丹參總酚酸、三七總皂苷,及其配伍對微循環障礙引發的疾病的預防和治療的製作方法

2023-05-05 03:16:36

專利名稱：丹參總酚酸、三七總皂苷,及其配伍對微循環障礙引發的疾病的預防和治療的製作方法
技術領域：
本發明涉及中藥產品丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍的新用途，特別涉及丹參 總酚酸、三七總皂苷，及其配伍對微循環障礙引發的疾病的預防和治療作用。
背景技術：
缺血再灌注損傷是介入療法、外科手術、溶栓後出現損傷的主要病理基礎。缺血再 灌注後白細胞與血管內皮細胞黏附、肥大細胞脫顆粒是血管損傷的主要病理環節。微循環是包括細動脈、毛細血管、細靜脈在內的血管床，佔體內血管的90%，是維 持新陳代謝的重要部分。高脂血症、高血壓、感染、精神刺激、跌打損傷、手術、介入治療等 都可以引起微循環障礙。微循環障礙包括血管徑變化、過氧化物產生、血管內皮粘附因子 ICAM-1、白細胞粘附因子⑶lib/⑶18表達、白細胞與血管內皮細胞粘附、血漿白蛋白外漏、 血管外肥大細胞脫顆粒釋放TNF- α、組織胺、5羥色胺、炎性因子等血管活性物質、以及形 成血拴、出血等多環節變化的複雜過程。肥大細胞脫顆粒是一型變態反應的主要病理環節，是花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉 的主要病理基礎。丹參總酚酸、三七總皂苷是CP中丹參和三七的主要組分。我們以往的研究已經證 明過複方丹參滴丸(Cardiotonic Pills*，CP)對缺血再灌注(ischemia and reperfusion, I/R)引起大鼠心臟、肝臟、腸繫膜微循環障礙有改善作用。但是，尚不清楚作為複方丹參 滴丸中丹參和三七的主要組分丹參總酚酸(TSA)、三七總皂苷(PNS)改善了微循環障礙的 哪些環節，兩者的不同比例配伍是否有協同作用等。為此，本研究用動態、可視化方法解析 TSA、PNS，及其配伍對I/R引起的大鼠微循環腸繫膜微循環障礙的改善作用環節。本發明經過實驗發現丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍可以改善缺血再灌注引 起的腸繫膜微循環障礙，從而達到治療和/或預防微循環障礙引發的疾病的作用，並提供 一種中藥藥物製劑。

發明內容
本發明發現中藥產品丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍的新用途，特別涉及丹參 總酚酸、三七總皂苷，及其配伍對缺血再灌注引起的腸繫膜微循環障礙的預防和治療改善 作用。從而將其應用於治療和/或預防微循環障礙引發的疾病，如、高脂血症、高血壓、 感染、精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術或介入治療等引發的微循環障 礙。本發明發現，丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍預給藥和後給藥可以抑制再灌注 後腸繫膜細靜脈內白細胞的滾動和粘附，抑制肥大細胞脫顆粒。本發明所述丹參總酚酸是中藥丹參中的一種成分，可以從市場上買到，也可以根 據現有技術製備，三七總皂苷是中藥三七中的一種成分，可以從市場上買到，也可以根據現有技術製備，均屬於現有技術。本發明使用的丹參總酚酸、三七總皂苷是符合藥用標準的產 品，優選純度> 50 %，更優選純度> 90 %，最優選純度> 98 %。本發明所述的藥物，是用上述丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍作為藥物活性成 分製備成的藥物組合物。本發明的藥物組合物，根據需要可以含有藥物可接受的載體，其中丹參總酚酸、 三七總皂苷，及其配伍作為藥物活性成分，其在製劑中所佔重量百分比可以是0. 1-99.9%, 其餘為藥物可接受的載體。本發明的藥物組合物，以單位劑量形式存在，所述單位劑量形式 是指製劑的單位，如片劑的每片，膠囊的每粒膠囊，口服液的每瓶，顆粒劑每袋，注射劑的每 支等。以上所述配伍是丹參總酚酸和三七總皂苷兩者的組合，其重量比例為1-4 4-1， 優選1-2 2-1，最優選1 1。本發明的藥物組合物可以是任何可藥用的劑型，這些劑型包括片劑、糖衣片劑、 薄膜衣片劑、腸溶衣片劑、膠囊劑、硬膠囊劑、軟膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、衝劑、丸 劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、軟膏劑、硬膏劑、霜劑、噴霧劑、滴 劑、貼劑。