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一種黑木耳液體菌種及其製備方法與流程

2023-05-13 01:53:11 1

本發明涉及食用菌技術領域,尤其涉及一種黑木耳液體菌種及其製備方法。



背景技術:

黑木耳是一種營養豐富的食用菌,又是我國傳統的保健食品和出口商品。目前,大多數黑木耳栽培仍然採用傳統的母種、原種、栽培種的固體培養模式,這種方式存在周期長,汙染率高,菌齡不一致等缺點。

基於上述周期長的缺點,越來越多的人們採用液體菌種來栽培黑木耳,這種液體菌種栽培方式的周期短,通常液體菌種是通過發酵罐一次發酵獲得,這種方式獲得的液體菌種存在發酵不均勻,成活率低,菌種萌發期長等缺點。



技術實現要素:

本發明針對現有技術的不足,提供一種黑木耳液體菌種及其製備方法,提高菌種成活率。

本發明是通過如下技術方案實現的,提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速160~200r/min,在溫度24~28℃條件下培養5~8天;

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24~28℃,通入無菌空氣培養4~6天;

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24~28℃,通入無菌空氣培養2~3天,獲得黑木耳液體菌種。

本發明的方法中採用兩次發酵製備黑木耳液體菌種,相比一次發酵,二次發酵在等量原種的情況下增大接種量三到四倍,節約生產成本;且二次發酵使液體發酵液中的營養成分維持在適宜的水平,既利於菌絲在液體環境中生長,又能讓菌絲在接入菌棒後的萌發階段更快適應;最主要的是二次發酵使菌種發酵的更均勻,更充分,提高了菌種的成活率。

作為優選,所述步驟s02中,所述液體培養基包括如下質量分數的組分:

麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水。

蛋白腖作為速效氮源,滿足菌種快速萌發的需要。磷酸二氫鉀提供微量元素,並且起到緩衝ph值的作用。

作為優選,所述步驟s02中,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至121~125℃保持1~3小時。

作為優選,所述步驟s03中,所述發酵罐一次發酵培養基包括如下質量分數的組分:

麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水。

玉米粉既是氮源,又是碳源,為培養基提供較為全面的營養。硫酸鎂能激發酶活性,提高菌絲活力。

作為優選,所述步驟s03中,所述發酵罐一次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至118~125℃保持1~3小時。

作為優選,所述步驟s04中,所述發酵罐二次發酵培養基包括如下質量分數的組分:

土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水。

土豆汁作為碳源。

作為優選,所述步驟s04中,所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至118~125℃保持1~3小時。

本發明還提供一種採用上述方法製備得到的黑木耳液體菌種。

本發明實施例提供的技術方案可以包含以下有益效果:

本發明提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括母種製備、液體搖瓶製備、發酵罐一次發酵、發酵罐二次發酵等步驟,在發酵罐進行一次發酵之後繼續進行二次發酵,相比一次發酵製備的液體菌種,本發明的二次發酵方法在等量原種的情況下增大接種量三到四倍,節約生產成本;且二次發酵使液體發酵液中的營養成分維持在適宜的水平,既利於菌絲在液體環境中生長,又能讓菌絲在接入菌棒後的萌發階段更快適應;最主要的是二次發酵使菌種發酵的更均勻,更充分,提高了菌種的成活率。

具體實施方式

為了使本技術領域的人員更好地理解本發明中的技術方案,下面將對本發明實施例中的技術方案進行清楚、完整地描述,顯然,所描述的實施例僅僅是本發明一部分實施例,而不是全部的實施例。基於本發明中的實施例,本領域技術人員在沒有做出創造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例,都應當屬於本發明的保護範圍。

實施例1

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水。

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速160r/min,在溫度24℃條件下培養5天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至121℃保持1小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24℃,通入無菌空氣培養4天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至118℃保持1小時。

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24℃,通入無菌空氣培養2天,獲得黑木耳液體菌種;其中,所述發酵罐二次發酵培養基包括:土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至118℃保持1小時。

實施例2

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速200r/min,在溫度28℃條件下培養8天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至125℃保持3小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24℃,通入無菌空氣培養4天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至125℃保持3小時。

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24℃,通入無菌空氣培養3天,獲得黑木耳液體菌種;其中,所述發酵罐二次發酵培養基包括:土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至125℃保持3小時。

