一種生產毛蕊花糖苷單體化合物的方法

2023-05-14 07:17:16

專利名稱：一種生產毛蕊花糖苷單體化合物的方法
技術領域：
本發明涉及一種利用新鮮肉蓯蓉肉質莖及肉灰蓉飲片，通過生物催化轉化生產毛蕊花糖苷單體化 合物的方法。
背景技術：
肉蓯蓉素有沙漠"人參"的美譽，為著名的補益中藥。分析表明，肉灰蓉的主要活性成分為苯乙醇 苷類、苯甲醇苷類、環烯醚萜苷類、木脂素苷類、低聚糖類衍生物、D-甘露醇和甜菜鹼等。苯乙醇苷 類(Phenylethanoid Glycosides, Ph Gs)包括松果菊苷(Echinacoside)、毛蕊花糖苷(Acteoside)等活 性物質。體內藥物學實驗顯示，苯乙醇苷類化合物的主要成分松果菊苷在胃腸道中運動過程需經大腸 內微生物酶催化轉化為毛蕊花糖苷的代謝通道，是導致口服後苯乙醇苷類成分藥物生物利用度與療效 存在顯著差異的主要因素。毛蕊花糖苷單體化合物具有小分子和低極性的特徵，在藥物吸收中展示良 好的吸收率和特殊的藥理活性。

發明內容
本發明的目的是提供一種利用新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉蓯蓉飲片，通過生物催化轉化生產毛蕊花糖 苷單體化合物的方法。
本發明的方法是，將新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉灰蓉飲片，通過高溫滅酶、細胞破碎成為肉蓯蓉細胞 破碎物，將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，再以p-葡萄糖苷酶工業酶製劑為生物催化劑，進行 生物催化反應，催化水解底物中松果菊苷使其葡萄糖基配體末端斷裂(P-l，6-糖苷鍵)，定向轉化為高 活性的毛蕊花糖苷單體化合物，催化反應溫度為40'C 6(TC， pH為4.0 5.8，時間為4h llh，催化反 應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為2U/g 2000U/g;將催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物再經漿液 提取、分離提純、濃縮、乾燥處理，收穫毛蕊花糖苷單體化合物。通過調整分離提純工藝條件，收穫 的毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量可達35. 8% 89.5%。
本發明方法的具體步驟包括
1、挑選新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉蓯蓉飲片，進行高溫滅酶，然後置於通常工業破碎碾磨裝置中進行 破碎碾磨，使細胞碎裂成為肉蓯蓉細胞破碎物；將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以(3-葡萄糖 苷酶工業酶製劑為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡 萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為4(TC 60'C,最佳溫度為42。C 50。C; pH為4.0 5.8,最佳pH為4.5 5.2;時間為4h llh，最佳時間為5h 6h，催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為2U/g 2000U/g，最佳酶活力為5U/g 200U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達70% 94%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業壓濾機壓濾或工業離心機分離，獲取肉蓯 蓉細胞漿液；可再將濾渣經一次至數次(一般為1 3次)加入工業純淨水對壓榨後的細胞破碎物進行 洗滌，並再經工業壓濾機壓濾或工業離心機分離進一步獲取細胞洗滌液，合併在細胞漿液中；將得到 的肉蓯蓉細胞槳液，通過通常工業超濾膜分離，選擇性篩分及截留除去多糖、蛋白質等大分子雜質以 及微粒和亞微粒等雜質；或/和採用通常工業納濾膜分離，選擇性篩分及截留除去胺基酸、D-甘露醇、 甜菜鹼等小分子雜質；或/和採用通常工業大孔樹脂吸附分離工藝進行分離純化；還可再採用通常工業 層析柱分離純化工藝，或/和採用通常模擬移動床色譜分離系統或通常多功能色譜分離系統工藝，進一 步分離純化；獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將步驟2獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業真空濃縮工藝或工業薄膜蒸發濃 縮工藝，獲得固形物含量為30% 50%的濃縮物；再通過工業噴霧乾燥工藝或其他乾燥方法，獲得毛 蕊花糖苷單體化合物的粉狀物或乾燥物。收穫的毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量可達35.8% 89.5%;
按照上述本發明方法，若採用肉灰蓉飲片為原料，在進行催化反應時可調節催化反應底物(肉蓯 蓉細胞破碎物)的含水量為50% 卯％。
本發明方法涉及的新鮮肉蓯蓉肉質莖，可以是新收穫(未經冷藏或冷凍保鮮)的新鮮肉蓯蓉肉質 莖，或者是置於工業冷藏庫保鮮的新鮮肉灰蓉肉質莖或置於工業冷凍庫冷藏的新鮮肉雙蓉肉質莖，；或 者是上述新鮮肉蓯蓉肉質莖的切片或碎料。
本發明所述的肉蓯蓉，是符合《中華人民共和國藥典》2005年版收載的列當科植物肉蓯蓉C^wc^e <sfeseW!'co/a Y,C.Ma或管花肉雙蓉C!'sfawc/ze f幽Zosa (Schrenk) Wight。
