取代的苯並咪唑和它們誘導細胞凋亡的用途的製作方法

2023-05-05 03:15:51 2

專利名稱：取代的苯並咪唑和它們誘導細胞凋亡的用途的製作方法
技術領域：
本發明涉及新的取代的苯並咪唑、其製備過程、含有它們的藥物組合物、它們任選與一種或多種其它藥物活性化合物組合在治療瘤形成疾病和自身免疫疾病中的用途和治療所述疾病的方法。
背景技術：
癌症是人類死亡的主導原因之一。儘管已經開發了多種對抗瘤形成疾病的藥物，並且有手術和放射療法等技術可用，不過仍然需要治療瘤形成疾病的替代改進方法。
自身免疫疾病與異常淋巴增殖有關，是淋巴細胞活化和生長終止缺陷的結果。這類疾病經常伴有炎症，象類風溼性關節炎、胰島素依賴型糖尿病、多發性硬化、系統性紅斑狼瘡等。這類疾病的治療集中在抗炎和免疫抑制藥，它們在大量病例中顯示出嚴重的副作用。因此，需要具有新的顯示出較少副作用的作用模式的替代藥物。
細胞凋亡是用於描述一系列其發生引起編程性細胞死亡的細胞事件的術語。細胞凋亡途徑有很多，有些已經被鑑別，而有些仍然有待闡明。如果細胞分裂與細胞凋亡之間的平衡被破壞，可能發生威脅生命的疾病，包括癌症、自身免疫紊亂、神經變性和心血管疾病。
近年來，日益明顯的是編程性細胞死亡(細胞凋亡)象細胞分裂一樣對多細胞生物的健康有重要意義。通過遍及發育或組織修復的反覆細胞分裂和分化，產生過剩的或者甚至有害的細胞。為了維持組織內環境穩定，這些細胞不得不被除去或殺死。生物細胞生長與細胞凋亡之間的微妙關係反映在複雜的分子平衡中，它決定了個別細胞是否經歷分裂、阻止在細胞周期中或者引起編程性細胞死亡。
細胞增殖的失調或者適當細胞死亡的缺乏具有廣泛的臨床意義。大量與這類失調有關的疾病牽涉過度增殖、炎症、組織重塑和修復。在這種類別中熟悉的適應症包括癌症、再狹窄、新內膜增生(neointimal hyperplasia)、血管生成、子宮內膜異位、淋巴增殖紊亂、移植相關性病變(移植物排斥)、息肉病、組織重塑中的神經功能喪失等。這類細胞可能喪失對細胞分裂的正常調節性控制，還可能不能經歷適當的細胞死亡。
由於細胞凋亡在大多數增殖性瘤形成疾病類型中被抑制或延遲，細胞凋亡的誘導是癌症治療的一個選擇，尤其是在顯示出對經典化療、放射和免疫療法有抗性的癌症類型中(Apoptosis and Cancer Chemotherapy，Hickman和Dive編輯，Blackwell出版社，1999)。而且在自身免疫和移植相關性疾病和病變中，誘導細胞凋亡的化合物可以用於恢復正常的細胞死亡過程，因此能夠根除症狀，有可能治癒疾病。誘導細胞凋亡的化合物的進一步應用可以是在再狹窄(即血管平滑肌細胞在動脈壁中的蓄積)中和在由根除被細菌和病毒感染的細胞失敗所導致的持續感染中。此外，在上皮細胞、內皮細胞、肌肉細胞和已經喪失與細胞外基質接觸的其它細胞中能夠誘導或重新建立細胞凋亡。這些細胞潛在地能夠佔據其它器官，因此可以發展為病變，象瘤形成、子宮內膜異位等。
發明概述式(I)的三唑並-與吡唑並-苯並咪唑選擇性地誘導癌細胞中的細胞凋亡，可以用於治療瘤形成和自身免疫疾病。本發明涉及式(I)化合物、這類化合物的合成方法、含有式(I)化合物的藥物組合物、式(I)化合物作為藥物的用途和在製備治療瘤形成和自身免疫疾病的藥物組合物中的用途，以及使用這類式(I)化合物或含有它們的藥物組合物治療瘤形成和自身免疫疾病的方法。
發明詳述本發明涉及式(I)化合物及其互變異構體和鹽，
其中R代表芳基或雜芳基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基；低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素和硝基；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表鍵；氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；或者基團CR7R8；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素或硝基，或者R3和R4、R4和R5或R5和R6與苯基環的原子一起形成5或6元碳環或雜環；R7代表氫、低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、任選被取代的苯基、低級烷氧基、低級鏈烯氧基、低級炔氧基；R8代表氫、低級烷基、羥基、低級烷氧基或低級鏈烯氧基，或者R7和R8與它們所鍵合的碳一起形成5或6元碳環或雜環；R9代表氫、低級烷基或氨基；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基-烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基，或者
R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫、低級烷基、醯基或氨基羰基，其中氨基是未取代的或者被低級烷基取代。
上下文所用的通用術語在本文公開的上下文中優選具有下列含義，另有指示除外。
前綴「低級」表示具有至多且包括最多7個、尤其至多且包括最多4個碳原子的基團，有關基團是直鏈或具有單一或多個分支的支鏈。
若複數形式用於化合物、鹽等，這被視為還表示單一的化合物、鹽等。
雙鍵在原則上可以具有E-或Z-構型。本發明化合物因此可以以異構體混合物或單一的異構體存在。如果沒有指定，兩種異構形式都包括。
任何不對稱的碳原子可以以(R)-、(S)-或(R，S)-構型存在，優選以(R)-或(S)-構型存在。因而化合物可以以異構體混合物或純的異構體存在，優選以對映異構純的非對映異構體存在。
本發明還涉及式(I)化合物的可能的互變異構體。
烷基具有1至12個、優選1至7個碳原子，並且是直鏈或支鏈的。烷基優選是低級烷基。
低級烷基具有1至4個碳原子，有丁基，例如正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基，丙基，例如正丙基或異丙基，乙基或甲基。優選低級烷基是甲基或乙基。
環烷基優選具有3至7個環碳原子，並且可以是未取代或取代的，例如被低級烷基或低級烷氧基取代。環烷基例如是環己基、環戊基或甲基環戊基。
芳基代表具有5至10個碳原子的單環或二環稠環芳族基團，例如苯基、1-萘基或2-萘基，或者包含苯基的部分飽和二環稠環，例如二氫茚基、二氫或四氫萘基。
在任選被取代的苯基中，取代基優選是低級烷基、低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、亞甲二氧基、滷代-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、滷代或硝基。
雜芳基代表含有至少一個選自氮、氧和硫的雜原子的芳族基團，並且是單環或二環的。單環雜芳基包括5或6元雜芳基，含有1、2、3或4個選自氮、硫和氧的雜原子。二環雜芳基包括9或10元稠環雜芳基。雜芳基的實例包括吡咯基、噻吩基、呋喃基、吡唑基、咪唑基、三唑基、唑基、異唑基、二唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、吡啶基、噠嗪基、嘧啶基、吡嗪基和這類單環雜芳基的苯並稠合衍生物，例如吲哚基、苯並咪唑基、苯並呋喃基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基或嘌呤基。
在任選被取代的雜芳基中，取代基優選是低級烷基，低級烷氧基，低級烷氧基-低級烷氧基，氨基，任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、低級鏈烯基和烷基羰基，滷代-低級烷基，低級烷氧基-低級烷基，滷代或硝基。
鏈烯基含有一條或多條如兩條或三條雙鍵，優選是低級鏈烯基，例如1-或2-丁烯基、1-丙烯基、烯丙基或乙烯基。
炔基優選是低級炔基，例如炔丙基或乙炔基。
乙二烯基表示如式(I)所定義的與R和亞甲基鍵合的乙烯基。與R和亞甲基連接的鍵可以位於乙烯基的孿位或連位。
在任選被取代的鏈烯基或炔基中，取代基優選是低級烷基、低級烷氧基、滷代或二(低級烷基)氨基，並且與鏈烯基或炔基的飽和碳原子或者與鏈烯基的不飽和碳原子連接。
雜環基優選表示飽和、部分飽和或不飽和的單環或二環，含有4-10個原子，包含一個、兩個或三個選自氮、氧和硫的雜原子，除非另有指定，它可以是經由碳或氮連接的，其中環氮原子可以任選被選自低級烷基、氨基-低級烷基、芳基、芳基-低級烷基和醯基的基團取代，環碳原子可以被低級烷基、氨基-低級烷基、芳基、芳基-低級烷基、雜芳基、低級烷氧基、羥基或氧代基取代。雜環基的實例有吡咯烷基、唑烷基、噻唑烷基、哌啶基、嗎啉基、哌嗪基、二氧雜環戊烷基和四氫吡喃基。
