涉及使用磁性顆粒的測定方法和裝置的製作方法

2023-05-11 17:33:26 2

專利名稱：涉及使用磁性顆粒的測定方法和裝置的製作方法
技術領域：
本發明涉及診斷測定領域，具體地講涉及其中待檢測分析物存在於複雜生物樣品中的開放式或至少部分開放式側向流動測定(lateral flow assay)。本發明根據使用磁性顆粒作為攜帶俘獲分子的固相可供獲得改進處理樣品的裝置和方法；例如改進反應動力學，從而改進測定的靈敏度。
背景技術：
現今，診斷測定對於許多疾病的診斷、治療和管理極為普及並十分重要。為了簡化對例如血液、血清、血漿、尿液、唾液、組織活檢、糞便、痰和皮膚或咽拭子等臨床樣品中各種分析物的檢測，多年來已開發出不同類型的診斷測定。通常預期這些測定給出快速可靠的結果，同時又容易使用，而且製造成本低廉。可以理解的是，在一種測定和相同測定中難以滿足所有的這些要求。在實踐中，許多測定受限於其速度。另一個重要參數是靈敏度。測定技術 的最新發展導致越來越靈敏的測試，允許檢測痕量的分析物，並且以儘可能最短的時間檢測樣品的疾病標誌物。一次性測定裝置的最普通類型由接受樣品的區或區域、反應區和任選分別連接接受區和反應區的運輸區或溫育區組成。這些測定裝置稱為層析測定裝置或簡稱為測試條(test strip)。它們採用多孔材料例如過濾材料，多孔材料限定能夠支持毛細流動的液體流動路徑。樣品接受區常由能夠吸收樣品的更多孔的材料組成，當需要分離血細胞時，還有效地捕集紅細胞。這類材料的實例為纖維材料，例如紙、羊毛狀物、凝膠或織物(tissue)，其包含例如纖維素、羊毛、玻璃纖維、石棉、人造纖維、聚合物或其混合物。運輸區或溫育區通常由相同或類似的材料組成，常具有不同於樣品接受區的孔隙率。同樣地，反應區通常由類似的吸收纖維材料或任何上文列出的材料組成，反應區可與溫育區整合，或構成其最遠端的組成部分。在測定裝置或測試條(strip test)中，一種或多種多孔材料被裝配在載體上，例如熱塑材料、紙、硬紙板等的條帶上。此外，可提供覆蓋物，所述覆蓋物具有至少一個接受樣品的口和一個允許讀取測定結果的口或透明區。硝化纖維材料常用作構成運輸區或反應區、連接接受區和反應區的基質。用硝化纖維的一個重大缺點是其對蛋白質和其它生物分子的高的非特異性結合。然而，目前的測試條常處理眾多樣品，減少了這種結合的影響。然而，需要使樣品體積減至最小，符合使整個測試小型化的趨勢，包括在不損害準確性和可靠性的情況下使試劑的量最小化。一種具體的測定裝置類型是無孔測定，例如WO 03/103835、WO 2005/089082、WO2005/118139和WO 2006/137785中公開的開放式側向流動裝置。WO 03/103835簡單提到在具有毛細結構以促進或驅動液體沿所述結構進行毛細流動的測定裝置中併入「加工區室、元件和/或裝置」。這些「加工區室、元件和/或裝置」包括「捕集所述液體的磁性組分」的磁性部件。此外，WO 2003/103835教導了「還可在流動路徑中或在流動路徑附近安置用於檢測磁性物質的磁體或部件。因此，磁性顆粒可被捕集並保留在結構中需要的位置上，顆粒的磁性因此可用作成功運輸到系統特定點上的標誌物或指示物。此外，磁性顆粒可用具有生物親和力的物質包覆，並且用於不同類型的測定」。WO2003/103835的教導集中在利用磁性能作為另一種標誌物。雖然提出磁性顆粒還可用作載體，例如用具有生物親和力的物質包覆，但是WO 2003/103835未表明如何將之付諸實踐。WO 2005/089082提到在無孔測定中使用磁性顆粒，其中利用磁性部件分離出樣品的不需要的組分。WO 2006/134546涉及在包括至少一個敏感表面的敏感裝置中使用磁性標記，敏感表面包含至少一類結合部位，其能夠與連接磁性標記的至少一類生物實體特異性連接。敏感裝置還包含至少一個磁性傳感器元件，敏感裝置還包含區分部件，用於以時間分辨的方式將特異性連接結合部位的磁性標記與非特異性連接的標記區分開來。WO 2007/110779公開了一種測定方法和裝置，其中樣品與磁性敏感性顆粒混合，且其中可通過施加的磁場操作所述顆粒。