本發明方法涉及的採用工業冷藏庫保鮮的庫溫一般為1'C 13'C,最佳的冷藏庫保鮮庫溫為4'C l(TC;採用工業冷凍庫冷藏的庫溫一般為-52'C -10'C，最佳的冷凍庫冷藏的庫溫為-36。C -18'C。
本發明方法涉及的高溫滅酶工藝溫度一般為80。C 10(TC,時間為3min 10min。
本發明方法涉及的(3-葡萄糖苷酶工業酶製劑，包括卩-葡萄糖苷酶，富含卩-葡萄糖苷酶的纖維素酶、 植物提取複合酶或/和植物水解複合酶。
本發明方法涉及的固態發酵反應器，包括通常工業固態發酵反應器，也可採用恆溫培養箱。
本發明方法涉及的將濾渣經一次至數次加入工業純淨水的每次加水量為濾渣的100% 400% (重量 比)，最佳添加量為200% 300% (重量比)。
本發明方法涉及的超濾膜的相對分子質量為1000 4500，最佳的相對分子質量為1500 3500;納 濾膜相對分子質量為200 300，最佳的相對分子質量為250 280;超濾膜選用CA或CTA、 PAN、 PS、 PSA、 PES、 PVDF、 PEK、 SPS的系列膜型號；納濾膜選用4040-UHT-ESNA或8540-UHY-ESNA、 ESNA-FREE650、 ESNA-FREE 1700、 NTR7450HG、 NTR729HG、 NF-CA膜、NF-CA巻式元件及中空 纖維件的系列膜型號；大孔吸附樹脂選用XAD、 Diaion、 SP、 Posapak及Chromosorb及非離子型高分 子吸附劑AB-8、 CHA-III、 CAD-40、 DlOl、 D301、 D296、 D396R、 D4006、 D4020、 D3520、 DA201、DM301 、 D130、 GDX104、 HPD亂HPD450、 HPD500、 HPD600、 HPD8、腦7、 JD-KW、 LD601、 LD605、 ME-1、 ME-2、 ME-3、 NKA-2、 NKA-9、 R-A、 S8、 SIP、 WLD及X-5系列型號；模擬移動床 色譜分離系統及多功能色譜分離系統，可以選用MB、 MD、 ME、 MF製備型色譜分離層析儀、SMBC 實驗型、SMBC中試型、XZ12E-4L型、XZ20Z-2L型及SMBC工業化連續製備色譜型的色譜分離系統。 本發明方法涉及的超濾膜、納濾膜、大孔吸附樹脂、非離子型高分子吸附劑、工業層析柱、移動床色 譜分離系統、多功能色譜分離系統，可選用通常國外及國內商品。
本發明方法涉及的通常工業真空濃縮工藝或工業薄膜蒸發濃縮工藝的溫度為48。C 8(TC，最佳溫 度為5(TC 65'C;採用的工業噴霧乾燥工藝，乾燥塔進風溫度為125。C 285。C，最佳進風溫度為 135。C 185。C。
本發明方法涉及的其它工業乾燥的方法包括通常工業滾筒乾燥、氣流乾燥、流化床乾燥、微波真 空乾燥、微波乾燥、真空乾燥或熱風循環乾燥。
本發明方法生產的毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物或乾燥物，可直接用於醫藥原料，或作為化妝 品原料，也可作為原料或複方原料生產口服液、膠囊劑、片劑、顆粒劑、衝劑、丸劑或袋泡茶等功能 性保健食品。本發明方法的推廣實施，將使肉蓯蓉這一名貴的中藥更好地造福於人類的健康。
本發明方法中涉及的各種量的百分比(％)，除了另有說明外，均為重量百分比。
具體實施例方式
下面結合實施例對本發明作進一步詳細說明。
實施例一
1、 挑選工業冷藏庫13'C保鮮的新鮮肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業微波加熱裝置將新鮮肉歡蓉肉質 莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度為IO(TC，時間為4min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉蓯蓉肉 質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以P-葡萄糖苷酶為生 物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一 個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為46.5'C， pH為4.1，時間為5h， 催化反應過程反應物中的(3-葡萄糖苷酶活力為80U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的 轉化率達98.5%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業壓濾機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞漿液，將濾 渣再分別經三次加入工業純淨水對壓搾後的細胞破碎物進行洗滌，每次加水量為濾渣重量的100%，並 經工業壓榨機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞洗滌液並合併在細胞槳液中；採用相對分子質量為3500的超濾膜 對細胞漿液進行超濾，再通過相對分子質量為250的納濾膜進行納濾，然後採用AB-8型的工業大孔吸 附樹脂進行吸附分離，並經XZ12E-4L型多功能色譜分離系統工藝進一步提純，獲得毛蔬花糖苷單體 化合物提取液；3、將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為50'C，獲得 固形物含量為30%的濃縮物；進一步通過通常工業噴霧乾燥，千燥塔進風溫度為125°C，獲得毛蕊花 糖苷單體化合物的粉狀物；經分析測定，所收穫的粉狀物中(以乾物質計)，毛蘊花糖苷單體化合物純 度百分比含量為89.5%。