醯基例如表示烷基羰基、環己基羰基、芳基羰基、芳基-低級烷基羰基或雜芳基羰基。低級醯基優選是低級烷基羰基，特別是丙醯基或乙醯基。
羥基烷基尤其是羥基-低級烷基，優選羥甲基、2-羥基乙基或2-羥基-2-丙基。
氰基烷基優選表示氰甲基和氰乙基。
滷代烷基優選是氟代烷基，尤其是三氟甲基、3，3，3-三氟乙基或五氟乙基。
滷素是氟、氯、溴或碘。
低級烷氧基尤其是甲氧基、乙氧基、異丙氧基或叔丁氧基。
芳基烷基包括如上所定義的芳基和烷基，例如是苄基、1-苯乙基或2-苯乙基。
雜芳基烷基包括如上所定義的雜芳基和烷基，例如是2-或3-或4-吡啶基甲基、1-或2-吡咯基甲基、1-吡唑基甲基、1-咪唑基甲基、2-(1-咪唑基)乙基或3-(1-咪唑基)丙基。
與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環的兩個相鄰取代基例如是1，2-亞丙基(propylene)、1-或2-氧代-1，2-亞丙基、1-或2-氧雜-1，2-亞丙基、1-氧雜亞丙基(propylidene)、亞甲二氧基、二氟-亞甲二氧基、1-或2-氮雜-1，2-亞丙基、1-或2-氮雜亞丙基、1，2-或1，3-二氮雜-亞丙基、1，3-二氮雜-2-氧代-1，2-亞丙基、1，2，3-三氮雜-1，2-亞丙基、亞丁基、1-或2-氧雜亞丁基、亞乙二氧基、1-或2-氮雜亞丁基或者1-或2-氮雜亞丁二烯基，或者攜帶如上所定義的其它取代基的這類基團。
由取代基R7和R8與它們所鍵合的碳原子一起所形成的5或6元碳環或雜環例如有環戊烷、環己烷、其中一個或優選兩個碳原子被氧代替的這類環或者其中一個碳原子被氧代替且另一個被氮代替的這類環，並且任選進一步被低級烷基、低級烷氧基或低級烷氧基-低級烷基取代。優選的實例有從羰基和乙二醇或單烷基化甘油生成的環狀縮醛，即其中取代基R7和R8一起代表1，2-亞乙二氧基或3-烷氧基亞丙-1，2-二氧基的環。
在取代的氨基中，取代基優選是上文作為取代基R5和R6提到的那些。確切而言，取代的氨基是烷基氨基、二烷基氨基、任選被取代的芳基氨基、任選被取代的芳基烷基氨基、低級烷基羰基氨基、低級烷氧羰基氨基或任選被取代的氨基羰基氨基。
當X代表基團C＝Y時，其中Y代表被羥基取代的氮，這相當於肟官能團。肟和相應的肟烷基醚(被烷氧基取代的氮)可以以E或Z形式或者異構體混合物存在。在其中Y代表被任選被取代的氨基取代的氮的基團中，該基團相當於任選被取代的腙官能團。取代基是上述取代的氨基所考慮的那些，特別是烷基氨基、二烷基氨基、任選被取代的芳基氨基或任選被取代的芳烷基氨基。
當R1代表OR12且R12是氫時，式(I)化合物主要或者僅僅以互變異構體的形式存在，特別是這樣的互變異構體其中連接五元環和含義為OH的R1的單鍵是與氧鍵合的雙鍵，五元環中Q與R1連接位置之間的雙鍵是單鍵，並且Q(含義為N或CR9)攜帶另外的氫原子。當R1代表NR10R11且R10和R11之一或者R10和R11兩者是氫時，式(I)化合物在一定程度上以互變異構體的形式存在，特別是這樣的互變異構體其中連接五元環和含義為NR10R11的R1的單鍵是與氮鍵合的雙鍵，五元環中Q與R1連接位置之間的雙鍵是單鍵，並且Q(含義為N或CR9)攜帶另外的氫原子。
鹽尤其是式(I)化合物的可藥用鹽。
這類鹽例如是從具有鹼性氮原子的式(I)化合物生成的、優選與有機或無機酸的酸加成鹽，尤其是可藥用鹽。適宜的無機酸例如是氫滷酸，例如鹽酸，硫酸或磷酸。適宜的有機酸例如是羧酸、膦酸、磺酸或氨基磺酸，例如乙酸、丙酸、辛酸、癸酸、十二烷酸、乙醇酸、乳酸、富馬酸、琥珀酸、己二酸、庚二酸、辛二酸、壬二酸、蘋果酸、酒石酸、檸檬酸、胺基酸(例如穀氨酸或天冬氨酸)、馬來酸、羥基馬來酸、甲基馬來酸、環己烷甲酸、金剛烷甲酸、苯甲酸、水楊酸、4-氨基水楊酸、鄰苯二甲酸、苯基乙酸、扁桃酸、肉桂酸、甲磺酸或乙磺酸、2-羥基乙磺酸、乙烷-1，2-二磺酸、苯磺酸、2-萘磺酸、1，5-萘-二磺酸、2-或3-或4-甲基-苯磺酸、甲基硫酸、乙基硫酸、十二烷基硫酸、N-環己基氨基磺酸、N-甲基-或N-乙基-或N-丙基-氨基磺酸或者其它有機質子酸，例如抗壞血酸。
出於分離或純化的目的，還有可能使用不可藥用的鹽，例如苦味酸鹽或高氯酸鹽。就治療用途而言，僅採用可藥用鹽或游離化合物(可以以藥物製劑的形式應用)，因此它們是優選的。
鑑於新化合物的游離形式與它們鹽形式(包括能夠用作中間體的那些鹽)之間的密切關係，例如在新化合物的純化或鑑別中，上下文任何對游離化合物的稱謂被理解為還表示相應的鹽，只要適當和方便的話。
式(I)化合物可以以前藥的形式給藥，前藥在人或動物體內分解得到式(I)化合物。前藥的實例包括式(I)化合物的體內可水解的酯。
式(I)化合物具有寶貴的藥理性質。本發明還涉及用作藥物的如上所定義的式(I)化合物。
本發明化合物誘導腫瘤細胞中細胞凋亡的功效可以證明如下。
利用WO 99/35493所述方法，在本發明化合物和標準腫瘤藥物的存在下測量被綠色螢光蛋白(GFP)轉染的適宜的腫瘤細胞系的相對螢光活性。適宜的腫瘤細胞系是A20.2J(BALB/c B細胞淋巴瘤)；PB-3c(從DBA/2小鼠骨髓分離的IL-3依賴性非致瘤性肥大細胞系)；Jurkat(人急性T-細胞白血病細胞系)；K562(人慢性髓細胞性白血病細胞系)；HL60(人急性前髓細胞性白血病細胞系)；Ramos和Raji(人B-細胞淋巴瘤細胞系)；H9和Hut78(人T-細胞淋巴瘤細胞系)；HeLa和KB(人鱗狀細胞癌細胞系)；MCF7、SK-BR-3、PC3、HBL-100、SW480、H460和H1792(人腺癌細胞系)；和HT-1080(人纖維肉瘤細胞系)。
優選作為對比化合物的標準藥物是a)抗代謝劑，例如5-氟尿嘧啶(ICN)、鹽酸吉西他濱(GemzarTM，Eli Lilly)；b)烷化劑，例如奧沙利鉑(EloxantinTM，Sanofi-Synthélabo)、達卡巴嗪(DetimedacTM，Medac)、環磷醯胺(EndoxanTM，Asta)和卡鉑(ParaplatinTM，Bristol-Meyers Squibb)；c)細胞周期抑制劑，例如長春瑞濱(NavelbineTM，Robapharm)、長春花鹼(VelbeTM，Eli Lilly)、多西他賽(TaxotereTM，Aventis)；d)DNA斷裂劑(拓撲異構酶抑制劑、插入劑、鏈斷裂劑)，例如鹽酸阿黴素(AdriblastinTM，Pharmacia-Upjohn)、博來黴素(Asta-Medica)、伊立替康(CamptoTM，Aventis)、磷酸依託泊苷(EtopophosTM，Bristol-Meyers Squibb)、鹽酸託泊替康(HycamtinTM，GlaxoSmithKline)；e)其混合物；f)幹擾信號轉導途徑的化合物，例如胱天蛋白酶(caspase)活性修飾劑，細胞死亡受體激動劑與拮抗劑，核酸酶、磷酸酶與激酶修飾劑，例如甲磺酸依馬替尼(GleevecTM，Novartis)、地塞米松、乙酸肉豆蔻佛波醇、環孢菌素A、槲皮素、他莫昔芬(Alexis Corporataion，瑞士)。
利用螢光平板讀數器進行初級篩選，然後利用FACS(螢光活化細胞掃描)進行二級篩選，測定細胞凋亡。選擇導致細胞凋亡而無嚴重的細胞毒性副作用的化合物，利用下列已經建立的測定法的組合進一步測試和鑑別A)Hoechst 33342染劑的核染色，提供關於核形態學和DNA片段化的信息，它們是細胞凋亡的標誌。B)MTS增殖測定法，測量細胞的代謝活性。在這種試驗中，活細胞是有代謝活性的，而呼吸鏈受損的細胞顯示活性減少。C)膜聯蛋白V結合測定法，它反映質膜外部脂質雙層的磷脂醯絲氨酸含量。這種事件被認為是細胞凋亡的早期標誌。D)細胞周期分布的PI染色，它顯示在不同細胞周期階段內分布的任何改變。可以測定細胞周期的停止點。E)增殖測定法，通過摻入溴脫氧尿苷(BrdU)監測DNA合成。可以直接測定對生長/增殖的抑制效應。F)利用特異性抑制劑分別測定半胱氨酸蛋白酶依賴性和胱天蛋白酶依賴性。這提供關於特定蛋白酶在機理中的可能牽連的信息。G)線粒體膜電位，通過螢光陽離子染劑檢測。在細胞凋亡的細胞中，線粒體膜電位消散，隨後引起染劑螢光活性的變化。
