一種兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒的製作方法

2023-05-14 16:22:01

專利名稱：：一種兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒的製作方法
技術領域：
：本發明涉及一種疾病易感基因檢測產品，具體的說，涉及一種有關兒童精祌發育遲緩基因檢測的試劑盒。
背景技術：
：精神發育遲緩(mentalretardation)又稱為精神發育不全或弱智，可由多種原因引起。因為其主要症狀是智力缺損，所以過去又稱為"智力不足"。這是兒童期最常見的精神障礙之一，並延續終生。主要表現是在發育期內智力明顯低於平均水平，並伴有適應行為的缺損。上述所謂發育期是指18歲以前，所謂智力明顯低於平均水平是指智商低於正常平均值的兩個標準差(即低於70)，所謂適應行為缺損是指根據其年齡及文化背景，不能符合社交的和個人的要求標準。兒童精神發育遲緩有如下表現症狀一、語言發展遲緩，發音不清二、心神不定，注意力分散三、不與同伴遊戲，不參加集體活動四、動作遲緩、不活潑五、基本生活能力差六、運動機能發展遲緩七、體弱多病標準化的智商測驗可測定智力低下的智商水平。智商測定存在一定程度的偏倚，但它仍能合理地、準確地評價兒童的智力，特別是對年長兒。智商(IQ)值為6984的兒童一般有學習困難，無精神發育遲緩。他們在入學前很少被檢查出來，當教育和行為問題突出時才被診斷出來。對他們進行特殊的教育，他們一般能完成學業，自謀生計。教育對精神發育遲緩的兒童都是非常有益的。輕度精神發育遲緩的兒童(IQ值5268)可能達到46年級的認知能力，雖然他們誦讀困難，但大多數精神發育遲緩的兒童能掌握曰常生活所需的基本教育機能。他們需要輔導、支持、特殊教育和訓練設備，長大後他們需要安全的生活環境和工作場所。雖然他們沒有明顯的身體缺陷，但可能並發癲癇。輕度精神發育遲緩患者不成熟，不懂世故，社會交往能力差，他們的思維僅僅是形象思維，往往不能抽象思維，他們難以適應新的環境，並且判斷力差，不能深謀遠慮。他們容易受騙，容易發生犯罪行為。但輕度患者常作為團夥的一員，參與團夥犯罪，有時為了充當團夥的頭目，而犯下衝動性罪行。中度精神發育遲緩的兒童(IQ值3651)有明顯的語言和運動發育遲緩，給予大量的訓練和支持，輕中度精祌發育遲緩的成年人可以在社會中過著不同程度的獨立生活，有些人通過重返社會訓練所，接受最低限度的支持即可生活，而一些人則需要很好的監督。重度精神發育遲緩的兒童(IQ值2035)接受訓練的能力較中度患兒差。極重度兒童(IQ值19以下)一般不會走，不會說話，痴呆。精神發育遲緩的兒童預期壽命短，根據病因和病情嚴重程度不同，預期壽命長短不一，病情越嚴重的病人，預期壽命越短。由於各家調查統計方法不同，所以患病率的報導差異很大。診斷的確定常依據智力測驗，目前我國因為智力測驗尚未普遍開展，未能根據智商進行篩選，因此常常只注意到較重的患者。根據一些地區的調查資料，中度及重度患者的患病率略高於0.1%，男性多於女性。有人認為，輕度的精神發育遲緩對社會影響不大，與正常的界線有時也不易劃清，因此其患病率很難準確地獲得，它主要是一個教育問題，而不是臨床醫學問題。精神發育遲緩一般是不可逆的。因此早期診斷精神發育遲緩，及早提供制訂教育和訓練方案的依據非常重要。對患病兒童，尤其是嬰幼兒，哪怕是早一兩個月都有極為重要的關係。而現有最常用的智力測驗方式通常僅針對較大的少兒，還受限於現有的統計水平，而且在我國還不普及，對一些輕度中度這類最易受教育培訓影響的患者，十分不利，很可能失去可以具備基本生活自理能力，甚至過正常人生活的機會。既增加患者家庭的痛苦，又增加了社會的負擔。人們希望有一種簡便而客觀的方法可以進行兒童精神發育遲緩測試，對精神發育遲緩者及早做出診斷，及時提供制訂教育和訓練方案的依據，使更多兒童患者具備基本生活自理能力，甚至可以過正常人的生活。
發明內容為了可以簡便而客觀地對兒童精神發育遲緩進行測試，本發明提供一種兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，可以以兒童DNA樣本為測試樣本，對兒童精神發育遲緩的基因進行檢測，從而判斷其是否患有精神發育遲緩，有助於及時診斷和治療。該試劑盒由DNA抽提試劑，預混PCR反應液，標準陽性對照品，標準陰性對照品組成。使用時以被測兒童的DNA樣本為檢測對象，經過樣本DNA抽提後，使用試劑盒在螢光定量PCR儀上進行反應，結合反應結果進行診斷。