WO 2007/129275描述了一種系統，其中磁性顆粒在反應室內越過傳感器表面移 動，其中分析物特異性探針或分析物類似物與傳感器表面結合。US 2008160630公開了一種用於檢測樣品中的分析物的裝置，所述裝置包括具有樣品區、清潔區和檢測區的流體網絡。分析物與利用微線圈陣列或機械可移動的永磁體在流體網絡內移動的磁性顆粒相互作用。WO 2009/009408涉及用於檢測分析物(例如致病細胞)的系統和方法。該方法允許直接測量分析物(例如致病生物)而無需樣品製備和/或PCR。該方法包括使用具有包含大量配體的外表面的磁珠，所述配體與靶分析物特異性結合。依賴於使用磁性顆粒的生物傳感器趨於在傳統夾心測定中構建，其中第一俘獲分子或俘獲元件與磁珠結合，第二俘獲分子或俘獲元件與固相結合，且主要集中在利用磁性能以準確檢測直到單珠粒靈敏度(Janssen等,載於Biosensors and Bioelectronics, 23(2008) 833-838)。有需要進一步改進動力學、提高用於生物化學和生物分子測定、特別是用於其中對靈敏度和準確性的要求非常高的診斷測定的方法和裝置中的靈敏度和特異性。發明概述
本發明人提供使用側向流動測定裝置、優選開放式側向流動測定裝置檢測液體樣品中的分析物的方法，所述裝置包括表面上的至少一個加樣區、至少一個反應區和至少一個槽，所述各區在所述表面上形成所述樣品的毛細流動路徑；能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子和也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接。按照本發明實施方案的方法中，所述磁性顆粒大小的範圍優選為5 nm-約5000nm、更優選約50 nm-約500 nm。所述第二俘獲分子和/或所述磁性顆粒還可攜帶可區別於所述第一標記的第二標記。在一個實施方案中，與磁性顆粒結合形成俘獲綴合物的所述第二俘獲分子預沉積在所述測定裝置上，在加入所述樣品之前或同時加入與非磁性標記結合形成檢測綴合物的所述第二俘獲分子。或者，所述第一俘獲分子預沉積在所述測定裝置上，在加入所述樣品之後或同時加入所述第二俘獲分子。優選所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者預沉積在所述測定裝置上。按照另一個可與先描述的實施方案任意組合的實施方案，所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者沉積在所述加樣區中，並且能夠在樣品加入所述加樣區後沿所述流動路徑運輸，並與分析物反應，從而形成由所述分析物、第一俘獲分子和第二俘獲分子以及一種或多種所述標記和磁性顆粒組成的檢測複合物。在上述實施方案中，所述第一俘獲分子和第二俘獲分子通過毛細作用力的影響隨樣品運輸至所述反應區，形成所述檢測複合物。按照可與上述實施方案任意組合的另一個實施方案，施加磁力使所述第二俘獲分子與其連接的磁性顆粒一起在所述反應區內移動。在該實施方案中，檢測複合物在反應區內移動，例如減緩或加速、振動或來回移動，優選利用磁力最終富集在分立位置(discretelocation)上後，定性或定量檢測所述第一和/或第二標記。所述樣品可以是任何生物、環境或臨床樣品，但是優選為取自哺乳動物的樣品，僅以一些非限制性實例為例，樣品選自血液、血清、血漿、尿液、唾液、組織活檢、糞便、痰和拭子，例如來自皮膚或黏膜表面的拭子，例如鼻、咽和生殖器拭子。所述第一俘獲分子和第二俘獲分子可以是對待檢測或待定量的靶分析物有親和力的任何合適的分子，但優選選自對待檢測的分析物有特異性的抗體、抗體片段、適配體和核酸序列。所述第一標記和/或第二標記可以是任何合適的標記，但優選為選自發色團、螢光團、放射性標記和酶的標記。