在這些研究的基礎上，本發明的式(I)化合物顯示出治療功效，尤其是對抗瘤形成疾病和自身免疫疾病的功效。確切而言，本發明化合物有對抗惡性腫瘤的活性，例如上皮瘤、鱗狀細胞瘤、基底細胞瘤、過渡型細胞乳頭瘤和癌、腺瘤與腺癌、附件與皮膚附件瘤、粘液上皮瘤、囊性瘤、粘蛋白與漿液瘤、導管-，小葉-與髓質-瘤、腺泡細胞瘤、複合型上皮瘤、特化(specialized)生殖腺瘤、副神經節瘤與血管球腫瘤、痣與黑素瘤、軟組織腫瘤與肉瘤、纖維瘤性瘤、粘液瘤性瘤、脂肪瘤性瘤、肌瘤性瘤、複合型混合型與基質性瘤、纖維上皮瘤、滑液樣瘤、間皮瘤、胚細胞瘤、滋養層瘤、中腎瘤、血管腫瘤、淋巴管腫瘤、骨性與軟骨瘤性瘤、巨細胞腫瘤、混雜的骨腫瘤、牙原性腫瘤、神經膠質瘤、神經上皮瘤性瘤、腦膜瘤、神經鞘腫瘤、顆粒細胞腫瘤與小泡柔軟部分肉瘤、何杰金氏與非何杰金氏淋巴瘤、其它淋巴網狀內皮細胞瘤、漿細胞腫瘤、肥大細胞腫瘤、免疫增殖疾病、白血病、混雜的脊髓增殖性紊亂、淋巴增殖性紊亂和脊髓發育不良症候群。
本發明化合物同樣有對抗自身免疫疾病的活性，例如系統性、盤狀或亞急性皮膚紅斑狼瘡、類風溼性關節炎、抗磷脂症候群、CREST、進行性全身性硬化症、混合型結締組織疾病(Sharp症候群)、Reiter氏症候群、幼年關節炎、冷凝集素疾病、特發性混合性冷球蛋白血症、風溼熱、強直性脊柱炎、慢性多關節炎、重症肌無力、多發性硬化症、慢性炎性脫髓鞘性多神經病、Guillan-Barré症候群、皮肌炎/多肌炎、自身免疫性溶血性貧血、血小板減少性紫癜、嗜中性白細胞減少症、I型糖尿病、甲狀腺炎(包括橋本病和格雷夫斯病)、Addison’s病、多腺體症候群、天皰瘡(尋常性、落葉性、皮脂性和增殖性)、大皰性與瘢痕性類天皰瘡、妊娠期類天皰瘡、後天性大皰性表皮鬆解、線性IgA疾病、硬化萎縮苔癬、Duhring病、尋常牛皮癬、滴狀泛化膿皰性與局限性膿皰性牛皮癬、白癜風、局限性脫髮、原發性膽汁性肝硬變、自身免疫性肝炎、所有形式的腎小球性腎炎、肺出血(古德帕斯丘症候群)、IgA腎病、惡性貧血與自身免疫性胃炎、炎性腸病(包括潰瘍性結腸炎和節段性迴腸炎)、貝赫切特病、Celic-Sprue疾病、自身免疫性眼色素層炎、自身免疫性心肌炎、肉芽腫性睪丸炎、無睪丸炎的精子生成缺乏、自發性與繼發性肺纖維變性、伴有自身免疫發病可能性的炎性疾病，例如壞疽性膿皮病、紅苔癬、結節病(包括Lfgren和皮膚/皮下型)、環形肉芽腫(granuloma anulare)、變應性I型與IV型免疫反應、支氣管哮喘、花粉症、特應性、接觸性與空氣傳播性皮炎、大血管脈管炎(巨細胞性和Takayasu氏動脈炎)、中等血管脈管炎(結節性多動脈炎、川崎病)、小血管脈管炎(韋格納氏肉芽腫病、Churg Strauss症候群、微觀polangiitis、Henoch-Schoenlein紫癜、特發性冷球蛋白血症脈管炎、皮膚成白細胞性脈管炎)、過敏症候群、中毒性表皮壞死松解(Stevens-Johnson症候群、多形性紅斑)、由藥物副作用引起的疾病、由I-VI型(Coombs分類)免疫反應形式引起的所有形式的皮膚、器官-特異性與全身性效應、移植相關性病變，例如急性與慢性移植物抗宿主和宿主抗移植物疾病，牽涉所有器官(皮膚、心臟、腎臟、骨髓、眼、肝、脾、肺、肌肉、中樞與外周神經系統、結締組織、骨、血管與淋巴管、泌尿生殖系統、耳、軟骨、主要與次要淋巴系統，包括骨髓、淋巴結、胸腺，胃腸道，包括口咽、食道、胃、小腸、結腸和直腸，包括上述器官下至單細胞水平和亞結構的部分，例如幹細胞)。
式(I)化合物可以單獨或者與一種或多種其它治療劑組合給藥，可能的聯合療法採取固定組合的方式，或者本發明化合物和一種或多種其它治療劑的給藥是交錯的或者彼此獨立地給予，或者是固定組合和一種或多種其它治療劑的組合給藥。此外或另外，式(I)化合物可以與化療、放射療法、免疫療法、手術幹預或它們的聯合組合給藥，尤其用於腫瘤療法。當在上述其它治療策略的上下文中作為輔助療法時，長期療法同樣是可能的。其它可能的治療是維持患者腫瘤消退後的狀態的療法，或者甚至是化學預防性療法，例如在處危患者中。特別優選的是式(I)化合物與放射療法組合使用。
用於可能的組合的治療劑尤其是一種或多種細胞抑制性或細胞毒性化合物，例如一種或若干種化學治療劑，選自indarubicin、阿糖胞苷、幹擾素、羥基脲、白消安，或者多胺生物合成抑制劑、蛋白激酶抑制劑，尤其是絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶如蛋白激酶C抑制劑，或者酪氨酸蛋白激酶抑制劑，例如表皮生長因子受體酪氨酸激酶抑制劑，細胞因子、負性生長調節劑，例如TGF-β或IFN-β，芳香酶抑制劑、經典細胞生長抑制劑、SH2結構域與磷酸化蛋白相互作用的抑制劑、Bcl-2抑制劑和Bcl-2家族成員調節劑，例如Bax、Bid、Bad、Bim、Nip3和BH3-only蛋白。
本發明的化合物不僅用於人類的(預防性和優選治療性)控制，而且用於其它溫血動物的處置，例如商業上有用的動物，例如齧齒動物，例如小鼠、兔或大鼠，或者豚鼠。這樣一種化合物還可以用作上述試驗系統中的參照標準，以便與其它化合物對比。
關於下文提到的優選的式(I)化合物，可以合理地使用來自上文提到的一般定義的取代基定義，例如用更具體的定義或尤其是用被確定為優選的定義代替更一般的定義。
確切而言，本發明涉及如下所述的式(I)化合物及其互變異構體和鹽，其中R代表芳基或雜芳基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基；低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素和硝基；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表鍵；氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；或者基團CR7R8；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，
羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素或硝基，或者R3和R4、R4和R5或R5和R6與苯基環的原子一起形成5或6元碳環或雜環；R7代表氫、低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、任選被取代的苯基、低級烷氧基、低級鏈烯氧基、低級炔氧基；R8代表氫、低級烷基、羥基、低級烷氧基或低級鏈烯氧基，或者R7和R8與它們所鍵合的碳一起形成5或6元碳環或雜環；R9代表氫、低級烷基或氨基；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基-烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基，或者R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫或低級烷基。
更具體而言，本發明涉及如下定義的式(I)化合物及其互變異構體和可藥用鹽，其中R代表苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、吲哚基、苯並異唑基，各自任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基、低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、滷素和硝基；
並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；或者基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、滷素或硝基；或者R3和R4、R4和R5或R5和R6一起代表亞甲二氧基；R9代表氫；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基；或者R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫。