所述的預混PCR反應液含有SYBRgreenI，以及與兒童精神發育遲緩相關的P0U1F1和NSUN5基因突變位點的擴增引物；擴增P0U1F1基因的引物為包含突變位點的上遊引物和正常的下遊引物，擴增NSUN5基因的引物為包含突變位點的下遊引物和正常的上遊引物，序列分別如下-擴增P0U1F1基因的引物序列如下上遊引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上遊引物FIT5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下遊引物Rl5-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;擴增NSUN5基因的引物序列如下上遊引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp，上遊弓1物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，下遊引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。上述的兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，所述的陽性對照品有4個，分別包含如下的序列SEQ1:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ2:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ3:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACGCTGTSEQ4:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACACTGTCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGACACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAACACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAAATCATATATTTTATGATTGTTGAAACAAATATTTCTGTATAAATAAATAGATCATATATTAGTGAGATTTTTATGATTGTTCCACTTTGATGAAACAAATTCAAGAGTGAATTTCTGTATAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;ATTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT。上述的兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，所述的陰性對照品包含的序列為SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。本發明的使用不需要兒童本人到場，只需取其DNA樣本，比如口腔樣本，更有效保護對方隱私。不用問答形式，減輕患者的心理負擔，以及人為因素對診斷結果的影響。可以對兒童精神發育遲緩進行簡便而客觀地分析，便於推廣應用，有助於對精神發育遲緩者及時做出診斷，及早提供制訂教育和訓練方案的依據，使更多兒童患者具備基本生活自理能力，甚t至可以過正常人的生活。圖1，圖2，圖3，圖4，圖5，圖6為螢光定量PCR儀上的擴增曲線圖。各圖上方的DeltaRnvsCycle，是指ARn隨循環變化的對數擴增圖譜；ARn(DeltaRn)是指在給定的一組PCR條件下所生成螢光信號的對數值。該圖的橫坐標表示循環數(CycleNumber),縱坐標表示螢光值(DdtaRn)。橫線表示螢光域值，曲線與螢光域值線的交叉點所對應的循環數即為Ct值。圖l、圖2、圖3中橫線3表示螢光域值；曲線1表示為擴增NSUN5的引物對F+RC，擴增樣本所生成的擴增曲線；曲線2為擴增NSUN5的引物對F+RT，這對引物擴增樣本所生成的擴增曲線。圖1表示NSUN5基因CC純合型樣本的產物擴增曲線圖曲線1與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為Cl，曲線2與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C2。圖2表示NSUN5基因CT雜合型樣本的產物擴增曲線圖曲線1與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C3，曲線2與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C4。圖3表示NSUN5基因TT純合型樣本的產物擴增曲線圖曲線2與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C5,曲線1與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C6。圖4、圖5、圖6中橫線4表示螢光域值；曲線5表示為擴增P0U1F1的引物對FC+R，擴增樣本所生成的擴增曲線；曲線6為擴增P0U1F1的引物對FT+R，這對引物擴增樣本所生成的擴增曲線。