本發明的藥物組合物，其口服給藥的製劑可含有常用的賦形劑，諸如粘合劑、填充 劑、稀釋劑、壓片劑、潤滑劑、崩解劑、著色劑、調味劑和溼潤劑，必要時可對片劑進行包衣。適用的填充劑包括纖維素、甘露糖醇、乳糖和其它類似的填充劑。適宜的崩解劑包 括澱粉、聚乙烯吡咯烷酮和澱粉衍生物，例如羥基乙酸澱粉鈉。適宜的潤滑劑包括，例如硬 脂酸鎂。適宜的藥物可接受的溼潤劑包括十二烷基硫酸鈉。可通過混合，填充，壓片等常用 的方法製備固體口服組合物。進行反覆混合可使活性物質分布在整個使用大量填充劑的那 些組合物中。口服液體製劑的形式例如可以是水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑， 或者可以是一種在使用前可用水或其它適宜的載體復配的乾燥產品。這種液體製劑可含 有常規的添加劑，諸如懸浮劑，例如山梨醇、糖漿、甲基纖維素、明膠、羥乙基纖維素、羧甲基 纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪，乳化劑，例如卵磷脂、脫水山梨醇-油酸酯或阿拉 伯膠；非水性載體(它們可以包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油、諸如甘油的酯的油性 酯、丙二醇或乙醇；防腐劑，例如對羥基苯甲酯或對羥基苯甲酸丙酯或山梨酸，並且如果需 要，可含有常規的香味劑或著色劑。對於注射劑，製備的液體單位劑型含有本發明的活性物質和無菌載體。根據載體 和濃度，可以將此化合物懸浮或者溶解。溶液的製備通常是通過將活性物質溶解在一種載 體中，在將其裝入一種適宜的小瓶或安瓿前過濾消毒，然後密封。輔料例如一種局部麻醉 齊U、防腐劑和緩衝劑也可以溶解在這種載體中。為了提高其穩定性，可在裝入小瓶以後將這 種組合物冰凍，並在真空下將水除去。本發明的藥物組合物，在製備成藥劑時可選擇性的加入適合的藥物可接受的載 體，所述藥物可接受的載體選自甘露醇、山梨醇、焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、硫代硫酸鈉、鹽 酸半胱氨酸、巰基乙酸、蛋氨酸、維生素C、EDTA 二鈉、EDTA鈣鈉，一價鹼金屬的碳酸鹽、醋 酸鹽、磷酸鹽或其水溶液、鹽酸、醋酸、硫酸、磷酸、胺基酸、氯化鈉、氯化鉀、乳酸鈉、木糖醇、 麥芽糖、葡萄糖、果糖、右旋糖苷、甘氨酸、澱粉、蔗糖、乳糖、甘露糖醇、矽衍生物、纖維素及其衍生物、藻酸鹽、明膠、聚乙烯吡咯烷酮、甘油、土溫80、瓊脂、碳酸鈣、碳酸氫鈣、表面活性 劑、聚乙二醇、環糊精、β -環糊精、磷脂類材料、高嶺土、滑石粉、硬脂酸鈣、硬脂酸鎂等。本發明的藥物製劑組合物在使用時根據病人的情況確定用法用量。本發明所述的治療用途是通過以下實驗證明的材料和方法1 試藥TSA(丹參總酚酸)、PNS(三七總皂苷)由昆明風山漸醫藥研究有限公司提供。甲 苯胺藍、二氫羅達明以及FITC標記的白蛋白均購於Sigma公司。2實驗動物200 250g的雄性wistar大鼠由日本琦玉實驗動物中心提供。動物被置於常規 飼養環境(溫度M±l°c，溼度50士5%，交替照明12小時)。動物的處理按照慶應義塾大 學醫學部規定的動物處理和倫理方針進行。實驗前禁食給水12小時。3. I/R模型的建立及給藥I/R組按30mg/kg體重的用量，用sodium pentobarbital施腹腔注射進行麻醉。 在大鼠的右側頸靜脈插入3號聚乙烯靜脈注射管，並留置。沿腹正中線切開20-30mm，輕柔 地將近回盲部的迴腸取出腹外，展開至有載玻片的觀察臺上。用37 °C的Krebs-Ringer緩 衝液連續地在展開的腸繫膜上滴加。腸繫膜微循環動態用置於37°C恆溫箱的倒立生物顯 微鏡(Diaphot TMD-2S，Nikon,東京)，在12V，IOOff的白光條件下觀察。在20倍物鏡頭下 選擇觀察部位，用有時間顯示的錄像系統，將觀察內容用S-VHS錄像帶紀錄保存。選擇的觀 察部位為直徑在25-35um之間的細靜脈非分枝部(長度在200μπι以上)的微循環血管床。 在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續靜滴入生理鹽水至觀察結束。用聚乙 烯管結紮觀察部環流的前腸繫膜動靜脈10分鐘，再解除結紮，將時間調至0處，連續觀察同 一視野的微循環動態60分鐘。假手術(Sham)組同I/R組大鼠麻醉開腹，取腸繫膜觀察，不作I/R處理，經頸靜 脈按5mg/kg/h的給藥量連續靜滴入生理鹽水至觀察結束。