一種柔性納米脂質體及其製備方法和應用的製作方法
2023-05-12 13:39:46
一種柔性納米脂質體及其製備方法和應用的製作方法
【專利摘要】本發明涉及一種柔性納米脂質體及其製備方法和應用。本發明的柔性納米脂質體包括下列重量份的組分所製成：1-1000份中性磷脂、1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.1-2份透明質酸和0.5-500份積雪苷。本發明的積雪苷柔性納米脂質體，可以顯著促進積雪苷的透皮吸收並提高其作用效率，還能提高積雪苷在皮膚表面和皮膚深層的滯留和作用時間；凍乾粉末狀態的積雪苷柔性納米脂質體還利於使用、運輸和貯存；本發明的柔性納米脂質體的製備方法均可採用機械化方法，產品工藝和質量的穩定性好、重現性高。
【專利說明】一種柔性納米脂質體及其製備方法和應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種柔性納米脂質體及其製備方法，特別是指積雪苷柔性納米脂質體及其製備方法，以及該柔性納米脂質體在化妝品方面的應用。
【背景技術】
[0002] 積雪苷是傘形科Umbelliferae積雪草Centella asiatica (L.) Urban的乾燥全草或帶根全草的提取物，可以緊緻表皮與真皮連接部分，能使皮膚變柔軟，有助於解決皮膚鬆弛現象，使皮膚光滑有彈性；幫助促進真皮層中膠原蛋白形成，使纖維蛋白再生，重新連接起來，從根本上消除媽媽紋，使肌膚達到緊緻光滑的效果。還可幫助受損的組織癒合及緊實肌膚。作為傳統藥物在亞洲、非洲等地已經應用了很長時間，主要用於治療皮膚和黏膜方面的疾病。由於其良好的促進成纖維細胞和膠原細胞的合成、抗菌、消炎等多方面的作用，近年來，越來越多的諸如疤痕修復、抗皺、抗衰老、去粉刺等功效型化妝品將積雪苷作為其主要活性成分之一。
[0003]專利申請號:200610066918.1，發明名稱為一種積雪苷分散片及其製備方法的專利，其公開了一種積雪苷分散片，它主要由積雪草總苷、崩解劑、填充劑、矯味劑製備而成。
[0004]專利申請號為200610050184.8，發明名稱為一種積雪苷外用液體製劑，它的有效成分由下列重量配比的原料製成:積雪苷0.1%~30.0%，藥用溶媒70.0%~99.9%。
[0005]積雪苷用於化妝品的主要形式為霜膏劑型，由於皮膚的修復周期較長，而霜膏劑型的使用習慣，勢必決定了積雪苷與皮膚接觸時間較短，不能充分發揮積雪苷的作用效果和作用時間。
[0006]二十世紀六十年代出現的柔性納米脂質體，可以通過其自身的柔性和變形性，高效地穿透比自身直徑小數倍的皮膚孔道從而達到良好的透皮吸收效果，柔性納米脂質體不僅可以包裹小分子活性物，對於分子量高達IO6的生物大分子活性物質亦具有比較優良的皮膚透過性能，是化妝品製備中極具潛力的製備方法。另外，化妝品活性成分分別用脂質體包裹，可以有效避免這些成分可能存在的相互作用和理化反應，進一步提高了其穩定性和使用的安全性。
【發明內容】
[0007]本發明為了解決上述問題，提供一種透皮能力強且生物相容性好的積雪苷柔性納米脂質體製劑。
[0008]本發明提供一種積雪苷柔性納米脂質體，能保證積雪苷在其的穩定性和使用安全性。
[0009]本發明提供了一種簡單，且具有較高的包封率和載藥量的積雪苷柔性納米脂質體製備方法。
[0010]本發明提供了一種柔性納米脂質體在化妝品中的應用。
[0011]本發明的技術方案如下:[0012]所述的柔性納米脂質體包括下列重量份的組分所製成:1-1000份中性磷脂、1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.1-20份透明質酸和0.5-500份積雪苷。
[0013]在本發明一較佳實施例中，本發明的柔性納米脂質體包括下列重量份的組分所製成:100-120份中性磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0.1-20份透明質酸和0.5-60份積雪苷。
[0014]在本發明一更佳實施例中，本發明的柔性納米脂質體包括下列重量份的組分所製成:100-120份中性磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、0.1-20份透明質酸和40份
積雪苷。
