含二硝基苯胺類、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物、製劑及應用的製作方法
2023-05-14 20:59:06
本發明涉及一種含二硝基苯胺類、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，同時還涉及包含該菌藥組合物的製劑及應用，屬於植物保護和農藥學領域。
背景技術：
菸草黑脛病(Tobacco black shank)是一種世界範圍的毀滅性土傳病害，其病原菌為疫黴菌菸草變種[Phytophthora parasitica var nicotianae(Breda de Hann)Tuker]。菸草疫黴在煙株苗期至成株期均可侵染，主要侵染菸草莖稈，也可侵染葉片。菸草黑脛病在莖基形成水漬狀黑斑，皮層組織變黑凹陷，並沿莖部上下擴展，髓部黑褐色壞死並幹縮呈碟片狀(萬維肖,何孝兵,曲平治,等.菸草黑脛病早期預防技術[J].植物醫生,2014(02):50-50)。葉片染病後初為水浸狀暗綠色小斑，後擴大為中央黃褐色壞死，邊緣有輪紋的膏藥狀黑斑，全株萎蔫(孫計平,李雪君,吳照輝,等.菸草黑脛病的研究進展[J].湖北農業科學,2011,50(16):3253-3256)。菸草疫黴以菌絲體與厚壁孢子隨病株殘體在土壤或堆肥中越冬，成為次年的初侵染源。病株上產生的孢子囊或釋放出來的遊動孢子通過地面流水或隨風雨進行再侵染(王萬能,肖崇剛.菸草黑脛病的綜合防治及其研究進展[J].南方農業學報,2003(2):42-43)。隨著20世紀80年代後期我國菸草種植面積的不斷擴大，菸草黑脛病迅速擴展。菸草黑脛病平均發病率為10％～20％，發病率高的田塊達75％，嚴重的甚至造成絕收(陳瑞泰,朱賢朝,王智發,等.全國16個主產煙省(區)菸草侵染性病害調研報告[J].中國菸草科學,1997(04):1-7)。
化學防治是菸草黑脛病防控的重要措施，其中甲霜靈、氟啶胺、代森錳鋅等農藥是生產中使用較為廣泛的藥劑。甲霜靈是苯基醯胺類內吸性殺菌劑，80年代中期在我國生產使用，在卵菌病害防治中發揮著重要作用，其作用機制為抑制病原菌的聚合酶活性，幹擾RNA合成。氟啶胺(SHIRLAN，IKF-1216)是由日本石原產業公司開發的2,6-二硝基苯胺類廣譜殺菌劑，通過抑制孢子形成與萌發、菌絲生長等抵制感染，耐雨水衝刷、持效期長，對灰葡萄孢引起的多種灰黴病有特效，同苯並咪唑類、二羧醯亞胺類及目前市場上已有的殺菌劑無交互抗性，對交鏈孢屬、疫黴屬、單軸黴屬、核盤菌屬和黑星菌屬等病菌引起的病害亦有良好的活性。但是隨著生產中的普遍應用，化學殺菌劑的抗性問題也隨之發生。王萬能等研究表明，化學藥劑處理後菸草黑脛病的菌絲體能引起交配型的變化，進而產生抗藥性突變菌株，甚至某些菌株的抗藥性可以穩定遺傳，其中以甲霜靈為代表苯基醯胺類殺菌劑最為突出，而且抗性水平很高(王萬能,肖崇剛.菸草黑脛病的綜合防治及其研究進展[J].廣西農業科學,2003,(2):42-44)。而化學藥劑復配可以減少一種殺菌劑成分的用量，延緩抗藥性的發生，同時降低生產成本，是植物病害防治中的重要措施之一。
菸草黑脛病的化學防治是病害綜合防治中的重要措施，目前其復配藥劑也有相關報導和專利。如公布號CN105265448A的發明專利公開的一種用於防治菸草根腐、黑脛病的殺菌劑，主要由甲霜靈和惡黴靈組成，輔以甲醇、乳化劑後兌水使用即可；公布號CN104430438A的發明專利公開的一種殺菌組合物，其有效成分為惡唑菌酮和霜脲氰，二者的重量比為80:1～1:80，適用於防治由病原真菌引起的植物病害，尤其是菸草黑脛病及瓜果、蔬菜等作物上的霜黴病、疫病等；公布號CN103478163A的發明專利公開了一種含苯噻菌胺的殺菌農藥組合物，除苯噻菌胺外還包括乙磷鋁，二者的重量比為1:40～60:1，該組合物可用於防治菸草黑脛病、作物疫病及霜黴病等。
生防菌株是天然存在的生物活體，具有良好的環境相容性。利用生防菌株防治菸草黑脛病具有防效高、安全性好、成本低等優點。公告號CN101220335B的發明專利公開的一種防治菸草黑脛病的菌株，名稱為淡紫擬青黴ZY-19-2，保藏編號CCTCC NO:M207196，該菌株對菸草黑脛病菌有較強的抑制作用，可定殖在菸草植株根際抵抗病菌的浸染；公告號CN103614319B的發明專利也公開了一種用於防治菸草黑脛病的阿氏芽孢桿菌J-6，保藏編號CCTCC NO:M2013475，該菌株能誘導菸葉拮抗黑脛病從而發揮疫黴防治效果；公告號CN102925393B的發明專利公開的一種兼抗根結線蟲和菸草疫黴的菸草內生菌，名稱為解澱粉芽孢桿菌ZY-9-13，保藏編號CGMCC NO:6162，該菌株對菸草根結線蟲和黑脛病均具有防治效果，可與菸草育苗基質混合使用或在菸草植株移栽時施入根際周圍，生防效果顯著。但是，上述專利均未涉及殺菌劑與生防菌劑聯用的內容。