TSA預給藥(TSA+I/R)組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續 靜滴入TSA至觀察結束。PNS預給藥(PNS+I/R)組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續 靜滴入PNS至觀察結束。TP (4 1)預給藥(TP (4 1)+I/R)組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按4 1的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。TP (1 1)預給藥(TP (1 1) +I/R)組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按1 1的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。TP (1 4)預給藥(TP (1 4)+I/R)組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按1 4的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。TSA後給藥(I/R+TSA)組在I/R10分鐘後經頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續靜 滴入TSA至觀察結束。PNS後給藥(I/R+PNQ組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的給藥量連續 靜滴入PNS至觀察結束。
TP (4 1)後給藥(I/R+TP (4 1))組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按4 1的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。TP (1 1)後給藥(I/R+TP (1:1))組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按1 1的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。TP (1 4)後給藥(I/R+TP (1:4))組在缺血20分鐘前經頸靜脈按5mg/kg/h的 給藥量，將TSA和PNS按1 4的比例配伍，連續靜滴入至觀察結束。其中，每組取6隻大鼠，用於觀察細靜脈血管徑、白細胞滾動、黏附、遊出、細靜脈 血管壁DHR螢光強度。另取6隻大鼠觀察血漿白蛋白漏出和肥大細胞脫顆粒。3.微循環動態的觀察微循環動態用連接於倒立生物顯微鏡的CXD攝像系統(CC-090，Flovel，東京)和 SIT螢光攝影機(C-M00-08、濱松7才卜二夕7、濱松)連續紀錄。血管經的測定在回放的⑶錄像上，用Image-Pro Plus 5. 0軟體在缺血前，再灌 注開始時ι分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時，取大鼠腸繫膜細靜脈 血管徑3個部位測定，取其平均值。沿細靜脈滾動白細胞的計數在回放的圖像上，在缺血前，再灌注開始時1分、10 分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時，計數10秒種內，在200微米細靜脈內滾 動的白細胞個數。粘附於細靜脈管壁的白細胞數計數在回放的圖像上，在缺血前，再灌注開始時1 分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時，計數在細靜脈管壁的同一部位停 留30秒以上的白細胞(粘附白細胞)，計算100 μ m長細靜脈上粘附的白細胞數。細靜脈管壁DHR螢光強度測定在所觀察的大鼠腸繫膜表面連續滴加感受過氧化 氫的螢光探針DHR(IOuM)。用倒置螢光顯微鏡觀察(DM-IRB，Leica, Germany)，455nm激發 光，汞燈作為發射光源(100W)。用⑶錄像機記錄各組缺血前，再灌注開始時1分、10分鐘、 20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時的圖像，用Image-Pro Plus 5.0軟體測定細靜 脈管壁及血管外間質的螢光強度。