實施例3

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速180r/min,在溫度26℃條件下培養5~8天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至123℃保持2小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24℃,通入無菌空氣培養4天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至120℃保持2小時。

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24℃,通入無菌空氣培養3天,獲得黑木耳液體菌種;其中,所述發酵罐二次發酵培養基包括:土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至120℃保持2小時。

實施例4

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速180r/min,在溫度24℃條件下培養5~8天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至121℃保持1小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24℃,通入無菌空氣培養4天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至118℃保持3小時。

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24℃,通入無菌空氣培養2天,獲得黑木耳液體菌種;其中,所述發酵罐二次發酵培養基包括:土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至125℃保持1小時。

實施例5

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速160r/min,在溫度28℃條件下培養5天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至125℃保持3小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫28℃,通入無菌空氣培養6天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至125℃保持1小時。

s04:將所述步驟s03獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐二次發酵培養基上,在發酵罐內保持溫度24℃,通入無菌空氣培養2天,獲得黑木耳液體菌種;其中,所述發酵罐二次發酵培養基包括:土豆汁:15%,玉米粉:5%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐二次發酵培養基的滅菌方法為:將所述發酵罐二次發酵培養基在發酵罐中加熱至118℃保持2小時。

對比例1

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速160r/min,在溫度28℃條件下培養5天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至125℃保持3小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫28℃,通入無菌空氣培養6天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至125℃保持1小時。

對比例2

本實施例提供一種黑木耳液體菌種的製備方法,所述方法包括如下步驟:

s01:購買黑木耳菌種,並保存於pda斜面培養基上;所述pda斜面培養基包括馬鈴薯20%,葡萄糖2%,瓊脂2%,餘量為水;

s02:將150ml液體培養基加入至500ml的三角瓶中,滅菌並冷卻後接入所述步驟s01中的菌種,旋轉式搖床,轉速180r/min,在溫度24℃條件下培養5~8天;其中,液體培養基包括:麩皮:10%,玉米粉:5%.葡萄糖:1%,kh2p04:0.1%,mgs04:0.1%,蛋白腖:0.1%,餘量為水,所述液體培養基的滅菌方法為:將所述液體培養基加熱至121℃保持1小時。

s03:將所述步驟s02獲得的菌種接入滅菌並冷卻後的發酵罐一次發酵培養基上,在發酵罐內保持恆溫24℃,通入無菌空氣培養4天;其中,所述發酵罐一次發酵培養基包括:麩皮:5%,玉米粉:10%.葡萄糖:2%,kh2p04:0.2%,mgs04:0.1%,餘量為水;所述發酵罐一次發酵培養基滅菌方法為:將所述發酵罐一次發酵培養基在發酵罐中加熱至118℃保持3小時。

將上述液體菌種與固體菌種相比:

液體菌種8d即可達到接種要求,而固體菌種需30d以上菌絲才能長滿瓶。固體菌種原種、栽培種培養共需50d,而液體菌種原種、栽培種培養共需25d,採用搖瓶發酵結合固體料制種可縮短制種時間25d,可見在時間上液體菌種比固體菌種有更大的優越性。

液體菌種與固體菌種在栽培過程的差異,液體菌種袋比固體菌種袋提前25d長滿,始菇期提前8d,終菇期延後20d,生物學效率提高15%。

將上述實施例1至實施例5與對比例1和對比例2進行對比,即二次發酵獲得的菌種相比一次發酵獲得的菌種,二次發酵在等量原種的情況下增大接種量三到四倍,節約生產成本;且二次發酵使液體發酵液中的營養成分維持在適宜的水平,既利於菌絲在液體環境中生長,又能讓菌絲在接入菌棒後的萌發階段更快適應;最主要的是二次發酵使菌種發酵的更均勻,更充分,提高了菌種的成活率。

當然,上述說明也並不僅限於上述舉例,本發明未經描述的技術特徵可以通過或採用現有技術實現,在此不再贅述;以上實施例僅用於說明本發明的技術方案並非是對本發明的限制,參照優選的實施方式對本發明進行了詳細說明,本領域的普通技術人員應當理解,本技術領域的普通技術人員在本發明的實質範圍內所做出的變化、改型、添加或替換都不脫離本發明的宗旨,也應屬於本發明的權利要求保護範圍。

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