可持續發展的農業生產系統要求減少農藥的投入，而生物、化學協同防治病害可減輕對環境的壓力，延緩對化學藥劑產生抗性，使藥效更穩定和持久(尹敬芳.生物-化學協同防治辣椒疫病菌藥合劑初步研究[D].中國農業大學,2006)。已有研究表明，生防菌劑和化學藥劑復配對多種病原菌均有良好的防治效果。如黃藍狀菌與甲霜錳鋅復配可防治小麥赤黴病(毛雪琴,彭志榮,邱海萍,等.生防菌株MT-06發酵條件及復配殺菌劑對小麥赤黴病的防效[J].浙江農業科學,2013(07):821-824)，枯草芽胞桿菌與戊唑醇復配可防治蠶豆枯萎病(陳志誼,任海英,劉永鋒,等.戊唑醇和枯草芽孢桿菌協同作用防治蠶豆枯萎病及增效機理初探[J].農藥學學報,2002(4):40-44)，枯草芽胞桿菌與苯醚甲環唑、嘧菌酯等復配可防治蘋果輪紋病(周寒.殺菌劑和生防菌協調控制蘋果採後輪紋病及作用機制[D].安徽農業大學,2009)，井岡黴素與枯草芽胞桿菌協同防治水稻紋枯病(陳志誼,劉永鋒,陸凡.井岡黴素和生防菌Bs-916協同控病作用及增效機理[J].植物保護學報,2003,30(4):429-434.)等等，但是以上菌藥復配的防治靶標均不涉及菸草疫黴。公布號CN104381303A的發明專利公開了一種用於防治真菌病害的菌藥組合物，由核黃素與枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉按照質量比1.21～2.34:97.96～98.79復配而成，相較單獨施用枯草芽孢桿菌Tpb55菌粉，該菌藥組合物能顯著提高菸草黑脛病、赤星病等病害防治功效，增強植株抗病性，但是也僅達到與化學藥劑相當的防治效果。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種含二硝基苯胺類、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和生防菌的菌藥組合物，該組合物對菸草根結線蟲病、菸草黑脛病等具有優異的防治效果，防效顯著優於使用單一種類的殺菌劑、生防菌菌劑以及上述任一種類殺菌劑與生防菌菌劑的組合，且可延緩化學抗藥性的產生。
同時，本發明還提供一種包含上述菌藥組合物的菌藥製劑。
最後，本發明再提供一種上述菌藥組合物、菌藥製劑在防治菸草根結線蟲病和/或菸草黑脛病中的應用。
為了實現以上目的，本發明所採用的技術方案是：
菌藥組合物，由二硝基苯胺類殺菌劑、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和生防菌菌粉組成，以質量比計，二硝基苯胺類殺菌劑:二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑:生防菌菌粉＝1～10:1～10:1～10，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
所述二硝基苯胺類殺菌劑選自氟啶胺等。
所述二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑選自代森鋅、代森銨、代森錳、代森聯、代森錳鋅、甲基代森鋅、丙森鋅、福美雙、福美鐵、福美鋅等中的一種或多種。如單獨選用代森鋅、代森錳鋅、丙森鋅或福美雙，或者選用代森錳與丙森鋅、甲基代森鋅與福美雙的組合，亦或者選用代森鋅、丙森鋅與福美鋅的組合。相較使用單一一種二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑，殺菌劑復配(兩種及以上殺菌劑配合使用)具有相加作用或增效作用。並且，復配殺菌劑與生防菌聯合使用對菸草根結線蟲病、菸草黑脛病等的防治效果優於單獨使用化學殺菌劑或生防菌菌劑。同時，復配殺菌劑中各組分配比可以任意選取，如代森錳鋅與丙森鋅按照質量比1～10:1～10復配，又如代森鋅與甲基代森鋅、福美鋅按照質量比1～10:1～10:1～10復配，等等。由於組合形式多樣，此處不一一列舉。
優選的，菌藥組合物中二硝基苯胺類殺菌劑為氟啶胺，二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑選自代森鋅、代森銨、代森錳、代森聯、代森錳鋅、甲基代森鋅、丙森鋅、福美雙、福美鐵、福美鋅等中的任意一種。二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑中代森鋅、代森錳鋅、福美雙等的殺菌機理相同或相似，因此從中選擇任意一種與氟啶胺復配，復配殺菌劑再與生防菌聯合使用，不僅能簡化配方，同時對菸草根結線蟲病、菸草黑脛病等也能達到良好的防治效果。其中，氟啶胺可使病原菌呼吸作用中的氧化磷酸化解偶聯，阻礙能量合成，抑制病原菌的菌絲生長、孢子形成與萌發。二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑為多作用位點抑制劑，不易產生抗性。