圖4表示POU1F1基因CC純合型樣本的產物擴增曲線圖曲線5與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C7，曲線6與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C8。圖5表示POU1F1基因CT雜合型樣本的產物擴增曲線圖曲線5與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C9，曲線6與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為CIO。圖6表示POU1F1基因TT純合型樣本的產物擴增曲線圖曲線6與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為Cll，曲線5與螢光域值線的交叉點表示達到域值的Ct循環數值為C12。具體實施例下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。7應當理解，下面實施例中未說明的常規條件和方法，通常按照所屬領域實驗人員常規採用方法如薩姆布魯克和拉塞爾主編的《分子克隆實驗指南》第三版，或按照製造廠商所建議的步驟和條件。實施例h試劑盒的製備。包括(l)探針的準備；(2)DNA抽提試劑；G)預混反應液；(4)標準陽性對照；(5)標準陰性對照。(1)探針的準備；由通常的核苷酸引物合成儀合成。序列如下擴增P0U1F1基因的引物序列上遊引物FlC5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上遊引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下遊引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;擴增NSUN5基因的引物序列下遊引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp'下遊引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，上遊引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。使用前按每OD引物稀釋為100pmol/L(即100pmol/pl)濃度的加水量，開啟瓶蓋溶解之前最好在3000-4000轉/分鐘的轉速下離心l分鐘，防止開蓋時引物散失。使用前，將濃溶液稀釋成工作液10pmol/ml後進行實驗。(2)DNA抽提試劑:tableseeoriginaldocumentpage8(3)預混PCR反應液預混反應液包括6種，每種內含一對上下遊擴增引物，各對應一個基因型。按lml配比量計算，共同的成分配製為..100|xM的dNTP，20^1;500U/plTaqDNAPolymerase20pl;2XQuantOneStepSYBR1300pi;10的上遊引物50pi;10的下遊引物50nl;脂ase-freeddH20860^1。管l的l對引物為上遊引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，下遊引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;管2的1對引物為上遊引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下遊引物Rl5陽CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp;管3的1對引物為上遊引物F25層TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp，下遊引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp;管4的1對引物為上遊引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT陽318bp，下遊引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp。(4)標準陽性對照標準陽性模板是含有PPARG和PPARA基因中含突變核苷酸片段構成的Pucl8-T重組質粒，該重組質料轉化大腸桿菌DH5(X增殖後用鹼裂解法提取，經DNA純化試劑盒純化，用分光光度計測A260定量並稀釋到109Copy/nI，.2(TC保存。貯存存為109CopyVl,使用濃度為105Copy/|al。標準陽性模板提供4種，每種濃度為105Copy/pl。