實施例二
1、 採用工業冷凍庫-2(TC冷凍保藏的速凍肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業蒸汽加熱裝置將新鮮肉蓯 蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度為l(XTC，時間為10min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉 蓯蓉肉質莖破碎碾磨成為肉灰蓉細胞破碎物，將肉灰蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷 酶為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末 端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為48'C， pH為5.0,時間 為6h,催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為2U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖 苷的轉化率達89.8%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液；採用 相對分子質量為3000的超濾膜對細胞漿液進行超濾，再通過相對分子質量為300的納濾膜進行納濾， 然後採用D396R型的工業大孔吸附樹脂進行吸附分離；並經XZ20Z-ZL型多功能色譜分離系統進一步 分離提純，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，再通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為6(TC，獲 得固形物含量為38%的濃縮物；進一步通過通常熱風循環乾燥工藝，溫度為65'C,獲得毛蕊花糖苷單 體化合物的乾燥物；經分析測定，所收穫的乾燥物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分 比含量為73. 9%。
實施例三
1、 挑選肉蓯蓉飲片，通過通常工業微波加熱裝置將新鮮肉蓯蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度
為卯'C，時間為5min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中進行破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將肉 蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，調節催化反應底物含水量為80%，以p-葡萄糖苷酶為生物催化劑， 採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、 定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為45'C， pH為5.8，時間為3h，催化反應過程 反應物中的(3-葡萄糖苷酶活力為100U/g。經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達65.8%
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，釆用通常工業壓濾機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞漿液，將濾 渣再加入工業純淨水，添加量為濾渣重量的150%,並經工業壓榨機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞洗滌液併合 並在細胞漿液中；採用相對分子質量為4500的超濾膜對細胞漿液進行超濾；並經工業層析分離純化工 藝進一步提純，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業薄膜蒸發工藝，溫度為56'C，獲得 固形物含量為36%的濃縮物；進一步通過通常工業噴霧乾燥，乾燥塔進風溫度為182t:，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物；經分析測定，所收穫的粉狀物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為61.2%。
實施例四-
1、 採用工業冷凍庫-35'C冷凍保藏的速凍肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業蒸汽加熱裝置將新鮮肉蓯蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度為IO(TC，時間為10min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉蓯蓉肉質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷酶為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為44'C， pH為4.9，時間為6h，催化反應過程反應物中的P-葡萄糖苷酶活力為20U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛驟花糖苷的轉化率達80.2%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液；採用相對分子質量為300的納濾膜對細胞槳液進行納濾，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，再通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為60。C，獲得固形物含量為38%的濃縮物；進一步通過通常真空乾燥工藝，溫度為65'C，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的乾燥物；經分析測定，所收穫的乾燥物中(以乾物質計)，毛蔬花糖苷單體化合物純度百分比含量為50. 8%。