所述生防菌菌粉可參照專利(公告號CN102925393B)中方法製備。其中，生防菌優選為解澱粉芽孢桿菌(Bacillus amyloliquefaciens)ZY-9-13，保藏編號：CGMCC No.6162，保藏時間：2012年05月29日，保藏單位：中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，單位地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號。該菌株兼抗菸草根結線蟲和菸草疫黴，尤其能抑制菸草黑脛病菌菌絲生長及孢子萌發，在菸草根際較好的定殖。參見專利「一種兼抗根結線蟲和菸草疫黴的菸草內生菌及其應用」(公告號：CN102925393B)。經試驗驗證，二硝基苯胺類殺菌劑、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑對解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)的生長影響微弱，殺菌劑與菌株之間的相容性良好，可以進行菌藥組合。
所述菌藥組合物可採用常規方法製備成任意一種適於農業使用的劑型，如可溼性粉劑、懸浮劑、水分散顆粒劑、乳油、水乳劑、微乳劑、水劑、微膠囊劑、可溶性粉劑等。製劑中菌藥組合物為有效成分，其含量為製劑總質量的0.1～99.9％。
菌藥製劑，包含上述菌藥組合物，以及一種或多種農藥學上可接受的助劑。所述助劑包括潤溼分散劑、穩定劑、防凍劑、崩解劑、增稠劑、消泡劑、有機溶劑、載體等，以及其他有益於有效成分在製劑中穩定發揮藥效的物質，是農藥製劑中常用的或允許使用的各種成分。助劑的具體選擇和用量可根據配方要求通過常規試驗確定。
所述潤溼分散劑可選自十二烷基硫酸鈉、十二烷基磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈉、十二烷基苯磺酸鈣、木質素磺酸鈣、木質素磺酸鈉、月桂酸硫酸鈉、烷基聚氧乙烯醚磺酸鹽、烷基酚聚氧乙烯醚甲醛縮合物、聚氧乙烯聚氧丙烯嵌段共聚物、月桂醇聚氧乙烯醚硫酸鈉、烷基萘甲醛縮合物磺酸鹽、拉開粉、十二烷基聚氧乙烯醚磷酸酯、羥甲基纖維素等中的任意一種或多種。
所述穩定劑可選自鄰苯三酚、BHT、BHA、檸檬酸、環氧大豆油、亞麻油、丁香酚、蓖麻油、橄欖油、對苯二酚、水楊酸、山梨酸鈉、丁基縮水甘油醚、苯基縮水甘油醚、甲苯基縮水甘油醚、聚乙烯基乙二醇二縮水甘油醚、二萘酚、一萘酚中的任意一種或多種。
所述防凍劑可選自甘油、丙二醇、乙二醇、尿素、氯化鈉中的任意一種。
所述崩解劑可選自硫酸銨、氯化鈣、氯化鎂、氯化鋁、膨潤土、磷酸二氫胺、尿素等中的任意一種或多種。
所述增稠劑可選自黃原膠、阿拉伯膠、聚乙烯醇、羧甲基纖維素、甲基纖維素、雜多糖、可溶性澱粉、蔗糖、葡萄糖、海藻酸鈉、丙烯酸系聚合物、聚乙烯吡咯烷酮、松香、石膏、硫酸鈉、骨膠、大豆蛋白、糊精、矽酸、矽酸鋁鎂等中的任意一種或多種。
所述消泡劑可選自矽油類消泡劑、矽酮類消泡劑、C10～20飽和脂肪酸類消泡劑、C8～10脂肪醇類消泡劑中的任意一種。
所述有機溶劑可選自甲苯、二甲苯、烷基苯、異丙醇、丁醇、乙二醇、二甘醇、三甘醇、丙二醇、丙三醇、山梨醇、苯甲醇、環己醇、丙酮、甲基異丁基酮、環己酮、二甲基甲醯胺、吡咯烷酮、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、植物油等中的任意一種或多種。
所述載體可選自石英、粘土、蒙脫土、二氧化矽、硅藻土、浮石、石膏、滑石、膨潤土、高嶺土、陶土、白炭黑、方解石、大理石、海泡石、白雲石、凹凸棒土等中的任意一種或多種。
菌藥組合物的應用，具體為菌藥組合物在防治菸草根結線蟲和/或菸草黑脛病中的應用。
菌藥製劑的應用，具體為菌藥製劑在防治菸草根結線蟲和/或菸草黑脛病中的應用。
本發明的有益效果：
本發明中菌藥組合物由二硝基苯胺類殺菌劑、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，其中二硝基苯胺類的氟啶胺可使病原菌呼吸作用中的氧化磷酸化解偶聯，阻礙能量合成，抑制病原菌的菌絲生長、孢子形成與萌發，二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑為多作用位點抑制劑，且不易產生抗性，這兩類殺菌劑與解澱粉芽孢桿菌配合使用對菸草根結線蟲病、菸草黑脛病具有優異的防治效果，防效顯著優於使用單一種類的殺菌劑、生防菌菌劑以及上述任一種類殺菌劑與生防菌菌劑的組合，且可延緩化學抗藥性的產生，特別適用于田間菸草黑脛病的防治。