用缺血前細靜脈管壁與血管外間質的差為基礎值，計算 各時間點數值與基礎值的比值，用以表示大鼠腸繫膜細靜脈管壁DHR螢光強度的變化率。細靜脈白蛋白滲出的測定每組另取6隻大鼠，沿頸靜脈緩慢推注FITC-標記的 牛血清白蛋白(50mg/kg)，基礎觀察10分鐘後，用倒置螢光顯微鏡觀察(DM-IRB，Leica, Germany)，455nm激發光，汞燈作為發射光源(100W)。用⑶錄像機連續記錄各組在缺血前， 再灌注開始時1分、10分鐘、20分鐘、30分鐘、40分鐘、50分鐘、60分鐘時細靜脈血管內和 相鄰的血管外間質的FITC螢光圖像。用Image-Pro Plus 5. 0軟體測定細靜脈血管內和相 鄰的血管外間質的FITC螢光強度，用缺血前的細靜脈管壁與血管外間質的FITC螢光的比 為基礎值。計算各時間點數值與基礎值的比值，用以表示大鼠腸繫膜細靜脈白蛋白滲出的 變化率。可以用公式表示Rt = Pt/Po其中，Rt表示在某時間點的FITC螢光強度比值；Pt 表示在該時間點血管壁與血管外螢光強度比值；Po表示0分鐘時血管壁與血管外螢光強度 比值。肥大細胞脫顆粒率在再灌注60分後，將0. l%toluidine blue滴加在觀察部位， 用CCD攝像機紀錄。用20倍的對物鏡計數5個視野的脫顆粒和未脫顆粒的肥大細胞數，計 算脫顆粒的肥大細胞佔計數的整個肥大細胞數的百分比，為肥大細胞脫顆粒率。
4.統計處理各測定值用one-way analysis of variance (ANOVA)處理，各組經時變化用T檢 驗，各組間比較用F檢驗。各測定值用均值士標準誤表示，P < 0. 05為有顯著意義。


圖1表示在本觀察時間內，I/R組大鼠細靜脈血管徑沒有發生顯著的變化。圖IA表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R大鼠腸繫膜細靜脈管徑的影 響。Sham 假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/R PNS前給藥組; TP(4 1)+I/R TSA 與 PNS4 1 配伍前給藥組；TP(1 1)+I/R TSA 與 PNSl 1 配 伍前給藥組；ΤΡ(1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。結果以平均值士標準 誤表示。圖IB表示TSA、PNS以及二者配伍後投入對I/R大鼠腸繫膜細靜脈管徑的影響。 Sham:假手術組；I/R I/R 組；I/R+TSA TSA 後給藥組；I/R+PNS PNS 後給藥組；I/ R+TP (4 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP (1 1) TSA 與 PNSl 1 配伍後 給藥組；I/R+TP(1 4) TSA與PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。圖2表示TSA、PNS以及二者配伍對I/R引起的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞滾動的影 響。I/R後大鼠腸繫膜細靜脈滾動的白細胞顯著增加，TSA、PNS以及二者配伍的預投入(圖 2A)和後投入(圖2B)對I/R後大鼠腸繫膜細靜脈滾動白細胞的增加都沒有顯著的抑制作 用。圖2A表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞 滾動的影響。Sham 假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/R PNS前給 藥組；TP (4 1)+I/R TSA 與 PNS4 1 配伍前給藥組；TP (1 1)+I/R TSA 與 PNSl 1 配 伍前給藥組；TP(1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖2B表示TSA、PNS以及二者 配伍後投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞滾動的影響。Siam 假手術組；I/R I/ R 組；I/R+TSA TSA後給藥組；I/R+PNS PNS 後給藥組；I/R+TP0 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP(1 1) TSA與PNSl 1配伍後給藥組；I/R+TP (1 4) TSA與 PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。