優選本發明涉及如下定義的式(I)化合物及其互變異構體和可藥用鹽，其中R代表苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、吲哚基、苯並異唑基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、滷代-低級烷基、苯基、任選被取代的雜芳基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、低級烷氧基-低級烷氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基、低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被烷氧基或任選被取代的氨基取代；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被烷氧基或任選被取代的氨基取代；低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基和滷素；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧或基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表N或CR9；
R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、羥基、低級烷氧基、羧基、低級烷氧羰基、氰基或滷素；R9代表氫；R10和R11彼此獨立地代表氫、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基或低級烷基羰基；R12是氫。
更優選本發明涉及如下定義的式(I)化合物及其互變異構體和可藥用鹽，其中R代表苯基、吡啶基或嘧啶基，各自任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、任選被取代的雜芳基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、低級烷氧基-低級烷氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基和滷素；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧或基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11；R2代表氫；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、羥基、低級烷氧基、羧基、低級烷氧羰基、氰基或滷素；R9代表氫；
R10代表氫、羥基-低級烷基、氰基-低級烷基或低級烷基羰基；R11代表氫。
最優選本發明涉及用作藥物的實施例化合物及其可藥用鹽，尤其實施例1、2、3、4、5、6、11、12、14、15、16、17和18的化合物及其可藥用鹽。
本發明尤其涉及式(I)化合物、這類化合物的前藥或可藥用鹽在製備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用於治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病。
此外，本發明提供了治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病的方法，該方法包含對需要這類治療的溫血動物給予有效對抗所述疾病量的式(I)化合物、其前藥或可藥用鹽，其中各基團和符號具有如上所定義的含義。
製備方法本發明化合物可以通過本身已知的方法製備，儘管這些方法迄今沒有應用於本發明的新化合物，確切而言，通過如下的方法製備將(II)化合物或其官能團為被保護形式的衍生物和/或鹽 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如式(I)中定義，用式(III)滷化物烷基化，R-X-CH2-Z(III)其中R如式(I)中定義，Z是親核離去基團；除去式(I)化合物的被保護衍生物中的任何保護基團；並且，如果需要的話，將可得到的式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物，將游離的式(I)化合物轉化為鹽，將可得到的式(I)化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式(I)的異構化合物的混合物分離為單一異構體。
式(III)烷基化劑中適宜的親核離去基團Z例如有滷素，例如氯、溴或碘，或者磺酸酯，例如芳族磺酸酯如苯磺酸酯、對甲苯磺酸酯或對硝基苯磺酸酯，或者還有甲磺酸酯或三氟甲磺酸酯。其它慣用離去基團也是可以考慮的，例如銨鹽、疊氮化物、重氮鹽、二(對甲苯磺醯基)胺、硝酸鹽、氧鹽、鋶鹽或鹽。
式(II)化合物與式(III)烷基化劑的烷基化作用按照本身已知的方式進行，通常在適宜的極性或兩極性質子惰性溶劑的存在下，冷卻或加熱，例如溫度從約-30℃至約+150℃，尤其約0℃左右至室溫。任選加入適宜的鹼，特別是叔胺鹼(例如三乙胺或二異丙基乙胺)或者無機鹼性鹽(例如碳酸鉀或碳酸鈉)。
如果式(II)或(III)化合物中一種或多種其它官能團(例如羧基、羥基或氨基)有待或需要被保護(因為它們不應參與反應)，則使用常用於合成醯胺、特別是肽化合物、頭孢菌素、青黴素、核酸衍生物和糖的保護基團。
保護基團可以已經存在於前體中，應當保護有關官能團不發生所不希望的二級反應，例如烷基化、醯化、醚化、酯化、氧化、溶劑分解和類似反應。保護基團的一個特徵是它們容易除去，即無需不期望的二級反應，通常通過溶劑分解、還原、光解或者例如在類似於生理條件的條件下通過酶活性除去，並且它們不存在於終產物中。專業人員知曉或者能夠容易確定哪些保護基團適於上下文提到的反應。
官能團被保護基團保護、保護基團本身和它們的除去反應例如參見關於肽合成的標準參考書和關於保護基團的專業書籍，例如J.F.W.McOmie的「Protective Groups in Organic Chemistry」(有機化學中的保護基團，Plenum出版，倫敦和紐約，1973)；「Methoden der organischen Chemie」(有機化學方法，Houben-Weyl，第4版，第15/l卷，Georg Thieme Verlag，斯圖加特，1974)和T.W.Greene的「Protective Groups in Organic Synthesis」(有機合成中的保護基團，Wiley，紐約)。
其中X是鍵且R是雜芳基的式(I)化合物的製備可以考慮其它過程。例如，其中X是鍵且R是-C(＝O)NHNH2、即醯肼的式(I)化合物可以這樣轉化與原酸酯和脒或醯化劑反應，繼之以脫水，得到相應的化合物，其中R是5-取代的1，3，4-二唑-2-基。當R是-C(NH2)＝N-OH、即異羥肟酸醯胺時，相應的反應得到的R是5-取代的1，2，4-二唑-3-基官能團。當R是-C(NH2)＝NH、即脒時，與1，3-二酮反應得到4，6-二取代的嘧啶-2-基官能團。在類似的反應中可以生成其它雜環。
在根據需要進行的附加方法步驟中，起始化合物中不應參與反應的官能團可以以未保護形式存在，或者可以例如被一種或多種上文在「保護基團」中提到的保護基團所保護。然後按照其中所述方法之一完全或部分除去保護基團。
在可得到的式(I)化合物向另一種式(I)化合物的轉化中，含義為C＝Y且其中Y是氧的X可以例如被還原為含義為CR7R8的X，其中R7是氫或羥基，R8是氫。適宜的還原劑是本領域已知的，例如金屬氫化物，如LiAlH4、LiAl(OCH3)3H或其它烷氧基-取代的鋰氫化物，NaBH4或BH3、任選在路易斯鹼如AlCl3或BF3的存在下，或者還可以用氫和適宜的貴金屬催化劑進行催化氫化。通過選擇催化劑和反應條件，可以影響反應是否終止於醇階段(R7羥基)或完全飽和的亞甲基階段(R7氫)。
其中X是C＝Y且Y是氧的式(I)化合物可以與任選O-取代的羥胺反應，得到相應的式(I)的肟或肟醚，其中X是C＝Y且Y是被羥基或烷氧基取代的氮。通過與任選被取代的肼的反應，生成相應的式(I)的腙，其中X是C＝Y且Y是被任選被取代的氨基取代的氮。
其中X是C＝Y且Y是氧的式(I)化合物可以與適當取代的醇反應，生成相應的縮醛，即其中X是CR7R8且R7和R8代表烷氧基的化合物，反應條件是在酸催化劑和任選的水結合劑和/或脫水器的存在下。類似地通過其中X是C＝Y且Y是氧的式(I)化合物與多元醇(例如乙二醇、丙烷-1，3-二醇、甘油等)的反應，可以得到其中R7和R8是1，3-二氧雜環戊烷或1，3-二烷的一部分的式(I)化合物。
可得到的式(I)化合物，其中R1是氨基NR10R11且R10和/或R11是氫，可以分別用式R10-Z或R11-Z化合物烷基化或醯化，其中Z是如上所述的親核離去基團，得到其中R10和/或R11不同於氫的式(I)化合物。優選的醯化條件包括在升高溫度、通常約+30℃至約+150℃的溫度下使用酸酐和醯氯。如果需要的話可以採用酸性或鹼性催化劑。其中R10和/或R11是烷基的式(I)化合物可以通過母體式(I)化合物的烷基化作用而得到。允許這種轉化的典型反應條件包括強鹼(如金屬氫化物或金屬醇化物)與式R10-Z或R11-Z化合物的組合。
