一種適於美國紅楓組織快繁方法
2023-05-13 02:41:16
一種適於美國紅楓組織快繁方法
【專利摘要】本發明公開了一種美國紅楓組織快繁的方法，包括以下步驟：（1）以美國紅楓的幼嫩莖段為外植體，進行表面消毒；（2）在初代培養基上進行培養，培養時間為25-30天；（3）在增殖培養基上進行培養，培養時間20-40天；（4）在生根培養基進行上生根培養，培養至長合適的根為止。通過本發明方法可快速、持續獲得優良美國紅楓無菌苗，且幼苗成活率高，為美國紅楓工廠化育苗生產提供技術保證和奠定堅實基礎，有助於我國美國紅楓栽培的產業化發展。
【專利說明】-種適於美國紅楓組織快繁方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種適於美國紅楓組織快繁方法。
【背景技術】
[0002] 美國紅楓為槭樹科槭樹屬，紅雞爪槭的栽培變種，原產美國東海岸，適應範圍廣， 在酸性土、中性土和石灰質土均能適應；抗性強，耐寒、耐旱、耐溼，耐薄瘠，但是喜溼潤溫暖 的氣候，在土壤肥沃、排水良好的環境中生長良好。美國紅楓屬於落葉大喬木，葉掌狀3? 5裂，葉長5?10cm，春季嫩葉呈鮮紅色或紫紅色，夏季略轉青，整株姿形優美，秋季樹葉 常出現鮮紅的色彩，風姿極佳，為城市綠化和營造景林的著名觀賞樹種，目前廣泛應用於公 園、庭院、小區綠化。美國紅楓枝葉可藥用，具有清熱解毒、行氣止痛的作用，可治療關節酸 痛、腹脹等症。美國紅楓木材還可作細木加工。因此，美國紅楓是一種值得大力推廣的珍貴 苗木。
[0003] 美國紅楓既可以進行有性繁殖，也可以進行無性繁殖。有性繁殖雖然方法簡單， 繁殖係數大，但是美國紅楓的色彩性狀是由於基因變異引起的，而非正常的生理表現，其色 彩性狀通過有性繁殖很難穩定遺傳。無性繁殖包括扦插、嫁接和組織培養。扦插生根成活 率低，嫁接繁殖速度太慢，這些缺陷嚴重影響了美國紅楓的規模發展與推廣。植物組織培養 技術具有效率高、生長快、周期短、重複性強、可周年生產等優點，在現代農業生產和園林育 種中得到了廣泛的應用。因此，繁殖美國紅楓園藝品種的最佳方式是組織培養。到目前為 止，已有研究者對紅楓的組織培養技術進行了初步研究，但是尚未建立美國紅楓組織快繁 體系。
【發明內容】
[0004] 本發明所要解決的技術問題是提供一種適宜於美國紅楓組織快繁的方法，通過該 方法可快速、持續獲得優良美國紅楓無菌苗，且幼苗成活率高，為美國紅楓工廠化育苗生產 提供技術保證和奠定堅實基礎，有助於我國美國紅楓栽培的產業化發展。
[0005] 本發明提供的技術方案是：一種美國紅楓組織快繁的方法，包括以下步驟：
[0006] (1)以美國紅楓的幼嫩莖段為外植體，進行表面消毒；
[0007] (2)在初代培養基上進行培養，培養時間為25-30天，其中初代培養基為 WPM+1. 0 ?I. 5mg/L BA+1. 0-2. Omg/L ZT+3-3. 5% 白糖；
[0008] (3)在增殖培養基上進行培養，培養時間20-40天，其中增殖培養基為WPM+1. 0? I. 5mg/L BA+2-3mg/L ΖΤ+0. 5-lmg/L GA3+3-3. 5% 白糖；
[0009] (4)在生根培養基上進行生根培養，培養至長合適的根為止，其中生根培養基為 1/2WPM+0. 5-lmg/L ΙΒΑ+0. 3 ?0· 5mg/L NAA+3 ?3. 5% 白糖。
[0010] 所述的方法，所述美國紅楓是美國紅點紅楓。
[0011] 所述的方法,進一步包括煉苗培養，以體積比草炭：蛭石=1 : 1為煉苗基質。
[0012] 上述的方法，所述表面消毒是先用75%酒精消毒50s後，再用0. 1%升汞進行兩次 處理，處理時間共12min。
[0013] 所述的方法，優選地，所述初代培養基為WPM+1. 5mg/L BA+2. Omg/L ZT+3%白糖。
[0014] 所述的方法，優選地，所述增殖培養基為WPM+1.5mg/L BA+2.0mg/L ZT+0.5mg/ LGA3+3% 白糖。
[0015] 所述的方法，優選地，所述生根培養基為1/2WPM+0. 5mg/L IBA+0. 3mg/LNAA+3. 5% 白糖。
[0016] 所述的方法，優選地，所述初代培養時間為28天。
[0017] 所述的方法，優選地，所述增殖培養時間為30天。
[0018] 所述的方法，優選地，所述生根培養時間為50-70天，更為優選地，所述生根培養 時間為60天。
[0019] 本發明具有以下有益效果：
[0020] 本發明以美國紅點紅楓的幼嫩莖段為外植體，對外植體的表面消毒、初代培 養基、增殖培養基、生根培養基、煉苗基質等無菌苗生產的幾個關鍵因素進行了優化， 建立一種適宜於美國紅楓組織快繁的方法。結果表明，外植體表面先用75%酒精消毒 50s後，再用0. 1 %升汞進行兩次處理，處理時間共12min，成活率高達84% ;以WPM為 基本培養基，適宜的初代培養基為1.0?1.5mg/L BA+1.0-2.0mg/L ZT+3%白糖，外植 體莖段的葉腋芽萌發率達85%以上；適宜的增殖培養基為I. 0?I. 5mg/L BA+2-3mg/L ZT+0. 5-lmg/L GA3+3-3. 5%白糖，增殖係數高達4. 7以上，苗長勢好；適宜於生根的培養基 為1/2耶]?+0.5-1.011^/118六+0.3?0.511^/1隱六+3?3.5%白糖，生根率達90%以上，主 根粗壯且長，側根細密；以體積比草炭：蛭石=1 : 1為煉苗基質，幼苗成活率高達100%。 本發明建立了可快速、持續獲得優良美國紅楓無菌苗的關鍵技術方法，有助於我國美國紅 楓栽培的產業化發展。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0021] 圖1為外源生長調節劑對增殖生長的影響，其中，A在添加 I. Omg/L ZT的增殖培養 基中培養IOd後的莖段，增殖係數較低；B在添加2. Omg/L ZT的增殖培養基中培養IOd後 的莖段，增殖係數高；C在1/2WPM的生根培養基中培養50d後的小苗，根系發達呈乳白色， 小苗健壯，葉色碧綠。