序列如下SE(J1:CGTGGAGGACCCTGGGCCCTCACCGCAGGCAGCAGTTTGCGTTTTGAAAGGTTATTGGGTCCCTTCCTCGGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAGCAAAAGTGTTGCCTGCAGAAATAAAATGCAGAACGTACTCTACGATAGATCACAGTTTTTTATTCTTAATGTCACAAGCAGGAGAAAAATCTCACATTCATACT;SEQ2:CGTGGAGGACCCTGGGCCCTCACCGCAGGCAGCAGTTTGCATTTTGAAAGGTTATTGGGTCCCTTCCTCGGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAGCAAAAGTGTTGCCTGCAGAAATAAAATGCAGAACGTACTCTACGATAGATCACAGTTTTTTATTCTTAATGTCACAAGCAGGAGAAAAATCTCACATTCATACT;SEQ3:TTCAACATCAAAATAAATAGATCATATATTGTTACAGGTTTTTAATAGCACTCTGAATGCAGTGAGATTTTTATGATTGTATCTAATAAAAGGCTACTTGCTCTGCCATTTCCACTTTGATGAAACAAATTTGTTAGACAAATAAGCAAAAATACGCTGTTCAAGAGTGAATTTCTGTATTCATTCATACAGACTGCT;SEQ4:TTCAACATCAAAATAAATAGATCATATATTGTTACAGGTTTTTAATAGCACTCTGAATGCAGTGAGATTTTTATGATTGTATCTAATAAAAGGCTACTTGCTCTGCCATTTCCACTTTGATGAAACAAATTTGTTAGACAAATAAGCAAAAATACACTGTTCAAGAGTGAATTTCTGTATTCATTCATACAGACTGCT。(5)標準陰性對照標準陰性模板是含有擬南芥基因片斷180個核苷酸構成的Pucl8-T重組質粒。該重組質料轉化大腸桿菌DH5a增殖後用鹼裂解法提取，經DNA純化試劑盒純化，用分光光度計測A260定量並稀釋到109Copy/pl，-20°。保存。貯存存為109Copy/|^l，使用濃度為105Copy4U。序列如下SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。實施例2:試劑盒的使用(1)樣本的製備取樣方式使用棉籤在面頰內擦拭IO次。注意為了保證樣本不被食物或者飲料汙染，取樣前30分鐘內請勿進食和飲水。a)處理材料將在面頰內擦拭過的棉籤轉置於2ml離心管中，用剪刀將棉籤部分從其杆上剪下，加入400m1緩衝液ga。b)加入20pl蛋白酶K溶液，渦旋IO秒混勻，56'C放置60分鐘，其間每15分鐘渦旋混勻數次。c)加入400^1緩衝液GB，充分顛倒混勻，7(TC放置10分鐘，此時溶液應變清亮，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。d)加200pl無水乙醇，充分顛倒混勻，簡短離心以去除管蓋內壁的液滴。e)將上一步所得溶液和絮狀沉澱都加入一個吸附柱CR中(吸附柱CR放入收集管中)，12,000rpm(13,400xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管中。f)向吸附柱CR中加入500|xl緩衝液GD，12,000rpm(13,40xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管中。g)向吸附柱CR中加入700pl漂洗液PW，12,000rpm(13，400xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液，將吸附柱CR放回收集管。h)向吸附柱CR中加入500pl漂洗液PW，12,000rpm(13,400xg)離心30秒，倒掉收集管中的廢液。i)將吸附柱CR放回收集管中，12,000rpm(13,400xg)離心2分鐘，倒掉廢液。將吸附柱CR室溫放置數分鐘，以徹底晾乾吸附材料中殘餘的漂洗。j)將吸附柱CR轉入一個乾淨的離心管中，向吸附膜中間位置懸空滴加20-50W洗脫緩衝液TB，室溫放置2-5分鐘，12,000rpm(13,400xg)離心2分鐘。重複一次。(2)實驗過程a)按樣品數n(樣品數二待測樣本數+陰性對照l個+陽性對照l個)取預混PCR反應液每管23pl分裝於反應管中。b)將上述處理好的待測樣本和陰性、陽性對照(務必振蕩混勻數秒)各取2pl分別加入反應管中，混勻，低速離心數秒，立即進行PCR擴增反應。c)PCR條件1095°C10sec(95°C15sec,60°C60sec)X40個循環(3)結果分析與判斷a)定量檢測SNP的判斷標準兩曲線的Ct值之差的絕對值記為IACtl，當IACtl《1，判斷為雜合型；當IACtl^5，判斷為純合型。如圖，圖l中lACtl》5，表示該樣本為NSUN5基因CC純合型樣本。圖2中，|ACt|《l，表示該樣本為NSUN5基因CT雜合型樣本。圖3中，|ACt|》5，表示該樣本為NSUN5基因TT純合型樣本。圖4中|ACt|》5，表示該樣本為P0U1F1基因CC純合型樣本。圖5中，|△Ct|《l，表示該樣本為P0U1F1基因CT雜合型樣本。