本發明的一個具體實施方案是利用側向流動測定裝置檢測液體樣品中的分析物的方法，所述裝置包括至少一個加樣區、至少一個反應區和至少一個槽，所述各區形成所述樣品的毛細流動路徑；能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子和也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接，其中所述樣品及所述第一俘獲分子和第二俘獲分子通過毛細作用力的影響沿流動路徑運輸。另一個實施方案是利用側向流動測定裝置檢測液體樣品中的分析物的方法，所述裝置包括至少一個加樣區、一個反應區和一個槽，所述各區形成所述樣品的毛細流動路徑；能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子和也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接，其中通過磁力的影響操作所述第一俘獲分子和第二俘獲分子。按照一個實施方案，還可從測定的「開放」側施加磁力。因此不僅可通過基底施加磁力，將磁性載體顆粒吸向基底，而且還可從上面或從毛細結構的開放側施加磁力。本發明人進行的實驗表明，磁性顆粒在不離開液相的情況下在液-氣界面下富集。這可供從上方定性和定量檢測結果，而不受基底阻礙；即不必補償基底對信號強度、失真等的影響。本發明人還提供用於檢測樣品中的分析物的改進的測定裝置，所述裝置包括加樣區、任選綴合物區、反應區和槽，所述各區形成流動路徑；能夠與所述分析物結合、任選沉積在裝置上的第一俘獲分子；以及也能夠與所述分析物結合、任選沉積在所述裝置上的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與、磁性顆粒連接。在上述實施方案的測定裝置中，所述磁性顆粒大小的範圍優選為5 nm-約5000nm、更優選約50 nm-約500 nm。所述第二俘獲分子和磁性顆粒任選還攜帶可區別於所述第
一標記的第二標記。在可與上述實施方案任意組合的一個實施方案中，所述第二俘獲分子預沉積在所述測定裝置上。或者，所述第一俘獲分子預沉積在所述測定裝置上。優選所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者預沉積在所述測定裝置上。在可與上述實施方案任意組合的另一個實施方案中，所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者沉積在所述加樣區中，並且能夠在樣品加入所述加樣區後沿所述流動路徑運輸。在可與上述實施方案任意組合的一個優選實施方案中，至少所述槽由突起組成， 突起實質上垂直於裝置表面，並具有使得在流動路徑中引起毛細流動的高度、寬度和相互間距。優選流動路徑由作為突起的微柱組成，微柱實質上垂直於表面，並且具有能夠在所述流動路徑中產生樣品側向流動的高度、直徑和相互間距。或者，流動路徑包含基於硝化纖維的材料。在可與上述實施方案任意組合的一個實施方案中，流動路徑被蓋子覆蓋。所述蓋子優選只提供對流動路徑的機械保護，但不參與毛細流動的產生。如果存在蓋子，則距流動路徑一段距離放置，所述距離超過毛細距離。按照可與上述實施方案任意組合的另一個實施方案，流動路徑在反應區內包括沒有微柱的區域。備選地或除此之外，在與之呈液體連通的所述流動路徑附近提供沒有微柱的區域。此外，流動路徑優選包括至少一個具有微柱的分立區，所述微柱具有不同於流動路徑周圍的微柱的高度、直徑或相互間距。按照可與上述實施方案任意組合的又一個實施方案，所述裝置包括磁性元件。所述磁性元件優選是整合到裝置中的永磁體。或者，所述磁性元件是在遇到外部信號時能夠產生磁場的元件；例如通過傳導元件施加電流。此外，所述裝置優選包括與流動路徑連通的分立區，所述區具有改進讀取測定結果的特徵。在上述實施方案的任一個中，裝置優選為一次性測定裝置。此外，在上述實施方案的任一個中，所述第一俘獲分子和第二俘獲分子可以是對待檢測或待定量的靶分析物有親和力的任何合適的分子，但優選選自對待檢測的分析物有特異性的抗體、抗體片段、適配體和核酸序列。此外，所述第一標記和/或第二標記可以是任何合適的標記，但優選為選自發色團、螢光團、放射性標記和酶的標記。