一種縮合環類葫蘆烷型三萜及其製法和用途的製作方法

2023-05-11 20:20:06 2

本發明涉及一種縮合環類葫蘆烷型三萜及其製法和用途，具體指2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃及其製法和用途。
背景技術：
：金佛山雪膽(HemsleyapengxianensisW.J.Changvar.jinfushanensisL.D.Shen&W.J.Chang)為葫蘆科(Fabaceae)雪膽屬屬植物，產於我國東南部地區，生於海拔2000米左右的林緣及山谷灌叢中。金佛山雪膽的果實呈卵形、長4-5釐米，直徑2.5-3.5釐米，果皮表面有細小的疣狀突起而與原變種相區別，主要活性成分分別為葫蘆烷型四環三萜及其皂苷和齊墩果烷型五環三萜及其皂苷，具有清熱解毒，抗菌消炎等多種功效，臨床上主要用於治療菌痢、各種炎症、潰瘍、黃疸等多種疾病。金佛山雪膽的藥效主要來源於其中的葫蘆烷型三萜類化合物，因此，開發和利用雪膽中的的葫蘆烷型單體化合物，進一步挖掘其潛在的藥用價值，並對其單體化合物的結構和理化性質進行確定和表徵，對於開發利用金佛山雪膽資源具有重要意義。技術實現要素：本發明就是克服現有技術的不足，提供一種從金佛山雪膽根莖中分離得到的具有重要生物活性和產業化利用價值的縮合環類葫蘆烷型三萜化合物。該單體化合物為從金佛山雪膽中首次分離得到，利用現代分析手段表徵其結構並確認其生物活性後，根據有關化合物的命名規則命名為2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃，該化合物為一新化合物。一種從金佛山雪膽根莖中分離得到的2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃，具有如下式所示結構：上述從金佛山雪膽根莖子中分離得到的2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃按下述方法得到：金佛山雪膽根莖幹燥後粉碎過篩，加95%乙醇加熱回流提取3次，每次1-3小時，合併提取液，減壓回收溶劑，濃縮後得總浸膏，總浸膏用水分散後，依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇萃取，萃取液濃縮至幹；取乙酸乙酯部位浸膏用矽膠柱色譜分離，氯仿-甲醇(1:0-0:1)梯度洗脫，得到12個餾分FrA-L，Fr.G部分經凝膠色譜洗脫後再用氯仿-甲醇作為洗脫液洗脫除去色素，然後樣品經反相中壓色譜柱經MeOH-H2O(60:40;70:30;80:20;90:10)梯度洗脫，得到四個部份Fr.G1-4，其中Fr.G1經高效液相色譜純化分離，採用甲醇-水洗脫，收集21.7分鐘的洗脫液結晶即得。所述加熱回流提取中金佛山雪膽根莖與乙醇的質量體積比為1:8-1:12。所述氯仿-甲醇洗脫液中氯仿與甲醇的體積比為45:55-60:40。所述甲醇-水洗脫液中甲醇與水的體積比為58:42。2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃為無色粉末，易溶於氯仿，甲醇，將2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃進行體外抗腫瘤藥效學實驗，體外抗腫瘤藥效學實驗利用MTT比色法。以2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃為實驗組，以Doxorubicin（多柔比星，抗腫瘤藥物）為對照組，同時設立空白組，實驗組、對照組和空白組選取HeLa（人宮頸癌）細胞和KB（人口腔表皮樣癌）為實驗對象，培養基稀釋後，以6×104/ml的密度接種於96孔板，每孔100μl，培養箱中正常培養24小時後，各組加入相對應的藥物，使各組藥物的最終濃度分別為2.5μg/ml(1組)，5μg/ml(2組)，10μg/ml(3組)，20μg/ml(四組)，40μg/ml(5組)，共設5個濃度，每個濃度3個復孔；培養48小時後，於每孔加MTT10μl染色；繼續培養四小時後，吸棄原培養液，每孔加入DMSO100μl，置搖床上低速振蕩10min，使結晶物充分溶解，並於酶聯免疫檢測儀570nm波長處檢測光密度值，根據光密度值計算50%抑制濃度（IC50，μg/mL)，光密度值計算IC50的計算方法為現有公知技術。