指，任何惡性或惡性前兆(pre-malignant)，擴散或過度擴散(hyper-proliferative)生理失調或者任何由於機體細胞或組織中的功能失調(disturbance)或異常或者其它失調或異常所引起的疾病或與它們有關的疾病。
治療或預防各種形式的癌症是本發明優選的實施方案，其包括治療或預防機體的任何癌性細胞或組織。
因此，本發明不限於任一種擴散性疾病(例如，白血病、淋巴瘤、癌(carcinomas)或肉瘤)，也不限於具體的癌基因或腫瘤抑制基因表位如前列腺特異性抗原1或前列腺特異性抗原2，her-2/new，ras，myc，myb，fos，fas，視網膜母細胞瘤，p53等，或以HLAI類抗原限制性方式或其它類似方式呈遞、從而能被白細胞識別的其它腫瘤細胞標誌表位。所有癌症，如白血病，淋巴瘤，乳腺癌，胃癌，結腸癌，直腸癌，肺癌，肝癌，子宮癌，睪丸癌，卵巢癌，前列腺癌和腦腫瘤如神經膠質瘤、星形細胞瘤和神經母細胞瘤，肉瘤如橫紋肌肉瘤和纖維肉瘤，都可以用本發明進行治療或預防。
因此，本發明可以用於治療或預防乳腺癌、結腸癌、肺癌和前列腺癌。本發明還可以用於治療或預防血液系統和淋巴系統的癌症(包括何杰金氏病(Hodgkin′s Disease)、白血病、淋巴瘤、多發性骨髓瘤、Waldenstrm氏病)，皮膚癌症(包括惡性黑素瘤)，消化道癌症(包括頭頸部癌、食道癌、胃癌、胰腺癌、肝癌、結直腸癌、肛門癌)，泌尿生殖道癌症(包括腎癌、膀胱癌、睪丸癌、前列腺癌)，女性的癌症(包括乳腺癌、卵巢癌、婦科癌症和絨膜癌)以及腦、骨中的類癌，鼻咽癌，腹膜後腔(retroperitoneal)腫瘤，甲狀腺腫瘤，和軟組織腫瘤。本發明還可以用於治療或預防未知的原發部位的癌症。
XIII.劑量學(Posology)本領域技術人員很容易確定本發明醫學應用中進行自體移植的白細胞組合物用量。要注意，只要0.01×108(例如，1-10×108)成熟淋巴細胞(可以從單一一份約100ml的正常人血液樣品中獲得)就足以增強(boost)受試者的免疫系統，並因此具有本發明自體移植方法的有益效果。要注意，僅在英國，每年從供血者採集到超過3百萬單位的血，從中取出一個單位的血用於同種異體移植是很平常的。
所施用的白細胞組合物可以來自單一一份血樣，或者可以是將同一供血者個體在不同時間點採集的多份不同血樣混合而成的白細胞組合物混合群(pool)。所施用的白細胞組合物可以是保存物的全部或一部分，優選是其一部分，以便可以多次(multiple dosing)施用，也可以選擇在將剩餘的細胞進行擴增後再施用(例如，T細胞數可以用標準方法體外擴增)。
在基於T細胞活性的應用中，成熟T細胞用量是至少0.01×108，更優選至少0.1×108，更優選至少1×108(如至少1-10×108)。優選的範圍是0.01×108-1010成熟T淋巴細胞，如0.1×108-1010，1×108-1010或1×109-1010成熟T淋巴細胞。
因此，自體移植所需的成熟T細胞樣品是至少0.01×108，通常在108-1010CD3+成熟T細胞的範圍，優選2×108-1010，更優選3×108-1010CD3+，還更優選4-5×108-1010CD3+成熟T細胞。
方便地，每份用於自體移植的樣品包含3×108CD3+成熟T細胞，更優選5×108，還更優選1×109CD3+成熟T細胞。當個體能提供充足的血液來源時，還更優選使用4-5×109CD3+成熟T細胞或1010CD3+成熟T細胞。
優選地，自體移植所需CD3+和CD8+成熟T細胞亞群的樣品是至少0.01×108，通常在0.25×108-0.25×1010的範圍，更優選0.5×108-0.25×1010，還更優選0.75×108-0.25×1010，還更優選0.75×108-0.25×1010或1.00-1.25×108-0.25×1010。方便地，用於移植的每份樣品中CD3+和CD8+的細胞數是0.2×108的水平，優選0.4×108，或更優選1×108，或還更優選2×108，或更優選3×108，或更優選5×108。當個體能提供充足的血液來源時，可以使用1×109，優選2×109，4×109，或更優選1×1010CD3+和CD8+細胞。
優選地，自體移植所需CD3+和CD4+成熟T細胞亞群的樣品是至少0.01×108，通常在0.1×108-0.5×1010的範圍，更優選0.65×108-0.5×1010，還更優選0.85×108-0.5×1010，還更優選1×108-0.5×1010或1.8-3.6×108-0.5×1010。方便地，用於移植的每份樣品中CD3+和CD4+的細胞數是0.2×1010的水平，優選0.3×108，或更優選0.4×108，0.5×108，1×108，2×108，3×108，4×108，或更優選5×108。當個體能提供充足的血液來源時，可以使用1×109，或更優選2×109，或更優選1×1010CD3+和CD4+細胞。
優選地，自體移植所需CD3+和CD16/56+成熟T細胞自然殺傷細胞亞群的樣品是至少0.01×108，通常在0.01×108-0.5×1010的範圍，優選0.02×108-0.5×1010，更優選0.03×108-0.5×1010，還更優選0.5×108-0.5×1010或0.5-2×108-0.5×1010。方便地，用於移植的每份樣品中CD3+和CD16/56+的細胞數是0.01×108，0.2×108，0.3×108，0.5×108，1×108，2×108，3×108，5×108的水平，或更優選，當個體能提供充足的血液來源時，可以使用1×109，或更優選2×109，或更優選1×1010CD3+和CD16/56+細胞。