可得到的式(I)化合物，其中R1是羥基OR12且R12是氫，可以用式R12-Z化合物烷基化，其中Z是如上所述的親核離去基團，得到其中R12不同於氫的式(I)化合物。允許這種轉化的典型反應條件包括強鹼(例如金屬氫化物或金屬醇化物)與式R12-Z化合物的組合。
存在於芳基或雜芳基R中或者取代基R3、R4、R5或R6之一中的其它氨基可以在本領域已知的條件下轉化為其它含氮取代基。例如，可以在還原條件下用醛進行氮的烷基化。就醯化而言，相應的醯氯(Z＝Cl)是優選的。作為替代選擇，可以使用酸酐，或者可以在用於肽化學中本身已知的醯胺生成的條件下用游離酸(Z＝OH)完成醯化，例如用羧基活化劑如1-羥基苯並三唑，任選在適宜的催化劑或共反應劑的存在下。
其中X＝NOH的式(I)化合物可以被烷基化，以便獲得相應的肟醚。引起這種轉化的反應條件包括弱鹼與烷基化劑的組合。典型的鹼包括金屬碳酸鹽或碳酸氫鹽。
使硝基-取代的芳基或雜芳基R中或者取代基R3、R4、R5或R6之一中硝基被還原得到相應的氨基，例如用含鐵粉的醇或者用其它還原劑進行。
羧基-取代的芳基或雜芳基R中或者取代基R3、R4、R5或R6之一中的羧基可以在用於肽化學中本身已知的醯胺生成的條件下被醯胺化，例如用相應的胺和羧基活化劑如1-羥基苯並三唑，任選在適宜的催化劑或共反應劑的存在下。
通過與適宜的苯基硼酸的Suzuki反應，芳基或雜芳基R中或者取代基R3、R4、R5或R6之一中的溴代或碘代取代基可以被苯基或苯基衍生物替換，反應條件優選是在兩極性質子惰性溶劑如二甲基甲醯胺中，或者在極性醚如四氫呋喃或二甲氧基乙烷中，在可溶性鈀(0)或相關金屬催化劑如四(三苯膦)鈀的存在下。
具有成鹽基團的式(I)化合物可以按照本身已知的方式製備。因而用酸或適宜的陰離子交換試劑處理，可以得到式(I)化合物的酸加成鹽。
鹽通常可轉化為游離化合物，例如用適宜的鹼性試劑處理，例如鹼金屬碳酸鹽、鹼金屬碳酸氫鹽或鹼金屬氫氧化物，通常為碳酸鉀或氫氧化鈉。
應當強調，類似於本章所述轉化的反應還可以在適當中間體的水平上發生。
本文所述所有方法步驟都可以在已知反應條件下進行，優選具體提到的那些條件，在沒有或者通常在溶劑或稀釋劑的存在下，優選對所用試劑惰性並且能夠溶解它們的溶劑或稀釋劑；在沒有或有催化劑、縮合劑或中和劑的存在下，例如離子交換劑，通常為陽離子交換劑，例如H+型，這依賴於反應和/或反應劑的類型；在降低溫度、常溫或升高溫度下，例如-100℃至約190℃的範圍，優選約-80℃至約150℃，例如-80至+60℃、-20至+40℃、室溫或所用溶劑的沸點；在大氣壓下或者在密封容器中，酌情在壓力下；和/或在惰性氣氛中，例如在氬或氮下。
鹽可以存在於所有起始化合物和過渡產物中，如果它們含有成鹽基團的話。鹽還可以存在於這類化合物的反應期間，只要反應不因此被破壞。
在所有反應階段，可以將所出現的異構體混合物分離為它們的單一異構體，例如非對映異構體或對映異構體，或者分離為異構體的任何混合物，例如外消旋物或非對映異構體混合物。
本發明還涉及這樣的方法形式，其中該方法開始於可在任意階段作為過渡產物得到的化合物並進行缺少的步驟，或者在任意階段中斷該方法，或者在反應條件下生成原料，或者使用所述原料的反應活性衍生物或鹽形式，或者生成可通過本發明的方法得到的化合物，以及進一步原位加工所述化合物。在優選的實施方案中，該方法開始於生成上文描述為優選、特別是描述為尤其優選、主要優選和/或首先優選的化合物的那些原料。
在優選的實施方案中，按照或者類似於實施例所定義的方法和方法步驟製備式(I)化合物。
式(I)化合物、包括它們的鹽還可以以水合物的形式得到，或者它們的晶體可以例如包括用於結晶的溶劑，即作為溶劑化物存在。
新的原料和/或中間體以及它們的製備方法同樣是本發明的主題。確切而言，本發明涉及式(II)的原料其互變異構體和鹽，其中Q代表CR9；R1代表基團NR10R11；R2、R3、R4、R5和R6代表氫；R9、R10和R11代表氫。在優選的實施方案中，使用原料並選擇反應條件以能夠得到優選的化合物。
式(II)和(III)原料是已知的、商業上可獲得的或者可以類似於或按照本領域已知的方法合成。確切而言，其中Q是N的式(II)原料通過如下方法獲得其中，將式(IV)肼基苯並咪唑或其官能團為被保護形式的衍生物和/或其鹽 其中R3、R4、R5和R6如式(I)中定義，用式(V)化合物處理，R′OCH＝N-CN (V)其中R′是低級烷基，優選乙基。
其中Q是CR9的式(II)原料通過如下方法獲得其中，將式(IV)肼基苯並咪唑或其官能團為被保護形式的衍生物和/或其鹽，其中R3、R4、R5和R6如式(I)中定義，用式(VI)化合物處理，HOCH＝CR9-CN (VI)其中R9如式(I)中定義。
式(IV)原料由相應的式(VII)巰基苯並三唑通過氧化和用肼處理得到，
藥物製劑、方法和用途本發明還涉及藥物組合物，其包含式(I)化合物作為活性成分，尤其可以用於治療開篇提到的疾病。對溫血動物、尤其人類經腸內給藥(例如經鼻、口腔、直腸或尤其口服給藥)以及胃腸道外給藥(例如靜脈內、肌內或皮下給藥)的組合物尤其是優選的。組合物包含單獨的活性成分，或者優選還包含可藥用載體。活性成分的劑量依賴於所要治療的疾病和物種、其年齡、體重與個體條件、個體藥動學數據和給藥模式。
本發明尤其涉及藥物組合物，其包含式(I)化合物、其互變異構體、前藥或可藥用鹽或者水合物或溶劑化物，以及至少一種可藥用載體。
本發明還涉及用於人或動物體的預防性或尤其是治療性管理方法中的藥物組合物，特別是用於治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病的方法、尤其上文提到的那些的藥物組合物。
本發明還涉及式(I)化合物在製備藥物製劑中的方法和用途，所述藥物製劑包含式(I)化合物作為活性組分(活性成分)。
用於預防性或尤其是治療性管理需要這類治療的溫血動物、尤其人類或商業上有用的哺乳動物的瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病的藥物組合物同樣是優選的，該組合物包含新的式(I)化合物作為活性成分，其含量對所述疾病有預防或尤其是治療活性。
藥物組合物包含約1％至約95％活性成分，單一劑量給藥劑型在優選的實施方案中包含約20％至約90％活性成分，不是單一劑量類型的劑型在優選的實施方案中包含約5％至約20％活性成分。單元劑型例如是包衣與未包衣的片劑、安瓿劑、小瓶劑、栓劑或膠囊劑。其它劑型例如是軟膏劑、霜劑、糊劑、泡沫劑、酊劑、唇膏、滴劑、噴霧劑、分散劑等。實例有膠囊劑，含有約0.05g至約1.0g活性成分。
本發明的藥物組合物按照本身已知的方式製備，例如通過常規的混合、造粒、包衣、溶解或凍幹方法。
優選使用活性成分的溶液以及混懸液或分散液，尤其是等張的水溶液、分散液或混懸液，例如當為凍幹組合物(其中包含單獨的活性成分或者還包含載體如甘露糖醇)時可以臨用前製備。藥物組合物可以被滅菌和/或可以包含賦形劑，例如防腐劑、穩定劑、潤溼劑和/或乳化劑、增溶劑、調節滲透壓的鹽和/或緩衝劑，按照本身已知的方式製備，例如通過常規的溶解和凍幹方法。所述溶液或混懸液可以包含增粘劑，通常為羧甲基纖維素鈉、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮或明膠，或者增溶劑，例如吐溫80(聚氧乙烯(20)脫水山梨醇單油酸酯)。
油混懸液包含慣用於注射目的的植物、合成或半合成油作為油組分。關於這一點，可以具體提到液體脂肪酸酯，其含有具有8至22個、尤其是12至22個碳原子的長鏈脂肪酸作為酸組分。這些脂肪酸酯的醇組分具有最多6個碳原子，並且是一價或多價的、例如一價、二價或三價的醇，尤其乙二醇和甘油。關於脂肪酸酯的混合物，植物油尤其是有用的，例如棉籽油、杏仁油、橄欖油、蓖麻油、芝麻油、大豆油和花生油。
可注射製劑的製造通常在無菌條件下進行，例如填充在安瓿或小瓶中，並密封容器。
適宜的載體尤其是填充劑，例如糖類，如乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇，纖維素製備物，和/或鈣的磷酸鹽，例如磷酸三鈣或磷酸氫鈣；以及粘合劑，例如澱粉，如玉米澱粉、小麥澱粉、米澱粉或馬鈴薯澱粉，甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮；和/或如果需要的話，崩解劑，例如上述澱粉，以及羧甲基澱粉、交聯聚乙烯吡咯烷酮、海藻酸或其鹽，例如海藻酸鈉。額外的賦形劑尤其是流動調節劑和潤滑劑，例如矽酸、滑石粉、硬脂酸或其鹽(例如硬脂酸鎂或鈣)和/或聚乙二醇或其衍生物。