本發明人還提供用於讀取在測定裝置(測定平臺)上進行的測定結果的裝置(讀數器)，其中所述裝置包括用於讀取由所述檢測複合物發射或反射的信號的部件、用於計算信號和顯示結果的部件和能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的部件。在裝置的一個實施方案中，能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的所述部件優選為用於激活存在於測定裝置上的一個或多個元件的部件。或者，在裝置的另一個實施方案中，能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的所述部件是能夠處於距測定裝置的有效距離內以操作存在於測定裝置上的磁性組分的磁性部件。所述磁性部件可以是例如使之與測定裝置接觸或處於距測定裝置的有效距離內的永磁體；或以距裝置的有效距離存在的並且在需要磁力的影響時被激活的電磁體。在上述實施方案的任一個中，能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的所述部件還可包括存在於所述用於讀取結果的裝置(讀數器)上的第一部件，第一部件激活存在於測定裝置(測定平臺)上的第二部件，其在激活後產生磁場。另一個實施方案是用於讀取在測定裝置上進行的測定的結果的裝置，其中所述裝置包括能夠讀取由存在於所述測定裝置的規定位置上的至少一種檢測複合物發射或反射的信號的檢測器，以及能夠在讀取所述信號前將存在於所述測定裝置上的磁性組分吸引到所述位置上的部件。在上述實施方案中，所述部件可包括激活第二部件、存在於所述用於讀取結果的 裝置中的第一部件，所述第二部件存在於測定裝置中，在激活時產生能夠在讀取所述信號前將存在於所述測定裝置上的磁性組分吸引到所述規定位置上的磁場。在上述實施方案的任一個中，讀數優選選自顏色、螢光、放射性或酶活性的檢測或定量測定。本發明實施方案的方法、測定裝置和讀數器具有許多優勢，主要與免疫化學反應的反應動力學改進和測定靈敏度提聞有關。另一個優勢是該方法可應用於現有測定平臺，特別是開放式側向流動平臺。另一個優勢是比起俘獲分子單獨和分立共價固定在省略流動通道表面活化的反應區的一個或若干個位置上，與磁性顆粒共價偶聯的第二俘獲分子更容易沉積在加樣區。因此，本發明不同實施方案的方法和裝置使得在對所述實體是儘可能優化的環境中處理俘獲分子成為可能，而不必考慮準確定位和固定的要求。而固定通過施加外部磁力實現。可在流動路徑內操作與磁性顆粒連接的俘獲分子，優選攪動、振動、運輸、固定化等從而改進混合，並因此改進反應動力學，延長分析物與俘獲分子之間的接觸時間，並且在讀取測定結果前集中檢測綴合物。此外，不僅僅可操作、優選固定化或振動俘獲綴合物，而且還可操作、優選固定化或振動包含第一俘獲分子和第二俘獲分子、分析物、磁性顆粒和一個或多個標記的檢測複合物。在系統滿載(satiated)的情況下，信號讀數期間顆粒的振動將改進讀數，因為顆粒否則可能遮蔽標記。在讀取結果前能夠富集檢測複合物到在流動路徑內或流動路徑外的特定位置上也是一項優勢。這在例如在背景信號高的情況下是有利的。又一個優勢是測定裝置表面只需要最少的或不需要化學修飾以容納反應化學，因為所有化學都存在於顆粒上。在下面的發明詳述中進一步論述了這些和其它特徵和優勢，可結合附圖
閱讀發明詳述。附圖簡述
下面將參照附圖，在說明書和非限制性實施例中更詳細地描述本發明，附圖中圖I以示意圖的方式顯示本發明示例性實施方案的側向流動測定平臺；
圖2以示意圖的方式顯示使用兩種俘獲分子俘獲和檢測分析物，其中一種俘獲分子與磁性顆粒偶聯；
圖3a、b、c和d以示意圖的方式顯示本發明側向流動測定裝置的不同實施方案；
圖4 a和b顯示側向流動測定平臺的兩個實施方案，其中形成分立位置，在此表示為與主流動路徑保持液體連通的主流動路徑的附屬件；和