實施例五
1、 採用工業冷藏庫5'C保鮮的精選的肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業微波加熱裝置將新鮮肉灰蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度為99'C，時間為3min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉灰蓉肉質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷酶為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為6(TC， pH為4.5，時間為3.5h,催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為80U/g。經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達89.3%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，釆用通常工業壓濾機壓濾，獲取肉灰蓉細胞槳液，將濾渣分別再經二次加入工業純淨水，每次加水量為濾渣重量的200%，並經工業壓榨機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞洗滌液並合併在細胞漿液中；採用相對分子質量為2000的超濾膜對細胞漿液進行超濾，再通過相對分子質量為300的納濾膜進行納濾，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業薄膜蒸發濃縮工藝，溫度為58'C，獲得固形物含量為31%的濃縮物；進一步通過通常工業噴霧乾燥，乾燥塔進風溫度為165°C,獲得毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物；經分析測定，所收穫的粉狀物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為66.4%。實施例六
1、 採用工業冷凍庫-18'C冷凍保藏的速凍肉灰蓉肉質莖，再通過工業高溫滅酶，溫度為10(TC，時間為6min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉灰蓉肉質莖破碎碾磨成為肉雙蓉細胞破碎物，將將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以植物提取複合酶工業酶製劑為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為48'C， pH為5.2,時間為8h，催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為20U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達88.2%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液；採用相對分子質量為300的超濾膜對細胞漿液進行超濾；然後釆用HPD8型的工業大孔吸附樹脂進行吸附分離；並經工業層析分離純化工藝進一步分離提純，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，再通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為53。C，獲得固形物含量為40%的濃縮物；進一步通過通常流化床乾燥，溫度為60'C，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的乾燥物；經分析測定，所收穫的乾燥物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為62.3%。
實施例七
1、 採用新鮮肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業微波加熱裝置將新鮮肉蓯蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶
的溫度為9(TC，時間為5min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉蓯蓉肉質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以P-葡萄糖苷酶為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為45'C， pH為4.2，時間為5h,催化反應過程反應物中的卩-葡萄糖苷酶活力為100U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達88.5%;