[0022] 圖2為不同基質配比對移栽成活率的影響。
【具體實施方式】
[0023] 下面通過【具體實施方式】的詳細描述來進一步闡明本發明，但並不是對本發明的限 制，僅僅作示例說明。
[0024] 植物材料來自湖南農業大學校園內的美國紅楓品種紅點紅楓，外植體選用生長健 壯無病害的當年生的幼嫩枝條。
[0025] 實施例1 :初代培養
[0026] 1.不同滅菌時間組合對外植體生長的影響
[0027] 初始外植體選取當年生幼嫩枝條，摘除葉片，將枝條切成1?2cm長的單對芽莖 段，用飽和洗衣粉水溶液浸泡約20min後流水下衝洗約30min,轉入超淨工作檯上。先用 75 %酒精分別消毒35、50、65s，然後用0. I %升汞分別消毒8、10、12min (分1?2次消毒）， 接著用無菌水衝洗4次，2min/次，最後用無菌濾紙吸乾外植體表面水分，各處理消毒的具 體時間和次數見表1。在無菌條件下接種於培養基上，每個處理接種10個外植體，1個外植 體/瓶，重複3次，培養IOd後，統計外植體汙染率、褐化死亡率、存活率。
[0028] 汙染率（％ )=汙染個數/接種個數X 100
[0029] 褐化死亡率（％)=褐化死亡個數/接種個數X 100
[0030] 存活率（％)=存活個數/接種個數X 100
[0031] 對外植體莖段以75%酒精和0.1%升汞不同時間組合雙重滅菌的影響見表1。從 表1可以看出，75%的酒精用於表面滅菌的時間過短，莖段易汙染，時間超過60s，莖段易 褐化，因此，75%的酒精的最佳滅菌時間為50s。升汞的滲透力相對酒精較弱，前者用於表 面滅菌的時間較長，隨著升汞處理的時間延長，莖段染菌率相對降低，而莖段褐化率相對升 高。另外，在相同滅菌時間條件下，將升汞分兩次進行滅菌的莖段染菌率均比一次滅菌的染 菌率有所下降。因此，75%的酒精50s和0. 1 %汞滅菌12min分兩次進行組合滅菌的效果最 佳，其染菌率和褐化率均為8 %，存活率高達84 %，顯著優於其它的組合。
[0032] 表1不同消毒時間組合對外植體莖段生長的影響
[0033]
【權利要求】
1. 一種美國紅楓組織快繁的方法，其特徵在於，包括以下步驟： (1) 以美國紅楓的幼嫩莖段為外植體，進行表面消毒； (2) 在初代培養基上進行培養，培養時間為25-30天，其中初代培養基為WPM+ 1. 0 ~1. 5mg/LBA+ 1. 0-2. 0mg/LZT+3-3. 5 % 白糖； (3)在增殖培養基上進行培養，培養時間20-40天，其中增殖培養基為WPM+1. 0~1. 5 mg/L BA+2-3 mg/L ZT+0? 5-1 mg/L GA3+2-4%白糖； (4)在生根培養基進行上生根培養，培養至長合適的根為止，其中生根培養基為1/2 WPM+0? 25-1 mg/L IBA+0? 3?0? 5 mg/L NAA+3?3. 5%白糖。
2. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述美國紅楓是美國紅點紅楓。
3. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：進一步包括煉苗培養，以體積比草炭：蛭石 =1 : 1為煉苗基質。
4. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述表面消毒是先用75%酒精消毒50s後， 再用0. 1 %升汞進行兩次處理，處理時間共12min。
5.如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述初代培養基WPM+1. 5 mg/L BA+2. 0 mg/ L ZT+3%白糖。
6.如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述增殖培養基WPM+1. 5 mg/L BA+2. 0 mg/ L ZT+0. 5 mg/L GA3+3%白糖。
7.如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述生根培養基1/2WPM+0. 5 mg/L IBA+0. 3 mg/LNAA+3. 5%白糖。
8. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述初代時間為28天。
9. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述增殖時間為培養30天。
10. 如權利要求1所述的方法，其特徵在於：所述生根時間為60天。
【文檔編號】A01H4/00GK104509439SQ201410798807
【公開日】2015年4月15日 申請日期:2014年12月19日 優先權日:2014年12月19日
【發明者】邱義蘭, 劉如石, 廖旻晶 申請人:湖南師範大學