圖5顯示螢光團標記的CRP結合的分析物結合測定的結果，測量為被磁體減緩的不同濃度的與磁珠連接的抗CRP抗體的信號(RFU)。發明詳沭 在詳細公開和描述本發明前，要理解的是，本發明不限於本文所公開的具體裝置、化合物、配置、方法步驟、基底和材料，因為這類裝置、化合物、配置、方法步驟、基底和材料可稍有變化。還要理解的是，本文使用的術語只用於描述具體實施方案的目的，並非是限制性的，因為本發明的範圍只受隨附權利要求書及其等同內容的限制。必須注意的是，本說明書和隨附權利要求書中使用的單數形式包括複數形式，除非文中另有明確規定。如果沒有任何其它定義，則本文所用任何術語和科技術語意指具有本發明所屬領域技術人員通常理解的含義。在整個說明書和權利要求書中，與數值連用的術語「約」是指本領域技術人員熟悉和接受的準確度的範圍。所述範圍為±10%。術語「俘獲分子」意指針對其對一種或多種靶生物化合物的親和力或其對所述一種或多種靶生物化合物的相關修飾物的親和力適當選擇的分子。例如，如果靶生物化合物是DNA，則俘獲分子可以是但不限於合成寡核苷酸、其類似物或特異性抗體。適當修飾的俘獲分子的非限制性實例是生物素取代的靶生物化合物，在該情況下探針可帶有抗生物素蛋白官能團。術語「標記」是指根據它發送的信號的物理分布或/和強度可檢出的物質，例如但不限於發光分子(例如突光劑、磷光劑、化學發光劑、生物發光劑等)、有色分子、反應時產生顏色的分子、酶、放射性同位素、具有特異性結合的配體等。當兩種標記在彼此不顯著幹擾、妨礙或猝滅的情況下可單獨檢出、優選同時量化時，兩種標記是「可區分的」。術語「操作」意指對磁性顆粒和與之結合的俘獲分子或包含磁性顆粒的整個檢測複合物施加影響。「操作」包括相對於缺乏磁力時顆粒的運動，減緩和加速顆粒運動。該術語還包括顆粒以一個、兩個或三個方向移動，例如相對於樣品流來回移動、相對於樣品流橫向移動或在測定裝置上的樣品層內振動。該術語還包括俘獲分子或整個檢測複合物移動至測定裝置的不同位置，例如回到加樣區以延長與樣品的接觸、在反應區內循環以改進動力學或在特定位置上富集以讀取測定結果等。整個權利要求書和說明書所用的「槽」是指具有接受液體樣品的能力的區域。本發明人提供使用側向流動測定裝置檢測液體樣品中的分析物的方法，所述裝置包括至少一個加樣區、至少一個反應區和至少一個槽，所述各區形成所述樣品的毛細流動路徑；能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子和也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接。圖2以示意圖的方式顯示使用包含第一俘獲分子11和標記12 (例如螢光團)的檢測綴合物10以及包含第二俘獲分子14和磁性顆粒15的俘獲綴合物13，來俘獲和檢測分析物16，所述第二俘獲分子14與第一俘獲分子11相同或不同。當與分析物16接觸時，檢測綴合物10和俘獲綴合物13分別形成檢測複合物17。按照本發明的一個實施方案，該檢測複合物17可用例如固定在測定裝置表面特定位置上的磁體18操作，測定裝置例如晶片，此處以示意圖的方式表示為19。在本發明的實施方案的方法中，所述磁性顆粒優選大小範圍為約5 nm-約5000nm、更優選為約50 nm-約500 nm。合適的磁性顆粒由文獻獲知，並可獲自商品供應商；例如Chemicell GmbH,Berlin, Germany ；Bioclone Inc., San Diego, CA, USA ；Nanostructured & AmorphousMaterials, Inc. , Huston, TX, USA。用於生物分離的已知磁性顆粒由一個或多個具有包 覆基質的磁芯組成，包覆基質為具有末端官能化基團的聚合物、二氧化矽或羥磷灰石。磁芯一般由具有超順磁性質或鐵磁性質的磁鐵礦(Fe3C4)或由磁赤鐵礦(YFe2O3)組成。或者，還可產生由磁鐵氧體(例如鈷鐵氧體或錳鐵氧體)製成的磁芯。還可按訂單製造磁性顆粒，以及為指定應用提供所需性質。表I給出了磁性顆粒的非限制性實例
表權利要求