2、 將經催化反應後的細胞破碎物採用通常工業壓濾機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞漿液，將濾渣分別再經二次加入工業純淨水，每次加水量為濾渣重量的110%,並經工業壓搾機壓濾，獲取肉蓯蓉細胞洗滌液並合併在細胞漿液中；採用相對分子質量為4500的超濾膜對細胞漿液進行超濾；並經工業層析分離純化工藝進一步提純，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業薄膜蒸發工藝，溫度為65'C，獲得固形物含量為36%的濃縮物；進一步通過通常工業噴霧乾燥，乾燥塔進風溫度為16(TC，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物；經分析測定，所收穫的粉狀物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為65.2%。
實施例八
1、採用工業冷凍庫-35'C冷凍保藏的速凍肉灰蓉碎料，通過通常工業蒸汽加熱裝置進行高溫滅酶，滅酶的溫度為IO(TC，時間為10min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中破碎碾磨成為肉灰蓉細胞破碎物，將將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷酶為生物催化劑，採用固態發酵反應器
8進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蔬花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為48。C, pH為4.9，時間為6h，催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為3U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達80.2%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液；然後採用ME-3型的工業大孔吸附樹脂對細胞漿液進行吸附分離，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，再通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為6(TC，獲得固形物含量為38%的濃縮物；進一步通過通常真空乾燥工藝，溫度為65'C，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的乾燥物；經分析測定，所收穫的乾燥物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為35. 8%。
實施例九
1、 採用工業冷藏庫5'C保鮮的新鮮肉蓯蓉肉質莖，通過通常工業微波加熱裝置將新鮮肉蓯蓉肉質莖進行高溫滅酶，滅酶的溫度為99'C，時間為3min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉蓯蓉肉質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷酶工業酶製劑為生物催化劑，採用恆溫培養箱進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為6(TC， pH為4.5，時間為3.5h，催化反應過程反應物中的P-葡萄糖苷酶活力為1500U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達89.3%;
2、 將經催化反應後的細胞破碎物採用通常工業壓濾機壓濾，獲取肉灰蓉細胞漿液；採用相對分子質量為1000的超濾膜對細胞漿液進行超濾，再通過相對分子質量為300的納濾膜進行納濾，獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；
3、 將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為58'C，獲得固形物含量為42%的濃縮物；進一步通過通常工業噴霧乾燥，乾燥塔進風溫度為165°C,獲得毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物；經分析測定，所收穫的粉狀物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為46.3%。
實施例十
1、 採用工業冷凍庫-18'C冷凍保藏的速凍肉蓯蓉肉質莖，再通過通常工業蒸汽高溫滅酶，溫度為IOO'C，時間為8min;然後置於通常工業破碎碾磨裝置中將肉蓯蓉肉質莖破碎碾磨成為肉蓯蓉細胞破碎物，將將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以植物水解複合酶工業酶製劑為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為48'C， pH為5.2，時間為8h，催化反應過程反應物中的P-葡萄糖苷酶酶活力為150U/g;經測定，底物中松果菊苷轉化為毛蕊花糖苷的轉化率達98.5%;