具體實施方式
下述實施例僅對本發明作進一步詳細說明，但不構成對本發明的任何限制。
實施例1
菌藥組合物，由氟啶胺、代森鋅和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:代森鋅:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝1:1:1，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例2
菌藥組合物，由氟啶胺、代森錳和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:代森錳:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝10:1:1，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例3
菌藥組合物，由氟啶胺、代森錳鋅和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:代森錳鋅:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝1:6:9，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例4
菌藥組合物，由氟啶胺、甲基代森鋅和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:甲基代森鋅:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝5:5:1，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例5
菌藥組合物，由氟啶胺、丙森鋅和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:丙森鋅:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝8:3:1，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例6
菌藥組合物，由氟啶胺、福美雙和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:福美雙:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝10:10:1，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例7
菌藥組合物，由氟啶胺、福美鋅和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:福美鋅:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝1:1:10，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例8
菌藥組合物，由氟啶胺、代森錳鋅、福美雙和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉組成，以質量比計，氟啶胺:代森錳鋅:福美雙:解澱粉芽孢桿菌菌粉＝4:3:7:9，菌粉中活菌數不低於106cfu/g。
實施例9
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺40份，代森鋅10份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉5份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，十二烷基磺酸鈉8份，月桂醇基硫酸鈉3份，十二烷基硫酸鈉5份，乙基纖維素5份，蔗糖5份，硅藻土12份，凹凸棒土12份；製備方法為：按照質量份數準確取各原料，粉碎後過篩，混合均勻，得到可溼性粉劑。
實施例10
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺11份，代森錳14份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉24份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，木質素磺酸鈣8份，十二烷基硫酸鈉3份，蔗糖4份，白炭黑15份，硅藻土18份；製備方法同實施例9。