實驗組、對照組對HeLa細胞和KB細胞的IC50如表1所示。表1組別HeLa細胞KB細胞實驗組3.4±1.514.8±0.79對照組1.3±0.110.89±0.03通過上表的數據可以看出，本發明所述的2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃對HeLa細胞和KB細胞均具有一定的抑制作用，能夠作為製備防治腫瘤藥物的原料，具備較強的產業化應用價值。與現有技術相比，本發明的有益效果在於：首次從金佛山雪膽根莖中分離得到了具有重要抗腫瘤活性的2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃，並利用現代分析手段確定了其化學結構和理化性質。經功能性試驗證明：2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃對腫瘤細胞具有較強的抑制作用，能夠作為製備防治腫瘤藥物的原料，具有較強的應用價值和市場前景。附圖說明圖1是2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃的分子結構示意圖。圖2是2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃的核磁共振氫譜（1H-NMR）。圖3是2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃的核磁共振碳譜（13C-APT）。具體實施方式下面將結合具體實施例對本發明作進一步的說明第一步：金佛山雪膽根莖(5.0kg)乾燥後粉碎過80目篩。第二步：藥材粉末加10倍量乙醇加熱回流提取3次，每次2小時，合併提取液，減壓回收溶劑，濃縮後得總浸膏1033g。第三步：金佛山雪膽根莖總浸膏加適量水進行分散處理後，分別用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取，萃取至無色，將萃取液減壓濃縮至幹，稱量得石油醚部位總浸膏56g、氯仿部位總浸膏302g、乙酸乙酯部位總浸膏151g、正丁醇部位總浸膏409g。第四步：取乙酸乙酯層浸膏151g經矽膠柱色譜(100～200目)分離，氯仿-甲醇(1:0-0:1)梯度洗脫，得到12個餾分FrA-L。第五步：Fr.G部分經凝膠色譜洗脫，氯仿-甲醇（45:55）作為洗脫液洗脫除去色素，然後樣品經反相中壓色譜柱經MeOH-H2O(60:40;70:30;80:20;90:10)梯度洗脫，得到四個部份Fr.G1-4.第六步：其中Fr.G1經高效液相色譜純化分離，採用甲醇-水(58:42)洗脫，收集21.7分鐘的洗脫液結晶即得到無色粉末，易溶於氯仿、甲醇。上述無色粉末的結構表徵和確認如下：將上述所得無色粉末進行核磁共振氫譜（1H-NMR）和核磁共振碳譜（13C-APT）分析，1H-NMR譜圖如圖2所示，13C-APT譜圖如圖3所示。對圖2和圖3進行圖譜解析，將圖2和圖3各峰進行歸屬，圖2和圖3的峰歸屬如表2所示，通過圖2、圖3以及表1的數據可知，無色粉末的化學結構式如圖1所示，根據有關化合物的命名規則命名為2β,3α,7β,20β,27-五羥基葫蘆烷萜-5,24(E)-雙烯-11-酮-16,23-吡喃。英文名為2β,3α,7β,20β,27--pentahydroxycucurbita-5,24(E)-diene-11-one-16,23-pyran。表2化合物1的1H-NMR和13C-NMR(150MHz,C5D5N)譜數據上述只是本發明的較佳實施例，並非對本發明作任何形式上的限制。任何熟悉本領域的技術人員，在不脫離本發明技術方案範圍的情況下，都可利用上述揭示的技術內容對本發明技術方案做出許多可能的變動和修飾，或修改為等同變化的等效實施例。因此，凡是未脫離本發明技術方案的內容，依據本發明技術實質對以上實施例所做的任何簡單修改、等同變化及修飾，均應落在本發明技術方案保護的範圍內。當前第1頁1&nbsp2&nbsp3&nbsp