2、 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物，採用通常工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液，將濾180%,並經工業離心機分離，獲取肉灰蓉細胞洗滌液並合併在細胞漿液中；採用相對分子質量為2500的超濾膜對細胞漿液進行超濾；然後採用CHA-III型的工業大孔吸附樹脂進行吸附分離；並經工業層析分離純化工藝進一步分離提純，獲得毛蔬花糖苷單體化合物提取液；
3、將上述獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，再通過通常工業真空濃縮工藝，溫度為53'C，獲得固形物含量為48%的濃縮物；進一步通過通常真空乾燥工藝，溫度為65'C，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的乾燥物；經分析測定，所收穫的乾燥物中(以乾物質計)，毛蕊花糖苷單體化合物純度百分比含量為89%。
權利要求
1.一種生產毛蕊花糖苷單體化合物的方法，將新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉蓯蓉飲片，通過高溫滅酶、細胞破碎成為肉蓯蓉細胞破碎物，將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，再以β-葡萄糖苷酶工業酶製劑為生物催化劑，進行生物催化反應，催化水解底物中松果菊苷使其葡萄糖基配體末端斷裂，定向轉化為高活性的毛蕊花糖苷單體化合物；再經漿液提取、分離提純、濃縮、乾燥處理，收穫毛蕊花糖苷單體化合物。
2. 按照權利要求1所述的方法，其特徵是該方法的具體步驟包括(1) 挑選新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉蓯蓉飲片，進行高溫滅酶，然後置於通常工業破碎碾磨裝置中進行破碎碾磨，使細胞碎裂成為肉蓯蓉細胞破碎物；將肉蓯蓉細胞破碎物作為催化反應底物，以p-葡萄糖苷酶工業酶製劑為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行催化反應，催化水解去掉底物中松果菊苷葡萄糖基配體末端的一個葡萄糖基、定向轉化為毛蕊花糖苷單體化合物；催化反應過程溫度為40'C 60°C， pH為4.0 5.8，時間為4h llh，催化反應過程反應物中的p-葡萄糖苷酶活力為2U/g 2000U/g;(2) 將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物採用通常工業壓濾機壓濾或工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液；將得到的肉蓯蓉細胞漿液，通過通常工業超濾膜，或/和通常工業納濾膜，或/和通常工業大孔樹脂吸附分離工藝，進行分離純化；獲得毛蕊花糖苷單體化合物提取液；(3) 將步驟2獲得的毛蕊花糖苷單體化合物提取液，通過通常工業真空濃縮工藝或工業薄膜蒸發濃縮工藝，獲得固形物含量為30°/。 50%的濃縮物；再通過工業噴霧乾燥工藝或其他乾燥方法，獲得毛蕊花糖苷單體化合物的粉狀物或乾燥物。
3. 按照權利要求1或2所述的方法，其特徵是反應過程溫度為42'C 50'C; pH為4.5 52;時間為5h 6h，催化反應過程反應物中的P-葡萄糖苷酶活力為5U/g 200U/g。
4. 按照權利要求1或2所述的方法，其特徵是所述的新鮮肉蓯蓉肉質莖為新收穫的新鮮肉蓯蓉肉質莖，或者是置於工業冷藏庫保鮮的新鮮肉蓯蓉肉質莖或置於工業冷凍庫冷藏的新鮮肉蓯蓉肉質莖，或者是上述新鮮肉蓯蓉肉質莖的碎料或切片。
5. 按照權利要求6.按照權利要求1或2所述的方法，其特徵是所述的高溫滅酶的溫度為80'C IOO"C,時間為3min 10min。
6. 按照權利要求1或2所述的方法，其特徵是所述的卩-葡萄糖苷酶工業酶製劑，包括p-葡萄糖苷酶、纖維素酶、植物提取複合酶或/和植物水解複合酶。
7. 按照權利要求2所述的方法，其特徵是步驟(2)中將經催化反應後的肉蓯蓉細胞破碎物採用通常工業壓濾機壓濾或工業離心機分離，獲取肉蓯蓉細胞漿液後，再將濾渣經一次至數次加入工業純淨水對壓榨後的細胞破碎物進行洗滌，並再經工業壓濾機壓濾或工業離心機分離獲取細胞洗滌液，合併在細胞漿液中；每次加入工業純淨水的量為濾渣重量的100% 400%。
8. 按照權利要求2所述的方法，其特徵是步驟(2)中再採用通常工業層析柱分離純化工藝，或/和採用通常模擬移動床色譜分離系統或通常多功能色譜分離系統工藝，進一步分離純化。
9. 按照權利要求2所述的方法，其特徵是步驟(3)中所述的工業真空濃縮工藝或工業薄膜蒸發濃縮工藝的溫度為48r 80'C,工業噴霧乾燥的進風溫度為125°C 285°C。
全文摘要
本發明涉及一種生產毛蕊花糖苷單體化合物的方法。本發明方法是將新鮮肉蓯蓉肉質莖或肉蓯蓉飲片，通過高溫滅酶、細胞破碎，再以β-葡萄糖苷酶工業酶製劑為生物催化劑，採用固態發酵反應器進行生物催化反應，催化水解底物中松果菊苷使葡萄糖基配體末端斷裂(β-1，6-糖苷鍵)，定向轉化為高活性的毛蕊花糖苷單體化合物；再經漿液提取、分離提純、濃縮及乾燥等系統工藝處理；，收穫毛蕊花糖苷單體化合物。通過調整分離提純工藝條件，收穫的毛蕊花糖苷單體化合物粉狀物或乾燥物純度百分比含量可達35.8％～89.5％。毛蕊花糖苷單體化合物具有小分子和低極性的特徵，在藥物吸收中展示良好的吸收率和特殊的藥理活性。
文檔編號C12P19/44GK101654692SQ20091004164
公開日2010年2月24日 申請日期2009年8月4日 優先權日2009年8月4日
發明者昕 劉, 劉小卓, 彭青雲, 招淑燕, 李國富, 田曉玲, 欣 鍾, 桅 雷, 黃曉霓 申請人:中山大學;深圳學者健康工程有限公司;廣州綠色盈康生物工程有限公司