圖6中，|ACt|》5，表示該樣本為P0U1F1基因TT純合型樣本。b)結果分析基因型診斷結果NSUN5CC+POU1F1CC基因檢測結果顯示兒童精神發育遲緩發生的機率比較大。NSUN5TT+POU1F1TT基因檢測結果顯示兒童精神發育遲緩發生的機率較小。NSUN5+POU1F1的其他組基因檢測結果顯示可能發生兒童精神發育遲緩，需要結合合其他的檢查手段。序列表上海裕隆生物科技有限公司—種兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒11127DNA人工序列根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢測POU1F1基因序列相關突變的DNA弓I物，命名為上遊引物F1C。1gaatacagaaattcactcttgaacacc27227DNA人工序列<223〉根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢測P0U1F1基因序列相關突變的DNA引物，命名為上遊引物F1T。2ggatacagaaattcactcttgaacact273<211〉22<212〉DNA人工序列根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢測P0U1F1基因序列相關突變的DNA引物，命名為下遊引物R1。3cttgctctgccatttccacttt22418DNA人工序列<223〉根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢領(JNSUN5基因序列相關突變的DNA引物，命名為下遊引物R2T。<400〉4cgc鄉cagcagtttaca18518DNA人工序列根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢壩i]NSUN5基因序列相關突變的DNA弓I物，命名為下遊引物R2C。5cgcaggcagcagtttacg186<211〉18DNA人工序列<220〉根據核酸鹼基配對原理和基因晶片雜交條件設計，以用作兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒中檢測NSUN5基因序列相關突變的DNA弓|物，命名為上遊引物F2。<400〉6tttatttctgcaggcaacactttt18<210〉7195DNA人屬(Homo)760120180195cgtggaggaccctgggccctcaccgcaggcagcagtttgcgttttgaaaggttattgggtcccttcctcgggctgtgttcttgctggtgagcaaaagtgttgcctgcagaaataaaatgcagaacgtactctacgatagatcacagttttttattcttaatgtcacaagcaggagaaaaatctcacattcatact8195DNA<213〉人屬(Homo)8cgtggaggaccctgggccctcaccgcaggcagcagtttgcattttgaaaggttattgggt60cccttcctcgggctgtgttcttgctggtgagcaaaagtgttgcctgcagaaataaaatgc120agaacgtactctacgatagatcacagttttttattcttaatgtcacaagcaggagaaaaa180tctcacattcatact1959198DNA人屬(Homo)9ttcaacatcaaaataaatagatcatatattgttacaggtttttaatagcactctgaatgc60agtgagatttttatgattgtatctaataaaaggctacttgctctgccatttccactttga12013tgaaacaaatttgttagacaaataagcaaaaatacgctgttcaagagtgaatttctgtat180tcattcatacagactgct19810198DNA人屬(Homo)10ttcaacatcaaaataaatagatcatatattgttacaggtttttaatagcactctgaatgc60agtgagatttttatgattgtatctaataaaaggctacttgctctgccatttccactttga120tgaaacaaatttgttagacaaataagcaaaaatacactgttcaagagtgaatttctgtat180tcattcatacagactgct198<210〉11180DNA擬南芥(Arabidopsisthaliana)<400〉11ttcgttattgaatcttgttttggttctcttgtgtggaatgcattgttettgcttctctgg60aacttgggatatgatgacaaaaatacgatatctctaaggctaattgctgtgcggatgaaa120tatatttgcacgtcagtctgatcccattatgtatataacattaggagttggtgcatgctc180權利要求1.