此外，成熟淋巴細胞樣品優選包括B細胞，如CD19+B淋巴細胞。包括在T細胞樣品中的成熟B細胞樣品可以是至少107，108或109，通常在107-1010成熟B細胞的水平，優選2×107-1010成熟B細胞，更優選3×107-1010成熟B細胞，還更優選4-5×107-1010成熟B細胞。
方便地，自體移植物中B細胞的具體數目在3×107的水平，優選5×108，更優選1×109成熟B細胞，還更優選4-5×109或1010成熟B細胞。
此外，淋巴細胞樣品可以優選包括樹突細胞。樹突細胞樣品可以是至少107，108或109的數量，通常在107-1010樹突細胞的範圍，優選2×107-1010細胞，更優選3×107-1010細胞，還更優選4-5×107-1010細胞。
自體移植物中樹突細胞的具體數目在3×107的水平，優選5×108，更優選1×108，還更優選4-5×109或1010成熟B細胞。
XIV.等效方案上文中詳細描述了本發明的優選實施方案，它們因此被視為對本發明各個方面的舉例說明而非限制。本領域技術人員了解或者可以認識到，利用常規實驗，可以獲得本文所述具體實施方案的多種等效方案(equivalent)，改良方案(modification)或變化方案(variation)。這些等效方案，改良方案或變化方案都包括在權利要求所述的發明範圍內。
權利要求
1.製備用於自體移植的白細胞組合物的方法，包括以下步驟(a)提供來自供血者個體的分離的血樣；(b)用白細胞單採裝置從該血樣中選擇性分離並收集白細胞。
2.權利要求1的方法，其中所述白細胞單採裝置是自動白細胞單採裝置。
3.權利要求1或2的方法，其中所述白細胞單採裝置包含封閉系統或功能性封閉系統。
4.權利要求2或3的方法，其中所述白細胞單採裝置是連續的或間斷的流體離心式白細胞單採裝置，或者是連續的或間斷的流體過濾式白細胞單採裝置。
5.在先任一權利要求的方法，其中所述自細胞單採裝置包含(a)分離裝置(例如，離心轉子或濾器)；(b)白細胞單採管道裝置；以及(c)一或多個泵，所述泵用於將樣品運輸通過所述管道裝置和將分離的白細胞運輸至採集容器。
6.在先任一權利要求的方法，所述方法用於製備恢復性自體移植所用的白細胞組合物，該方法還包括以下步驟(c)使收集到的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存使之休眠)；和，可選地(d)使休眠的白細胞復甦(例如，通過解凍和/或稀釋使之復甦)。
7.權利要求1-5中之任一方法，所述方法用於製備治療性自體移植所用的白細胞組合物，該方法還包括以下步驟(c)處理所收集到的白細胞；和，可選地(d)使經過處理的白細胞休眠(例如，通過深低溫保存使之休眠)。
8.權利要求7的方法，還包括以下步驟(e)使經過處理且已休眠的白細胞復甦(例如，通過解凍和/或稀釋使之復甦)。
9.權利要求6的方法，所述方法用於製備白細胞庫，其中將所述方法重複應用於來自不同供血者個體的一系列血樣，從而製備多份休眠(例如深低溫保存)的白細胞組合物，所述方法還包括，將休眠的白細胞以可以復甦的方式保存、以備日後自體移植的步驟。
10.一種用於從個體收集分離的血樣的系統(例如，封閉系統或功能性封閉系統)，所述系統包含(a)採樣裝置(例如，包含針頭)，以用於從所述個體收集血樣；(b)樣品容器，其與所述採樣裝置之間有流體聯通；(c)白細胞單採管道系統，其與所述樣品容器之間有流體聯通，其中所述管道系統是盲端，它不包含用於將經過分級分離的樣品的任何一部分引回所述個體中的裝置。
11.權利要求10的系統，其中所述管道系統包含一或多個(例如3個)白細胞收集容器。
12.權利要求10或11的系統，其中所述管道系統還包含血液處理容器(例如，離心環)。
13.權利要求6-8中之任一系統，其中所述管道系統還包含用於容納獲取白細胞以後剩餘的血液的容器。
14.權利要求10-13中之任一系統，還包含用於將來自個體的血樣導入樣品容器的針。
15.用於從來自個體的分離的血樣中選擇性分離和取出白細胞的裝置，所述裝置包含帶有權利要求10-14中之任一收集系統的白細胞單採裝置。
16.權利要求15的裝置，其中所述白細胞單採裝置是權利要求2-5中之任一所述的裝置。
17.白細胞組合物，其可以(或已經)用權利要求1-9中之任一方法獲得。
18.白細胞庫，其可以(或已經)用權利要求9的方法獲得。
19.權利要求17的白細胞組合物，是在治療或預防中應用的白細胞組合物。
20.權利要求17的白細胞組合物在製備用於自體移植(例如，CAT療法，或者恢復性或治療性自體移植)的藥物中的用途。
全文摘要
本發明涉及新的白細胞單採形式(分離的白細胞單採)，實施分離的白細胞單採的方法和裝置，由此產生的白細胞庫以及基於它們進行的各種形式的治療。
文檔編號A61B5/155GK1761475SQ200480007085
公開日2006年4月19日 申請日期2004年6月17日 優先權日2003年6月21日
發明者威廉·A·施皮爾斯 申請人:英國生命力集團公司