*表示與假手術組相比ρ <0.05。圖3表示TSA、PNS以及二者配伍對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈內粘附白細胞的 影響，Siam組在本觀察結束時僅有少量的白細胞粘附於細靜脈。I/R組大鼠在再灌注早期 就有白細胞粘附於細靜脈管壁，隨著再灌注的進行，黏附白細胞逐漸增多。預投予TSA、PNS 以及三種比例的配伍在再灌注40分以後，都顯著地抑制了白細胞的粘附。在再灌注10分， 已經有白細胞黏附於細靜脈壁時，後投TSA、PNS、TP(4 1)、TP(1 1)、ΤΡ(1 4)都可以 在投入20分以後顯著地抑制細靜脈內粘附白細胞，其中，ΤΡ(4 1)的抑制作用最強。圖3Α表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞 粘附的影響。Sham 假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/R PNS前給 藥組；TP(4 1)+I/R TSA與PNS4 1 配伍前給藥組；ΤΡ(1 1)+I/R TSA與PNSl 1 配 伍前給藥組；ΤΡ(1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖表示TSA、PNS以及二者 配伍後投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞粘附的影響。Siam 假手術組；I/R I/ R組；I/R+TSA TSA 後給藥組；I/R+PNS PNS 後給藥組；I/R+TP0 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP(1 1) TSA與PNSl 1配伍後給藥組；I/R+TP (1 4) TSA與7PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。*表示與假手術組相比P <0.05; #表示與I/R組相比ρ < 0. 05。圖4表示TSA、PNS以及二者配伍對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞遊出的影 響。Siam組在本觀察結束時沒有觀察到經由細靜脈的白細胞遊出。在再灌注30時經由細 靜脈遊出的白細胞顯著增加，並持續增加到本觀察結束時候。TSA、PNS及其三種配伍的前 給藥和後給藥都顯著地抑制了 I/R後經由腸繫膜細靜脈的白細胞遊出。圖4A表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞 遊出的影響。Sham 假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/R PNS前給 藥組；TP(4 1)+I/R TSA與PNS4 1 配伍前給藥組；ΤΡ(1 1)+I/R TSA與PNSl 1 配 伍前給藥組；ΤΡ(1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖4B表示TSA、PNS以及二者 配伍後投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈白細胞遊出的影響。Siam 假手術組；I/R I/ R組；I/R+TSA TSA 後給藥組；I/R+PNS PNS 後給藥組；I/R+TP0 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP(1 1) TSA與PNSl 1配伍後給藥組；I/R+TP (1 4) TSA與 PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。*表示與假手術組相比ρ <0.05; #表示與I/R組相比ρ < 0. 05。圖5A表示TSA、PNS及其配伍預投入對I/R後大鼠腸繫膜細靜脈管壁過氧化物產 生動態的影響。Siam組在本觀察期間內，細靜脈管壁DHR的螢光強度沒有顯著的變化。I/ R組在再灌注開始後細靜脈管壁DHR螢光強度開始增加，並持續增加。TSA、TSA與PNS的各 配伍組的預投入顯著地抑制了 I/R後大鼠腸繫膜細靜脈管壁過氧化物的產生，而PNS的預 投入沒有表現出顯著的抑制作用。圖5B表示TSA、PNS及其配伍後投入對I/R後大鼠腸繫膜細靜脈管壁過氧化物產 生動態的影響。