[0015]在本發明一較佳實施例中,所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、二棕櫚酸磷脂醯膽鹼、二硬脂酸磷脂醯膽鹼、二肉豆蘧酸磷脂醯膽鹼、二月桂酸磷脂醯膽鹼或者二棕櫚酸磷脂醯乙醇胺中的一種或多種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉。
[0016]本發明中性磷脂優選大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、二棕櫚醯磷脂醯膽鹼中的一種或幾種。
[0017]本發明中膽固醇的使用是為了調節脂質體膜的流動性和通透性，進而調整脂質體膜的穩定性。本發明使用的表面活性劑，可以使脂質體膜具有更大的彈性與變形性，從而促進脂質體的透皮吸收性能。優選膽酸鈉或去氧膽酸鈉。
[0018]在本發明一較佳實施例中，本發明的柔性納米脂質體還包括佔脂質體總重量
0.1-0.5%的抗氧化劑；所述的氧化劑選自維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚(BHA)、2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚(BHT)、茶多酚、愈創樹脂、芝麻酚或者波爾定鹼中的一種或多種。
[0019]優選地為0.2%抗氧化劑，抗氧化劑優選地為維生素E和丁基羥基茴香醚(BHA)組成的混合抗氧化劑。
[0020]在本發明一較佳實施例中，本發明的柔性納米脂質體可以包括相當於脂質體總重量2-8倍的冷凍保護劑。所述的冷凍保護劑可選用但不限於甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖。優選乳糖和甘露醇。
[0021]在本發明一較佳實施例中，上述脂質成分與所包裹活性成分的重量比，對脂質體的穩定性、包封率及載藥量有較大影響，適宜的脂質成分與所包裹活性成分的重量比在2:1至6:1 ;凍幹保護劑與脂質體的重量比，對最終產品的載藥量亦有較大影響，適宜的比例範圍是凍幹保護劑:脂質體3:1至6:1。
[0022]本發明提供了脂質體混懸液中，脂質體包裹的活性成分與游離的活性成分分離的透析方法，還可以採用低溫超速離心法、柱層析法等分離脂質體與游離成分。
[0023]在本發明一實施例中，所述方法採用逆向蒸發法-超聲-均質-擠出-凍幹法，其包括如下步驟:
[0024]I)將所述比例的中性磷脂、膽固醇在10_50°C水浴條件下溶解於揮發性有機溶劑中；
[0025]2)將所述比例的表面活性劑、積雪苷、冷凍乾燥保護劑水溶性成分在10_50°C水浴條件下溶解於PH=7.0的磷酸緩衝溶液中；
[0026]3)將步驟I)和2)混合超聲成乳狀，靜置；[0027]4)將步驟3)得到的乳液置於旋轉蒸發儀上旋轉蒸發得初步的脂質體混懸液；
[0028]5)將步驟4)得到脂質體混懸液，超聲破碎60-90次後，5000PS1-10000PSI均質，最後通過擠出儀過濾膜；
[0029]6)將步驟5)得到的混懸液，置於截留分子量8000-14000的透析袋中，透析，從而分離脂質體包裹的活性成分和游離在磷酸緩衝液中的活性成分；
[0030]7)在步驟6)得到的脂質體混懸液於-50至-100°C預凍12小時以上，再置於冷凍乾燥機凍幹，得到凍幹柔性納米脂質體粉末。[0031]所述步驟I中加入佔脂質體總重量0.1-0.5%的複合抗氧化劑的脂溶性成分。
[0032]在本發明一實施例中，一種所述的柔性納米脂質體在製備積雪苷化妝品活性成分方面的應用。
[0033]本發明的積極進步效果在於:本發明製備的柔性納米脂質體粒徑在50_200nm之間，保證了所包裹的活性成分具有更好的穩定性和皮膚吸收效果。而本發明採用的改良的逆向蒸發法-超聲-均質-擠出-凍幹法，產品製備方法簡單、且具有較高的包封率和載藥量；整個工藝過程均由機械手段完成，使產品工藝和質量具有較好的穩定性和重現性。本發明最終的產品為流動性良好的粉末，便於使用、運輸和貯存。
【具體實施方式】:
[0034]實施例1
[0035]將IOmg 二棕櫚醯中性磷脂醯膽鹼、Img膽固醇溶於氯仿中，將0.25mg維生素E與BHA混合抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將3mg積雪苷、2mg膽酸鈉、1.5mg透明質酸、40mg乳糖溶於pH7.0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液加入氯仿液中，超聲形成均已乳劑，靜置30分鐘後，乳液置旋轉蒸發儀上旋蒸去除有機溶劑，得到積雪苷脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲90個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒，冰浴)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次；將擠出的脂質體混懸液分子截留量8000-14000的透析袋中透析6小時，分離游離的積雪苷；所得的脂質體混懸液於-80°C預凍12小時後，放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。
