金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的製備方法及用途與流程

2023-05-15 03:28:36

本發明屬於生物材料製備技術，具體涉及金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的製備技術。

背景技術：

水凝膠具有獨特的三維網絡結構，可吸水溶脹，溶脹後緩慢降解。水凝膠與細胞基質材料相似，且具有粘附性，可結合於生物體表或使一個生物體的表面與另外一個天然或合成材料的表面粘結。水凝膠良好的理化性質和生物相容性，能夠有效提高載藥量和生物半周期和穩定性等，使其更適合應用於藥劑學領域，如作為一些緩釋製劑的載體、水性軟膏基質以及傷口輔料等。

製備水凝膠的材料多為無活性的天然或合成材料，難以發揮水凝膠的材料優勢。而中草藥中的天然高分子活性多糖根據種類不同而具有不同的功效，金銀花多糖具有清熱解毒抗炎及止血作用，其抗炎作用相當於皮炎平和地塞米松，薄荷多糖具有抗氧化、抗病毒等功效。將兩者的優勢結合起來製備複合多糖水凝膠既可以發揮兩種多糖的功效又應用了水凝膠的載藥優勢，提高材料利用率。目前尚未見到具有抗菌消炎作用的水凝膠的報導。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的製備方法及用途。

本發明是金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的製備方法及用途，其方法的步驟為：

（1）取金銀花薄荷多糖粉末，加入到乾燥的反應釜中，然後加入與金銀花薄荷多糖重量體積比w/v為1:30~1:40的去離子水，在60℃下，150rmp/min攪拌2h；

（2）將金銀花薄荷多糖爾量，以單體葡萄糖的相對分子質量計算，按照質量比n/w1:0.40~1:0.60的naio4溶於適量水中，配成飽和溶液，緩慢加入到反應體系中，在避光的狀態下反應8h；

（3）反應結束後，向反應體系中加入與金銀花薄荷多糖摩爾體積比為n/w1:0.10~1:0.20的乙二醇，150rmp/min攪拌5min；

（4）反應結束後，按照與金銀花薄荷多糖量質量比為w/w1:0.20~1:0.30向反應體系中加入氯化鈉，150rmp/min攪拌15min；

（5）按照體積比v/v為1:3的比例向反應體系中加入95%乙醇，攪拌10min後抽濾，然後用截留分子量為3500的透析袋透析72h，50℃下乾燥12小時，即得氧化的金銀花薄荷多糖；

（6）稱取氧化金銀花薄荷多糖於反應釜中，按重量體積比w/v為1:20加入蒸餾水；按照與氧化金銀花薄荷多糖質量比為w/w1:2~1:4稱取n,o-羧甲基殼聚糖，按質量體積比1:10~1:25溶於蒸餾水，將兩種溶液等體積混合，在室溫下靜置10min，即得具有抗菌消炎作用的金銀花薄荷多糖水凝膠。

金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的用途，用於抗菌消炎、傷口敷料、潛在的組織工程材料。

本發明的有益之處是：產品原料來源廣泛，製備工藝簡單，成本較低；水凝膠本身具有抗菌消炎活性，作為藥物輔料，可以與其他抗菌消炎藥構成複方，製備緩釋製劑，減少主要用量，彌補緩釋製劑載藥量小的不足。抗菌消炎藥物的使用，發揮輔料本身的優勢，同時可實現藥物緩釋。

附圖說明

圖1是本發明製備的具有抗菌消炎作用的金銀花薄荷複合多糖水凝膠的實物圖，圖2是本發明製備的緩釋型金銀花薄荷複合多糖水凝膠的抑制金黃色葡萄球菌圖。

具體實施方式

本發明是金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的製備方法及用途，其方法的步驟為：

（1）取金銀花薄荷多糖粉末，加入到乾燥的反應釜中，然後加入體積為金銀花薄荷多糖質量數30-40倍的去離子水，在60℃下，150rmp/min攪拌2小時；

（2）取質量為金銀花薄荷多糖摩爾量（以單體葡萄糖的相對分子質量計算）的0.40-0.60倍的naio4溶於適量水中，配成飽和溶液，緩慢加入到反應體系中，在避光的狀態下反應6-12h；