實施例11
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺30份，甲基代森鋅24份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉6份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，十二烷基磺酸鈉10份，月桂醇基硫酸鈉8份，木質素磺酸鈣5份，乙基纖維素5份，蔗糖5份，高嶺土20份；製備方法同實施例9。
實施例12
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺5份，代森錳鋅6份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉44份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉6份，拉開粉8份，硫酸鈉3份，黃原膠5份，蔗糖5份，高嶺土22份；製備方法為：按照質量份數準確取各原料，混合均勻後造粒，乾燥、篩分，得到懸浮劑。
實施例13
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺8份，丙森鋅48份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉8份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉12份，拉開粉3份，澱粉3份，硫酸鈉2份，黃原膠5份，蔗糖5份，膨潤土12份，硅藻土12份；製備方法同實施例12。
實施例14
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺25份，福美鋅13份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉27份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，十二烷基萘磺酸鈉12份，拉開粉5份，硫酸鈉3份，蔗糖8份，膨潤土18份，硅藻土8份；製備方法同實施例12。
實施例15
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺20份，福美雙20份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉20份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，聚乙烯吡咯烷酮5份，十二烷基酚聚氧乙烯醚3份，十二烷基苯磺酸鈉3份，環氧乙烷5份，乙基纖維素8份，凹凸棒土22份；製備方法為：按照質量份數準確取各原料，混合均勻後超微氣流粉碎，造粒，得到水分散顆粒劑。
實施例16
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺18份，代森錳鋅18份，福美雙12份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉6份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，木質素磺酸鈉8份，二丁基萘磺酸鈉3份，十二烷基苯磺酸鈉4份，聚乙烯吡咯烷酮5份，澱粉3份，蔗糖3份，硅藻土18份；製備方法同實施例15。
在本發明的其他實施例中，還可將菌藥製劑製成水乳劑、水劑、微膠囊劑等劑型，助劑採用本領域常規助劑即可。
在本發明的其他實施例中，還可從二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑中任選多種與氟啶胺復配，復配殺菌劑再與生防菌組合或製成菌藥製劑。
對比例1
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：氟啶胺50份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉5份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，其他助劑及製備方法同實施例9。
對比例2
菌藥製劑，由以下質量份數的原料製成：代森鋅50份，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉5份(菌粉中活菌數不低於106cfu/g)，其他助劑及製備方法同實施例9。