[0036]所得到的積雪苷柔性納米脂質體的粒徑和Zeta電位經Zitasizer (NanoZS, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和Zeta電位分別為51.3±6.2nm、71.0±9.9mV ;採用透析法法分離測得產品的包封率為42.6%。
[0037]實施例2
[0038]將IOOmg大豆卵中性磷脂、50mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將0.26mg維生素E與BHA混合抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合；將35mg積雪苷、15mg膽酸鈉、
1.5mg透明質酸、400mg甘露醇溶於pH7.0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲60個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒，冰浴)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，於_80°C預凍12小時後,放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。[0039]所得到的表皮活性因子柔性納米脂質體的粒徑和Zeta電位經Zitasizer (NanoZS, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和Zeta電位分別為107.6±21.3nm、64.1±6.6mV ;採用透析法分離測得產品的包封率為27.61%。
[0040]實施例3
[0041]將1000mg大豆卵中性磷脂、50mg膽固醇水浴超聲溶於氯仿中，將2.5mg維生素E與BHA混合抗氧化劑溶於少量乙醇中，再與氯仿液混合df 350mg積雪苷、150mg膽酸鈉、15mg透明質酸、4000mg甘露醇溶於pH7.0的磷酸緩衝液中；將前述的磷酸緩衝液與氯仿溶液在水浴中超聲成均勻乳濁液，靜置30分鐘後，旋轉蒸發得脂質體混懸液；將脂質體混懸液用探針式超聲細胞破碎儀超聲90個循環(每循環超聲5秒，間歇5秒，冰浴)後，用AVESTIN高壓均質機均質3次，再通過AVESTIN擠出儀過IOOnm的微孔濾膜10次，擠出的脂質體混懸液放入透析袋(分子截留量8000-14000)中透析6小時；取透析袋中的脂質體混懸液，於_80°C預凍12小時後,放置於冷凍乾燥機冷凍乾燥成粉末狀。
[0042]所得到的表皮活性因子柔性納米脂質體的粒徑和Zeta電位經Zitasizer (NanoZS, Malvern)納米粒度及電位分析儀測定其粒徑和Zeta電位分別為137.8±19.6nm、59.5±8.0mV ;採用透析法分離測得產品的包封率為26.88%。
[0043]上述實施例中，中性中性磷脂由日油株式會社提供，膽固醇、去氧膽酸鈉以及膽酸鈉由天津市大茂化學試劑廠生產，透明質酸由山東福瑞達生物醫藥有限公司生產，甘露醇和乳糖由上海實驗試劑有限公司生產，BHA由上海QIGANG Pd生產，維生素E為美國Sigma產品，磷酸緩衝液根據中國藥典自配，其餘試劑均為市售產品，除有機溶劑外均符合食品或藥用標準。
[0044]效果實施例1形態學
[0045]將積雪苷柔性納米脂質體混懸液，磷鎢酸負染，透射電鏡下觀察形態，見圖1。圖1積雪苷柔性納米脂質體電鏡圖。A為剛製備的脂質體原液；B為凍幹後重新懸浮的脂質體；C未加凍幹保護劑的凍幹脂質體；D為加凍幹保護劑的凍幹脂質體。
[0046]由圖1中可以看出，所製備的脂質體為類圓形，大小較為均一，粒徑< 200nm，脂質體膜具有「指紋」特徵，確證了方法製備脂質體是成功的。在不加凍幹保護劑時，得到的凍幹脂質體為海綿狀，容易吸溼和結塊，加入凍幹保護劑後，得到的凍幹脂質體為流動性良好的粉末。