（3）反應結束後，向反應體系中加入體積數為金銀花薄荷多糖摩爾量0.10-0.20倍的乙二醇，150rmp/min攪拌5min；

（4）反應結束後，向反應體系中加入4g氯化鈉，150rmp/min攪拌15min；

（5）向反應體系中加入體積約3-4倍於前述反應體系的95%乙醇，攪拌10min後抽濾，然後用截留分子量為3500的透析袋透析72h，50℃下乾燥12小時，即得氧化的金銀花薄荷多糖；

（6）稱取一定量氧化金銀花薄荷多糖於反應釜中，按1:20（w/v）加入蒸餾水，稱取氧化金銀花薄荷多糖質量2-4倍的n,o-羧甲基殼聚糖，按質量體積比1:10-25溶於蒸餾水，將兩種溶液等體積混合，在室溫下靜置10min，即得具有抗菌消炎作用的金銀花薄荷多糖水凝膠，如圖1所示。

（7）將氧化金銀花薄荷多糖、n,o-羧甲基殼聚糖分別配製成20mg／ml、40mg／ml、60mg／ml、80mg／ml、100mg／ml溶液，用氧化金銀花薄荷多糖和n,o-羧甲基殼聚糖製備水凝膠用於抗菌實驗。

（8）菌懸液的製備將供試的菌種進行斜面活化，取已活化的供試菌用接種環挑取2環至9ml的試管中，製成菌懸液。再用移液槍取1ml充分混勻的菌懸液於試管中，加入9ml無菌水，用顯微鏡直接計數法測定菌體個數，調至菌體濃度為106-107個/ml，備用。

（9）圓形紙片法選擇吸水性強的濾紙用打孔器打成直徑為6mm的圓形濾紙片，滅菌。取濾紙片在無菌的樣品溶液中浸泡24h，風乾備用。將滅過菌的培養皿、培養基放入超淨工作檯中冷卻至60℃後倒平板。每皿約20ml，倒完後水平放置培養皿待培養基凝固。

（10）無菌操作，吸取0.1ml的菌液塗布做成含菌平板，平行三組，在培養基表面相應位置放上含有樣品的濾紙片或用注射器將待成膠的金銀花薄荷凝膠注射至平板上，每個平板3個濾紙片或三個凝膠恆溫培養(37℃，24h)，比較抑菌效果。

表1氧化金銀花薄荷多糖、n,o-羧甲基殼聚糖、金銀花薄荷多糖水凝膠的抑菌性能

註：「＋」能抑制微生物生長；「＋＋」能完全抑制微生物生長；「-」不能抑制微生物生長

金銀花/薄荷複合多糖水凝膠的用途，用於抗菌消炎、傷口敷料、潛在的組織工程材料。

以下結合實施例對本發明作進一步詳細描述。

實施例1：

1)取180g質量的金銀花薄荷多糖粉末，加入到乾燥的反應釜中，然後加入去離子水5400ml，在60℃下，150rmp/min攪拌2h；

2)取106.95gnaio4溶於適量水中，配成飽和溶液，緩慢加入到反應體系中，在避光的狀態下反應8h；

3)再向反應體系中22.32ml乙二醇，150rmp/min攪拌5min；

4)再向反應體系中加入4gnacl，150rmp/min攪拌5min；

5)向反應體系中加入約15000ml95%乙醇，攪拌10min後抽濾，然後用截留分子量為3500的透析袋透析72h，50℃下乾燥12小時，即得氧化的金銀花薄荷多糖；