TSA和TPG 1)分別在投入40和50分後顯著地抑制了 I/R後大鼠腸系 膜細靜脈管壁過氧化物的產生，而PNS、TSA與PNS的其他比例的配伍後投入沒有表現出顯 著的抑制作用。圖5A表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管 壁過氧化物的影響。Siam:假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/ R PNS 前給藥組；TP (4 1)+I/R TSA 與 PNS4 1 配伍前給藥組；TP (1 1)+I/R TSA 與PNSl 1配伍前給藥組；TP(1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖5B表 示TSA、PNS以及二者配伍後投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管壁過氧化物的影響。 Sham:假手術組；I/R I/R 組；I/R+TSA TSA 後給藥組；I/R+PNS PNS 後給藥組；I/ R+TP (4 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP (1 1) TSA 與 PNSl 1 配伍後 給藥組；I/R+TP(1 4) TSA與PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。 *表示與假手術組相比ρ < 0. 05 ；#表示與I/R組相比ρ < 0. 05。圖6表示TSA、PNS及其配伍對I/R後大鼠腸繫膜靜脈內血漿白蛋白外漏的影響。 Siam組在60分鐘觀察過程結束時，僅有少量的血漿白蛋白經由大鼠腸繫膜細靜脈漏出，而 I/R組大鼠在再灌注開始後，經由大鼠腸繫膜細靜脈漏出的血漿白蛋白就顯著地增加，並隨 著再灌注的持續進一步增強。TSA、TP(4 1)、TP(1 1)配伍的與投入都可顯著地抑制I/ R引起的大鼠腸繫膜細靜脈血漿白蛋白的漏出。在再灌注後給藥時，TSA、TP(1 1)配伍對 I/R引起的大鼠腸繫膜細靜脈血漿白蛋白的漏出仍有顯著的抑制作用，但是，PNS和其他比例的配伍不能抑制血漿白蛋白的漏出。圖6A表示預投入TSA、PNS以及二者配伍對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管內 白蛋白滲出變化的影響。假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組；PNS+I/R PNS 前給藥組；TP(4 1)+I/R TSA 與 PNS 4 1 配伍前給藥組；ΤΡ(1 1)+I/R TSA 與 PNSl 1配伍前給藥組；TP (1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖6B表示後 投入TSA、PNS以及二者配伍對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管內白蛋白滲出變化的影 響。Sham:假手術組；I/R I/R組；I/R+TSA TSA後給藥組；I/R+PNS PNS後給藥組；I/ R+TP (4 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP (1 1) TSA 與 PNSl 1 配伍後 給藥組；I/R+TP(1 4) TSA與PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準誤表示。 *表示與假手術組相比ρ < 0. 05 ；#表示與I/R組相比ρ < 0. 05。圖7表示TSA、PNS及其配伍對對I/R後大鼠腸繫膜大鼠腸繫膜間質肥大細胞脫 顆粒的影響。再灌注60分鐘時，與Siam組相比，I/R組肥大細胞脫顆粒率顯著增加，TSA、 PNS及其配伍的與投入都可顯著地抑制I/R引起的大鼠腸繫膜間質內肥大細胞脫顆粒率的 增加。在再灌注發生後投予TSA則不能抑制肥大細胞脫顆粒，PNS的後投入可以部分抑制 肥大細胞脫顆粒，而TSA與PNS的各配伍的後投入都可顯著地抑制I/R引起的大鼠腸繫膜 間質內肥大細胞脫顆粒率。圖7A表示TSA、PNS以及二者配伍預投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管 周圍肥大細胞脫顆粒的影響。