[0047]效果實施例2穩定性
[0048]取3批積雪苷柔性納米脂質體及凍幹積雪苷柔性納米脂質體粉末，分別置於室溫、4°C條件下,於Om和3m測定其包封率、pH、粒徑和Zeta電位,並觀察外觀，以確定其穩定性。見表1。
[0049]表1積雪苷脂質體混懸液及凍幹脂質體分別放置3個月後其穩定性結果
[0050]
【權利要求】
1.一種柔性納米脂質體，其特徵在於:所述的柔性納米脂質體包括下列重量份的組分所製成:1-1000份中性磷脂、1-1000份膽固醇、0.5-500份表面活性劑、0.1_2份透明質酸和0.5-500份積雪苷。
2.根據權利要求1所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:其包括下列重量份的組分所製成:100-120份中性磷脂、15-100份膽固醇、10-100份表面活性劑、0.1-2份透明質酸和0.5-60份積雪苷。
3.根據權利要求1所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:其包括下列重量份的組分:100-120份中性磷脂、15-20份膽固醇、10-20份表面活性劑、0.1-2份透明質酸和40份積雪苷。
4.根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:其還包括佔脂質體總重量0.1-0.5%的抗氧化劑，優選地為0.2%抗氧化劑；所述的氧化劑選自維生素C、維生素E、丁基羥基茴香醚、2，6- 二叔丁基-4-甲基苯酚、茶多酚、愈創樹脂、芝麻酚或者波爾定鹼中的一種或多種。
5.根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:其還包括相當於脂質體總重量2-8倍的冷凍保護劑；所述的冷凍保護劑選自甘油、乳糖、蔗糖、甘露醇、葡萄糖或者海藻糖的一種或多種。
6.根據權利要求5所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:所述的凍幹保護劑:脂質體的重量比在3:1至6:1。
7.根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:所述的柔性納米脂質體的粒徑範圍為50-200nm。·
8.根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:所述的中性磷脂選自大豆卵磷脂、氫化大豆卵磷脂、蛋黃卵磷脂、腦磷脂、二棕櫚酸磷脂醯膽鹼、二硬脂酸磷脂醯膽鹼、二肉豆蘧酸磷脂醯膽鹼、二月桂酸磷脂醯膽鹼或者二棕櫚酸磷脂醯乙醇胺中的一種或多種；所述的表面活性劑是膽酸鈉或去氧膽酸鈉。
9.根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體，其特徵在於:所述的積雪苷為包裹的活性成分，脂質成分與所述的包裹活性成分的重量比在2:1至6:1。
10.一種根據權利要求5所述的柔性納米脂質體的製備方法，其特徵在於:所述方法採用逆向蒸發法-超聲-均質-擠出-凍幹法，其包括如下步驟: 1)將所述比例的中性磷脂、膽固醇在10_50°C水浴條件下溶解於揮發性有機溶劑中； 2)將所述比例的表面活性劑、積雪苷、透明質酸和冷凍乾燥保護劑在10-50°C水浴條件下溶解於PH=7.0的磷酸緩衝溶液中； 3)將步驟I)和2)混合超聲成乳狀，靜置； 4)將步驟3)得到的乳液置於旋轉蒸發儀上旋轉蒸發得初步的脂質體混懸液； 5)將步驟4)得到脂質體混懸液，超聲破碎60-90次後，5000PS1-10000PSI均質，最後通過擠出儀過濾膜； 6)將步驟5)得到的混懸液，置於截留分子量8000-14000的透析袋中，透析，從而分離脂質體包裹的活性成分和游離在磷酸緩衝液中的活性成分； 7)在步驟6)得到的脂質體混懸液於-50至-100°C預凍12小時以上，再置於冷凍乾燥機凍幹，得到凍幹柔性納米脂質體粉末。
11. 根據權利要求10所述的製備方法，其特徵在於:所述步驟I中加入佔脂質體總重量0.1-0.5%的複合抗氧化劑的脂溶性成分。
12.一種根據權利要求1-3所述的柔性納米脂質體在製備積雪苷化妝品活性成分方面的應用。
【文檔編號】A61K8/60GK103520006SQ201310479331
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年10月14日 優先權日:2013年10月14日
【發明者】江妍 申請人:天博醫藥技術（蘇州）有限公司