一種兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，其特徵在於由DNA抽提試劑，預混PCR反應液，標準陽性對照品，標準陰性對照品組成；所述的預混PCR反應液含有SYBRgreenI，以及與兒童精神發育遲緩相關的POU1F1和NSUN5基因突變位點的擴增引物；擴增POU1F1基因的引物為包含突變位點的上遊引物和正常的下遊引物，擴增NSUN5基因的引物為包含突變位點的下遊引物和正常的上遊引物，序列分別如下擴增POU1F1基因的引物序列如下上遊引物F1C5-GAATACAGAAATTCACTCTTGAACACC-327bp，上遊引物F1T5-GGATACAGAAATTCACTCTTGAACACT-327bp，下遊引物R15-CTTGCTCTGCCATTTCCACTTT-322bp；擴增NSUN5基因的引物序列如下下遊引物R2T5-CGCAGGCAGCAGTTTACA-318bp，下遊引物R2C5-CGCAGGCAGCAGTTTACG-318bp，上遊引物F25-TTTATTTCTGCAGGCAACACTTTT-318bp。2.如權利要求1所述的兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，其特徵在於所述的陽性對照品有4個，分別包含如下的序列SEQ1:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ2:CGTGGAGGACGTTATTGGGTTGCCTGCAGATTATTCTTAASEQ3:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACGCTGTSEQ4:TTCAACATCACTCTGAATGCCTCTGCCATTAATACACTGTCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCCCTGGGCCCTCCCTTCCTCGAATAAAATGCTGTCACAAGCAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGAAAATAAATAGAGTGAGATTTTCCACTTTGATCAAGAGTGACACCGCAGGCAGCAGTTTGCGGCTGTGTTCTTGCTGGTGAAGAACGTACTCTACGATAGAAGGAGAAAAATCTCACATTCCACCGCAGGCGGCTGTGTTCAGAACGTACTAGGAGAAAAAAGCAGTTTGCTTGCTGGTGACTACGATAGATCTCACATTCATCATATATTTTATGATTGTGTTACAGGTTATCTAATAAATGAAACAAATTTGTTAGACAATTTCTGTATTCATTCATACATCATATATTTTATGATTGTTGAAACAAATATTTCTGTATGTTACAGGTTATCTAATAAATTGTTAGACATCATTCATACGTTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;ATTTTGAAAGGCAAAAGTGTTCACAGTTTTATACT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT;TTTAATAGCAAGGCTACTTGAATAAGCAAAAGACTGCT。3.如權利要求1或2所述的兒童精神發育遲緩基因檢測試劑盒，其特徵在於所述的陰性對照品包含的序列為SEQ5:TTCGTTATTGAATCTTGTTTTGGTTCTCTTGTGTGGAATGCATTGTTCTTGCTTCTCTGGAACTTGGGATATGATGACAAAAATACGATATCTCTAAGGCTAATTGCTGTGCGGATGAAATATATTTGCACGTCAGTCTGATCCCATTATGTATATAACATTAGGAGTTGGTGCATGCTC。全文摘要本發明提供一種兒童精神發育遲緩基因分析檢測試劑盒。該試劑盒由DNA抽提試劑，預混PCR反應液，標準陽性對照品，標準陰性對照品組成。預混PCR反應液中含有擴增兒童精神發育遲緩分析POU1F1-1和NSUN5基因突變位點的擴增引物。本發明克服了通常採用的智力測驗方式診斷兒童精神發育遲緩的不足該方法存在一定程度的偏倚，並且較適宜對年長兒童作檢查，不適於對嬰幼兒檢測；且受限於各國分析水平，在我國推行不廣。本發明提供一種簡便而客觀的方法，以兒童DNA基因樣本為測試對象樣本，對兒童精神發育遲緩及早做出診斷，及時提供制訂教育和訓練方案的依據，使更多兒童患者具備基本生活自理能力，甚至可以過正常人的生活。文檔編號C12Q1/68GK101684491SQ20081020058公開日2010年3月31日申請日期2008年9月26日優先權日2008年9月26日發明者汪寧梅,穆海東,颯黎申請人:上海裕隆生物科技有限公司