上述各實施例及對比例中的解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌粉參照專利(公告號CN102925393B)具體實施方式中方法製備成可溼性粉劑。
1、菌藥組合物的協同增效作用測定
採用菌絲生長速率法測定菸草黑脛病菌對殺菌劑、解澱粉芽孢桿菌和菌藥組合物的藥劑敏感性。表1中殺菌劑原藥(未加解澱粉芽孢桿菌)的供試濃度為3.50μg/mL，表2中二硝基苯胺類殺菌劑原藥(未加解澱粉芽孢桿菌)的供試濃度為1.00μg/mL，表3中二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑原藥(未加解澱粉芽孢桿菌)的供試濃度為10.00μg/mL；解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌懸液的濃度為1010cfu/mL，菌藥組合物(各類殺菌劑原藥對應濃度+解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)1010cfu/mL)，復配形式具體見下表1～3。將直徑5mm菌碟置於含藥的燕麥培養基中央，每藥劑處理重複3次，以無藥處理為對照，採用十字交叉法測量菌落直徑，計算不同處理對菸草黑脛病菌的抑制率，評價菌藥組合物對黑脛病菌的抑制作用，結果見下表1～3。
採用Abbott數學模型計算菌藥組合物對病原菌的抑制效果(Colby S,Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations[J].Weeds,1967)。
藥劑對菸草黑脛病菌的理論抑制率計算公式如下：
E＝(X1+X2+…)-X1·X2·…/100；
式中：E代表藥劑對菸草黑脛病菌的預期(理論)抑制率，X1、X2…分別代表藥劑A、藥劑B…對菸草黑脛病菌的抑制率。
評價方法為：期望(理論)抑制率與實際測定抑制率相比較，當理論值＜實際值時，表現為增效作用；當理論值＝實際值時，表現為相加作用；當理論值＞實際值時，表現為拮抗作用。
表1二硝基苯胺類、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑與解澱粉芽孢桿菌對菌絲生長的抑制效果
表2二硝基苯胺類殺菌劑與解澱粉芽孢桿菌對菸草黑脛病菌菌絲生長的抑制效果
表3二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑與解澱粉芽孢桿菌對菸草黑脛病菌菌絲生長的抑制效果
從表1～3可以看出，含二硝基苯胺類殺菌劑、二硫代氨基甲酸酯類殺菌劑和解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)的菌藥組合物對菸草黑脛病菌的抑制效果顯著優於使用單一種類的殺菌劑、解澱粉芽孢桿菌以及上述任一種類殺菌劑與解澱粉芽孢桿菌的組合。表明本發明中菌藥組合物各組分之間具有協同增效作用。
2、菌藥製劑對菸草黑脛病菌的溫室藥效試驗
通過溫室接種菸草黑脛病菌，並噴施實施例9～16及對比例1～2製備的菌藥製劑，具體方法如下：參照董瑜的方法製備菌谷接種物，將20個直徑5mm的菌餅加入500g滅菌的穀子中，28℃培養14d，混合均勻後備用(董瑜.防治菸草黑脛病緩釋型殺菌劑研究[D].中國農業科學院,2015)；將中煙100煙苗種植在10×10cm的營養缽中，營養土與蛭石的比例為1:1，待煙苗長至6～7片真葉時，進行藥劑灌根處理，每個營養缽加藥液50mL，每個處理5株煙苗，以不施加藥劑、加50mL清水的處理作為對照。試驗設三次重複，施藥3d後於煙株根部接種菌谷10g/株，施藥7d後進行病害調查，按照以下公式計算防治效果：
防治效果(％)＝(對照病情指數-處理病情指數)/對照病情指數×100％。
菸草黑脛病分級標準參照中華人民共和國菸草行業標準(YC/T39-1996)，試驗結果見下表4。表4中，72％甲霜·錳鋅可溼性粉劑購自浙江禾本科技有限公司，500g/L氟啶胺懸浮劑購自日本石原產業株式會社，50％福美雙可溼性粉劑購自山西科力科技有限公司，解澱粉芽孢桿菌(CGMCC No.6162)菌劑參照專利(公告號CN102925393B)具體實施方式中方法製備，以上均為對照組。
表4菌藥製劑對菸草黑脛病的防治效果
從表4可以看出，實施例9～16中菌藥製劑對菸草黑脛病均具有優異的防治效果，防效達81％以上，優於市售的化學藥劑、解澱粉芽孢桿菌菌劑及對比例1～2中菌藥製劑，為黑脛病的防治提供了新型備選藥劑，通過與市售藥劑輪換使用，可降低抗藥性的產生。