片芯可以帶有適宜的、任選腸溶性的包衣，尤其通過使用濃糖溶液，其中可以包含阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙二醇和/或二氧化鈦；或者通過使用在適宜有機溶劑或溶劑混合物中的包衣溶液；或者對於製備腸溶衣而言，通過使用適宜纖維素製備物的溶液，例如乙醯纖維素鄰苯二甲酸酯或羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯。可以向片劑或片劑包衣加入染劑或色素，例如出於鑑別目的或者表明活性成分的不同劑量。
經口服給藥的藥物組合物還包括由明膠組成的硬膠囊和由明膠及增塑劑組成的軟密封膠囊，所述增塑劑例如是甘油或山梨醇。硬膠囊可以含有顆粒形式的活性成分，以及例如混合有下列成分填充劑，例如玉米澱粉；粘合劑；和/或助流劑，例如滑石粉或硬脂酸鎂；以及任選的穩定劑。在軟膠囊中，活性成分優選被溶解或懸浮在適宜的液體賦形劑中，例如脂肪油、石蠟油或液體聚乙二醇，或者乙二醇或丙二醇的脂肪酸酯，向其中還可以加入穩定劑和崩解劑，例如聚氧乙烯脫水山梨醇脂肪酸酯類型。
適於直腸給藥的藥物組合物例如是栓劑，其由活性成分與栓劑基質的組合組成。適宜的栓劑基質例如是天然或合成的甘油三酯、石蠟烴、聚乙二醇或高級烷醇。
就胃腸道外給藥而言，活性成分的水溶性形式、例如水溶性鹽的水溶液或者水性注射混懸液尤其是適宜的，所述混懸液含有增粘物質，例如羧甲基纖維素鈉、山梨醇和/或葡聚糖以及酌情的穩定劑。活性成分(任選與賦形劑)還可以是凍乾物的形式，可在胃腸道外給藥之前加入適宜的溶劑製成溶液。
例如用於胃腸道外給藥的溶液還可以作為輸注溶液採用。
優選的防腐劑例如是抗氧化劑，例如抗壞血酸；或者殺微生物劑，例如山梨酸或苯甲酸。
本發明此外涉及治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病的方法，該方法包含對需要這類治療的溫血動物給予有效對抗所述疾病量的式(I)化合物或其可藥用鹽，其中各基團和符號具有如上關於式(I)所定義的含義。式(I)化合物可以本身或尤其以藥物組合物的形式預防或治療性地施用於需要這類治療的溫血動物、例如人類，優選以有效對抗所述疾病的量。對於體重約70kg的個體，所施用的日劑量是約0.05g至約5g、優選約0.25g至約1.5g本發明化合物。
本發明還尤其涉及式(I)化合物或其可藥用鹽、尤其是描述為優選的式(I)化合物或其可藥用鹽本身或以含有至少一種可藥用載體的藥物製劑的形式在治療性以及預防性管理一種或多種上述疾病、特別是瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病中的用途。
用在每種情況中的藥物製劑(藥劑)的優選劑量、組成和製備如上所述。
下列實施例起到闡述發明的作用，而非限制其範圍。
實施例實施例13-氨基-2-(1-[3，4-二甲基苯基羰基甲基]苯並咪唑-2-基)-1，2，4-三唑將3-氨基-2-(1H-苯並咪唑-2-基)-1，2，4-三唑(0.15g，0.75mmol)、3，4-二甲基苯甲醯甲基溴(0.204g，0.9mmol)與無水碳酸鉀(0.258g，1.87mmol)的混懸液在室溫下攪拌16小時。將混合物用水稀釋，產物用乙酸乙酯萃取。產物經矽膠色譜法純化。M.p.190-193℃，1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)7.84(m，1H)；7.77(m，3H)；7.65(m，2H)；7.50(s，1H)；7.33(d，1H)；6.22(s，2H)；2.30(s，6H)。
實施例1a3-氨基-2-(1H-苯並咪唑-2-基)-1，2，4-三唑向2-肼基-1H-苯並咪唑(5.0g，33.7mmol)的乙醇(30ml)溶液中依次加入三乙胺(5ml，33.7mmol)和N-氰基甲亞胺酸乙酯(3.3g，33.7mmol)，同時冷卻。在0℃下攪拌2小時後，抽濾所得沉澱，乾燥，得到3-氨基-2-(1H-苯並咪唑-2-基)-1，2，4-三唑。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)13.0(s，1H)；7.77(s，1H)；7.70(m，2H)；7.50(m，2H)；7.20(s，2H)。
實施例1b2-肼基-1H-苯並咪唑在2小時內向2-巰基-1H-苯並咪唑(15g，100mmol)、氫氧化鈉(4.4g，110mmol)與催化量鎢酸的混合物中加入過氧化氫(43ml，100mmol，30％水溶液)，同時保持溫度在25℃。加入額外的過氧化氫(3×1ml)，以完成轉化。加入水合肼(15g，300mmol)後，將混合物在80℃下加熱5小時。冷卻後，2-肼基-1H-苯並咪唑開始結晶。抽濾，用乙醚洗滌，乾燥，得到純產物。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)10.9(s，1H)；7.78(m，1H)；7.10(m，2H)；6.84(m，2H)；4.42(s，2H)。
實施例1cN-氰基甲亞胺酸乙酯將氨腈(15g，357mmol)與原甲酸三乙酯(110ml)的混合物在回流下加熱2小時。分餾所得混合物，得到N-氰基甲亞胺酸乙酯。
實施例25-氨基-2-(1-[4-甲氧基苯基羰基甲基]苯並咪唑-2-基)吡唑將5-氨基-2-(1H-苯並咪唑-2-基)吡唑(0.10g，0.5mmol)、對甲氧基苯甲醯甲基溴(0.204g，0.9mmol)與無水碳酸鉀(0.173g，1.25mmol)的混懸液在室溫下攪拌16小時。將混合物用水稀釋，產物用乙酸乙酯萃取。產物經矽膠色譜法純化。M.p.136-140℃，1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)8.04(d，2H)；7.58(m，2H)；7.28(m，3H)；7.11(d，2H)；6.84(s，2H)；6.26(s，2H)；5.39(d，1H)；3.87(s，3H)。
實施例2a5-氨基-2-(1H-苯並咪唑-2-基)吡唑在室溫下，將甲酸乙酯(5ml，62mmol)、乙腈(1g，25mmol)與乙醇(0.5ml)的混合物滴加到氫化鈉(0.96g，40mmol)在乙醚中的混懸液中。攪拌16小時後，在減壓下除去揮發物。將殘餘物用水稀釋，加入AcOH調節pH至7。加入2-肼基-1H-苯並咪唑(6.6g，45mmol)後，將混合物放置5小時。用氫氧化鈉調節pH，混合物用氯仿萃取。粗的標題產物未經進一步純化使用。1H-NMR(400MHz，d6-DMSO)12.7(s，1H)；7.57(s，1H)；7.49(m，2H)；7.40(m，2H)；7.19(s，2H)；6.9(s，2H)；5.44(d，1H)。
類似於實施例1製備下列化合物表1
類似於實施例2製備下列化合物表2
測試本發明化合物的一般方法實施例23細胞培養物和細胞系在RPMI-1640組織培養基中培養細胞系，該培養基含有5％或10％胎牛血清、0.05mM 2-巰基乙醇、2mM穀氨醯胺和青黴素/鏈黴素50μg/ml(完全培養基)(Sigma，Buchs，瑞士)。一般生長條件為37℃和7.5％CO2。
使用下列小鼠細胞系(經或未經EGFP轉染)A20.2J(ATCCTIB-208)，MC57G(ATCCCRL-2295)。
使用下列人細胞系(經或未經EGFP轉染)Hela(ATCCCCL-2)，KB(ATCCCCL-17)，MCF7(ATCCHTB-22)，SK-BR-3(ATCCHTB-30)，SK-Mel 1(ATCCHTB-67)，SK-Mel 28(ATCCHTB-72)，PC-3(ATCCCRL-1435)，SW480(ATCCCCL-228)，NCI-H460(ATCCHTB-177)，NCI-H1792(ATCCCRL-5895)，HT1080(ATCCCCL-21)，Jurkat(ATCCTIB-152)，Ramos(ATCCCRL-1596)，Raji(ATCCCCL-86)，H9(ATCCHTB-176)，Hut78(ATCCTIB-161)，K562(ATCCCCL 243)，HL-60(ATCCCCL 240)，U-87MG(ATCCHTB-14)，HepG2(ATCCHB-8065)，U-2OS(ATCCHTB-96)，Saos-2(ATCCHTB-85)，U937(ATCCCRL 1593)，Hs 578T(ATCCHTB 126)，HBL-100(ATCCHTB 124)，Molt-4(ATCCCRL 1582).