Siam:假手術組；I/R I/R組；TSA+I/R TSA前給藥組； PNS+I/R PNS 前給藥組；TP(4 1)+I/R TSA 與 PNS4 1 配伍前給藥組；TP(1 1)+1/ R TSA與PNSl 1配伍前給藥組；TP (1 4)+I/R TSA與PNSl 4配伍前給藥組。圖 7B表示TSA、PNS以及二者配伍後投入對I/R引發的大鼠腸繫膜細靜脈血管周圍肥大細胞脫 顆粒的影響。Sham:假手術組；I/R I/R組；I/R+TSA TSA後給藥組；I/R+PNS PNS後給 藥組；I/R+TP0 1) TSA 與 PNS4 1 配伍後給藥組；I/R+TP (1 1) TSA 與 PNSl 1 配伍後給藥組；I/R+TP(1 4) TSA與PNSl 4配伍後給藥組。結果以平均值士標準 誤表示。*表示與假手術組相比ρ < 0. 05 ；#表示與I/R組相比ρ < 0. 05。結論1.I/R後大鼠腸繫膜血管徑沒有顯著變化，而滾動、粘附和遊出的白細胞數、細靜 脈血管壁DHR螢光強度、FITC標記的血漿白蛋白漏出率、血管外間質組織中的肥大細胞脫 顆粒率顯著增加。2. TSA的前給藥對I/R後大鼠腸繫膜血管徑沒有顯著影響，對沿細靜脈滾動的白 細胞沒有顯著的抑制作用，但是，可以顯著地抑制粘附和遊出白細胞數的增加，抑制細靜脈 管壁DHR螢光強度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出，抑制肥大細胞脫顆粒。而TSA後 給藥，除不能顯著地抑制肥大細胞脫顆粒之外，其他作用與前給藥相同。3. PNS前給藥和後給藥對I/R後大鼠腸繫膜血管徑沒有顯著影響，對沿細靜脈滾 動的白細胞沒有顯著的抑制作用，但是，可以顯著地抑制粘附和遊出白細胞數的增加，抑制 肥大細胞脫顆粒。PNS無論前給藥和後給藥都沒有抑制I/R引起的大鼠腸繫膜細靜脈管壁 DHR螢光強度的增加。4. TP(4 1)、TP(1 1)、ΤΡ(1 4))前給藥對I/R後大鼠腸繫膜微循環障礙的改 善作用與TSA、PNS的作用相同，但是，ΤΡ(4 1)、ΤΡ(1 1)、ΤΡ(1 4)後給藥時，其抑制肥大細胞脫顆粒作用顯著增強，TPG 1)後給藥時，其抑制白細胞粘附的作用顯著增強， 而TP(1 4)後給藥時，其抑制白細胞粘附的作用較弱。結論TSA、PNS，及其配伍均可以缺 血再灌注引起的大鼠微循環腸繫膜微循環障礙的改善作用。其中，TSA改善微循環障礙的 作用與其抑制白細胞的粘附和遊出，抑制細靜脈管壁過氧化物的產生相關；其中，PNS改善 微循環障礙的作用與其抑制白細胞的粘附和遊出，抑制肥大細胞脫顆粒作相關。TSA與PNS 的配伍增加了其肥大細胞脫顆粒的作用，TPG 1)的配伍還增加了其抑制白細胞粘附的 作用。總之，本發明證明，丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍可以預防和治療缺血再灌 注引起的微循環障礙。從而將其應用於治療和/或預防微循環障礙引發的疾病，如過敏性 疾病、高脂血症、高血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手 術或介入治療等引發的微循環障礙。
具體實施例方式以下通過實施例進一步說明本發明，但不作為對本發明的限制。實施例1片劑處方丹參總酚酸、三七總皂苷1 l，105g 微晶纖維素55g 微粉矽膠3g 硬脂酸鎂1. 5g製法取原、輔料分別過100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷1 1、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C乾燥，取出，過30目篩整 粒，加入微粉矽膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，製成1000片，即得。實施例處方丹參總酚酸、三七總皂苷1 485g 硫酸鈣118g 微晶纖維素37g微 粉矽膠2. 4g 硬脂酸鎂1. 2g製法取原、輔料分別過100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷1 4、微晶纖維素， 混勻，用60%乙醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C乾燥，取出，過30目篩整 粒，加入適量微粉矽膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，製成1000片，即得。實施例處方丹參總酚酸、三七總皂苷4 1133g 硫酸鈣208g 微晶纖維素68g 微粉矽膠5g 硬脂酸鎂2. 5g製法諏原、輔料分別過100目篩；取丹參總酚酸、三七總皂苷4 1、微晶纖維素， 混勻，用60%醇適量作為粘合劑制軟材，過20目篩制顆粒，60°C乾燥，取出，過30目篩整粒， 加入適量微粉矽膠及硬脂酸鎂，混勻，壓片，製成1000片，即得。實施例4膠囊取丹參總酚酸60g，加入適量澱粉，硬脂酸鎂等輔料，制粒，整粒，裝入1號膠囊，即得。實施例5口服液