6)取25g氧化的金銀花薄荷多糖，溶於500ml蒸餾水，製備存貯液a；

7)稱取50gn,o-羧甲基殼聚糖，溶於500ml蒸餾水中，製備存貯液b；

8)將存貯液a與存貯液b充分混勻後製備成金銀花薄荷多糖凝膠貼。

9)取製備好的具有抗菌消炎作用的金銀花薄荷多糖水凝膠貼備用。10隻雄性小鼠適應性餵養1w後，將20μl二甲苯均勻塗抹在小鼠左耳/右耳內外兩側，30min後將製備的金銀花薄荷多糖水凝膠切片貼敷於小鼠右耳，30min後斷頸處死小鼠，剪下左右耳，疊放後用打孔器取雙側耳同一位置的耳片，稱重後計算兩耳片質量差作為耳廓腫脹度。耳廓腫脹度為：6.9（±2.2）㎎

實施例2：

1)取180g質量的金銀花薄荷多糖粉末，加入到乾燥的反應釜中，然後加入去離子水5400ml，在60℃下，150rmp/min攪拌2h；

2)取106.95gnaio4溶於適量水中，配成飽和溶液，緩慢加入到反應體系中，在避光的狀態下反應8h；

3)再向反應體系中22.32ml乙二醇，150rmp/min攪拌2h；

4)再向反應體系中加入4gnacl，150rmp/min攪拌5min；

5)向反應體系中加入約15000ml95%乙醇，攪拌10min後抽濾，然後用截留分子量為3500的透析袋透析72h，50℃下乾燥12小時，即得氧化的金銀花薄荷多糖；

6)取25g氧化的金銀花薄荷多糖，溶於500ml蒸餾水，製備存貯液a；

7)稱取50gn,o-羧甲基殼聚糖，溶於500蒸餾水中，製備存貯液b；

8)將存貯液a與存貯液b充分混勻後製備成金銀花薄荷多糖凝膠片。

9)取製備的具有抗菌消炎作用的金銀花薄荷多糖水凝膠片備用。10隻雄性小鼠適應性餵養1w後，每日一次，每次0.5g，根據實際適當調劑給藥劑量。將30隻小鼠隨機分為3組，每組10隻，分別為：模型對照組，陽性對照組，金銀花薄荷多糖凝膠組。模型對照組給予生理鹽水（劑量為0.2㎎/ml），陽性對照組給予地塞米松磷酸鈉注射液（濃度0.5%，劑量為0.01ml／10g），給藥組分別給予金銀花薄荷多糖凝膠組（劑量為250mg／10g）。連續餵養1w後，末次給藥後30min，在小鼠右耳正反兩面用微量加樣器各滴加10μl二甲苯致炎。同時給各鼠尾靜脈注射even'sblue，每0．25ml(0.2%溶液)。末次給藥後l小時，將小鼠頸椎脫臼處死，沿耳廓基部剪下兩耳，用直徑9毫米的打孔器在左右耳的同一部位打下圓形耳片。稱同一小鼠左右兩耳片的重量，以左右兩耳片重量之差表示腫脹度，並比較試驗組與對照組間差異的顯著性。

表2金銀花薄荷多糖水凝膠的抗炎效果

實施例3：

1)取180g質量的金銀花薄荷多糖粉末，加入到乾燥的反應釜中，然後加入去離子水5400ml，在60℃下，150rmp/min攪拌2h；

2)取106.95gnaio4溶於適量水中，配成飽和溶液，緩慢加入到反應體系中，在避光的狀態下反應8h；

3)再向反應體系中22.32ml乙二醇，150rmp/min攪拌2h；

4)再向反應體系中加入4gnacl，150rmp/min攪拌5min；

5)向反應體系中加入約15000ml95%乙醇，攪拌10min後抽濾，然後用截留分子量為3500的透析袋透析72h，50℃下乾燥12小時，即得氧化的金銀花薄荷多糖；

6)取25g氧化的金銀花薄荷多糖，溶於500ml蒸餾水，製備存貯液a；

7)稱取50gn,o-羧甲基殼聚糖，溶於500蒸餾水中，製備存貯液b；

取75㎎阿司匹林粉末溶於存貯液b，迅速和存貯液a混合，為水相；與油相液體石蠟按一定比例混合後，300轉/分快速攪拌120min，即得具有緩釋作用的諾氟沙星/金銀花薄荷多糖微球。