實施例24初級篩選方案所有操作均在無菌條件下進行。分別在商業上可獲得的96或384孔平底透明微量滴定平板(Greiner，德國)中進行測定，這些平板適於組織培養技術。平板接種規定數量的經過EGFP轉染的供試粘連細胞(96孔平板104-105，384孔平板1500-2×104)，24小時後每孔用75μl(96孔平板)或60μl(384孔平板)完全培養基處理，目的是確保適當的細胞鋪展。為此，使用蠕動泵(例如Multidrop，Thermo-Labsystems，芬蘭)或其它適宜的裝置。按照相同工藝，但是在處理前1小時平板接種細胞混懸液。在接種與化合物處理或加入之間，將細胞在37℃和7.5％CO2下溫育。隨後，利用適當的裝置(例如液體操控系統、多通道吸移管等)加入規定濃度(40-80μM，在25μl(96孔平板)或20μl(384孔平板)完全培養基中，其中含有最多4％DMSO)的待研究化合物，供試小孔中化合物在最多1％DMSO中的最終濃度為10-20μM。
向細胞加入化合物之後不久，利用螢光微量平板讀數器測定零時螢光值(t＝0小時)，目的是能夠使螢光活性標準化。然後，在37℃和7.5％CO2下進一步溫育供試平板達總計48小時，分別在8小時、24小時和48小時短暫移去，僅供測量。
實施例25初級篩選的測量和量化利用裝有一對濾光器的BMG Fluostar微量平板螢光讀數器測量經過化合物處理的供試細胞相對於對照細胞和用標準藥物處理的細胞而言的相對EGFP螢光活性，激發/發射波長為485nm/520nm。利用測量的時間分辨模式檢測最佳信噪比，延遲時間為20μs，積分時間歷經1ms。以這樣一種方式調節增加，以便對照細胞產生最大螢光活性的90％。在t＝0h、8h、24h和48h時測量相對螢光活性，進行動力學分析。通過將每一來自t＝8h、24h和48h的值除以t＝0h的值得到E(8)、E(24)和E(48)值，對每個平板小孔的不同細胞數和供試化合物的不同旋光性而言分別使螢光活性粗值標準化。隨後，通過形成乘積E(8)×E(24)×E(48)的倒數(Q-值)進一步處理E(x)值，對化合物的細胞凋亡/壞死活性而言數值＞1，對化合物的增殖活性而言數值＜1。對照(未處理)顯示與1相似的值。Q-值＞2的化合物被視為在細胞凋亡/壞死活性上適當，隨後在二級篩選方案中測試。
實施例26二級篩選方案所有操作均在無菌條件下進行。當為粘連細胞時在商業上可得到的24孔平底組織培養平板(Greiner，德國)中進行測定，當為懸浮細胞時在聚丙烯試管(P-試管)1.4ml(Matrix，UK)中進行測定。
供試粘連細胞在處理前24h，將2×104-4×104經過EGFP轉染的細胞平板接種在0.5ml完全培養基中。在t＝0時除去培養基，加入450μl新的完全培養基。隨後加入在最多5％DMSO中含有供試化合物的50μl完全培養基，導致供試化合物的最終濃度分別為20μM、10μM、3μM、1μM和0.3μM。溫育48h後收穫細胞，按照標準工藝利用螢光活化細胞掃描裝置(FACSCaliburTM，BD Biosciences)進行分析。
懸浮細胞將含有105供試細胞的450μl完全培養基吸移至P-試管中。立即加入含有化合物的50μl完全培養基(參見粘連細胞)。溫育48h後，直接在FACSCaliburTM上分析供試細胞。
實施例27二級篩選的量化通過在FACSCaliburTM上監測FL1中的EGFP螢光活性，有可能區分同一細胞種群內的增殖細胞、凋亡細胞和壞死細胞。增殖細胞顯示較高的GFP螢光活性，細胞凋亡種群顯示中等的螢光活性，而壞死細胞證明有與模擬轉染細胞相當的殘留螢光活性。在CellQuest軟體(BD Biosciences)內，在直方圖中定義了三個區域M1包含增殖細胞，M2包含凋亡細胞種群，M3包含壞死細胞種群。以屬於M1、M2或M3的細胞的相對豐度表示讀數。誘導M2值＞50％和M3值＜30％的化合物被視為適當，並進一步在三級/高級篩選方案中測試和鑑別。
實施例28三級篩選方案A)Hoechst 33342核染色本測定在96孔組織培養平板中進行。將適量細胞(粘連細胞3-5×103，懸浮細胞8-10×103)接種在80μl完全培養基中。將粘連細胞溫育24h供適當的鋪展，然後加入供試化合物，而懸浮細胞在接種後立即用供試化合物處理。在含有最多5％DMSO的20μl完全培養基中加入供試化合物。測定中的最終化合物濃度分別為10μM、3μM、1μM和0.3μM。在培養條件下溫育24h或48h後，向每孔加入含有2-5μg/ml Hoechst 33342染劑(SigmaB-2261)的10μl培養基。然後將測定平板進一步溫育30分鐘，隨後利用標準反轉螢光顯微鏡分析。
讀數允許測定細胞凋亡核的比例以及其它細胞凋亡特有的形態學標準作為處理的函數。結果如表3所示。使用下列評分0指沒有活性，1指微弱活性，包含少於50％的細胞，2指強大活性，包含多於50％的細胞。
表3Hoechst 33342核染色
B)MTS增殖測定測定在96孔組織培養平板中進行。在化合物處理前24h，將細胞(1.5×103-104)接種在80μl完全培養基中。在含有最多5％DMSO的20μl完全培養基中加入供試化合物。測定中的最終化合物濃度分別為10μM、3μM、1μM和0.3μM。將測定平板在培養條件下溫育72h。MTS試劑按照廠商方案(Promega G1111)製備。向每孔加入20μl MTS試劑；使測定平板快速自旋，在培養條件下另外溫育3h。隨後，將平板短暫振蕩，在492nm下利用微量平板讀數器測量吸光度。通過圖形分析測定IC50值，如表4所示，以μM濃度表示。
表4MTS增殖測定
C)AnnexinV/7-AAD染色在化合物處理之前24小時，將粘連細胞(1-2×105)接種在24孔組織培養平板中。在處理之前不久將懸浮細胞吸移至P-試管中。加入供試化合物，最終濃度為10μM。處理24小時後，收穫細胞(在粘連細胞的情況下通過胰蛋白酶消化)，轉移至FACS試管(BD Biosciences)。離心和除去上清液後，加入含有AnnexinV-GST(10μg)的100μl完整培養基，混合，在4℃下溫育30分鐘。隨後，將細胞用培養基洗滌一次，在4℃下與100μl按照1∶500稀釋在培養基中的抗-GST Alexa 488(MolecularProbes A-11131)溫育30分鐘。然後將細胞洗滌一次，用含1μg/ml 7-氨基放線菌素D(7-AAD)(Molecular Probes A-1310)的250μl培養基染色，在FACSCaliburTM上分析。AnnexinV在FL1中測量，而7-AAD在FL3中測量。
D)細胞周期分布的PI染色將1-2×105個細胞接種在24孔組織培養平板中，在化合物加入前溫育24h。加入化合物達24h，最終濃度為3μM或10μM。通過胰蛋白酶消化收穫粘連細胞。通過加入2份冰冷的100％乙醇並同時渦旋，使細胞混懸液固定。然後將樣品在-20℃下貯存＞2h。隨後將細胞用PBS洗滌一次，再懸浮在含有50μg/ml PI(Calbiochem #537059)的250μl PBS中，然後將樣品在37℃下溫育30分鐘，隨後在FACSCaliburTM上分析，監測FL2上的線性PI螢光活性。讀數允許檢測供試化合物對細胞周期可能的直接或間接影響。可發生下列事件a)指示DNA片段化的subG1峰的生成，b)終止於G2M期的細胞種群的增加。
E)BrdU摻合(增殖)在處理前24小時，將粘連細胞按2-4×104細胞/孔/ml接種在24孔組織培養平板中。將混懸細胞按2×105細胞/ml/孔接種在24孔平板中。加入化合物，最終濃度分別為3μM和10μM。隨後加入最終濃度為10μM的BrdU(Molecular Probes #B-23151)，將平板溫育48小時。溫育後，按照標準工藝加工細胞。利用抗溴脫氧尿苷Mab PRB-1，Alexa Fluor660綴合物(Molecular Probes #A-21306)檢測所摻合的BrdU。在FACSCaliburTM上通過監測FL3上的螢光活性進行分析。讀數反映DNA的合成，它是增殖的標誌。
F)胱天蛋白酶依賴性通過將化合物處理與pan-胱天蛋白酶抑制劑zVAD或其對照肽zFA(ICN Pharmaceuticals，分別為#FK009和FK029)組合，評價胱天蛋白酶依賴性。兩種肽均以20μM濃度使用。當為胱天蛋白酶依賴性時，應當檢測到在所有細胞凋亡試驗中特定讀數的明顯抑制。通過比較經zVAD和zFA處理的樣品與化合物對照的讀數，有可能檢測胱天蛋白酶相對於半胱氨酸的依賴性。當為被zVAD而非zFA抑制的情況時，清楚的胱天蛋白酶依賴性是明顯的。被zVAD以及被zFA抑制表明半胱氨酸蛋白酶在細胞凋亡級聯中有牽連。
實施例29軟膠囊劑如下製備5000粒軟明膠膠囊劑，每粒包含0.05g前述實施例提到的式(I)化合物之一作為活性成分將250g經過粉碎的活性成分懸浮在2升LauroglykolTM(月桂酸丙二醇酯，GattefosséS.A.，Saint Priest，法國)中，在溼粉碎機中研磨至粒徑為約1至3μm。然後利用膠囊填充機將每份0.419g混合物裝入軟明膠膠囊中。
權利要求
1.式(I)化合物， 其中R代表芳基或雜芳基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基；低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素和硝基；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表鍵；氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；或者基團CR7R8；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素或硝基，或者R3和R4、R4和R5或R5和R6與苯基環的原子一起形成5或6元碳環或雜環；R7代表氫、低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、任選被取代的苯基、低級烷氧基、低級鏈烯氧基、低級炔氧基；R8代表氫、低級烷基、羥基、低級烷氧基或低級鏈烯氧基，或者R7和R8與它們所鍵合的碳一起形成5或6元碳環或雜環；R9代表氫、低級烷基或氨基；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基-烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基，或者R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫、低級烷基、醯基或氨基羰基，其中氨基是未取代的或者被低級烷基取代，其互變異構體和鹽。