1.一種用於檢測液體樣品中的分析物的方法，所述方法包括以下步驟 提供在基底上包括至少一個加樣區、至少一個反應區和至少一個槽的側向流動測定裝置，所述各區在所述基底上形成所述樣品的流動路徑； 將能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子沉積在所述測定裝置上；和 將也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子沉積在所述測定裝置上，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接。
2.權利要求I的方法，所述方法包括以下步驟將與所述磁性顆粒連接的所述第二俘獲分子預沉積在所述測定裝置上，在加入所述樣品之後或同時加入所述第一俘獲分子。
3.權利要求I的方法，所述方法包括將所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者預沉積在所述測定裝置上的步驟。
4.權利要求I的方法，所述方法包括將所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者沉積在所述加樣區的步驟，其中每個所述俘獲分子在樣品加入所述加樣區後沿所述流動路徑運輸，並與分析物反應，從而形成由所述分析物、第一俘獲分子和第二俘獲分子及一種或多種所述標記和磁性顆粒組成的檢測複合物。
5.權利要求I的方法，其中所述第一俘獲分子和第二俘獲分子通過毛細作用力的影響隨樣品運輸至所述反應區，形成所述檢測複合物。
6.權利要求I的方法，所述方法包括施加磁力使所述第二俘獲分子與其連接的磁性顆粒一起在所述反應區內移動的步驟。
7.權利要求4的方法，所述方法包括使用磁力將所述檢測複合物富集至分立位置後定性或定量檢測所述第一標記和/或第二標記的步驟。
8.一種用於檢測液體樣品中的分析物的方法，所述方法包括以下步驟 提供包括存在於基底上的至少一個加樣區、至少一個反應區和至少一個槽的開放式側向流動測定裝置，所述各區在所述基底上形成所述樣品的流動路徑； 將能夠與所述分析物結合的第一俘獲分子沉積在所述測定裝置上；和 將也能夠與所述分析物結合的第二俘獲分子沉積在所述測定裝置上，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接。
9.權利要求8的方法，所述方法包括將所述第一俘獲分子和第二俘獲分子兩者沉積在所述加樣區的步驟，所述分子能夠在將樣品加入所述加樣區後沿所述流動路徑運輸，並與分析物反應，從而形成由所述分析物、第一俘獲分子和第二俘獲分子及一種或多種所述標記和磁性顆粒組成的檢測複合物。
10.權利要求8的方法，所述方法包括將磁力施加於基底的開放側、將檢測綴合物富集至液/氣界面的步驟。
11.權利要求I的方法，其中所述磁性顆粒大小的範圍為約5nm-約5000 nm、優選約.50 nm-約 500 nm。
12.權利要求I的方法，其中所述第二俘獲分子和/或所述磁性顆粒還攜帶可區別於所述第一標記的第二標記。
13.權利要求I的方法，其中所述樣品是取自哺乳動物的樣品，其選自血液、血清、血漿、尿液、唾液、組織活檢、糞便、痰和皮膚或咽拭子。
14.權利要求I的方法，其中所述第一俘獲分子和第二俘獲分子選自對待檢測的分析物有特異性的抗體、抗體片段、適配體和核酸序列。
15.權利要求I的方法，其中所述第一標記和/或第二標記是選自發色團、螢光團、放射性標記和酶的標記。
16.一種用於檢測樣品中的分析物的測定裝置，所述裝置包括基底上的加樣區、反應區和槽，所述各區在所述基底上形成所述樣品的流動路徑；能夠與所述分析物結合、任選沉積在裝置上的第一俘獲分子；以及也能夠與所述分析物結合、任選沉積在所述裝置上的第二俘獲分子，其中所述第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而所述第二俘獲分子與磁性顆粒連接。
17.權利要求16的測定裝置,其中所述磁性顆粒大小的範圍為約5nm-約5000 nm、優選約 50 nm-約 500 nm。
18.權利要求16的測定裝置，其中所述第二俘獲分子和磁性顆粒還攜帶可區別於所述第一標記的第二標記。
19.權利要求16的測定裝置，其中將與所述磁性顆粒連接的所述第二俘獲分子預沉積在所述測定裝置上。
20.權利要求16的測定裝置，其中將所述第一俘獲分子和第二俘獲分子預沉積在所述測定裝置上。