取丹參總酚酸8g，加入適量蔗糖，防腐劑，加水到1000ml，分裝成IOml —支，即得口服液。實施例6顆粒劑取三七總皂苷80g，加入適量糊精、甜菊素，乾式制粒，整粒，分裝，即得。實施例7注射劑三七總皂苷7g加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水溶解，混勻，調pH 值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。實施例8注射劑丹參總酚酸、三七總皂苷4 12g加水溶解，另氯化鈉、對羥基苯甲酸乙酯加熱水 溶解，混勻，調PH值。注射用水稀釋至1000ml，用中空纖維膜濾過，灌裝，滅菌，即得。
權利要求
1.丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍在製備預防和治療微循環障礙引發的疾病的藥 物中的應用。
2.權利要求1的應用，其特徵在於，其中丹參總酚酸的應用表現在前給藥可以顯著地 抑制粘附和遊出白細胞數的增加，抑制細靜脈管壁DHR螢光強度的增加，抑制血漿白蛋白 的血管外漏出，抑制肥大細胞脫顆粒。
3.權利要求1的應用，其特徵在於，其中丹參總酚酸的應用表現在後給藥，可以顯著地 抑制粘附和遊出白細胞數的增加，抑制細靜脈管壁DHR螢光強度的增加，抑制血漿白蛋白 的血管外漏出。
4.權利要求1的應用，其特徵在於，其中三七總皂苷的應用表現在前給藥和後給藥可 以顯著地抑制粘附和遊出白細胞數的增加，抑制肥大細胞脫顆粒。
5.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述配伍是丹參總酚酸和三七總皂苷兩者的 組合，其重量比例為1-4 4-1，優選1-2 2-1，最優選1 1。
6.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述丹參總酚酸和三七總皂苷配伍的應用表 現在TPG 1)、TP(1 1)、ΤΡ(1 4))前給藥可以顯著地抑制粘附和遊出白細胞數的增 加，抑制細靜脈管壁DHR螢光強度的增加，抑制血漿白蛋白的血管外漏出，抑制肥大細胞脫 顆粒。
7.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述丹參總酚酸和三七總皂苷配伍的應用表 現在TPG 1)、ΤΡ(1 1)、ΤΡ(1 4)後給藥時，其抑制肥大細胞脫顆粒作用顯著增強， TP(4 1)後給藥時，其抑制白細胞粘附的作用顯著增強。
8.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述應用包括以下疾病，如過敏性疾病、高脂 血症、高血壓、感染等以及因精神刺激、跌打損傷、花粉病，皮膚病，哮喘，腹瀉、手術或介入 治療等引發的微循環障礙。
9.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述的藥物，是用上述丹參總酚酸、三七總皂 苷，及其配伍作為藥物活性成分製備成的藥物組合物。
10.權利要求1的應用，其特徵在於，其中所述丹參總酚酸是中藥丹參中的一種成分， 可以從市場上買到，也可以根據現有技術製備，三七總皂苷是中藥三七中的一種成分，可 以從市場上買到，也可以根據現有技術製備，均屬於現有技術，本發明使用的丹參總酚酸、 三七總皂苷是符合藥用標準的產品，優選純度> 50%，更優選純度> 90%，最優選純度> 98%。
全文摘要
本發明涉及中藥產品丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍的新用途，特別涉及丹參總酚酸、三七總皂苷，及其配伍對微循環障礙引發的疾病的預防和治療作用。
文檔編號A61P31/00GK102048818SQ20091007116
公開日2011年5月11日 申請日期2009年11月5日 優先權日2009年11月5日
發明者劉育英, 孫凱, 張玉, 楊繼英, 王明霞, 郭俊, 韓晶巖 申請人:天津天士力製藥股份有限公司