2.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表芳基或雜芳基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基；低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素和硝基；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表鍵；氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；或者基團CR7R8；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基，羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷硫基、任選被取代的苯硫基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、任選被取代的苯基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、任選被取代的苯基磺醯基、芳烷基磺醯基、滷素或硝基，或者R3和R4、R4和R5或R5和R6與苯基環的原子一起形成5或6元碳環或雜環；及其可藥用鹽，用作藥物，R7代表氫、低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、低級鏈烯基、低級炔基、任選被取代的苯基、低級烷氧基、低級鏈烯氧基、低級炔氧基；R8代表氫、低級烷基、羥基、低級烷氧基或低級鏈烯氧基，或者R7和R8與它們所鍵合的碳一起形成5或6元碳環或雜環；R9代表氫、低級烷基或氨基；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基-烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基，或者R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫或低級烷基，其互變異構體和鹽。
3.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、吲哚基、苯並異唑基，各自任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、滷代-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷氧基-低級烷基、滷代-低級烷氧基-低級烷基、醯氧基低級烷基、雜環基、雜環基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基、羥基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、環烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基、氨磺醯氧基、氨甲醯氧基、低級烷基碳醯氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基、低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自任選被取代的苯基、胍基、滷素、氰基、烷氧基、任選被取代的苯氧基、烷硫基和任選被取代的氨基；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、滷代-低級烷基、任選被取代的苯基、滷素、氰基、烷氧基和任選被取代的氨基；氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、滷素和硝基；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧；基團C＝Y，其中Y代表氧或者被羥基、烷氧基或任選被取代的氨基取代的氮；或者基團-CH＝CH-(C＝O)n-或-(C＝O)n-CH＝CH-，其中n是0或1；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、羥基、低級烷氧基、滷代-低級烷氧基、環烷氧基、環烷基-低級烷氧基、羥基-低級烷氧基、低級烷氧基-低級烷氧基、雜環基氧基、雜環基-低級烷氧基、任選被取代的苯氧基、任選被取代的苯基-低級烷氧基、任選被取代的雜芳氧基、任選被取代的雜芳基-低級烷氧基，氨基、氨甲醯基、氨磺醯基、氨基-低級烷基或氨基-低級烷基氨基，其中在各自情況下氮原子是未取代的或者被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自低級烷基、環烷基、環烷基-低級烷基、羥基-低級烷基、低級烷氧基-低級烷基、任選被取代的苯基、任選被取代的苯基-低級烷基、任選被取代的雜芳基、任選被取代的雜芳基-低級烷基和低級烷基羰基，或者其中氮上的兩個取代基與該氮一起形成雜環基，低級烷基羰基、環烷基羰基、任選被取代的苯基羰基、任選被取代的雜芳基羰基、雜環基羰基，羧基、低級烷氧羰基、羥基-低級烷氧羰基、低級烷氧基-低級烷氧羰基、任選被取代的苯基-低級烷氧羰基、氰基、低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基、滷素或硝基；或者R3和R4、R4和R5或R5和R6一起代表亞甲二氧基；R9代表氫；R10和R11彼此獨立地代表氫、烷基、環烷基、環烷基烷基、任選被取代的芳基烷基、任選被取代的雜芳基烷基、羥基烷基、烷氧基烷基、羥基烷氧基烷基、烷氧基烷氧基烷基、氰基烷基、羧基烷基、任選被取代的鏈烯基、任選被取代的炔基或低級烷基羰基，其中低級烷基任選被一個或兩個取代基取代，所述取代基選自芳基、任選被取代的氨基、烷氧基和芳氧基；或者R10和R11與它們所鍵合的原子一起形成雜環基；R12是氫，其互變異構體和可藥用鹽。
4.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表苯基、萘基、噻吩基、呋喃基、噻唑基、二唑基、噻二唑基、咪唑基、吡唑基、吡啶基、嘧啶基、苯並噻吩基、苯並呋喃基、吲哚基、苯並異唑基，任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、滷代-低級烷基、苯基、任選被取代的雜芳基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、任選被取代的炔氧基、低級烷氧基-低級烷氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；氨基磺醯氨基，其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基磺醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷氧基碳醯氨基、低級烷基碳醯氨基，其中烷基任選被烷氧基或任選被取代的氨基取代；低級鏈烯基碳醯氨基，其中鏈烯基任選被烷氧基或任選被取代的氨基取代；低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基和滷素；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧或基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11或OR12；R2代表氫、低級烷基或氨基；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基、羥基、低級烷氧基、羧基、低級烷氧羰基、氰基或滷素；R9代表氫；R10和R11彼此獨立地代表氫、氰基-低級烷基、羧基-低級烷基或低級烷基羰基；R12是氫，其互變異構體和可藥用鹽。
5.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表苯基、吡啶基或嘧啶基，各自任選被至多四個取代基取代，所述取代基獨立地選自烷基、任選被取代的雜芳基、低級烷氧基、任選被取代的鏈烯氧基、低級烷氧基-低級烷氧基，氨基、單烷基氨基、二烷基氨基、氨基碳醯氨基且其中兩個氨基各自任選被烷基、鏈烯基、炔基或烷氧基-低級烷基取代；雜環基碳醯氨基，其中雜環基經由氮原子鍵合；低級烷基亞磺醯基、滷代-低級烷基亞磺醯基、低級烷基磺醯基、滷代-低級烷基磺醯基和滷素；並且其中兩個相鄰的取代基與芳基或雜芳基的原子一起可以形成5或6元碳環或雜環；X代表氧或基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表N或CR9；R1代表基團NR10R11；R2代表氫；R3、R4、R5和R6彼此獨立地代表氫、低級烷基、滷代-低級烷基、羥基、低級烷氧基、羧基、低級烷氧羰基、氰基或滷素；R9代表氫；R10代表氫、羥基-低級烷基、氰基-低級烷基或低級烷基羰基；R11代表氫，其互變異構體和可藥用鹽。
6.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表3，4-二甲基苯基、4-甲氧基苯基、4-氯苯基、4-氨基苯基、3-氨基-4-氯苯基或2-氨基-5-吡啶基；X代表基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表N；R1代表基團NR10R11；R2、R3、R4、R5和R6代表氫；R10代表氫或氰基乙基；R11代表氫，其互變異構體和可藥用鹽。
7.權利要求1的式(I)化合物，其中R代表3，4-二甲基苯基、4-甲氧基苯基或4-氯苯基；X代表基團C＝Y，其中Y代表氧；Q代表CR9；R1代表基團NR10R11；R2、R3、R4、R5、R6、R9、R10和R11代表氫，其互變異構體和可藥用鹽。
8.用作藥物的權利要求1的式(I)化合物。
9.製備權利要求1的式(I)化合物的方法，其中將(II)化合物或其官能團為被保護形式的衍生物和/或鹽 其中R1、R2、R3、R4、R5和R6如式(I)中定義，用式(III)滷化物烷基化，R-X-CH2-Z(III)其中R如式(I)中定義，Z是親核離去基團；除去式(I)化合物的被保護衍生物中的任何保護基團；並且，如果需要的話，將可得到的式(I)化合物轉化為另一種式(I)化合物，將游離的式(I)化合物轉化為鹽，將可得到的式(I)化合物的鹽轉化為游離化合物或另一種鹽，和/或將式(I)的異構化合物的混合物分離為單一異構體。
10.式(II)化合物、其互變異構體和鹽， 其中Q代表CR9；R1代表基團NR10R11；R2、R3、R4、R5和R6代表氫；R9、R10和R11代表氫。
11.藥物組合物，包含權利要求1的式(I)化合物以及可藥用載體。
12.權利要求1的式(I)化合物、該化合物的前藥或可藥用鹽在製備藥物組合物中的用途，所述藥物組合物用於治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病。
13.治療瘤形成疾病、自身免疫疾病、移植相關性病變和/或變性疾病的方法，該方法包含對需要該治療的溫血動物給予有效對抗所述疾病的量的權利要求1的式(I)化合物、該化合物的前藥或可藥用鹽。
全文摘要
本發明涉及式(I)化合物、該化合物的合成方法、含有式(I)化合物的藥物組合物、中間體以及涉及式(I)化合物作為藥物的用途和在製備用於治療瘤形成和自身免疫疾病的藥物組合物中的用途，還涉及使用式(I)化合物或含有它的藥物組合物來治療瘤形成和自身免疫疾病的方法，其中R代表芳基或雜芳基，X是鍵、羰基、羰基衍生物、亞乙基或亞乙基羰基，R
文檔編號C07D401/04GK1918148SQ200580004534
公開日2007年2月21日 申請日期2005年2月10日 優先權日2004年2月11日
發明者M·埃貝勒, F·巴赫曼, A·斯特雷貝爾, S·羅伊, S·斯裡瓦斯塔瓦, G·薩哈 申請人:巴斯利爾藥物股份公司