21.權利要求20的測定裝置，其中所述第一俘獲分子和所述第二俘獲分子兩者沉積在所述加樣區中，並且能夠在樣品加入所述加樣區後沿所述流動路徑運輸。
22.權利要求16的測定裝置，其中至少所述槽由突起組成，突起實質上垂直於裝置表面，並具有使得在流動路徑中引起毛細流動的高度、寬度和相互間距。
23.權利要求16的測定裝置，其中所述流動路徑包括作為突起的微柱，所述突起實質上垂直於表面，並具有能夠在所述流動路徑中產生樣品的毛細側向流動的高度、直徑和相互間距。
24.權利要求16的測定裝置，其中所述流動路徑包括基於硝化纖維的材料。
25.權利要求16的測定裝置，其中所述流動路徑被蓋子覆蓋。
26.權利要求25的測定裝置，其中所述蓋子不參與毛細流動的產生。
27.權利要求23的測定裝置，其中所述流動路徑在反應區內包括沒有微柱的區域。
28.權利要求23的測定裝置，其中在與之呈液體連通的所述流動路徑附近提供沒有微柱的區域。
29.權利要求23的測定裝置，其中所述流動路徑包括至少一個具有微柱的分立區，所述微柱具有不同於流動路徑周圍的微柱的高度、直徑或相互間距。
30.權利要求16的測定裝置，其中所述裝置包括磁性元件。
31.權利要求30的測定裝置，其中所述磁性元件是整合到裝置中的永磁體。
32.權利要求30的測定裝置，其中所述磁性元件是在遇到外部信號時能夠產生磁場的元件，所述信號是施加的通過所述元件的電流。
33.權利要求16的測定裝置，其中所述裝置包括與流動路徑連通的分立區，所述區具有改進讀取測定結果的特徵。
34.權利要求16的測定裝置，其中所述裝置是一次性測定裝置。
35.權利要求16的測定裝置，其中所述第一俘獲分子和第二俘獲分子選自對待檢測的分析物有特異性的抗體、抗體片段、適配體和核酸序列。
36.權利要求16的測定裝置，其中所述第一標記和/或第二標記是選自發色團、螢光團、放射性標記和酶的標記。
37.一種用於讀取在測定裝置上進行的測定的結果的裝置，其中所述裝置包括用於讀取由檢測複合物發射或反射的信號的部件、用於計算信號和顯示結果的部件和能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的部件。
38.權利要求37的裝置，其中所述能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的部件是用於讀數的裝置中的部件，當位於用於讀數的裝置中的位置時存在於距測定裝置的有效距離，或被可移動地設置以被帶至這類距測定裝置的有效距離。
39.權利要求38的裝置，其中所述用於讀數的裝置中的所述部件選自永磁體和電磁 體。
40.權利要求37的裝置，其中所述能夠操作存在於所述測定裝置上的磁性組分的部件是存在於所述用於讀取結果的裝置中的第一部件，其激活存在於所述測定裝置上的第二部件，第二部件在激活後誘導磁場。
41.一種用於讀取在測定裝置上進行的測定的結果的裝置，其中所述裝置包括能夠讀取由存在於所述測定裝置的規定位置上的至少一種檢測複合物發射或反射的信號的檢測器，以及能夠在讀取所述信號前將存在於所述測定裝置上的磁性組分吸引至所述規定位置上的部件。
42.權利要求41的裝置，其中所述部件是存在於所述用於讀取結果的裝置中的第一部件，其激活存在於所述測定裝置中的第二部件，第二部件在激活後產生能夠在讀取所述 信號之前將存在於所述測定裝置上的磁性組分吸引至所述位置的磁場。
43.權利要求41的裝置，其中所述讀數選自顏色、螢光、放射性或酶活性的檢測和/或定量測定。
全文摘要
本文提供使用能夠與分析物結合的第一俘獲分子和也能夠與分析物結合的第二俘獲分子的測定裝置和進行測定的方法，以測定分析物的存在情況和任選分析物的量，其中第一俘獲分子攜帶不是磁性標記的第一標記，而第二俘獲分子與磁性顆粒連接。
文檔編號G01N33/543GK102753972SQ201080057103
公開日2012年10月24日 申請日期2010年10月18日 優先權日2009年10月16日
發明者I.門德爾-哈特維希 申請人:阿米克股份公司